Nguyên liệu thu enzim và phân bố

CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 3 Chng 1: NGUYÊN LIU THU ENZIM VÀ PHÂN B 1.1. Ngun ng vt: 1.1.1. Tu tng: (Pan creas) ây là ngun enzim sm nht, lâu dài nht, có cha nhiu loi enzim nht nh: tripxin, kimotripxin, cacboxy pectidaza A và B, ribonucleaza, amilaza, lipaza. + Tripxin y hc phi là loi tinh ch. + ng dng u tiên ca ch phm tripxin là làm mn da  lt da, kh các vt nt trên da. + Sn xut sn phm thu phân protein y hc (dch truyn y t) và môi trng nuôi cy vsv. + Ch phm dch tu y hc  cha bnh v tu (ri lon chc nng, b ct b tu). + Sn xut ch phm enzim ty ra (vt bn, màu khó tan)  nhit  va phi, không thích hp vi nhit  cao và pH thay i. 1.1.2. Màng nhy d dày ln: Là ngun enzim pepxin A, B, C, D, gastrisin. Các enzim này c tit ra ngoài t bào cùng vi dch v ( khi tiêu hoá thc n). i vi các typ pepxin có pH opt =1.3÷2.2. 1.1.3.  dày bê: Trong ngn th t ca d dày bê có tn ti enzim thuc nhóm Proteaza tên là renin. Enzim này ã t lâu c s dng ph bin trong công ngh phomat. Renin làm bin i cazein thành paracazein có kh nng kt ta trong môi trng sa có  nng  Ca 2+ . ây là quá trình ông t sa rt n hình, c nghiên cu và ng dng y  nht. Trong thc t nu ch phm renin b nhim pepxin (trong trng hp thu ch phm renin  bê quá thì. Khi ó, d dày bê ã phát trin y  có kh nng tit ra pepxin) thì kh ng ông t sa kém i. n ây có nghiên cu sn xut proteaza t vsv có c tính renin nh  các loài Eudothia Parasitica và Mucor Purillus. 1.1.4. Các loi ni tng khác: Gan, lá lách, thn, phi, c hoành tim, d con, huyt. Các loi này u có cha enzim, a s tn ti trong t bào. Ch có mt s loi c sn xut di dng ch phm nh: gan, tim ln  tách aspartat-glutamat aminotransferaza, huyt tng (t huyt)  tách ra trombia (Proenzim chng ông máu) Nhìn chung nguyên liu ng vt dùng  tách enzim phi ti tt (ly ngay sau khi git m) hoc gi -20 0 C có thc 1÷12 tháng vn không làm gim hot tính enzim. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 4 1.2. Ngun gc thc vt: 1.2.1. Cây u ra (Canavalin ensifirmis): ây là cây thuc hu Canavalia – có nhiu  châu Phi,  Vit Nam có nòi k trên. Trong tt c các nòi u ra u rt giàu enzim Ureaza, hàm lng có thn 20% cht khô. 1.2.2.  da (Bromalaceae): Bao gm tt c các nòi da trng ly qu, ly si (k c các nòi da di). Trong các b phn khác nhau ca cây da (v, lõi, chi, thân, lá,…) u có cha enzim bromelain. Trong ó nhiu nht là phn lõi u qu da. Hot tính ca enzim bromelain ph thuc nhiu vào trng thái và u kin bo qun nguyên liu. Các nghiên cu ã ch ra rng các nguyên liu sy khô  nhit  400C s gi c hot tính enzim tt hn so vi nguyên liu ã c bo qun lnh  nhit  4 0 C. 1.2.3. Nha u  (Carica Papaya. L): ây là loi cây n qu ph bin  các nc nhit i. T qu ti hoc thân thu c nha (latex) chính là ch phm papain thô  tó tinh ch thành papain thng phm. Hin nay ngi ta ã to ra c các ging u  có sn lng m và hot tính papain cao  khai thác có hiu qu ngun enzim này (không t vn  ly qu). 1.2.4. t s loi nguyên liu thc vt khác: Khi tin hành nghiên cu khoa hc, y sinh hc, nhiu khi cn xem xét (nh tính, nh ng, cu trúc phân t,  hot ng enzim, …) ca mt s loi enzim có trong bn thân nguyên liu ó nh lng s dng. áng chú ý hn c là: Ch phm enzim Polyphenoloxydaza (EPPO): n hình nht là eppo ca lá chè, ca i nh ht ca cao ti, nc ép qu nho. Ch phm loi này ph bin hn c là loi “bt axeton”. 1.2.5. t cc và mt s loi c cha tinh bt: Trong ht cc ny mm (malt) và mt s loi c ny mm (n hình là khoai lang) có t h enzim rt phong phú c ngi ta s dng t rt lâu trong các lnh vc: mt tinh t (mch nha), ru và bia (thm chí có mt phng pháp sn xut ru etylic mang tên là phng pháp maltaza hay phng pháp malt) 1.3. Ngun vi sinh vt: ây là ngun enzim phong phú nht, có  hu ht các loài vi sinh vt nh: nm mc, vi khun và mt s loài nm men. Có th nói vi sinh vt là ngun nguyên liu thích hp nht  sn xut enzim  qui mô ln dùng trong công ngh và i sng. Dùng ngun vi sinh vt có nhng li ích chính nh sau: + Chng v nguyên liu nuôi cy vi sinh vt và ging vi sinh vt. + Chu k sinh trng ca vi sinh vt ngn: 16÷100 gi nên có th thu hoch nhiu ln quanh nm. + Có thu khin sinh tng hp enzim d dàng theo hng có li (nh hng s ng và tng hiu sut tng thu hi). + Giá thành tng i thp vì môt trng tng i r, n gin, d t chc sn xut. Tuy nhiên trong mi trng hp cn lu ý kh nng sinh c t (gây c, gây bnh)  có bin pháp phòng nga, x lý thích hp. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 5  sn xut ch phm enzim, ngi ta có th phân lp các ging vi sinh vt có trong t nhiên hoc các ging t bin có la chn theo hng có li nht, ch tng hp u th t loi enzim nht nh cn thit nào ó. Chng 2: SN XUT CÁC CH PHM ENZIM T VI SINH VT 2.1. u hoà quá trình sinh tng hp enzim trong môi trng nuôi cy vi sinh vt i mc ích nuôi cy thu hi enzim vi hiu sut cao, cn phi nhn r quá trình u hoà sinh tng hp enzim  có các nh hng tác ng thích hp trong công ngh. T bào vi sinh vt ch tng hp enzim khi cn thit vi s lng thích hp mong mun. 2.1.1. u hoà theo hng óng m bi gen operator (gen u khin) _hin ng trn áp : + hin tng trn áp (c ch) (repression): là làm gim quá trình sinh tng hp do sn phm cui cùng ca quá trình nuôi cy. Hin tng này thng gp i vi các enzym xúc tác quá trình sinh tng hp mt chiu nh: quá trình sinh tng hp axit amin, nucleotit. Ví d: khi thêm mt axit amin nào ó vào môi trng nuôi cy thì t bào s không cn ng hp này na. Do ó cng sình ch quá trình sinh tng hp enzym, xúc tác cho quá trình tng hp nên chính axit amin ó. Enzym này chc tng hp tr li khi có nhu u ngha là khi làm gim nng  axit amin tng ng. i vi h thng phân nhánh ngha là quá trình dn n vic to thành nhiu sn phm cui cùng khác nhau t mt c cht chung ban u thì c ch trn áp có thc thc hin theo các cách khác nhau. Ví d: Phn ng u tiên ca quá trình sinh tng hp các axit amin lizin, methionin, treonin u do enzym aspactokinaza xúc tác. Enzym này có 3 izoenzim. Ký hiu: a l , a m , a t . Quá trình sinh tng hp a l s b trn áp bi nng  lizin. a m ca methionin. Riêng i vi a t thì treonin va là sn phm cui cùng ca c quá trình va là  cht ban u  sinh tng hp izolxin. Do ó quá trình sinh tng hp axit t ch b trn áp khi c treonin và izolexin t nng  cao vt quá nhu cu ca t bào. Có th minh ho c ch trn áp này theo s: CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 6 al am at A B C D Methionin E G Lizin Treonin Izoloxin Ghi chú: A – C cht Aspartic ban u. B, C, D, G là các sn phm trung gian có tác dng trn áp. Nh vy ây s trn áp ch xy ra khi có s hp ng tác dng ca c 2 sn phm. u trn áp hp ng này cùng xy ra i vi quá trình sinh tng hp enzym ging nhau xúc tác cho các phn ng song song to thành 2 sn phm cui cùng khác nhau. Ví d: quá trình sinh tng hp valin và izolxin do 4 enzym ging nhau xúc tác theo s sau: Valin Izoloxin 432 1 Hin nay ngi ta cho rng ARN mi là yu t trn áp thc s cho quá trình sinh tng p các enzym xúc tác  tng hp các axit amin tng ng. + Hin tng cm ng (induction): là hin tng ngc li vi hin tng trn áp làm ng lng enzym ca t bào (Ghi chú  s trên: 1: -axeto.-oxyaxítintetaza 2: reductoizomeraza (axetolactat mutaza) 3: hydrooxyaxit dehydrataza 4: amino transpheraza 4 Phn ng 4 Phn ng 6 Phn ng -axetolactat -axeto -Oxybutirat -Dioxy  metylvalerat -Xeto  - metyl -Xeto izovalerat -Dioxy izovalerat CH 3 CHO hot ng CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 7 Ngha là khi trong môi trng nuôi cy có cht cm ng s kích thích cho vi sinh vt sinh tng hp nên nhiu enzym hn so vi bình thng. Cht cm ng c xem nh là mt cht nn (Cht c s, b khung cácbon)  sinh ng hp enzym. Hin nay, ngi ta ch ra rng có th các sn phm trung gian ca quá trình bin i óng vai trò là cht cm ng, thm chí nhiu c cht ca enzym cng có th là cht cm ng. n hình là các gluxit (monosaccarit và polysaccarit). Trong s các enzim do vi sinh vt tng hp, có nhng enzim bình thng chc ng hp rt ít i nhng khi thêm mt s cht nht nh vào môi trng nuôi cy thì hàm ng ca chúng có th tng lên rt nhiu ln. Monod và Cohn (1925) gi các enzim này là enzim cm ng, cht gây nên hiu qu này là gi là cht cm ng. Các enzim cm ng thng là nhng enzim xúc tác cho quá trình phân gii nh: Proteinaza, amylaza, pectinaza, penixilinaza, _galactosidaza  t bào E. coli. Khi nuôi cy E. coli trong môi trng glucoza và glyxerin, vi khun ch tng hp khong 10 phn t_galactosidaza/t bào. Nu nuôi cy trên môi trng lactoza là ngun các bon duy nht thì hàm lng enzim là 6÷7% tng hp lng protein ca t bào. Trích ra t t bào cha n 6000 phn  enzim, ngha là tng lên gn 1000 ln so vi khi nuôi cy trong môi trng c.  cm ng thng có tính cht dây chuyn. Trong h thng gm nhiu phn ng, c cht u tiên ca h thng có th cm ng quá trình sinh tng hp tt c các enzim xúc tác cho quá trình chuyn hoá ca nó. u này c thc hin theo c ch sau: Trc ht cht cm ng làm tng quá trình sinh tng hp enzim tng ng, sau ó sn phm này li m ng tng hp enzim  phá hu nó, tip theo sn phm th 2 này li cm ng tng p nên enzim th 3,… Ví d: Histidin có tác dng cm ng hàng lot các enzim xúc tát cho quá trình chuyn hoá nó thành axít glutamic (Chasin và Magasamil (1968)). + C chu hòa theo kiu trn áp và cm ng: Zocob và Monod ã  ra mô hình gii thích c ch ca 2 hin tng trn áp và cm ng trên c s di truyn. Theo mô hình này, s trn áp và cm ng sinh tng hp enzim c thc hin theo cùng mt c ch chung da trên c su hoà hot ng ca các gene di tác dng ca các cht phân t thp. Nhng cn c chính ca thuyt này nh sau: 1) Có s phân hoá chc nng ca các giai n khác nhau trong phân t AND trong nhim sc th, da vào chc phn ca chúng trong qui trình sinh tng hp Protein có th chia thành các loi gene sau: - Gene cu trúc (ký hiu: S 1 ,S 2 ,S 3 ) : mã hoá phân t protein enzim c tng hp, tc là th t các axit amin trong phân t enzim c tng hp là tu thuc vào th t các nucleotit ca n gene này. Các gene mã hóa các enzim c íp xp lin nhau thành t nhóm trên nhim sc th. Chúng là khuôn  tng hp phân t ARN tt . - Gene Operator (ký hiu: O):  cnh nhóm gene cu trúc, không mã hoá protein nhng m bo cho quá trình sao chép mã  gene cu trúc theo c ch “óng m” ta nh công tc ca mt dây èn. Quá trình sao chép ch có th tin hành khi gene operator  trng thái “m” (không kt vi cht nào c) và ngng li khi nó b “óng” (kt hp vi t cht c bit gi là cht trn áp represson). Mt gene operator có th “ph trách” mt nhóm gene cu trúc các gene cu trúc này cùng vi gene operator ca chúng hp thành CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 8 t n v sao chép s cp gi là mt operon. S tng hp ARN tt c bt u  mt u ca operon và chuyn qua các gene cu trúc n u kia ca operon. - Gene Promotor (gene hot hoá ký hiu P) ng trc gene operator là n And mà ARN-polimeraza s kt hp và bt u quá trình sao chép các gene cu trúc. - Gene u hoà regulator (ký hiu R): Gene này mã hoá cho mt protein c bit gi là cht trn áp (repressor). Cht trn áp có vai trò “óng-m” gene operator. Do ó gene u hoà có th kim tra quá trình sao chép gene cu trúc thông qua cht trn áp này. + Không có repressor (sn phm cui cùng) R P O S1 S2 S3 ADN E3E2E1 A BC D ARNtt + Có repressor (sn phm cui cùng): Phiên mã CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 9 R P O S1 S2 S3 ADN : ARN-polymeraza : Repressor : coreressor R: Gene u hoà, P: Gene promotor, O: Gene Operator, S1, S2, S3: Các gene cu trúc. 2) Trong trng hp u hoà sinh tng hp enzim theo c ch trn áp, repressor do gene u hoà tng hp còn  dng không hot ng (aporepessor) cha có kh nng kt p vi gene operator nên quá trình sao chép các gene cu trúc tin hành bình thng. Các enzim c tng hp xúc tác cho các phn ng  to thành các sn phm cui cùng, n phm cui cùng này li có kh nng kt hp vi aporepessor và hot hoá nó. Aporepessor ã c hot hoá s kt hp vi operator ngn cn quá trình sao chép các gene cu trúc, làm ngng vic tng hp ARN tt tng ng do ó ình ch quá trình sinh ng hp các enzim tng ng. Trong trng hp này các sn phm mi c coi nh là cht trn áp (repressor). 3) i vi trng hp cm ng: + Không có cht cm ng R P O S1 S2 S3 ADN + Có cht cm ng: CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 10 ADNS3S2S1OPR ARNtt A BC D E1 E2 E3  minh ho c ch cm ng sinh tng hp enzim : Cht cm ng Khi không có mt cht cm ng, cht trn áp (repressor) c tng hp ã  trng thái hot ng, nó kt hp vi gene u khin operator, quá trình sao chép mã ca gene cu trúc b bao vây nên các enzim tng ng không c tng hp. Khi có mt cht cm ng thì cht trn áp repressor b mt hot ng, tách khi gene u khin operator và quá trình sao chép mã bt u, kt qu làm tng lng enzim c ng hp. Nh vy ta thy hin tng trn áp và cm ng sinh tng hp enzim là hai mt i lp a mt quá trình hoá sinh thng nht c thc hin thông qua hot ng “óng-m” gene di tác dng ca các cht phân t thp 2.1.2. u hoà tng tác gia ARN-polymeraza vi gene promotor: Nhiu du hiu thc nghim cho thy các gene bo m sinh tng hp mt s enzim m ng xúc tác cho quá trình phân gii không ch chu s kim tra theo c ch cm ng nhã trình bày  trên mà còn chu s kim tra theo mt c ch khác nh tác dng ca AMP vòng (AMP v ) gi là “trn áp phân gii” (cactabolic repressor) AMP v có tác dng kích thích ca AMP v i vi quá trình sao chép mã ca các operon phân gii. Hin tng này ã c nghiên cu nhiu i vi operon lactoza. Theo nhiu tác gi, tác dng kích thích ca AMP v i vi quá trình sao chép mã c thc hin nh mt protein c bit làm trung gian gi là protein nhn AMP v , hay còn gi là protein hot hoá gene phân gii CAP (catabolite gene activator protein). Khi AMP v kt hp vi CAP to thành phc hp có tác dng hot hoá gene promotor làm cho ARN-polymeraza d dàng kt hp vi nó  t u quá trình sao chép mã. Nh vy AMP v có tác dng làm tng cng quá trình sao chép. Cng có ý kin cho rng phc hp AMP v -CAP-ARN-polymeraza cho phép bt u quá trình sao chép mã. CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 11 CAP P O Zi i ZO ARN-Polymeraza CAP a) b) c) i ZO CAP AMPv AMPv AMPv ARN Pol Pol ARN CAP O Z i d) ARNtt Mô hình bt u sao chép mã ca operon lactoza a – Phc hp CAP-AMP v chun b kt hp vào min c bit ca ADN. b – Sau khi phc CAP-AMP v kt hp vào, nó làm yu n ADN. c - ARN-polymeraza kt hp vào min c bit ca nó. d - ARN-polymeraza “trc” dc theo n ADN nh mt “cái bt” n min bt u. Ngi ta cng nhn thy glucza và mt s loi ng khác khi thêm vào môi trng nuôi cy vi khun thng làm giàu lng AMP v trong t bào, do ó làm gim quá trình sinh tng hp nhiu enzim cm ng, ngay c khi nó có cht cm ng trong môi trng. Hin tng này còn gi là “hiu ng glucoza” c quan sát thy  E. coli và mt s vi khun. Tuy nhiên cho n nay vn cha bit rõ c ch làm giàu AMP v do glucoza và các ng khác 2.2. Tuyn chn và ci to ging vi sinh vt cho enzim có hot lc cao:  chn ging vi sinh vt có kh nng sinh tng hp enzim cao, ngi ta có th phân p t môi trng t nhiên hoc có th dùng các tác nhân gây t bin tác ng lên b máy di truyn hoc làm thay i c tính di truyn  to thành các bin chng có kh ng tng hp c bit hu hiu mt loi enzim nào ó, cao hn hn chng gc ban u. 2.2.1. Phng pháp gây t bin: ây là phng pháp hay c dùng nht nhm : - To nhng t bin b gim kh nng sinh tng hp repressor hoc tng hp repressor có ái lc thp vi gene opertor. - To nhng t bin tng hp enzim có cu trúc bc 1 thay i do ó có th gim  thay i vi kiu kìm hãm theo c ch liên h ngc. u vào Min bt u vào CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 12 u s thay i cu trúc bc 1 xy ra  vùng trung tâm hot ng hoc  gn ó thì có th làm thay i rõ rt hot tính ca enzim. - Gây t bin n gene hot hoá promotor  làm tng áp lc ca nó i vi ARN- polymaraza do ó làm tng tc  sao chép mã Dùng bin pháp này có th làm tng ng glucoza-6-phosphatdehydrogenaza lên 6 ln. Hin tng t bin thng liên h vi s thay i mt gene, chng hn b “li” mt baz khi tái to phân t ADN. Ví d mt v trí nào ó trên gene có th t nucleotit là G-X, nu nó b thay th bng A-T, T-A hoc X-G thì phân t ARN tt c tng hp trên n gene b li này cng s khác vi ARN tt bình thng  v trí tng ng vi ch “li” trên gene. Do ó s tng hp nên phân t enzim khác vi bình thng  mt s gc axít amin.  to mt t bin gene có th dùng tác nhân vt lý (tia t ngoi, tia phóng x) hay hoá hc (các hoá cht) tác dng lên t bào sinh vt. 2.2.2. Phng pháp bin np: Là s bin i tính trng di truyn ca mt nòi vi sinh vt di nh hng ca ADN trong dch chit nhn c t t bào ca vi sinh vt khác. ây yu t bin np là ADN.  chuyn vt liu di truyn (ADN) t t bào cho n t bào nhn có th xy ra trong ng nghim (invitro) khi cho t bào nhn tip xúc vi dch chit t t bào cho mà không có s tip xúc gia các t bào. Các t bào có th nhn bt k loi ADN nào ch không òi hi phi là ADN t các ging h hàng. Tuy nhiên t bào ch có th nhn mt sn ADN nht nh, thng không quá 10 n. Các n ADN c di truyn trong bin np có M=10 6 -10 7 và phi có câu trúc xon kép. T bào không tip nhn các n ADN có kích thc nh hn hoc các n không có cu trúc xon kép. Hin tng bin np ph bin  nhiu loài vi sinh t nh: Diplococus, Staphylococus, Hemophilus, Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Xantomonas. 2.2.3. Phng pháp tip hp gene: Khác vi bin np, ây vt liu di truyn chc truyn t t bào cho n t bào nhn khi hai t bào tip xúc vi nhau. Do vy các vi sinh vt có kh nng bin np thì s không có kh nng tham gia tip hp gene na. Hin nay quá trình tip hp gene ã c nghiên cu  mt s loài vi khun nh E. coli, salmonella, Pseudomonas aeruginosa. 2.2.4. Phng pháp ti np: t liu di truyn (ADN) c chuyn t t bào cho sang t bào nhn nh vai trò trung gian ca thc khun th (phage). Trong quá trình ti np, các n ADN c chuyn t  bào cho n t bào tip hp vi ADN ca t bào nhn. Do ó làm bin i tính cht di truyn ca t bào nhn. 2.3. Phng pháp bo qun ging vi sinh vt : Khi s dng vi sinh vt  sn xut enzim cn chn ging thun chng, ã c kim tra y  v các c tính hoá sinh, vi sinh, nuôi cy và cn c bit lu ý n u kin o qun ging. Thc t khi bo qun ging gc trong mt thi gian dài có th to ra các bin d ngu nhiên không mong mun do ó nh k phi cy chuyn và kim tra li các c tính ban u. [...]... monosacarit và glyxerin thì hoàn toàn không th sinh t ng h p enzim này ng glucoza có tác d ng kìn hãm Trang: 14 CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths Tr n Xuân Ng ch (ch t tr n áp) sinh t ng h p enzim pectinaza trên môi tr ng nuôi c y là pectin và lactoza ôi v i loài Asp Niger, Asp Awamori - i v i các h vi sinh v t sinh enzim xenluloza Enzim xenluloza là enzim c m ng vì v y trong môi tr ng nuôi c y vi sinh v t sinh enzim. .. ph i th c hi n các u ki n k thu t c bi t và kh c khe h n nh : nguyên li u ph i t t, giàu ch t dinh d ng h n, u ki n nuôi c y kh ng ch nghiêm ng t h n, th i gian nuôi c y dài h n (g n g p ôi) n m c hình thành nhi u bào t và u + Ti n hành quá trình nuôi c y : Sau khi gieo gi ng và phân ph i vào các d ng c nuôi (mành hay khay c l ) r i chuy n vào phòng nuôi có u ch nh nhi t và m t ng i c a không khí (ϕ)... cho môi tr ng c tinh khi t h n v ph ng di n vsv và làm cho chín (bi n hình) môi tr ng (tinh b t, protein) Thông th ng ng i ta thanh trùng b ng h i n c tr c ti p nhi t 120- 1300C trong 2-3h + Làm ngu i và làm t i môi tr ng gieo gi ng: Kh i môi tr ng v a h p xong còn nóng và dính b t Vì v y ph i làm ngu i và làm i thu n ti n cho vi c gieo gi ng và phân ph i vào các d ng c nuôi Yêu c u th i gian này ph i... nit nguyên ch t và l nh thâm ) nên chi phí b o qu n r t cao 2.4 Môi tr ng nuôi c y vi sinh v t sinh t ng h p enzim: ây là y u t u tiên nh h ng tr c ti p n ho t ng s ng c ng nh kh n ng sinh ng h p enzim c a vi sinh v t Môi tr ng ch n ch a y các ch t C, N, H, O Các ch t vô c : Mn, Ca, P, S, Fe, K và các ch t vi l ng khác 2.4.1 Ngu n cácbon: Th ng là h p ch t h u c trong ó ch y u là gluxit, tu thu c vào... ngu n nit là các axit amin có ngu n g c t d ch thu phân protein (d ch t phân n m men, n c ch m, cao ngô, d ch chi t malt) ây v a là ngu n nit v a là ngu n cácbon và ch t c m ng sinh enzim Các axit amin có tác d ng t t nh t trong nh ng tr ng h p này là asparagin, axit glutamic; D,L serin, histamin, alanin Trong khi casein th m chí là c ch thì d ch thu phân casein l i c m ng sinh t ng h p amylaza lên... ý trong a s tr ng h p, m t s lo i ng, n hình nh t là ng glucoza i kìn hãm sinh t ng h p các enzim thu phân nói chung (ch ng h n theo c ch tr n áp phân gi i do làm giàu l ng AMPv trong t bào) i v i các h vi sinh v t sinh enzim Proteaza: Có m t s ngu n gluxit khi dùng nuôi c y n m m c có kh n ng sinh t ng h p enzim Proteaza có ho t l c cao, ch ng h n theo th t sau: + i v i Asp Flavus 74: fructoza > glucoza... i là tinh b t mà là s n ph m thu phân m t ph n c a nó: erytrodextrin T ng t nh v y, ch t c m ng a enzyme proteinaza là các polypeptin, protein có phân t l ng nh - Khi l a ch n môi tr ng nuôi c y và c bi t là ch t c m ng c n xem xét c n th n các y u t chi phí, giá thành s n xu t ra s n ph m 2.5 Các ph ng pháp nuôi c y vi sinh v t: nguyên t c có 2 ph ng pháp nuôi c y vsv thu enzyme là: ph ng pháp nuôi... c y m c g ng n gi nuôi th 10-12 X y ra s tr ng n bào t và xu t hi n cu ng n m b o m s n y m m nhanh và h n ch nhi m t p, n gi m nguyên li u 55-60%, ϕ=96-100%, T=30-32oC *Giai n 2: kéo dài trong 10-18h N m m c phát tri n m nh, lan kh p b m t và trong toàn kh i môi tr ng tr ng (khu n ty n sâu vào c ch t) d n n hi n t ng k t bánh Quá trìnhhô h p và to nhi t m nh làm môi tr ng tr ng b khô x p, t ng hàm... có kh n ng sinh t ng h p enzym cao và l a ch n t i u thành phân môi tr ng, các u ki n nuôi c y, enzym thu c tinh khi t h n, m b o u ki n v sinh, vô trùng + Tuy nhiên do thu c canh tr ng có n ng enzym th p nên khi tách thu h i enzym s có giá thành cao (có t tr c) T n n n ng cho khu y tr n, n u không b o m vô trùng s b nhi m hàng lo t, toàn b gây t n th t l n 2.6 Tách và làm s ch ch ph m enzym : (xem s... th ng tách sinh kh i và c n bã khoi canh tr ng b ng cách c li tâm, l c ép có s d ng tác nhân tr l c (diatomit, t ho t tính) ho c các tác nhân tr k t t a (Ví d : h n h p CaCl2+(NH4)2SO4 CaSO4 : l ng c n kéo theo sinh kh i nên l c d h n) Trang: 22 CÔNG NGH ENZIM GVC: Ths Tr n Xuân Ng ch 2.6.2 Thu nh n ch ph m k thu t: Ch ph m k thu t là ch ph m enzym ch a c tinh ch ; có th ch a m t vài lo i enzym ch y . NGH ENZIM GVC: Ths. Trn Xuân Ngch Trang: 3 Chng 1: NGUYÊN LIU THU ENZIM VÀ PHÂN B 1.1. Ngun ng vt: 1.1.1. Tu tng: (Pan creas) ây là ngun enzim. cha enzim bromelain. Trong ó nhiu nht là phn lõi u qu da. Hot tính ca enzim bromelain ph thu c nhiu vào trng thái và u kin bo qun nguyên