Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của loài nàng nàng (callicarpa candicans) và loài tử châu lá to (callicarpa macrophylla) ở việt nam tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …………***………… VŨ THỊ THU LÊ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI NÀNG NÀNG (CALLICARPA CANDICANS) VÀ LOÀI TỬ CHÂU LÁ TO (CALLICARPA MACROPHYLLA) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã số: 9.44.01.17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC HÀ NỘI - 2020 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Thị Hồng Minh Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam GS.TS Phạm Quốc Long Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phản biện 1: PGS TS Phan Minh Giang Trường Đại học Khoa học tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phản biện 2: TS Đỗ Hữu Nghị Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Số 18 Hoàng Quốc Việt - Cầu Giấy - Hà Nội Vào hồi … giờ… ngày … tháng … năm 2020 Có thể tìm luận án thư viện Quốc gia Việt Nam thư viện Học viện Khoa học Cơng nghệ MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới có nguồn thiên nhiên vơ phong phú đa dạng sinh học với nhiều loài dược liệu quý Việc sử dụng loại thảo dược theo y học cổ truyền hay từ hợp chất nguồn gốc tự nhiên có xu hướng ngày tăng chiếm vị trí quan trọng y học Những thuốc sử dụng thảo dược đối tượng nhà khoa học nghiên cứu cách đầy đủ chất hoạt chất có cỏ thiên nhiên, kết nghiên cứu góp phần giải thích rõ tác dụng chữa bệnh thuốc cổ truyền hay sử dụng dân gian Trên giới nghiên cứu loài chi Callicarpa chủ yếu tập trung nghiên cứu về: thực vật học, dược lý, hóa thực vật lâm sàng Nghiên cứu dược lý thực dịch chiết thô hợp chất tinh khiết cung cấp sở khoa học cho việc sử dụng truyền thống Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chủ yếu tập trung vào hoạt tính: kháng viêm, cầm máu, trí nhớ, oxi hóa, kháng khuẩn Những nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học giới rằng, hợp chất diterpenoid triterpenoid có hoạt tính chống ung thư tốt mà hoạt chất thành phần hóa học phong phú chi Callicarpa Việc nghiên cứu nhằm tìm hoạt chất có ích thực vật nhận quan tâm giới khoa học nhiều quốc gia giới có Việt Nam Đây lý đề tài “ Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Nàng nàng (Callicarpa candicans) loài Tử châu to (Callicarpa macrophylla ) Việt Nam.” lựa chọn để nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu luận án  Phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất từ loài C candicans loài C macrophylla thu hái Việt Nam  Đánh giá hoạt tính gây độc số dòng tế bào ung thư: gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) hợp chất phân lập  Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu loài C candicans loài C macrophylla Các nội dung nghiên cứu luận án Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ loài C candicans loài C macrophylla Việt Nam Xác định thành phần hóa học tinh dầu lồi C candicans loài C macrophylla Việt Nam phương pháp chưng cất lôi quấn nước thông thường phương pháp chưng cất có hỗ trợ vi sóng Đánh giá hoạt tính gây độc ba dòng tế bào ung thư (gan HepG2, tiền liệt tuyến - PC3, phổi - A549) kháng vi sinh vật kiểm định in vitro tinh dầu thu từ loài C candicans loài C macrophylla Đánh giá hoạt tính gây độc ba dòng ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) in vitro hợp chất phân lập từ loài C candicans loài C macrophylla CHƯƠNG TỔNG QUAN Phần tổng quan tài liệu tập hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề: 1.1 Đặc điểm chung thực vật học chi Callicarpa 1.2 Tác dụng dược lý chi Callicarpa 1.3 Thành phần hóa học thực vật chi Callicarpa 1.4 Hoạt tính sinh học thực vật chi Callicarpa Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phần mô tả chi tiết trình xử lý mẫu, phương pháp tạo cặn chiết, sắc ký phân lập hợp chất; xác định thành phần hóa học tinh dầu phương pháp thử hoạt tính sinh học 2.1 Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Mẫu thực vật Lá, thân cành loài Nàng nàng (Callicarpa candicans (Burm.f.) Hochr.) Tử châu to (Callicarpa macrophylla Vahl) thu huyện Tam Đảo – Vĩnh Phúc vào tháng 10/2015 huyện Đại Từ, tỉnh Thái Nguyên vào tháng 10 năm 2017, TS Nguyễn Quốc Bình (Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam - VAST) xác định tên khoa học, mẫu số tiêu lưu Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam 2.1.2 Phương pháp phân lập hợp chất từ mẫu Việc phân tích, phân tách phần dịch chiết thực phương pháp sắc ký khác như: sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký cột thường (CC) với pha tĩnh silica gel (Merck), sắc ký cột pha đảo với pha tĩnh YMC RP 18 (Merck), sắc ký dây phân tử với pha tĩnh sephadex LH-20 (Merck) sắc ký điều chế pha tĩnh silica gel 2.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học Cấu trúc hợp chất xác định kết hợp thông số vật lý với phương pháp phổ đại như: điểm nóng chảy (Mp), độ quay cực ([α]D), sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS), phổ khối lượng phun mù điện tử (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HR-ESIMS), phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân gồm phổ chiều (1H-, 13 C-NMR DEPT) phổ chiều (COSY, HSQC, HMBC NOESY) 2.2 Phương pháp chiết xuất tinh dầu 2.2.1 Phương pháp chưng cất lôi nước dùng cất tinh dầu vi lượng 2.2.2 Phương pháp chưng cất lơi nước có hỗ trợ vi sóng 2.2.3.Phương pháp phân tích thành phần hóa học tinh dầu Xác định thành phần hóa học tinh dầu cách kết hợp hệ thống máy GC –MS với thư viện phổ chuẩn phần mềm khóa thời gian lưu Mass Finder 4.0 2.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học Hoạt tính gây độc tế thử nghiệm phương pháp SRB ba dòng ung thư: gan (Hep-G2), phổi (LU-1) vú (MCF-7) phương pháp MTT [3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide] ba dòng ung thư gan (Hep-G2), tiền liệt tuyến (PC3) phổi (A549) Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định tiến hành để đánh giá hoạt tính kháng sinh mẫu chiết theo phương pháp Vander Bergher Vlietlinck (1991), McKane & Kandel (1996) chủng: Vi khuẩn Gram, nấm sợi nấm men Các thử nghiệm thực tại Phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, VAST Chương THỰC NGHIỆM Phần thực nghiệm mơ tả chi tiết q trình: Xử lý mẫu phân lập chất từ loài Tử châu to (C macrophylla) Nàng nàng (C candicans); Hằng số vật lí kiện phổ hợp chất phân lập từ loài nghiên cứu 3.1 Lá Tử châu to (C macrophylla) 3.1.1 Thu nhận dịch chiết từ Tử châu to Quá trình xử lý mẫu Tử châu to Sơ đồ 3.1 Sơ đồ ngâm chiết Tử châu to (C macrophylla) 3.1.2 Phân lập, tinh chế chất từ cặn chiết Tử châu to Quá trình phân lập hợp chất từ cặn chiết n-hexane ethyl acetate Tử châu to Sơ đồ 3.2 Sơ đồ 3.2 Phân lập cặn n-hexane ethyl acetate Tử châu to 3.2 Lá Nàng nàng (C candicans) 3.2.1 Thu nhận dịch chiết từ Nàng nàng Quá trình xử lý mẫu Nàng nàng Sơ đồ 3.3 Sơ đồ 3.3 Sơ đồ ngâm chiết Nàng nàng (C candicans) 3.2.2 Phân lập, tinh chế chất từ cặn chiết Nàng nàng Quá trình phân lập hợp chất từ cặn n-hexane ethyl acetate Nàng nàng Sơ đồ 3.4 Sơ đồ 3.4 Sơ đồ phân lập cặn n-hexane ethyl acetate Nàng nàng Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Chương trình bày cách xác định cấu trúc hợp chất phân lập được, thành phần hóa học tinh dầu kết thử hoạt tính sinh học thành phần 4.1 Thành phần hóa học tinh dầu Nàng nàng Tử châu to Phân tích GC - MS thành phần khơ Nàng nàng có 39 cấu tử, chiếm 92,57% tổng hàm lượng Trong có 25 sesquiterpene hydrocacbon (62,98%) 11 sesquiterpen có chứa oxi (22,46%) Cấu tử xác định tinh dầu α-Gurjunene (21,97%) Trong tinh dầu Nàng nàng tươi có 47 cấu tử phát chiếm 93,17% tổng hàm lượng tinh dầu Trong số đó, có 28 sesquiterpene hydrocarbon (69,84%), 12 sesquiterpen (16,50%) Trong đó, cấu tử chiếm hàm lượng lớn α-gurjunene (21,31%) Thành phần hóa học tinh dầu từ hoa Nàng nàng cho biết có tổng 47 cấu tử, chiếm 92,86% tổng hàm lượng Các cấu tử có hàm lượng cao xác định tinh dầu hoa Các cấu tử có hàm lượng xác định tinh dầu hoa Nàng nàng Ecaryophyllene (5,07%), α- selinene (5,66%), δ-cadinene (5,44%) Thành phần hóa học tinh dầu tươi Tử châu to phát có 50 cấu tử, chiếm 90,59% tổng hàm lượng Cấu tử xác định tinh dầu Phytol (11,03%) 4.2 Các hợp chất phân lập từ Tử châu to Nàng nàng Từ cặn dịch chiết n-hexane ethyl acetate Tử châu to 10 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm hợp chất terpenoid: callimacrophylla B (M8), 3βhydroxyolean-12-ene (M2), β-amyrin (M3), ursolic acid (M6), oleanolic acid (M10), callimacrophylla A (M1) ent-1β-acetoxy7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7) hợp chất steroid: spinasterol (M5), β-sitosterol (M4) daucosterol (M9) Trong đó, callimacrophylla A (M1) callimacrophylla B (M8) hai hợp chất Từ cặn dịch chiết n-hexane ethyl acetate Nàng nàng (C candicans) 11 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm hợp chất flavonoid: 5-hydroxy-7,4’-dimethoxyflavon (C1), 5-hydroxy-3’,4’,7-trimethoxyflavon (C3), Hợp chất genkwanin (C9) cynaroside (C10); hợp chất terpenoid: ursolic acid (M6), 2α-hydroxy-ursolic acid (C7), 2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid (C8), seco-hinokiol (C5) methyl seco-hinokiol (C6) hợp chất steroid: β-sitosterol (M4) daucosterol (M9) Trong đó, hợp chất methyl seco-hinokiol lần đầu phân lâp từ tự nhiên Thành phần hóa học lồi thực vật chi Callicarpa nghiên cứu chủ yếu hợp chất flavonoid, diterpennoid triterpenoid Một số hợp chất phân lập giống hai loài như: ursolic acid, β-sitosterol daucosterol Các hợp chất triterpenoid phân lập từ loài nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học hợp chất khung ursane oleane, phù hợp với thành phần hóa học hợp chất triterpenoid chi Callicarpa tài liệu công bố Các hợp chất diterpene phân lập từ loài nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học hợp chất khung ent-kaurane abietane, phù hợp với thành phần hóa học hợp chất diterpenoid chi Callicarpa tài liệu công bố Các hợp chất phân lập từ loài nghiên cứu Bảng 4.26 Các hợp chất phân lập từ loài nghiên cứu Tên hợp chất callimacrophylla A (M1) ent-1α-acetoxy-7β,14 α-dihydroxy-kaur16-en-15-on (M7) seco-hinokiol (C5) methyl seco-hinokiol (C6) 3β-hydroxyolean-12-ene (M2) Diterpneoid C macrophylla KL Tính (mg) 10,8 M Diterpenoid C macrophylla 12,5 H Diterpenoid C candicans Diterpenoid C candicans Triterpenoid C macrophylla 22,8 31,0 10,3 H H L Lớp chất Loài phân lập 13 44,9 - 26,9 1,75 (1H, m)/ 1,66 (1H, m) 48,1 30,5 69,5 3,62 (1H, dd, 10,5; 5,5) 78,1 10 58,4 52,6 38,5 0,94 (1H, d, 9,0) 1,20 (1H, m)/ 1,53 (1H, m) 11 17,9 1,20 (1H, m)/ 1,53 (1H, m) 49,0 51,1 40,4 19,1 12 28,0 1,18 (1H, m)/ 1,60 (1H, m) 27,6 13 38,7 2,21 (1H, br d, 3,5) 14 25,3 1,66 (1H, m)/ 2,38 (1H, m) 46,1 37,5 15 16 219,3 78,4 1,63 (dd, 11,9, 1,7) 1,75 (m) 1,40 (m) 2,28 (dt, 13,3, 4,1) 1,33 (overlap) 1,85 (overlap) 3,66 (dd, 10,7, 6,0) 1,68 (m) 1,98 (m) 1,57 (m) 2,95 (br s) 2,45 (d, 11,8) 1,33 (overlap) 6,02 (br s) 5,16 (br s) 3,64 (d, 10,5) 3,32 (d, 10,5) 0,88 (s) 1,44 (s) 219,3 82,9 3,45 (1H, dd, 6,5; 12,0) 66,7 17 61,4 3,54 (1H, dd, 4,5; 12,0) 2,85 (1H, dd, 5,0; 10,5) 71,0 18 69,9 3,18 (1H, dd, 5,0; 10,5) 19 17,4 0,65 (3H, s) 16,8 20 17,7 1,02 (3H, s) 16,1 7-OH 4,30 (1H, d, 5,0) 16-OH 4,78 (1H, s) 17-OH 4,43 (1H, dd, 4,5; 6,5) 18-OH 4,49 (1H, dd, 5,0; 10,0) #δH #δC scopariusol L (1H: 500 MHz, 13C: 125 MHz, pyridine-d5) [102] 4.2.2.1 Hợp chất callimacrophylla B (M8)- Hợp chất Hợp chất M8 thu dạng tinh thể trắng Công thức phân tử hợp chất M8 xác định C32H50O4 dựa xuất píc ion giả phân tử phổ khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS m/z 499,3786 [M + H]+ (tính tốn lý thuyết cho C32H51O4: m/z 499,3786) Phổ 1H-NMR hợp chất M8 xuất nhóm methyl singlet H 0,83 (3H, s, H3-28); 1,17 (3H, s, H3-26); 1,18 (3H, s, H325); 1,34 (3H, s, H3-27); 0,89 (6H, s, H3-23 H3-24), nhóm methyl dạng doublet H 0,80 (3H, J = 6,5 Hz, H3-29) 0,93 (3H, J = 6,5 Hz, H3-30) nhóm methyl H 2,05 (3H, s, CH3CO) nhóm acetoxy Phổ 1H-NMR M8 cho thấy xuất nhóm methien [H 4,53 (1H, dd, J = 11,5; 4,5, H-3); 0,82 (1H, m, H-5); 2,50 (1H, s, H-9), 2,43 (1H, dd, J = 11,5; 1,5, H-18); 1,42 (1H, m, H-19) 1,08 (1H, m, H-20)] nhóm methine có độ dịch chuyển hóa học 14 khoảng H 0,95-2,75 (H-1, H-2, H-6, H-7, H-15, H-16, H-21 H-22), proton singlet H 6,27 (1H, s, 12-OH) (Bảng 4.7) Hình 4.17 Phổ HR-ESI-MS M8 Hình 4.18 Phổ 1H-NMR M8 Phổ 13C-NMR kết hợp với phổ DEPT cho thấy hợp chất M8 có 32 nguyên tử cacbon, có cacbon bậc bốn [C 38,0 (C-4); 45,5 (C-8); 37,0 (C-10); 195,2 (C-11); 144,5 (C-12); 134,4 (C-13); 41,7 (C14) 33,4 (C-17)], nhóm methine [C 80,5 (C-3); 55,0 (C-5); 59,7 (C-9); 48,9 (C-18); 39,3 (C-19) 40,8 (C-20)], nhóm methilen [C 38,9 (C-1); 23,5 (C-2); 17,4 (C-6); 32,9 (C-7); 27,3 (C-15); 27,5 (C16); 31,2 (C-21) 41,2 (C-22)] nhóm methyl [C 28,0 (C-23); 16,6 (C-24); 16,7 (C-25); 18,6 (C-26); 21,0 (C-27); 28,8 (C-28); 16,6 (C-29) 20,9 (C-30)] Ngồi ra, có tín hiệu 01 nhóm acetoxy C 170,9 (CH3CO) 21,3 (CH3CO) thu từ phổ 13C-NMR 15 Hình 4.19 Phổ 13C-NMR M8 Tất liệu gợi ý cho biết hợp chất M8 triterpene khung ursane chứa nhóm acetoxy có cấu trúc giống hợp chất 3βacetoxy-urs-12-ene-11-one [94], ngoại trừ khác biệt độ dịch chuyển hóa học nguyên tử cacbon vị trí C-11, C-12 C-13 Khi so sánh liệu NMR hợp chất M8 hợp chất 3β-acetoxy-urs-12-ene-11one (TLTK) thấy TLTK tín hiệu proton nhóm olefin H 5,54 (1H,s) liên kết trực tiếp với C-12 cacbon bậc 4(không liên kết với hydro) có độ chuyển dịch hóa học C 144,5 ppm (C-12) Đồng thời vị trí C-12 có gắn với nhóm hydroxy thể phổ khối phân giải cao Ngồi xác định tương tác xa dị hạt nhân proton H 6,27 (1H, s, 12-OH) với nguyên tử cacbon C 195,2 (C-11); 144,5 (C-12) 134,4 (C-13) Thêm vào đó, liên kết phổ HMBC H18 (H 2,43) C-12 (144,5)/C-13 (C 134,4) vị trí liên kết đơi C-12/C-13 nhóm keton C-11 (Hình 4.16) Hình 4.20 HSQC M8 16 Hình 4.21 Phổ HMBC M8 Bên cạnh đó, liên kết proton methyl H-23/H-24 (H 0,89) với C-3(C 80,5)/C-4 (C 38,0) C-5(C 55,0) liên kết H-3 (H 4,53)/CH3CO (H 2,05) với nguyên tử carbon C 170,9 (CH3CO), kết hợp với số ghép lớn H-3 (J = 11,5 Hz) phổ H-NMR xác nhận nhóm acetoxy liên kết C-3 có hướng β Ngồi ra, proton H-3 có hướng α xác định liên kết từ H-2α (H 1,65) H3-23 (H 0,89) đến H-3 (H 4,53) từ H3-25 (H 1,18) đến H-2β (H 1,72) phổ ROESY Mặt khác, liên kết H-20 với H-29/H-19 proton H-2 với H-1/H-3 tìm thấy phổ 1H-1H COSY Hình 4.22 Phổ 1H-1H COSY NOESY M8 Kết hợp liệu phổ với HMBC, 1H-1H COSY ROESY so sánh với liệu phổ hợp chất 3β-acetoxy-urs-12-ene-11one [94] tài liệu tham khảo cho phép khẳng định hợp chất M8 3β-acetoxy-urs-12-ene-11-one-12-ol Đây hợp chất đặt tên callimacrophylla B 17 Hình 4.16 Cấu trúc hóa học, tương tác HMBC (HC) M8 Bảng 4.7 Dữ liệu phổ 1H- 13C-NMR M8 chất tham khảo Vị trí δC 38,9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 CH3CO 23,5 80,5 38,0 55,0 17,4 32,9 45,5 59,7 37,0 195,2 144,5 134,4 41,7 27,3 27,5 33,4 48,9 39,3 40,8 31,2 41,2 28,0 16,6 16,7 18,6 21,0 28,8 16,6 20,9 170,9 M8 δH (mult., J Hz) 2,75 (1H, dt, 6,5; 3,5) 1,13 (1H, m) 1,65 (1H, m) / 1,72 (1H, m) 4,53 (1H, dd, 11,5; 4,5) 0,82 (1H, m) 1,43 (1H, m)/ 1,58 (1H, m) 1,43 (1H, m)/ 1,68 (1H, m) 2,50 (1H, s) 0,95 (1H, m)/ 2,10 (1H, m) 1,17 (1H, m)/ 1,90 (1H, m) 2,43 (1H, dd, 11,5; 1,5) 1,42 (1H, m) 1,08 (1H, m) 1,25 (1H, m)/ 1,43 (1H, m) 1,39 (1H, m)/ 1,47 (1H, m) 0,89 (3H, s) 0,89 (3H, s) 1,18 (3H, s) 1,17 (3H, s) 1,34 (3H, s) 0,83 (3H, s) 0,80 (3H, d, 6,5) 0,93 (3H, d, 6,5) - [94] #δH (mult., J Hz) #δC 38,9 2,75(lH,ddd, 3,5;3,5;13,5) 23,6 80,7 38,1 55,1 17,5 32,8 45,2 61,5 36,7 199,5 130,5 164,8 43,7 27,2 27,3 33,9 59,1 39,2 39,3 30,9 40,9 28,1 16,7 16,5 18,6 20,5 28,9 17,5 21,2 170,9 4,51 (lH, dd, 4,6; 11,7) 2,34 (1H, s) 5,54 (1H, s) 0,87 (3H, s) 0,88 (3H, s) 1,16 (3H, s) 1,18 (3H, s) 1,29 (3H, s) 0,81 (3H, s) 0,80 (3H,d, 6,0) 0,94 (3H, d, 6,0) - 18 CH3CO 21,3 12-OH 2,05 (3H, s) 6,27 (1H, s) 21,1 2,04 (3H, s) #δH #δC 3β-acetoxy-urs-12-ene-11-one (1H: 500 MHz,13C:125MHz,CDCl3) [94] 4.3 Đánh giá hoạt tính sinh học Nàng nàng Tử châu to 4.3.1 Đánh giá hoạt tính sinh học tinh dầu Nàng nàng Tử châu to Kết cho thấy, tinh dầu Nàng nàng khô thể hoạt tính yếu dòng tế bào ung thư gan Hep-G2 (IC50 = 94,5 µg/mL) Tinh dầu tươi chiết xuất phương pháp chưng cất lôi quấn nước thông thường tinh dầu tươi Tử châu to khơng thể hoạt tính dòng tế bào ung thư thử nghiệm Bảng 4.20 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào in vitro tinh dầu Nàng nàng Tử châu to dòng tế bào ung thư: gan (Hep-G2), ung thư tiền liệt tuyến (PC3) ung thư phổi (A549) Tên mẫu Tinh dầu khô Tinh dầu tươi cất thơng thường Tinh dầu tươi sử dụng lò vi sóng Tinh dầu tươi Tử châu to Đối chứng (paclitaxel) Hep-G2 94,53 >100 14,65 >100 4,03 IC50 (µg/mL) PC3 >100 >100 23,87 >100 3,48 A549 >100 >100 56,21 >100 3,69 Kết cho biết phương pháp cất tinh dầu có hỗ trợ vi sóng thu cấu tử hỗn hợp cấu tử tinh dầu Nàng nàng có hoạt tính sinh học tốt so với phương pháp chưng cất tinh dầu lơi quấn nước thơng thường Điều có ý nghĩa quan trọng cho định hướng nghiên cứu tinh dầu lồi Nàng nàng nói riêng tinh dầu từ lồi thực vật khác nói chung Bảng 4.21 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định tinh dầu Nàng nàng Tử châu to Tên mẫu MIC (g/mL) EC PA BS SA AN FO SC CA >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 Tinh dầu khô Tinh dầu tươi cất thông >200 >200 >200 >200 >200 200 >200 200 thường Tinh dầu tươi dùng lò >200 >200 >200 >200 >200 100 >200 200 vi sóng Tinh dầu Tử châu to >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 EC: Escherichia coli, PA: Pseudomonas aeruginosa, BS: Bacillus subtillis, SA: Staphylococcus aureus, AN: Aspergillus niger, FO: Fusarium oxysporum, SC: Saccharomyces cerevisiae, CA: Candida albicans 19 4.3.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào in vitro cao chiết từ loài Tử châu to Nàng nàng Các số liệu từ bảng 4.22 cho thấy cặn chiết ethanol từ lá, quả, thân loài Tử châu to Nàng nàng thể hoạt tính ức chế tốt dòng tế bào ung thư thử nghiệm với giá trị CS(%) từ 29,69  0,8 đến 89,62  1,2% Đặc biệt cặn chiết ethanol loài Tử châu to Nàng nàng (L.CM L.CC) có tác dụng ức chế tốt với giá trị CS(%) 47,84  2,1 56,28  2,6 (đối với dòng tế bào ung thư HepG2); 39,40  2,2 29,69  0,8 (đối với dòng tế bào ung thư Lu-1) 30,23  1,5 35,18  1,0 (đối với dòng tế bào ung thư MCF-7) Kết sàng lọc sơ hoạt tính gây độc tế bào ung thư ba dòng tế bào ung thư Hep-G2, Lu-1 MCF-7 cho thấy lồi Tử châu to Nàng nàng có tác dụng mạnh thân cành chúng Do vậy, nghiên cứu thành phần hóa học ưu tiên tập trung vào loài Tử châu to Nàng nàng Bảng 4.22 Hoạt tính gây độc tế bào in vitro cặn chiết tổng ethanol từ lá, thân cành Tử châu to Nàng nàng TT Nồng độ Giá trị CS (%) Dòng tế bào đầu (g/mL) MCF-7 Hep-G2 LU-1 DMSO 100 100 100 Chứng (+) 1,34  0,8 2,66  0,9 1,21  0,71 20 Q.CC 89,29  1,1 33,04  1,4 40,43  2,79 20 T.CC 89,62  1,2 33,53  1,6 91,29  0,32 20 L.CC 56,28  2,6 29,69  0,8 35,18  1,0 20 Q.CM 60,02  2,3 47,31  1,5 38,86  2,26 20 T.CM 64,66  2,2 55,64  2,8 90,22  0,15 20 L.CM 47,84  2,1 39,40  2,2 30,23  1,5 (Q: quả, T: thân cành, L: lá, CC: C candicans, CM: C macrophylla) KH mẫu Tiếp tục thử hoạt tính cặn chiết phân đoạn n-hexane, EtOAc methanol Tử châu to Nàng nàng dòng tế bào ung thư Hep-G2, Lu-1 MCF-7 Ngoại trừ cặn chiết phân đoạn methanol hoạt tính, cặn chiết phân đoạn lại lồi hai lồi có tác dụng mức độ khác nhau, phân đoạn n-hexane (L.CM.H) Tử châu to 20 EtOAc (L.CC.E) Nàng nàng thể hoạt tính mạnh với giá trị CS(%) thấp với giá trị CS (%) từ 12,49  1,4 - 30,17  0,1 % Kết giải thích diện nhóm chất có hoạt tính gây độc tế bào mạnh terpenoid flavonoid phân đoạn có độ phân cực yếu trung bình Bảng 4.23 Hoạt tính gây độc tế bào cặn chiết phân đoạn từ loài Tử châu to Nàng nàng Giá trị CS (%) Dòng tế bào Hep-G2 LU-1 MCF-7 DMSO 100 100 100 Chứng (+) 1,34  0,8 2,66  0,9 1,21  0,71 20 L.CM.H 20,18  0,8 12,49  1,4 11,61  2,11 20 L.CM.E 98,03  0,9 18,20  1,3 40,43  2,79 20 100 100 L.CM.M 91,29  0,32 20 L.CC.H 98,84  0,9 73,04  1,5 38,86  2,26 20 L.CC.E 30,17  0,1 15,69  2,3 19,93  0,11 20 100 100 L.CC.M 90,22  0,15 (L: lá, H: n-hexane, E: ethyl acetate, M: methanol, CC: C candicans, CM: C macrophylla) TT KH mẫu Nồng độ đầu (g/mL) 4.3.3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào in vitro hợp chất phân lập từ Tử châu to Nàng nàng Bảng 4.24 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào in vitro chất dòng tế bào ung thư (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) TT 10 Hợp chất Ellipticine methyl seco-hinokiol (C6) seco-hinokiol (C5) callimacrophylla A (M1) ent-1β-acetoxy-7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7) callimacrophylla B (M8) ursolic acid (M6) 2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid (C8) β-amyrin (M3) 3β-hydroxyolean-12-ene (M2) spinasterol (M5) Giá trị IC50 (g/mL) Dòng tế bào HepG2 Lu1 MCF7 0,29 0,51 0,48 8,65 8,53 2,20 8,25 9,13 2,46 2,72 2,68 1,57 0,31 1,55 0,23 0,32 1,87 0,28 0,25 0,31 0,21 5,85 2,36 8,22 8,29 1,82 21 11 12 13 14 5-hydroxy-7,4’-dimethoxyflavon (C1) 5-hydroxy-3’,4’,7-trimethoxyflavon (C3) genkwanin (C9) cynaroside (C10) - - - Đánh giá hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư thử nghiệm: Bảng 4.24 cho thấy hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (HepG2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) hợp chất terpenoid mạnh so với hợp chất steroid flavonoid Các hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư vú (MCF-7) tốt dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2) phổi (Lu-1) Hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) số 14 hợp chất thử kết hoạt tính có hợp chất khơng có hoạt tính với IC50 > 100 (g/mL) gồm: 5-hydroxy7,4’-dimethoxyflavon (C1), 5-hydroxy-3’,4’,7-trimethoxyflavon (C3), 2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid (C8), Genkwanin (C9) cynaroside (C10) β-amyrin (M3) Các hợp chất lại thể hoạt tính tương mạnh methyl seco-hinokiol (C6), seco-hinokiol (C5), ent-1 α-acetoxy-7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7), callimacrophylla B (M8), ursolic acid (M6), spinasterol (M5), 3β-hydroxyolean-12-ene (M2), callimacrophylla A (M1) với 0,2 g/mL < IC50 < 9,2 g/mL Đặc biệt hợp chất ursolic acid (M6) có hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (HepG2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) mạnh với giá trị IC50 = 0,25; 0,31 0,21 g/mL nhỏ nồng độ chất đối chứng Ellipticine với IC50 = 2,9; 0,51 0,48 g/mL Hợp chất ent-1α -acetoxy-7β,14α-dihydroxy16-kauren-15-on (M7) callimacrophylla B (M8) thể hoạt tính kháng tế bào ung thư vú MCF-7 mạnh với IC50= 0,23 0,21 g/mL, mạnh so với chất đối chứng Ellipticine với IC50 = 0,48 g/mL Hai hợp chất abietane (methyl seco-hinokiol (C6), seco-hinokiol (C5)) hợp chất steroid (spinasterol (M5) thể hoạt tính gây độc mạnh dòng tế bào ung thư vú (MCF-7) với giá trị IC50 khoảng 1,82 g/mL < IC50 < 2,46 g/mL thể hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) với giá trị 8,22 g/mL < IC50 < 9,13 g/mL, khoảng lần so với ung thư vú (MCF-7) Các hợp chất có hoạt tính lại thể hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư vú (MCF-7) mạnh không đáng kể so với dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) Trừ hợp chất 3βhydroxyolean-12-ene (M2) hoạt tính gây độc tế bào dòng ung thư phổi (Lu-1), hoạt tính gây độc tế bào dòng ung thư vú (MCF-7) tốt dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2) với giá trị IC50 tương ứng 2,36 g/mL 5,85 g/mL Đối với dòng ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) hợp chất khung ent-kaurane diterpenoid (callimacrophylla A (M1) ent-1β-acetoxy7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7)) ursane-triterpenoid (callimacrophylla B (M8) ursolic acid (M6) với 0,25 g/mL < IC50 < 2,72 g/mL biểu hoạt tính gây độc tế bào mạnh gấp lần so với hợp chất khung abietane (methyl seco-hinokiol (C6), seco-hinokiol (C5)) steroid (spinasterol (M5)) với 8,22 g/mL < IC50 < 9,13 g/mL Đối với dòng ung thư vú (MCF-7) hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào gần tương đương với giá trị 0,21 g/mL < IC50 < 2,46 g/ 22 mL Trừ hợp chất ursane-triterpenoid: 2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid (C8) khơng thể hoạt tính Nhóm hydroxyl vị trí C-3 hợp chất seco-hinokiol (C5) thay nhóm CH3O- vị trí C-3 methyl secohinokiol (C6) hai hợp chất khung abietane-diterpenoid dẫn đến hoạt tính hoạt tính gây độc tế bào dòng ung 25 g/mL 8,65 g/ mL) lại dòng tế bào ung thư phổi (Lu-1) vú (MCF7) (giá trị IC50 tương ứng 9,13 g/ml 8,53 g/ml dòng ung thư Lu-1; 2,46 g/mL 2,20 g/mL dòng ung thư MCF-7) nhiên khác không đáng kể Sự biến nhóm hydroxy vị trí C-18; xuất thêm nhóm α-acetoxy vị trí C-1 β-OH vị trí C-14 thay nhóm βOH, α-CH2-OH C-17 thành nhóm olefin hợp chất ent-1 αacetoxy-7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7) so với hợp chất callimacrophylla A (M1) thuộc khung ent-kaurane-triterpenoid dẫn đến làm tăng hoạt tính gây độc ba dòng tế bào ung thư gan (HepG2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) với giá trị tương ứng 0,31 g/mL 2,72 g/mL; 1,55 g/mL 2,68 g/mL; 0,23 g/mL 1,57 g/ mL Đối với hợp chất khung ursane-triterpenoid, ursolic acid (M6) có hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) mạnh với giá trị IC50 = 0,25; 0,31 0,21 g/mL, hợp chất 2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid (C8) khơng thể hoạt tính Điều xuất hai nhóm hidroxy vị trí C-2 C-23 làm giảm hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) Một hợp chất ursanetriterpenoid khác, callimacrophylla B (M8) có hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) mạnh với giá trị IC50 = 0,32; 1,87 0,28 g/mL, tương đương với ursolic acid, điều liên quan tới nhóm keton C-11 KẾT LUẬN  Thành phần hóa học chất phân lập Luận án lần nghiên cứu thành phần hóa học hai loài thực vật Nàng nàng (C candicans) loài Tử châu to (C macrophylla) thuộc chi Callicarpa Việt Nam Đã phân lập 21 hợp chất có hợp chất mới, hợp chất lần đầu phân lập từ tự nhiên Từ cặn dịch chiết n-hexane ethyl acetate Tử châu to 10 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm hợp chất terpenoid: callimacrophylla B (M8), 3β-hydroxyolean-12-ene (M2), β-amyrin (M3), ursolic acid (M6), oleanolic acid (M10), 23 callimacrophylla A (M1) ent-1β-acetoxy-7β,14α-dihydroxy-16kauren-15-on (M7) hợp chất steroid: spinasterol (M5), βsitosterol (M4) daucosterol (M9) Trong đó, callimacrophylla A (M1) callimacrophylla B (M8) hợp chất Từ cặn dịch chiết n-hexane ethyl acetate Nàng nàng (Callicarpa candicans) 11 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm hợp chất flavonoid: 5-hydroxy-7,4’dimethoxyflavon (C1), 5-hydroxy-3’,4’,7-trimethoxyflavon (C3), genkwanin (C9) cynaroside (C10); hợp chất terpenoid: ursolic acid (M6), 2α-hydroxy-ursolic acid (C7), 2α,3β,23-trihydroxyurs-12en-28-oic acid (C8), seco-hinokiol (C5) methyl seco-hinokiol (C6) hợp chất steroid: β-sitosterol (M4) daucosterol (M9) Trong đó, hợp chất methyl seco-hinokiol lần đầu phân lâp từ tự nhiên  Thành phần hóa học tinh dầu Thành phần hóa học tinh dầu hoa Nàng nàng  Theo phương pháp chưng cất thơng thường Phân tích GC - MS thành phần khơ Nàng nàng có 39 cấu tử, chiếm 92,57% tổng hàm lượng Cấu tử xác định tinh dầu α-Gurjunene (21,97%) Trong tinh dầu tươi Nàng nàng có 47 cấu tử chiếm 93,17% tổng hàm lượng tinh dầu Cấu tử xác định tinh dầu α-Gurjunene (21,31%) Thành phần tinh dầu hoa Nàng nàng có 47 cấu tử chiếm 92,86% tổng hàm lượng Cấu tử có hàm lượng xác định tinh dầu hoa Nàng nàng E-caryophyllene (5,07%), αselinene (5,66)  Theo phương pháp chưng cất nước có hỗ trợ vi sóng Phân tích GC - MS thành phần tươi Nàng nàng có 46 cấu tử chiêm 93,4% tổng hàm lượng Cấu tử xác định tinh dầu Nàng nàng tươi β-caryophyllene (10,45%), δ cadinene (10,28%) Thành phần hóa học tinh dầu Tử châu to Thành phần tinh dầu tươi Tử châu to có 50 cấu tử, chiếm 90,59% tổng hàm lượng Cấu tử xác định tinh dầu phytol (11,03%)  Hoạt tính sinh học Kết thử hoạt tính gây độc dòng ung thư gan (Hep-G2), ung thư phổi (Lu-1) ung thư vú (MCF-7) số chất phân lập được, cho biết hợp chất (callimacrophylla A callimacrophylla B) thể hoạt tính mạnh, hầu hết chất lại 24 thể hoạt tính mức Trong đó, hợp chất ursolic acid (M6) có hoạt tính kháng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (Lu-1) vú (MCF-7) mạnh với giá trị IC50 = 2,5; 0,31 0,21 g/mL; hợp chất ent-1β-acetoxy-7β,14α-dihydroxy-16-kauren-15-on (M7) callimacrophylla B (M8) thể hoạt tính kháng tế bào ưng thư vú CF-7 mạnh với IC50 = 0,23 0,21 g/mL, nhỏ nồng độ chất đối chứng Ellipticine Tinh dầu tươi Nàng nàng thu từ phương pháp sử dụng lò vi sóng thể hoạt tính tốt dòng tế bào ung thư gan (HepG2), ung thư tiền liệt tuyến (PC3), ung thư phổi (A549) thử nghiệm với giá trị IC50 tương ứng bằng14,65; 23,87 56,21 µg/mL thể hoạt tính ức chế nấm Fusarium oxysporum tốt với giá trị MIC 100 g/mL Các mẫu lại: tinh dầu khơ hoa tươi Nàng nàng, tươi Tử châu to chưng cất theo phương pháp lôi quấn nước thông thường hoạt tính KIẾN NGHỊ Các kết nghiên cứu luận án cho thấy loài chi Callicarpa nguồn giàu có hợp chất thiên nhiên có cấu trúc hóa học hoạt tính sinh học thú vị Vì vậy, tương lai tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính chống ung thư phận lại hai lồi lồi chi Callicarpa khác nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính chống ung thư hoạt tính sinh học khác từ loài thuộc chi Callicarpa Việt Nam, để khẳng định thêm giá trị khoa học lồi này, góp phần việc tạo sản phẩm phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN  Luận án lần nghiên cứu thành phần hóa học hai loài thực vật: Nàng nàng (C candicans) Tử châu to (C macrophylla) thuộc chi Callicarpa Việt Nam Đã phân lập 21 hợp chất Trong đó, callimacrophylla A callimacrophylla B hai hợp chất hợp chất methyl seco-hinokiol lần đầu phân lập từ tự nhiên 25    Lần đâu tiên tinh dầu loài Nàng nàng Tử châu to nghiên cứu Việt Nam Riêng tinh dầu Nàng nàng giới chưa có cơng trình nghiên cứu Lần đâu Việt Nam nghiên cứu tác dụng gây độc số dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2), ung thư phổi (Lu-1) ung thư vú (MCF-7) 14 hợp chất phân lập từ loài Tử châu to (C.macrophylla) Nàng nàng (C Candicans) Trong hợp chất thể hoạt tính mạnh, hầu hết chất lại thể hoạt tính mức Tinh dầu tươi Nàng nàng thu từ phương pháp sử dụng lò vi sóng thể hoạt tính tốt ba dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2), ung thư tiền liệt tuyến (PC3), ung thư phổi (A549) thử nghiệm với giá trị IC50 tương ứng bằng14,65; 23,87 56,21 µg/mL thể hoạt tính ức chế nấm Fusarium oxysporum tốt với giá trị MIC 100 g/mL Các mẫu lại: tinh dầu khô hoa tươi Nàng nàng, tươi Tử châu to chưng cất theo phương pháp lôi quấn nước thông thường hoạt tính 26 CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CÔNG BỐ  Bài báo quốc tế (ISI/Scopus): Vũ Thị Thu Lê, Lại Phương Phương Thảo, Phạm Thị Hồng Minh, Hồng Thị Bích, Đỗ Tiến Lâm, Đinh Thị Thu Thủy, Phạm Minh Quân, Phạm Quốc Long, Đào Việt Hùng, Trần Quốc Toàn, Essential oil of Callicarpa candicans (Burm.f.) Hochr, Asian Journal of Chemistry, 2019 (chấp nhận đăng) (Scopus) Do Tien Lam, Vu Thi Thu Le, Pham Minh Quan, Pham Thi Hong Minh, Bui Huu Tai, and Phan Van Kiem, Two new terpenoids from the leaves of Callicarpa macrophylla, Natural Product Research, 2019, 34, 688 (SCIE) Quoc Toan Tran, Thu Le Vu Thi , Tien Lam Do, Hong Minh Pham Thi, Bich Hoang Thi, Quang Truyen Chu, Phuong Thao Lai Phuong, Huu Nghi Do , Hoai Thu Hoang Than , Thu Thuy Ta Thi, Van Huyen Luu, Mai Duong Phuong Thi Thu Huong Phung Thi, Optimization of Microwave-Assisted Extraction Process of Callicarpa candicans (Burm.f.) Hochr Essential Oil and Its Inhibitory Properties against Some Bacteria and Cancer Cell Lines, Processes, 2020, 8(2):173 (SCIE)  Bài báo nước: Vũ Thị Thu Lê, Luân Thị Thu, Phạm Thị Hồng Minh, Đỗ Tiến Lâm, Nguyễn Phi Hùng, Đoàn Lan Phương, Nguyễn Thị Hồng Vân, Phạm Quốc Long, Một số kết nghiên cứu ban đầu dịch chiết n-hexan Nàng nàng (Callicarpa candicans (Burm.F) Hochr) Việt Nam, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 2016, 54 (2B), 251-257 Vũ Thị Thu Lê, Đỗ Tiến Lâm, Cầm Thị Ính, Đồn Lan Phương, Phạm Quốc Long, Trần Đăng Thạch, Tạ Thị Thu Thủy, Phạm Thị Hồng Minh, nghiên cứu thành phần hóa học cặn chiết etyl axetat Nàng nàng (Callicarpa candicans (burm.f) hochr.) Việt Nam, Tạp chí Khoa học cơng nghệ, 2018, 178(2), 1859-2171 Vũ Thị Thu Lê, Đỗ Tiến Lâm, Cầm Thị Ính, Phạm Quốc Long, Trần Đăng Thạch, Nguyễn Thị Hồng Vân, Phạm Thị Hồng Minh, Triterpenoid flavonoid từ dịch chiết etyl axetat Nàng nàng (Callicarpa candicans (Burm f Hochr.) Ở Việt Nam, Tạp chí Hóa học, 2018, 56(3), 341-345 27 Do Tien Lam, Pham Minh Quan, Vu Thi Thu Le, Nguyen Thi Hong Van, Cam Thi Inh, Ta Thi Thu Thuy, Pham Thi Hong Minh, Terpene compounds isolated from Callicarpa macrophylla in Vietnam Journal of Science and Technology, 2018, 56 (4A), 213-220 ... có Việt Nam Đây lý đề tài “ Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Nàng nàng (Callicarpa candicans) loài Tử châu to (Callicarpa macrophylla ) Việt Nam. ” lựa chọn để nghiên cứu Mục... lập được, thành phần hóa học tinh dầu kết thử hoạt tính sinh học thành phần 4.1 Thành phần hóa học tinh dầu Nàng nàng Tử châu to Phân tích GC - MS thành phần khơ Nàng nàng có 39 cấu tử, chiếm... keton C-11 KẾT LUẬN  Thành phần hóa học chất phân lập Luận án lần nghiên cứu thành phần hóa học hai lồi thực vật Nàng nàng (C candicans) loài Tử châu to (C macrophylla) thuộc chi Callicarpa Việt