Nghiên cứu thành phần loài và đặc điểm phân tử của vi nấm gây viêm màng não thu thập ở một số bệnh viện (2013 2017)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y TRỊNH THỊ THÚY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI VÀ ĐẶC ĐIỂM PHÂN TỬ CỦA VI NẤM GÂY VIÊM MÀNG NÃO THU THẬP Ở MỘT SỐ BỆNH VIỆN (2013-2017) LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Hà Nội – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y TRỊNH THỊ THÚY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI VÀ ĐẶC ĐIỂM PHÂN TỬ CỦA VI NẤM GÂY VIÊM MÀNG NÃO THU THẬP Ở MỘT SỐ BỆNH VIỆN (2013-2017) Chuyên ngành: Khoa học y sinh Mã số: 8720101 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Vũ Tuấn Anh Hà Nội – 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn phần số liệu đề tài nghiên cứu có tên: “Nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật Nested Multiplex realtime - PCR phát số nguyên vi khuẩn vi nấm gây viêm màng não thường gặp khu vực Thành phố Hà Nội” “Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử để chẩn đoán số vi nấm gây bệnh nội tạng người”.Tôi chủ nhiệm đề tài đồng ý cho phép sử dụng phần số liệu vào luận văn để bảo vệ lấy thạc sĩ Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Trịnh Thị Thúy LỜI CẢM ƠN Để hồn thành cơng trình nghiên cứu này, nhận nhiều giúp đỡ cá nhân, tổ chức Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn tới Đảng ủy Ban Giám đốc Học viện Quân y, Phòng Sau đại học, Hệ Sau đại học - Học viện Quân y, Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược Thái Bình tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS.Vũ Tuấn Anh, người thầy dìu dắt, tận tình bảo trực tiếp hướng dẫn tơi q trình thực hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Duy Bắc Chủ nhiệm đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật Nested Multiplex realtime –PCR phát số nguyên vi khuẩn vi nấm gây viêm màng não thường gặp khu vực Thành phố Hà Nội” PGS.TS Nguyễn Khắc Lực Chủ nhiệm đề tài:“Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử để chẩn đoán số vi nấm gây bệnh nội tạng người” cho phép sử dụng phần số liệu chủng nấm gây viêm màng não để thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Trần Anh, TS Phạm Văn Minh, TS Đỗ Ngọc Ánh, ThS Lê Quốc Tuấn tập thể cán bộ, nhân viên Bộ môn Ký sinh trùng Côn trùng giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn ý kiến đóng góp xác đáng Hội đồng để hoàn thiện luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp động viên, tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập để tơi có kết ngày hôm nay! Học viên Trịnh Thị Thúy MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Viêm màng não tình hình viêm màng não 1.1.1 Viêm màng não 1.1.2 Tình hình viêm màng não 1.1.3 Viêm màng não nấm 1.2 Một số vi nấm gây viêm màng não 1.2.1 Nấm Cryptococcus 1.2.2 Nấm Candida 15 1.2.3 Một số loài nấm khác 17 1.3 Các kỹ thuật xác định loài 18 1.3.1 Các kỹ thuật truyền thống 18 1.3.2 Kỹ thuật sinh học phân tử 20 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 24 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 24 2.3.2 Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu 26 2.4 Nội dung nghiên cứu 26 2.4.1 Xác định thành phần loài vi nấm gây viêm màng não 26 2.4.2 Mô tả đặc điểm phân tử vi nấm gây viêm màng não 26 2.5 Vật liệu nghiên cứu 27 2.6 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 28 2.6.1 Kỹ thuật bảo quản mẫu nấm, nuôi cấy, soi tươi, thử nghiệm sinh ống mầm 28 2.6.2 Tách ADN chạy phản ứng PCR 29 2.6.3 Phân tích sản phẩm PCR enzyme 32 2.6.4 Kiểm tra sản phẩm PCR sản phẩm cắt giới hạn 32 2.6.5 Giải trình tự đoạn gen thu từ phản ứng PCR 33 2.7 Phân tích xử lý số liệu nghiên cứu 35 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1 Thành phần loài vi nấm gây viêm màng não 36 3.1.1 Đặc điểm đối tượng phân lập vi nấm 36 3.1.2 Kết định danh nấm gây viêm màng não 36 3.2 Đặc điểm phân tử vi nấm gây viêm màng não 43 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 55 4.1 Thành phần loài vi nấm gây viêm màng não 55 4.1.1 Về đặc điểm đối tượng phân lập mẫu nấm 55 4.1.2 Về việc lựa chọn kỹ thuật để xác thành phần loài 56 4.1.3 Xác định thành phần loài 61 4.2 Về đặc điểm phân tử vi nấm gây viêm màng não 64 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Phần viết tắt Tên tiếng Anh đầy đủ Nghĩa/Tên Tiếng Việt ADN Acid Deoxyribonucleic Axit Deoxyribonucleic AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải Bp Base pair Đơn vị đo BV Bệnh viện Cs Cộng GĐPT Giám định phân tử HIV Human immnodeficiency viurs Virus gây suy giảm miễn dịch LSU Large subunit Tiểu đơn vị lớn PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại gen RFLP Restriction fragment length polymorphism Kỹ thuật xác định tính đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn ITS Internal transcribed spacer Đoạn giao gen thuộc hệ gen nhân TNHT Thử nghiệm huyết TP Thành phố DANH MỤC HÌNH Hình số Tên hình Trang 1.1 Nấm Cryptococcus nhuộm mực tàu 1.2 Minh họa vị trí bắt cặp mồi ITS1-ITS4 vùng gen đích 23 3.1 Mẫu nấm 070601 (N455) dương tính ni cấy 36 3.2 Kết phân loại nấm kỹ thuật nhuộm mực tàu 37 3.3 Hình ảnh mẫu nấm N461 dương tính nhuộm mực tàu 38 3.4 Thử nghiệm huyết dương tính 39 3.5 Kết định danh nấm kỹ thuật PCR-RFLP 40 3.6 Kết chạy PCR với mồi ITS1, ITS4 số mẫu nấm nghiên cứu 40 3.7 Kết cắt giới hạn sản phẩm PCR với mồi ITS1, ITS4 enzyme MspI số mẫu nấm nghiên cứu 41 3.8 Tương đồng đoạn nucleotide mẫu MH203396.1 (N460) so với trình tự JN939455.1 (Cryptococcus neoformans var grubii) ngân hàng gen 45 3.9 Minh họa số vị trí sai khác nucleotide đoạn ITS1 - 5,8S - ITS2 số chủng Cryptococcus nghiên cứu số chủng giới 48 3.10 Minh họa vị trí sai khác nucleotide đoạn ITS2 số chủng nghiên cứu số chủng giới 52 3.11 Minh họa vị trí sai khác nucleotide đoạn ITS2 số chủng Cryptococcus số chủng Candida nghiên cứu với số chủng giới 53 3.12 Vị trí cắt enzym MspI đoạn ITS2 số chủng nấm nghiên cứu chủng nấm Cryptococcus ngân hàng gen 54 DANH MỤC BẢNG Bảng số Tên bảng Trang 1.1 Phân bố tuýp huyết nấm Cryptococcus 12 2.1 Kích thước sản phẩm PCR mảnh cắt enzyme MspI 33 3.1 Phân bố giới tính đối tượng phân lập vi nấm 36 3.2 Phân bố nhóm tuổi đối tượng phân lập vi nấm 36 3.3 Tỷ lệ nấm men, nấm sợi soi tươi 37 3.4 Kết định danh nấm kỹ thuật thử nghiệm huyết 38 3.5 Kết định danh nấm kỹ thuật nhuộm mực tàu thử nghiệm huyết 39 3.6 Kết xác định loài nấm hai kỹ thuật PCR-RFLP giải trình tự gen 41 3.7 Tỷ lệ xác định loài nấm kỹ thuật hình thái 42 3.8 Sự phù hợp kết xác định loài kỹ thuật nhuộm mực tàu kỹ thuật PCR- RFLP việc xác định nấm Cryptococcus dịch não tủy 42 3.9 Sự phù hợp kết định danh nấm PCR-RFLP với kết giải trình tự gen 42 3.10 Mã số số chủng nấm Cryptococcus nghiên cứu đăng ký ngân hàng gen 43 3.11 Tỷ lệ tương đồng nucleotide số mẫu nấm Candida nghiên cứu với trình tự tham chiếu ngân hàng gen 43 3.12 Tỷ lệ tương đồng nucleotide số chủng nấm nghiên cứu so với chủng tham chiếu ngân hàng gen 44 3.13 Thành phần nucleotide đoạn ITS1- 5,8S- ITS2 số chủng nấm Cryptococcus nghiên cứu giới 46 3.14 Vị trí sai khác nucleotide đoạn ITS1 - 5.8S - ITS2 chủng nấm nghiên cứu với chủng nấm ngân hàng gen 47 3.15 Thành phần nucleotide đoạn gen ITS2 số chủng nấm Cryptococcus nghiên cứu giới 49 3.16 Tỷ lệ tương đồng nucleotide đoạn ITS2 số chủng nấm Cryptococcus so với chủng tham chiếu ngân hàng gen 50 3.17 Vị trí sai khác nucleotide đoạn ITS2 chủng nấm Cryptococcus nghiên cứu với chủng nấm ngân hàng gen 51 29 S E Vartivarian, E J Anaissie, R E Cowart et al (1993), Regulation of cryptococcal capsular polysaccharide by iron J Infect Dis, 167 (1): 186-190 30 D C McFadden, M De Jesus and A Casadevall (2006), The physical properties of the capsular polysaccharides from Cryptococcus neoformans suggest features for capsule construction J Biol Chem, 281 (4): 1868-1875 31 C Heiss, J S Klutts, Z Wang et al (2009), The structure of Cryptococcus neoformans galactoxylomannan contains β-D-glucuronic acid Carbohydrate research, 344 (7): 915-920 32 Helene C.E., Raymond D., Hsi C., et al (2014), Reduced virulence of melanized Cryptococcus neoformans in Galleria mellonella Virulence, (5): 611-618 33 H C Eisenman and A Casadevall (2012), Synthesis and assembly of fungal melanin Applied microbiology and biotechnology, 93 (3): 931940 34 M Cogliati, R D'Amicis, A Zani et al (2016), Environmental distribution of Cryptococcus neoformans and C gattii around the Mediterranean basin FEMS Yeast Research, 16 (4) 35 R A Hajjeh, G Cryptococcal Active Surveillance, L A Conn et al (1999), Cryptococcosis: Population-Based Multistate Active Surveillance and Risk Factors in Human Immunodeficiency VirusInfected Persons J Infect Dis, 179 (2): 449-454 36 E W Bratton, N E Husseini, C A Chastain et al (2012), Comparison and Temporal Trends of Three Groups with Cryptococcosis: HIV-Infected, Solid Organ Transplant, and HIVNegative/Non-Transplant PLoS ONE, (8): 43582 37 Đỗ Ngọc Ánh, Nguyễn Khắc Lực, Lê Trần Anh cs (2015), Xác định thành phần loài nấm men phân lập từ máu người kỹ thuật PCR-RFLP Tạp chí Y Dược lâm sàng, (108): 51-56 38 Y Schmiedel and S Zimmerli (2016), Common invasive fungal diseases: an overview of invasive candidiasis, aspergillosis, cryptococcosis, and Pneumocystis pneumonia Swiss Med Wkly, 146: 14281 39 P Hankovszky, D Társy, N Öveges et al (2015), Invasive Candida Infections in the ICU: Diagnosis and Therapy The Journal of Critical Care Medicine, (4): 129-139 40 H Wisplinghoff, T Bischoff, S M Tallent et al (2004), Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study Clin Infect Dis, 39 (3): 309-317 41 M A Pfaller, P G Pappas and J R Wingard (2006), Invasive Fungal Pathogens: Current Epidemiological Trends Clinical Infectious Diseases, 43 (Supplement_1): S3-S14 42 D H Akbar and A T Tahawi (2001), Candidemia at a University Hospital: epidemiology, risk factors and predictors of mortality Ann Saudi Med, 21 (3-4): 178-182 43 S Schwartz, D P Kontoyiannis, T Harrison et al (2018), Advances in the diagnosis and treatment of fungal infections of the CNS Lancet Neurol, 17 (4): 362-372 44 D C Saha, I Xess, A Biswas et al (2009), Detection of Cryptococcus by conventional, serological and molecular methods J Med Microbiol, 58 (Pt 8): 1098-1105 45 M P Murray, R Zinchuk and D H Larone (2005), CHROMagar Candida as the sole primary medium for isolation of yeasts and as a source medium for the rapid-assimilation-of-trehalose test J Clin Microbiol, 43 (3): 1210-1212 46 M A Pfaller (2015), Chapter - Invasive Fungal Infections and Approaches to Their Diagnosis Methods in Microbiology, Academic Press, 42: 219-287 47 J Maertens, J Verhaegen, K Lagrou et al (2001), Screening for circulating galactomannan as a noninvasive diagnostic tool for invasive aspergillosis in prolonged neutropenic patients and stem cell transplantation recipients: a prospective validation Blood, 97 (6): 1604-1610 48 B Jahromi et al (2006), Detection of Cryptococcus neoformans by seminested PCR Seminested PCR in cerebrospinal fluid MJIRI, 20 (2): 62-65 49 P Rappelli, R Are, G Casu et al (1998), Development of a Nested PCR for Detection of Cryptococcus neoformans in Cerebrospinal Fluid Journal of Clinical Microbiology, 36 (11): 3438-3440 50 Sh Mirhendi, P Kordbacheh, B Kazemi et al (2012), A PCR-RFLP Method to Identification of the Important Opportunistic Fungi: Candida Species, Cryptococcus neoformans, Aspergillus famigatus and Fusarium solani, 51 J Irobi, A Schoofs and H Goossens (1999), Genetic identification of Candida species in HIV-positive patients using the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis of its DNA Molecular and Cellular Probes, 13 (6): 401-406 52 R Wang, Y Chen, J Wu et al (2017), Cryptococcosis in patients with hematological diseases: a 14-year retrospective clinical analysis in a Chinese tertiary hospital BMC Infectious Diseases, 17: 463 53 L E Andrade-Silva, K F Paim, T B Ferreira et al (2018), Genotypic analysis of clinical and environmental Cryptococcus neoformans isolates from Brazil reveals the presence of VNB isolates and a correlation with biological factors PLoS ONE, 13 (3): 0193-237 54 M Chan, D Lye, M Kyaw Win et al (2014), Clinical and microbiological characteristics of cryptococcosis in predominance of Cryptococcus neoformans Singapore: compared with Cryptococcus gattii International Journal of Infectious Diseases, 26: 110-115 55 Trần Phủ Mạnh Siêu, Nguyễn Nhƣ Quỳnh (2013), Định danh phân chủng vi nấm Cryptococcus neoformans bệnh nhân HIV/AIDS viêm màng não khảo sát độ nhạy cảm thuốc kháng nấm hành Y hoc Tp Hồ Chí Minh, 17 (1): 184- 189 56 S T Tay, M Y Rohani, T S Hoo et al (2010), Epidemiology of cryptococcosis in Malaysia Mycoses, 53 (6): 509-514 57 A Farasat, M Ghahri, H Mirhendi et al (2018), Identification of Candida Species Screened from Catheter Using Patients with PCRRFLP Method, 58 A S Mattei, S H Alves, C B Severo et al (2014), Use of Mueller - Hinton broth and agar in the germ tube test Revista Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, 56 (6): 483- 485 59 Nhữ Thị Hoa, Phù Lý Minh Hƣơng Trần Thị Nhật Vy (2009), Hiệu thử nghiệm sinh ống mầm thử nghiêm Dalmau định danh C.albicans C non albicans (2007) Tạp chí Y dược học Tp Hồ Chí Minh, 13 (1): 17-22 60 M A Jabra-Rizk, W A Falkler and T F Meiller (2004), Fungal Biofilms and Drug Resistance Emerging Infectious Diseases, 10 (1): 14-19 61 H Mirhendi, K Makimura, M Khoramizadeh et al (2006), A OneEnzyme PCR-RFLP Assay for Identification of Six Medically Important Candida Species Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi, 47 (3): 225-229 62 S Ayatollahi , K E, G H S Bonjar et al (2007), Rapid molecular diagnosis for Candida species using PCR-RFLP, 63 Khƣơng Thị Doanh (2012), Nghiên cứu nguyên vi khuẩn nấm gây viêm màng não bệnh viện Bạch Mai từ năm 2008- 2010, Luận văn Thạc sĩ, Khoa Vi sinh, Đại học Khoa học Tự nhiên 64 S Chhin, G Rozycki, D Pugatch et al (2004), Aetiology of meningitis in HIV-infected patients in a referral hospital in Phnom Penh, Cambodia Int J STD AIDS, 15 (1): 48-50 65 Tran T H Chau, Nguyen H Mai, Nguyen H Phu et al (2010), A prospective descriptive study of cryptococcal meningitis in HIV uninfected patients in Vietnam - high prevalence of Cryptococcus neoformans var grubii in the absence of underlying disease BMC Infectious Diseases, 10: 199-199 66 A L Colombo, M Nucci, B J Park et al (2006), Epidemiology of Candidemia in Brazil: a Nationwide Sentinel Surveillance of Candidemia in Eleven Medical Centers Journal of Clinical Microbiology, 44 (8): 2816-2823 67 C L Schoch, K A Seifert, S Huhndorf et al (2012), Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (16): 62416246 68 Y C Chen, J D Eisner, M M Kattar et al (2000), Identification of Medically Important Yeasts Using PCR-Based Detection of DNA Sequence Polymorphisms in the Internal Transcribed Spacer Region of the rRNA Genes Journal of Clinical Microbiology, 38 (6): 2302- 2310 69 C Y Turenne, S E Sanche, D J Hoban et al (1999), Rapid Identification of Fungi by Using the ITS2 Genetic Region and an Automated Fluorescent Capillary Electrophoresis System Journal of Clinical Microbiology, 37 (6): 1846-1851 70 Y C Chen, J D Eisner, M M Kattar et al (2001), Polymorphic Internal Transcribed Spacer Region DNA Sequences Identify Medically Important Yeasts Journal of Clinical Microbiology, 39 (11): 4042- 4051 Phụ lục PHIẾU THEO DÕI I.HÀNH CHÍNH Mã số:………………………………………………………………………… Họ tên bệnh nhân:………………………………………………………… Tuổi:……………………….………………………………………………… Giới: Nam Nữ Nơi cấp bệnh phẩm: BV Chợ rẫy BV NĐTƯ BV Phạm Ngọc Thạch II.Kết Kỹ thuật Nuôi cấy Kết 0.Âm tính Dương tính 2.Soi tươi 0.Nấm sợi 1.Nấm men Nhuộm mực tàu Âm tính (nấm men khác) Dương tính (C neoformans) Thử nghiệm sinh ống mầm Âm tính 1.Dương tính (C albicans) PCR- RFLP 0.C albicans 1.C tropicalis 2.C glabrata 3.C krusei 4.C neoformans Nấm men khác Giải trình tự 0.Khơng 1.Có Kết giám định phân tử 0.C albicans 1.C tropicalis 2.C glabrata 3.C krusei 4.C neoformans Nấm men khác Xác nhận Hà Nội, ngày tháng năm Ngƣời theo dõi Bs Trịnh Thị Thúy Phụ lục DANH SÁCH MẪU NẤM NGHIÊN CỨU Đề tài: “Nghiên cứu thành phần loài số đặc điểm phân tử số vi nấm gây viêm màng não thu thập số bệnh viện (2013- 2017)” Người thực hiện: Học viên Trịnh Thị Thúy STT Mã môn N453 N454 N455 N456 N457 N458 N459 N460 N461 10 N462 11 N463 12 N464 13 N465 14 N584 15 N589 16 N590 17 N591 18 N596 19 N599 20 N600 21 N601 22 N602 23 N603 24 N604 Mã nơi cấp 300912 5415 070601 080402 090501 100914 270302 280959 300504 110960 260911 270913 091015 Họ tên BN Tuổi Giới Chú thích Nguyễn Văn Ph Nguyễn Thái T Nguyễn Thanh L Trần Văn Th Quách Ngọc D Phạm Minh Q Trần Văn Đ Võ Thị Thùy Tr Đào Văn Nh Heng N Lê Thanh K Ycem L Siu Thy Phạm Ngọc Á Bùi Xuân H Phạm Thị M Ngô Văn L Lưu Thị Đ Quảng Thị H Lâm Văn C Nguyễn Quang T Nguyễn Thanh T Vũ Thị H Chu Thị H 39 37 31 58 28 36 66 46 40 53 28 63 47 27 69 28 32 40 29 27 40 32 44 44 BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV Chợ rẫy BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ BV NĐTƯ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nữ 25 26 27 28 29 30 31 32 N1037 N1038 N1039 N1040 N1041 N1042 N1043 N1044 378 331 461 223 224 564 453 429 Khun C Hồ Thị H Lê Minh Tr Lê Văn T Nông Thị Th Nguyễn Thanh T Nguyễn Văn T Lê Thị T Xác nhận labo 61 50 31 34 59 59 46 37 Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ BV PNT BV PNT BV PNT BV PNT BV PNT BV PNT BV PNT BV PNT Hà Nội, ngày tháng năm Ngƣời lập danh sách Thiếu tá Đỗ Ngọc Ánh Bs Trịnh Thị Thúy Xác nhận môn Chủ nhiệm môn Đại tá Nguyễn Khắc Lực Phụ Lục Mẫu N460 đƣợc giải trình tự đăng ký ngân hàng gen với mã số MH203396 Phụ lục Mẫu nấm N458 đƣợc giải trình tự đăng ký ngân hàng gen với mã số MH203395.1 Phụ Lục Mẫu nấm N461 đƣợc giải trình tự đăng ký ngân hàng gen với mã số MH203397.1 Phụ Lục Mẫu nấm N459 đƣợc giải trình tự đăng ký ngân hàng gen với mã số MF593936.1 Phụ lục Danh sách số chủng nấm tham khảo ngân hàng gen STT Mã số Loài nấm JN939455.1 C neoformans var grubii JN939456.1 C neoformans var grubii KM085009.1 C neoformans var grubii JN939458.1 C gattii JN939461.1 C gattii JN939462.1 C gattii JN939487.1 C gattii KU642657.1 C gattii KY102648.1 C gattii 10 KF241847.1 C albicans 11 KJ415647.1 C tropicalis 12 KJ451708 C tropicalis ... số đặc điểm phân tử vi nấm gây vi m màng não thu thập đƣợc 3 CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vi m màng não tình hình vi m màng não 1.1.1 Vi m màng não Vi m màng não tượng vi m màng nuôi, màng nhện dịch não. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VI N QUÂN Y TRỊNH THỊ THÚY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI VÀ ĐẶC ĐIỂM PHÂN TỬ CỦA VI NẤM GÂY VI M MÀNG NÃO THU THẬP Ở MỘT SỐ BỆNH VI N (201 3- 2017) Chuyên... 1.1 Vi m màng não tình hình vi m màng não 1.1.1 Vi m màng não 1.1.2 Tình hình vi m màng não 1.1.3 Vi m màng não nấm 1.2 Một số vi nấm gây vi m màng não