(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia

(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen của bệnh HbH và chẩn đoán trước sinh bệnh α thalassemia

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI WWW HMU.EDU.VN NGÔ DIỄM NGỌC NGHIÊN CứU ĐặC ĐIểM LÂM SàNG, KIểU GEN CủA BệNH HBH Và CHẩN ĐOáN TRƯớC SINH BệNH THALASSEMIA LUN N TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI WWW HMU.EDU.VN NGÔ DIỄM NGỌC NGHI£N CøU ĐặC ĐIểM LÂM SàNG, KIểU GEN CủA BệNH HBH Và CHẩN ĐOáN TRƯớC SINH BệNH THALASSEMIA Chuyờn ngnh: Y sinh học - Di truyền Mã số: 62.72.01.11 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Thị Thanh Hương TS Dương Bá Trực HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Sau trình dài, ngày hơm nay, nhìn lại, tơi trân trọng tất đời cho tơi, khơng riêng khía cạnh Tơi chọn lối đi, lĩnh vực chuyên môn, mà từ tơi thực tâm nguyện Hơm nay, với kết luận án này, kết có khơng từ riêng cá nhân mình, tơi thật trân trọng chân thành cảm ơn tất Lời đầu tiên, xin cảm ơn bệnh ngặt nghèo, số phận, gia đình nghiệt ngã bệnh tật đời thường HỌ, hun đúc tâm huyết, để tơi mang tâm huyết vào đời, vào chuyên môn, đặc biệt quay vào lại với tâm tôi, mà đồng cảm, chia sẻ với HỌ Xin cảm ơn hai người THẦY khoa học, PGS.TS Trần Thị Thanh Hương TS Dương Bá Trực, dìu dắt động viên tơi không ngừng suốt chặng đường lâu dài này, để có sản phẩm khoa học ngày hơm Xin cảm ơn vị LÃNH ĐẠO, ĐỒNG NGHIỆP, Bệnh Viện Nhi Trung Ương nơi công tác, Bộ Môn Y sinh học - Di truyền, Trường Đại Học Y Hà Nội nơi học tập, Trung tâm chẩn đoán trước sinh Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương Phụ Sản Hà Nội, giúp đỡ tơi hồn thành nhiệm vụ, vinh dự Xin cảm ơn người BẠN yêu quý bên Xin cảm ơn GIA ĐÌNH, bố mẹ, chồng hai gái tơi, người mà tất họ dành cho tơi tình u thương vơ bờ bến Cuối cùng, tất cả, xin cảm ơn NGƯỜI, khai sáng, dẫn đường, lối, để tơi nhìn lại TƠI, đây, lời nói này, đường tơi đi, mãi Ngô Diễm Ngọc LỜI CAM ĐOAN Tôi là: Ngô Diễm Ngọc, nghiên cứu sinh khóa 30, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Y sinh học - Di truyền, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn thầy: PGS.TS Trần Thị Thanh Hương TS Dương Bá Trực Công trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2018 NGƢỜI CAM ĐOAN Ngô Diễm Ngọc DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt PCR C-ARMSPCR RT-PCR MLPA RDB DB RE - PCR Hb β γ δ ε δ ( 2β2) ( 2δ2) (δ2ε2) ( 2ε2) (δ2γ2) ( 2γ2) β4 γ4 HPFH HPLC MCS / Tiếng Anh Polymerase Chain Reaction Combine-Amplification Refractory Mutation System-PCR Reverse transcrip PCR Multiplex ligation dependent probe amplification Reserve dot blot Dot blot Restriction enzyme - PCR Hemoglobin Alpha chain Beta chain Gamma chain Delta chain Epsilon chain Zeta chainchain Hemoglobin A Hemoglobin A2 Hemoglobin Gower1 Hemoglobin Gower2 Hemoglobin Porland Hemoglobin F Hemoglobin H Hemoglobin Bart’s Hereditary Persistence of fetal Hemoglobin High Performance Liquid Chromatography Multispicies Conserved Sequence Normal Tiếng Việt Phản ứng kéo dài chuỗi Hệ thống khuếch đại đột biến Có tính trơ PCR mã ngược Khuếch đại nhiều đoạn dò phụ thuộc kết nối Lai điểm ngược Lai điểm PCR cắt enzyme Huyết sắc tố Chuỗi alpha Chuỗi beta Chuỗi gamma Chuỗi delta Chuỗi epsilon Chuỗi zeta HbA HbA2 Hb Gower1 Hb Gower2 Hb Porland HbF HbH Hb Bart’s Hội chứng tồn dư huyết sắc tố bào thai di truyền Điện di hemoglobin sắc ký lỏng cao áp Trình tự bảo tồn đa lồi Người bình thường - / Silent Carrier / α0-thalassemia (Cis) ( -thalassemia trait) α0-thalassemia (Trans) ( -thalassemia trait) HbH deletional type HbH non deletional type Hb Bart’s Rightward deletion of 3.7kb - / / / T / 3.7 4.2 - Leftward deletion ofof 4.2kb Dị hợp tử +-thal, người mang gen α+-thalassemia Dị hợp tử 0-thal, người mang gen α0-thalassemia Đồng hợp tử +-thal, người mang gen α0-thalassemia Bệnh HbH thể đoạn Bệnh HbH thể không đoạn Bệnh Hb Bart’s Đột biến đoạn gen lệch phải 3.7kb Đột biến đoạn gen lệch trái 4.2kb Đột biến đoạn gen Đông Nam Á Đột biến đoạn gen Filipine Đột biến đoạn gen Thailand Gen globin Gen globin Đột biến đoạn gen Hemoglobin Constant Spring Hemoglobin Quong Sze SEA South East Asia deletion FIL Filipine deletion THAI Thailand deletion - - HbCs - HbQs - c.2delT - c.92 G>A - c.426 A>T 1globin gene globin gene Deletion of gene TAA>CAA codon142 gen CTG>CCG codon 125 gen ATG>A-G codon ATG gen AGG>AAG codon 31 gen TAA>TAT codon TAA gen Hemoglobin Parkse (- c.426 A>T) Hemoglobin Hekinan GAG>GAT codon 27 gen (- c.81G>T) and thalassemia carrier Người mang gen thalassemia and HbE carrier Người mang gen HbE c.81G>T / / E RBC (1012/L) Hb (g/dL) HCT (%) MCV (fL) MCH (pg) MCHC (%) cffDNA NIPD PGD IVF EQA WHO TIF BV Nhi TƯ DT-SHPT Red Blood Cells Hemoglobin Hematocrit Mean Corpuscular Volume Mean Corpuscular Hemoglobin Số lượng hồng cầu Khối lượng hemoglobin Thể tích trung bình hồng cầu Số lượng hemoglobin trung bình hồng cầu Mean Corpuscular Hemoglobin Nồng độ hemoglobin trung Concentration bình hồng cầu Cell free fetal DNA DNA thai tự máu mẹ No invasive Prenatal Chẩn đốn trước sinh khơng Diagnosis xâm lấn Pre-implantation genetic Chẩn đốn di truyền trước diagnosis chuyển phơi In vitro fertilization Thụ tinh ống nghiệm External Quality Assessment Mẫu ngoại kiểm World Health Organization Tổ chức y tế giới Thalassemia International Hiệp hội Thalassemia quốc tế Fondation National Hospital of Pediatrics Bệnh Viện Nhi Trung Ương Human Genetics Department Khoa Di truyền - Sinh Học Phân Tử MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cấu trúc dạng phân tử hemoglobin 1.1.1 Cấu trúc phân tử Hb người bình thường 1.1.2 Các dạng phân tử hemoglobin 1.2 Bệnh -thalassemia 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Dịch tễ học bệnh α-thalassemia 1.2.3 Gen globin 1.2.4 Cơ chế bệnh sinh bệnh thalassemia 1.2.5 Cơ chế bệnh sinh bệnh α-thalassemia 1.2.6 Cơ chế phân tử bệnh α-thalassemia 10 1.3 Đặc điểm lâm sàng bệnh -thalassemia 13 1.3.1 Người mang gen α+-thalassemia 14 1.3.2 Người mang gen α0-thalassemia 14 1.3.3 Bệnh HbH 14 1.3.4 Hội chứng phù thai Hb Bart’s 15 1.4 Đặc điểm cận lâm sàng bệnh α-thalassemia 16 1.4.1 Xét nghiệm công thức máu 16 1.4.2 Phân tích thành phần hemoglobin 16 1.4.3 Xét nghiệm di truyền phân tử phân tích gen globin 17 1.4.4 Vai trò phát đột biến gen globin gây bệnh -thalassemia 22 1.5 Chẩn đoán bệnh α thalassemia 24 1.5.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh α-thalassemia 24 1.5.2 Chẩn đoán phân biệt bệnh α-thalassemia 24 1.6 Giá trị tiên lượng kiểu hình dựa kiểu gen bệnh HbH 25 1.7 Sàng lọc người mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 27 1.7.1 Sàng lọc người mang gen bệnh 27 1.7.2 Chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 28 1.7.3 Chẩn đốn tiền phơi 33 1.8 Tình hình nghiên cứu bệnh α-thalassemia 34 1.8.1 Thế giới 34 1.8.2 Việt Nam 35 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 37 2.2 Đối tượng nghiên cứu 37 2.2.1 Nhóm đối tượng cho mục tiêu phát số đột biến gen -thalassemia kỹ thuật sinh học phân tử 37 2.2.2 Nhóm đối tượng cho mục tiêu nhận xét biểu lâm sàng kiểu gen bệnh nhân HbH 37 2.2.3 Nhóm đối tượng cho mục tiêu chẩn đoán trước sinh bệnh thalassemia 37 2.3 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 38 2.3.1 Tiêu chuẩn chọn đối tượng cho mục tiêu phát số đột biến gen -thalassemia kỹ thuật sinh học phân tử 38 2.3.2 Tiêu chuẩn lựa chọn đối tượng cho mục tiêu nhận xét biểu lâm sàng kiểu gen bệnh nhân HbH 38 2.3.3 Tiêu chuẩn lựa chọn đối tượng cho mục tiêu chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 38 2.3.4 Tiêu chuẩn loại trừ 39 2.4 Thiết kế nghiên cứu 39 2.4.1 Mục tiêu 39 2.4.2 Mục tiêu 40 2.4.3 Mục tiêu 40 2.5 Cỡ mẫu 41 2.6 Mẫu bệnh phẩm 41 2.7 Nội dung nghiên cứu 42 2.7.1 Đặc điểm lâm sàng huyết học bệnh nhân HbH 42 2.7.2 Quy trình phát đột biến gen α globin gây bệnh α-thalassemia 42 2.7.3 Nuôi cấy tế bào ối 55 2.7.4 Phân tích gen α thalassemia, xác định kiểu gen thai nhi 55 2.8 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 56 2.9 Sơ đồ nghiên cứu 56 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 57 3.1 Kết phát đột biến gen globin người mắc -thalassemia kỹ thuật PCR, MLPA giải trình tự gen Sanger 57 3.1.1 Xác định đột biến đoạn thường gặp bệnh nhân HbH kỹ thuật GAP-PCR 57 3.1.2 Kết xác định đột biến điểm thường gặp bệnh nhân HbH kỹ thuật ARMS-PCR 58 3.1.3 Đối chiếu kết phân tích gen globin kỹ thuật PCR với kỹ thuật MLPA giải trình tự gen Sanger 58 3.1.4 Kết xác định đột biến đoạn gặp bệnh nhân HbH đoạn kỹ thuật MLPA 60 3.1.5 Kết xác định đột biến điểm gặp bệnh nhân HbH kỹ thuật giải trình tự gen Sanger 61 3.1.6 Kết xác định đột biến gen globin bệnh nhân mắc Hb Bart’s sống sau sinh kỹ thuật PCR, MLPA 64 3.1.7 Tổng hợp kết đột biến gen α globin người mắc thalassemia 65 3.2 Mối liên hệ đặc điểm lâm sàng kiểu gen bệnh HbH 67 3.2.1 Đặc điểm chung bệnh HbH 67 3.2.2 Một số đặc điểm lâm sàng bệnh HbH 70 3.2.3 Một số đặc điểm huyết học bệnh nhân HbH 73 3.2.4 Tổng hợp số mối liên quan đặc điểm lâm sàng, đặc điểm huyết học kiểu gen bệnh HbH 85 3.3 Chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 87 3.3.1 Sàng lọc chẩn đoán xác định người mang gen bệnh thalassemia cặp vợ chồng có thai bị phù 87 3.3.2 Kết xác định người mang gen -thalassemia cặp vợ chồng có tiền sử sinh mắc bệnh HbH 94 3.3.3 Kết chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 95 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 98 4.1 Về đột biến gen globin gây bệnh -thalassemia phát kỹ thuật PCR, MLPA giải trình tự gen 98 ... mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh α- thalassemia Đây xem biện pháp hiệu cần thiết để phòng bệnh Xuất phát từ l trên, tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, kiểu gen người... 3.2.3 Một số đặc điểm huyết học bệnh nhân HbH 73 3.2.4 Tổng hợp số mối liên quan đặc điểm lâm sàng, đặc điểm huyết học kiểu gen bệnh HbH 85 3.3 Chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia ... trước sinh 94 Kết chẩn đoán trước sinh bệnh Hb Bart’s 95 Kết chẩn đoán trước sinh bệnh HbH 95 Tổng hợp kết chẩn đoán trước sinh bệnh -thalassemia 96 So sánh tỷ lệ HbH đoạn không đoạn quần