Nghiên cứu co dinh dưỡng enzyme α-amylase 03

Nghiên cứu, dinh dưỡng, enzyme α-amylase

NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH ENZYME α-AMYLASEGVHD: TS. Trần Bích LamSVTH: Nguyễn Thị Vân LinhMSSV: 60601261Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí MinhTrường Đại học bách khoaKhoa Kỹ thuật hóa họcBộ môn Công nghệ Thực phẩmLuận văn tốt nghiệp Đại học Giới thiệuAmylase rất quan trọng trong quá trình đường hóa tinh bột, đồng thời có nhiều ứng dụng trong công nghệ thực phẩm Tuy nhiên enzyme bị:oỨc chế bởi nồng độ cao của cơ chất, sản phẩm.oMất ổn định khi sử dụng lâu, thời gian dài.oKhó tách khỏi sản phẩm…Có thể khắc phục những nhược điểm này bằng cách cố định enzyme. NHIỆM VỤ THÍ NGHIỆMKhảo sát phương pháp cố định α-amylase trên chitosan rắnChọn điều kiện, thông số cố định α-amylaseKhảo sát tính chất của α-amylase cố địnhKhả năng tái sử dụng chế phẩm α-amylase cố định NGUYÊN LIỆUEnzyme α-amylase oTermamyl 120L của hãng Novo, sản xuất từ vi khuẩn Bacillus licheniformis. oTính chất:pHopt = 6 – 6,5.Topt = 90oC.ChitosanoNguồn gốc: Đại học thủy sản Nha Trang.oChỉ số deacetyl hóa (chỉ số DD): 75%.oPhân tử lượng trung bình: 5,187x104 đvC. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hàm lượng protein (mg/ml)Hoạt tính riêng (đơn vị hoạt độ/mg protein α-amylase tự do)50,09 20,86KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMCHẾ PHẨM AMYLASE TỰ DOBảng: Hàm lượng protein và hoạt tính riêng của α-amylase tự do KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMCHỌN PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNHPhương pháp 1: Cố định α-amylase bằng liên kết cộng hóa trịPhương pháp 2: Cố định α-amylase bằng phương pháp hấp phụ và liên kết giữa các enzymeChọn phương pháp 1 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMKHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYMEHIỆU SUẤT CỐ ĐỊNH KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMKHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYMEChitosan khối lượng cố định 1gGiá trị ban đầu của 5 yếu tố ảnh hưởng:oThể tích enzyme: 0,5mloThời gian cố định: 2 giờoVận tốc lắc đảo: 100 vòng/phútoKích thước chitosan: 2,8mmoNồng độ glutaraldehyde: 2% KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMKHẢO SÁT THỂ TÍCH ENZYME SỬ DỤNGEnzyme sử dụng (ml)Hoạt tính riêng α-amylase cố định0,1 10,05ab ± 0,10,2 10,19ac ± 0,150,3 9,97b ± 0,130,4 10,18ac ± 0,050,5 10,25c ± 0,09Bảng: Hoạt tính riêng của amylase cố định ứng với mỗi thể tích enzyme sử dụngChọn thể tích enzyme sử dụng ban đầu 0,2mlKHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME [...]... suất cố định enzyme đạt cao nhất là 52,15% tại những giá trị sau: o o o o o Thể tích enzyme: 0,2ml Thời gian cố định: 2 giờ Vận tốc lắc: 150 vòng/phút Kích thước chitosan: 0,7mm Nồng độ glutaraldehyde: 4% KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT α-AMYLASE CỐ ĐỊNH KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNH ẢNH HƯỞNG CỦA pH pHopt của enzyme cố định khoảng 7 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH... HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ Topt của enzyme cố định khoảng 75 – 80oC KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNH ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CƠ CHẤT Phương trình động học của phản ứng enzyme tuân theo định luật Michaelis – Menten ở nồng độ tinh bột dưới 150 g/l KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNH XÁC ĐỊNH HỆ SỐ PHƯƠNG TRÌNH ĐỘNG HỌC MICHAELIS – MENTEN Enzyme Enzyme tự do cố định Vma 1,16... CỦA α-AMYLASE o Trong phân tử α-amylase khá giàu tyrosine và tryptophan o Glutamic và aspartic chiếm ¼ o Có rất ít methionine và có từ 7 – 10 gốc cysteine o Chứa rất ít histidine và arginine KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNH Bảng: Ảnh hưởng của pH lên hoạt tính α-amylase tự do và cố định pH Hoạt tính (đơn vị hoạt tính/mg protein α-amylase) α-amylase tự do 5,5 6 6,5 7 7,5 8 α-amylase. .. KIẾN NGHỊ  Nghiên cứu sự ổn định nhiệt của α-amylase cố định  Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian bảo quản đến hoạt tính α-amylase cố định  Tối ưu quá trình thủy phân tinh bột  Đánh giá chất lượng sản phẩm CÁM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE BÁO CÁO Slide phụ PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH Phương pháp 1: Cố định bằng liên kết cộng hóa trị Phương pháp 2: Cố định bằng hấp phụ và liên kết giữa các enzyme XÁC ĐỊNH... SỬ DỤNG CỦA ENZYME CỐ ĐỊNH KẾT LUẬN  Phương pháp cố định α-amylase trên chất mang chitosan rắn được chọn là phương pháp cố định bằng liên kết cộng hóa trị  Điều kiện cố định α-amylase trên 1g chitosan đạt hiệu suất cao nhất 52,15%: o Lượng enzyme sử dụng 0,2ml o Thời gian cố định 2 giờ o Vận tốc lắc đảo 150 vòng/phút o Kích thước chitosan 0,7mm o Nồng độ glutaraldehyde 4%  Tính chất α-amylase cố... 10,18b ± 0,32 9,40a ± 0,19 Hoạt tính còn lại (%) 48,58 49,23 53,88 62,12 60,70 71,99 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNH Bảng: Ảnh hưởng của nhiệt độ lên hoạt tính α-amylase tự do và cố định pH Hoạt tính (đơn vị hoạt tính/mg protein αamylase) α-amylase tự do 60 65 70 75 80 85 90 α-amylase cố định 18,38a ± 0,12 19,55b ± 0,55 20,50c ± 0,17 23,09d ± 0,31 24,86e ± 0,12 26,21f ± 0,11 30,58g... ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KHẢO SÁT THỜI GIAN CỐ ĐỊNH Bảng: Hoạt tính riêng của amylase cố định ứng với mỗi thời gian cố định Thời gian cố định (giờ) Hoạt tính riêng α-amylase cố định 1 2 3 4 5 10,08a ± 0,15 10,09a ± 0,07 10.17a ± 0,08 9.87a ± 0,16 7.85b ± 0,38 Chọn thời gian cố định 2 giờ KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KHẢO SÁT VẬN TỐC... QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ GLUTARALDEHYDE Bảng: Hoạt tính riêng của amylase cố định ứng với mỗi nồng độ glutaraldehyde Nồng độ glutaraldehyde (%) 1 2 3 4 5 Hoạt tính riêng α-amylase cố định Chọn nồng độ glutaraldehyde 4% 9,97ab ± 0,15 9,68b ± 0,34 10,21a ± 0,20 10,16a ± 0,15 8,53c ± 0,10 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KẾT QUẢ... amylase cố định ứng với mỗi vận tốc lắc đảo Vận tốc lắc đảo (vòng/phút) Hoạt tính riêng α-amylase cố định 0 50 100 150 200 9,98a ± 0,11 10,07ab ± 0,14 10,11ab ± 0,05 10,15ab ± 0,14 10,23b ± 0,08 Chọn vận tốc lắc đảo 150 vòng/phút KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ CÔNG NGHỆ ĐẾN QUÁ TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KHẢO SÁT KÍCH THƯỚC CHITOSAN Bảng: Hoạt tính riêng của amylase cố định ứng với mỗi... THÍ NGHIỆM TỐI ƯU HAI YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG NHIỀU NHẤT  Hai yếu tố được chọn là thể tích enzyme và thời gian cố định  Thí nghiệm được tiến hành theo phương pháp quy hoạch thực nghiệm trực giao hai yếu tố, với hàm mục tiêu là hiệu suất cố định  Số thí nghiệm thực hiện là 11 với giá trị của hai yếu tố như sau: o Thể tích enzyme sử dụng: Z1∈[0,1; 0,3], và tâm Zo1 = 0,2 ml o Thời gian cố định: Z2∈[1; 3], và . TRÌNH CỐ ĐỊNH ENZYME KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMNGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT α-AMYLASE CỐ ĐỊNH KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMNGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNHpHopt của enzyme cố định. QUẢ THÍ NGHIỆMNGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT AMYLASE CỐ ĐỊNHTopt của enzyme cố định khoảng 75 – 80oCẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMNGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT