ĐH Quốc tế Hồng Bàng DVDS17-LC4-DS2 NGUYỄN XUÂN DŨNG BÀI KIỂM TRA Môn: DƯỢC LIỆU Ngày:28/12/2019 Phản ứng tạo bọt Saponin: Cách thực hiện: - Chiết dược liệu (1g) với cồn 70% (5mL); đun cách thủy 15 phút - Thu dịch chiết dược liệu, bốc tới cắn - Hịa cắn dược liệu với nước ống nghiệm - Bịt lắc ống nghiệm thẳng đứng 15 giây (khoảng 30 lần) - Để yên ống nghiệm thẳng đứng quan sát sau 15 phút Kết quả: - Phản ứng tạo bọt (+) khi: Dịch chiết dược liệu ống nghiệm sau lắc tạo thành cột bọt bền vững phút - Kết luận: Dịch chiết dược liệu có Saponin Chỉ số bọt: Cách thực hiện: - Chiết dược liệu (1g) với nước (100mL); đun sôi nhẹ 30 phút; để nguội lọc - Thu dịch chiết dược liệu, thêm nước cho vừa đủ 100mL - Chia dịch chiết dược liệu vào 10 ống nghiệm, thêm nước vào ống nghiêm cho vừa đủ 10mL ống: Dịch chiết (mL) Nước (mL) Nồng độ (1) 0.01 (2) 0.02 (3) 0.03 (4) 0.04 (5) 5 0.05 (6) 0.06 (7) 0.07 (8) 0.08 (9) 0.09 (10) 10 0.1 - Bịt lắc ống nghiệm thẳng đứng 15 giây (khoảng 30 lần) - Để yên ống nghiệm thẳng đứng quan sát sau 15 phút Chỉ số bọt: - Là số mL nước đủ để hòa tan Saponin có 1g dược liệu; - Cho cột bọt ống nghiệm cao 1cm sau lắc đọc kết điều kiện quy định - Nếu cột bọt ống số (1) < 1cm → Chỉ số bọt < 100 - Nếu cột bọt cao 1cm (ví dụ) ống số (4) → Chỉ số bọt là: 10 x 1/0,04 = 250 3 Phản ứng tạo bọt dùng để phân loại Saponin (p/ư Fontan-Kaudel): Cách thực hiện: - Cho cắn / dịch chiết dược liệu cồn 70% vào ống nghiệm (# 2-3mL) (1) có dd HCl 5mL (pH = 1) (2) có dd NaOH 5mL (pH = 13) - Bịt lắc ống nghiệm thẳng đứng 15 giây (khoảng 30 lần) - Để yên ống nghiệm thẳng đứng quan sát: Kết quả: - Nếu cột bọt ống nghiệm (1) (2) cao nhau: → dịch chiết dược liệu có Saponin triterpenoid - Nếu cột bọt ống nghiệm (2) cao so với (1): → dịch chiết dược liệu có Saponin steroid Tại chiết Saponin phải dùng cồn 70%? - Tất Saponin có tính phân cực mạnh nên dung mơi dùng để chiết dung mơi có tính phân cực nước, methanol, ethanol, n-buthanol, … Đối với nước: Saponin hòa tan tốt; nhiên có nhược điểm dịch chiết dược liệu lẫn nhiều tạp chất như: chất nhựa, chất màu, tanin, tinh bột, khống vơ cơ… Ngồi ra, có số Saponin bị thủy phân enzym môi trường nước Dùng cồn 70% khắc phục nhược điểm - Saponin khó tan cồn cao độ, nên khơng dùng để chiết dược liệu có Saponin - Saponin tan Aceton, khơng tan Ether n.Hexan, nên thường dùng dung môi để làm kết tủa Saponin Tại dịch chiết Saponin phải cô bớt cồn 70% thực phản ứng tạo bọt? - Tất Saponin có đầu ưa nước (Ose/Glycon) đầu kỵ nước (Sapogenin/Aglycon) nên có hoạt tính bề mặt cao, dễ tạo bọt bền vững lắc với nước; hịa tan với chất béo nước tạo thành nhũ - Trong dung mơi cồn lỗng Saponin hịa tan hồn tồn, để làm phản ứng tạo bọt cần phải cô dịch chiết dược liệu cho cồn bay bớt thực