ĐẶT VẤN ĐỀ Bằng lăng nước, Giảo cổ lam và Tri mẫu là các dược liệu đã được chứng minh riêng rẽ về hiệu quả trị bệnh ĐTĐ qua nhiều nghiên cứu tiền lâm sàng và lâm sàng, cũng như đã được kết hợp với nhau thành dạng cao mềm Vinabetes. Tuy nhiên, cao mềm Vinabetes chỉ mới được chiết xuất trong điều kiện phòng thí nghiệm và chưa có các nghiên cứu dược lý đầy đủ. Với mong muốn tạo ra một sản phẩm có tác dụng điều trị ĐTĐ hiệu quả, công ty Traphaco đã nghiên cứu chiết xuất và bào chế cao từ thân, lá, rễ Giảo cổ lam, thân rễ Tri mẫu và lá Bằng lăng nước, tạo ra viên nang cứng Andiabet theo quy mô công nghiệp. Tuy nhiên câu hỏi được đặt ra: khi thay đổi quy trình chiết xuất và dạng bào chế có làm thay đổi độc tính cũng như tác dụng của Andiabet hay không? Để trả lời câu hỏi trên đề tài “Nghiên cứu độc tính và tác dụng HGM của viên Andiabet trên thực nghiệm” được tiến hành nhằm các mục tiêu sau: 1. Xác định độc tính cấp và bán trường diễn của viên Andiabet. 2. Đánh giá tác dụng và sơ bộ cơ chế tác dụng HGM của viên Andiabet trên thực nghiệm. Chương 1. TỔNG QUAN
1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bằng lăng nước, Giảo cổ lam Tri mẫu dược liệu chứng minh riêng rẽ hiệu trị bệnh ĐTĐ qua nhiều nghiên cứu tiền lâm sàng lâm sàng, kết hợp với thành dạng cao mềm Vinabetes Tuy nhiên, cao mềm Vinabetes chiết xuất điều kiện phòng thí nghiệm chưa có nghiên cứu dược lý đầy đủ Với mong muốn tạo sản phẩm có tác dụng điều trị ĐTĐ hiệu quả, công ty Traphaco nghiên cứu chiết xuất bào chế cao từ thân, lá, rễ Giảo cổ lam, thân rễ Tri mẫu Bằng lăng nước, tạo viên nang cứng Andiabet theo quy mô công nghiệp Tuy nhiên câu hỏi đặt ra: thay đổi quy trình chiết xuất dạng bào chế có làm thay đổi độc tính tác dụng Andiabet hay không? Để trả lời câu hỏi đề tài “Nghiên cứu độc tính tác dụng HGM viên Andiabet thực nghiệm” tiến hành nhằm mục tiêu sau: Xác định độc tính cấp bán trường diễn viên Andiabet Đánh giá tác dụng sơ chế tác dụng HGM viên Andiabet thực nghiệm Chương TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1.1 Định nghĩa, phân loại, tiêu chuẩn chẩn đoán đái tháo đường chế bệnh sinh ĐTĐ typ 1.1.1.1 Định nghĩa: “Đái tháo đường bệnh rối loạn chuyển hóa có đặc điểm tăng glucose máu, hậu thiếu hụt tiết insulin; khiếm khuyết hoạt động insulin; hai Tăng glucose máu mạn tính thường kết hợp với hủy hoại, rối loạn suy yếu chức nhiều quan, đặc biệt mắt, thận, thần kinh, tim mạch máu” 1.1.1.2 Phân loại: Đái tháo đường(ĐTĐ) chia làm loại: ĐTĐ typ 1, typ 2, ĐTĐ thai kỳ type đặc biệt Trong ĐTĐ typ 1, typ hay gặp 1.1.1.3 Tiêu chuẩn chẩn đốn ĐTĐ ADA: Glucose máu tĩnh mạch lúc đói ³ 126mg/dL (7mmol/L) Đói khơng nạp lượng 8h Hoặc glucose máu tĩnh mạch sau làm nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống ³ 200mg/dL (11,1mmol/L) Test thực theo hướng dẫn WHO, sử dụng 75g glucose (loại anhydrous) pha nước Hoặc HbA1C ³ 6.5% (48 mmol/mol) Xét nghiệm phải thực phòng thí nghiệm chuẩn hóa theo tiêu chuẩn quốc tế Hoặc glucose máu ³ 200mg/dL (11.1mmol/l) kèm theo triệu chứng kinh điển tăng glucose máu tăng glucose máu 1.1.1.4 Cơ chế bệnh sinh ĐTĐ typ 2: Kháng insulin mô ngoại vi rối loạn tiết insulin yếu tố đóng vai trò quan trọng liên hệ mật thiết chế bệnh sinh cuả ĐTĐ typ 2, thường xảy trước có biểu lâm sàng ĐTĐ (ngay từ giai đoạn tiền ĐTĐ) Tuy nhiên, bệnh nhân ĐTĐ typ khơng thừa cân, biểu giảm tiết insulin chính, ngược lại bệnh nhân ĐTĐ typ có kèm béo phì, tình trạng kháng insulin Các yếu tố gen mơi trường đóng vai trò thúc đẩy làm phát sinh phát triển bệnh 1.2 CÁC NHÓM THUỐC ĐIỀU TRỊ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG Hiện nay, biện pháp điều trị ĐTĐ typ điều chỉnh lối sống (chế độ ăn luyện tập) dùng thuốc Các thuốc điều trị ĐTĐ typ tập trung vào nhóm sau: 1.2.1 Các thuốc có tác dụng kích thích tiết insulin gồm: - Nhóm thuốc ức chế kênh KATP: sulfonylurea meglitinide - Nhóm thuốc điều biến incretin: Các chất tương tự GLP-1: Exenatid, Liraglutid, Lixisenatid chất ức chế DPP-4: sitagliptin, vildagliptin, saxagliptin, linagliptin, alogliptin 1.2.2 Các nhóm thuốc làm giảm kháng insulin: metformin thiazolidinedion: pioglitazon 1.2.3 Nhóm thuốc làm giảm/chậm hấp thu glucid: Các thuốc ức chế enzym a-glucosidase gồm: acarbose (Precose, Glucobay) miglitol (Glyset) 1.2.4 Nhóm thuốc làm tăng thải trừ glucose ống thận: Các chất ức chế SGLT2 là: Dapagliflozin, Canagliflozin Empagliflozin 1.3 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐTĐ TRÊN THỰC NGHIỆM 1.3.1 Các mô hình nghiên cứu invivo 1.3.1.1 Các mơ hình gây ĐTĐ typ 1: Mơ hình ĐTĐ typ tự phát thứ phát dùng hóa chất, cắt bỏ tuyến tụy, gây ĐTĐ virus 1.3.1.2 Các mơ hình gây ĐTĐ typ 2: Mơ hình động vật gặm nhấm béo phì khơng béo phì ĐTĐ typ tự phát Mơ hình ĐTĐ typ thứ phát: gây hóa chất hay chế độ ăn giàu chất béo kết hợp liều thấp STZ phương pháp biến đổi gen 1.3.1.3 Một số phương pháp đánh giá tác dụng HGM invivo như: Đánh giá ảnh hưởng thuốc lên khả dung nạp glucose, khả hấp thu polysaccharide Đánh giá tác dụng tăng nhạy cảm insulin với mô đích thuốc qua “kỹ thuật kẹp trì glucose ổn định-tăng insulin máu” 1.3.2 Các mơ hình nghiên cứu invitro: Mơ hình nghiên cứu invitro chia loại: đánh giá tác dụng thuốc quan, tế bào cô lập enzyme tham gia điều hòa glucose máu 1.4 TỔNG QUAN VỀ CÁC THÀNH PHẦN CỦA ANDIABET VÀ CÁC NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN ANDIABET Bằng lăng nước, Giảo cổ lam Tri mẫu, dược liệu cổ truyền có tác dụng HGM chứng minh riêng rẽ hiệu điều trị bệnh ĐTĐ qua nhiều nghiên cứu tiền lâm sàng lâm sàng loại thảo dược kết hợp với thành dạng cao mềm Vinabetes đề tài cấp Bộ Giáo dục Đào tạo Phạm Hữu Điển (2012) Vinabetes có tỷ lệ kết hợp loại dược liệu Bằng lăng nước, Giảo cổ lam Tri mẫu 1,5: 1,5: tương tự Andiabet thử độc tính cấp, xác định LD50 chuột nhắt trắng 42,98 g/kg Vinabetes nghiên cứu độc tính bán trường diễn thỏ tuần với liều 1,8 g/kg/ngày 3,6 g/kg/ngày Về tác dụng: Vinabetes liều 4,5 g/kg g/kg cho chuột nhắt trắng bình thường uống liên tục tuần làm HGM 34 % 44% Còn chuột cống trắng gây ĐTĐ thực nghiệm uống Vinabetes liều g/kg/ngày tuần, nồng độ glucose máu giảm 44% Tuy nhiên, cao mềm Vinabetes chiết xuất điều kiện phòng thí nghiệm chưa có nghiên cứu dược lý đầy đủ Viên nang cứng Andiabet chế phẩm kết hợp loại thảo dược nêu trên, lần tiêu chuẩn hoá nguồn nguyên liệu chiết xuất, bào chế theo quy trình cơng nghiệp Đề tài nghiên cứu tác dụng HGM, số chế tác dụng HGM Andiabet với mong muốn tạo thuốc hỗ trợ điều trị ĐTĐ hiệu Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu: viên nang cứng Andiabet gồm: 200 mg cao khô Bằng lăng nước (Lagerstroemia speciosa (L.) Pers.) chiết cồn 70%; 200 mg cao khô thân, rễ, Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino) chiết nước 133 mg cao thân rễ Tri mẫu (Anemarrhena asphdeloides (Bunge)) chiết cồn 50% Chế phẩm sản xuất đạt tiêu chuẩn sở cung cấp Công ty cổ phần Traphaco, Hà Nội 2.1.2 Động vật nghiên cứu: Thỏ chủng Newzealand White, hai giống, khoẻ mạnh, lông trắng, cân nặng 1,8-2,5 kg Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng-Hà Tây cung cấp để nghiên cứu độc tính bán trường diễn Chuột nhắt trắng chủng Swiss, tuổi từ 5-6 tuần, khỏe mạnh, hai giống, cân nặng 18-22 g, viện Vệ sinh dịch tễ Trung Ương cung cấp để nghiên cứu độc tính cấp tác dụng HGM 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp xác định độc tính cấp bán trường diễn 2.2.1.1 Xác định độc tính cấp: Andiabet chuột nhắt trắng theo đường uống theo hướng dẫn WHO thuốc có nguồn gốc dược liệu Chuột nhắt trắng nhịn ăn 16 qua đêm, uống chế phẩm thử với liều tăng dần đến liều tối đa 44,25g/kg với thể tích Theo dõi tình trạng chung số lượng chuột chết vòng 72 sau uống thuốc 2.2.1.2 Xác định độc tính bán trường diễn: theo đường uống, thỏ thực theo hướng dẫn WHO thuốc có nguồn gốc dược liệu Thỏ uống Andiabet liều: 0,21 g/kg/ngày (tương đương liều dự kiến dùng người) 0,64 g/kg/ngày (gấp lần liều dự kiến dùng người) 90 ngày liên tục Đánh giá tình trạng chung thay đổi cân nặng Đánh giá chức phận tạo máu, chức gan, thận, mô bệnh học gan, thận thỏ 2.2.2 Phương pháp đánh giá tác dụng HGM sơ chế tác dụng HGM viên Andiabet thực nghiệm 2.2.2.1 Tác dụng HGM chuột nhắt trắng bình thường Chuột nhắt trắng giống, chia làm lô (10 con/lô) - Lô (Chứng sinh học): Uống nước cất - Lô (Chứng dương): Uống gliclazid liều 80 mg/kg - Lô (Andiabet 0,68g/kg): Uống Andiabet 0,68 g/kg/ngày - Lô (Andiabet 2g/kg): Uống Andiabet liều 2g/kg/ngày Chuột uống nước cất thuốc thử liên tục tuần vào buổi sáng Tiến hành lấy máu, định lượng nồng độ glucose máu thời điểm: chưa uống thuốc (to); sau uống thuốc thử tuần (t1) tuần (t2) 2.2.2.2 Tác dụng HGM chuột nhắt trắng gây ĐTĐ typ - Giai đoạn 1: Gây mơ hình ĐTĐ typ chế độ ăn giàu chất béo Chuột nhắt trắng chia làm nhóm: Nhóm (n = 10 con): ăn chế độ ăn bình thường (NFD - normal fat diet) Nhóm (n = 100 con): ăn chế độ ăn giàu chất béo (HFD - high fat diet) Sau tuần ăn NFD, tất chuột nhóm tiêm dung mơi pha STZ Sau tuần ăn HFD, tất chuột nhóm tiêm STZ liều 100mg/kg 72 sau tiêm STZ dung môi, tiến hành lấy máu, định lượng nồng độ glucose máu lúc đói thời điểm: bắt đầu nghiên cứu, sau nuôi béo tuần (hay trước tiêm STZ) 72 sau tiêm STZ Lựa chọn chuột nhóm tiêm STZ bị ĐTĐ (glucose lúc đói > 10 mmol/l) đưa vào nghiên cứu - Giai đoạn 2: Đánh giá tác dụng HGM Andiabet: Sau gây mơ hình ĐTĐ typ 2, chuột nhóm lựa chọn tiếp tục chia thành lô để đánh giá tác dụng HGM Andiabet Nhóm chuột ăn NFD giai đoạn tiếp tục sử dụng làm lô (lô chứng trắng) chuột bị ĐTĐ typ chia thành lô, từ lô đến lô 6, lô 10 con: - Lô (chứng sinh học): Chuột ăn NFD + uống nước cất - Lô (chứng bệnh): Chuột ĐTĐ + uống nước cất - Lô (chứng dương): Chuột ĐTĐ + gliclazid 80 mg/kg/ngày - Lô (Andiabet 0,68 g/kg):Chuột ĐTĐ +Andiabet 0,68g/kg/ngày - Lô (Andiabet g/kg): Chuột ĐTĐ + Andiabet g/kg/ngày - Lô (Andiabet g/kg): Chuột ĐTĐ + Andiabet g/kg/ngày Chuột lô uống thuốc thử tương ứng liên tục 14 ngày Đánh giá: cân nặng chuột sau 2, 4, tuần ni béo Nồng độ glucose máu trung bình lơ chuột đo thời điểm t0, t1, t2 Các số lipid: TC, TG, HDL - C, LDL-C Quan sát hình ảnh đại thể, vi thể, cân nặng gan, tụy chuột 2.2.2.3 Đánh giá khả ức chế dung nạp glucose, sucrose tinh bột chuột nhắt trắng bình thường chuột gây ĐTĐ typ sĐánh giá khả ức chế dung nạp glucose/sucrose/tinh bột Andiabet chuột nhắt trắng bình thường Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô (10 con/lô): - Lô (Lô chứng sinh học): uống nước cất - Lô (chứng dương): uống Acarbose 14 mg/kg/ngày - Lô (chứng dương): uống Metformin 250 mg/kg/ngày - Lô (Andiabet 1g/kg): uống Andiabet liều g/kg/ngày - Lô (Andiabet 2g/kg): uống Andiabet liều g/kg/ngày Chuột uống thuốc thử 14 ngày liên tục vào buổi sáng Ngày thứ 15 sau uống thuốc thử giờ, cho chuột uống glucose liều g/kg (test dung nạp glucose) uống sucrose liều g/kg (test dung nạp sucrose), uống tinh bột khoai liều g/kg (test dung nạp tinh bột) Định lượng nồng độ glucose máu thời điểm trước uống, 30, 60 120 phút sau uống glucose/sucrose/tinh bột Đánh giá: Đỉnh tăng glucose máu (PBG) – Mức độ tăng glucose máu tối đa nhóm sau uống glucose Diện tích đường cong AUC glucose máu tính theo cơng thức hình thang sau: !"#!$" !$"#!&" AUC = ( % ) x (t30 – t0) + ( ) x (t60 - t30) + % !&"#!'%" ( ) x (t120 - t60) % * C0, C30, C60, C120 nồng độ glucose máu đo thời điểm trước uống (t0), 30 phút (t30), 60 phút (t60), 120 phút (t120) sĐánh giá khả ức chế dung nạp glucose/sucrose/tinh bột Andiabet chuột nhắt trắng gây ĐTĐ typ Tiến hành chuột ĐTĐ typ 2, tương tự chuột nhắt bình thường 2.2.2.4 Đánh giá ảnh hưởng Andiabet đến mức kháng insulin chuột nhắt gây ĐTĐ typ 8 Chuột nhắt ĐTĐ typ chia thành lô (7 con/lô), uống thuốc thử/nước cất tuần liên tiếp với thể tích 0.2ml/10g chuột - Lơ (chứng trắng): Chuột bình thường + uống nước cất - Lô (chứng bệnh): Chuột ĐTĐ + uống nước cất - Lô (Andiabet 1g/kg): Chuột ĐTĐ + uống andiabet 1g/kg/ngày - Lô (Andiabet 2g/kg): Chuột ĐTĐ+ uống andiabet 2g/kg/ngày Ngày thứ 15, tiến hành kỹ thuật “kẹp trì glucose ổn định-tăng insulin máu” để đánh giá mức độ kháng insulin Tại thời điểm t0, lấy máu đuôi chuột để xác định nồng độ glucose máu Insulin truyền tốc độ: mU/kg/phút, liên tục trì tốc độ khơng đổi suốt thí nghiệm Đồng thời truyền glucose 20 %: tốc độ truyền ban đầu dựa vào nồng độ glucose máu đo thời điểm t0 Sau 10 phút/lần, đo nồng độ glucose máu dựa kết đo điều chỉnh tốc độ truyền glucose (glucose máu ~7,5 - 8.3 mmol/L), tiếp tục truyền insulin So sánh nồng độ glucose máu, tốc độ truyền glucose thời điểm “kẹp” (từ phút 80 - 120) lô uống mẫu thử so với lô chứng 2.3 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU Số liệu nhập xử lý phần mềm Microsoft Excel IBM - SPSS version 22 Các số liệu nghiên cứu xử lý thống kê theo phương pháp t-test Student, phân tích phương sai ANOVA đơn biến Kiểm định giả thiết: phương sai đồng nhất, sử dụng test post hoc Dunnett’s Phương sai không đồng dùng test post hoc GamesHowell Số liệu biểu diễn dạng: X ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN ANDIABET 3.1.1 Độc tính cấp Chuột nhắt trắng uống chế phẩm thử Andiabet tăng dần đến liều cao 44,25 g/kg thể trọng chuột tương đương 0,25 ml/10g, lần/24 Theo dõi không thấy có chuột chết, khơng có triệu chứng bất thường suốt ngày Như vậy, Andiabet khơng có độc tính cấp liều 44,25 g/kg Vì chưa xác định LD50 chuột nhắt trắng Andiabet đường uống 3.1.2 Độc tính bán trường diễn Andiabet mức liều: 0,21g 0,64g/kg/ngày uống liên tục 90 ngày chưa thấy biến đổi số huyết học, hố sinh máu mơ bệnh học gan, thận thỏ 3.2 TÁC DỤNG HGM VÀ MỘT SỐ CƠ CHẾ TÁC DỤNG HGM CỦA VIÊN ANDIABET TRÊN THỰC NGHIỆM 3.2.1 Tác dụng HGM chuột nhắt trắng bình thường Bảng 3.1 Nồng độ glucose máu chuột nhắt trắng bình thường sau tuần uống chế phẩm thử Andiabet Nồng độ glucose máu mmol/l (X ± SD) To T1 T2 Lô 1: Chứng sinh học 3,53 ± 0,72 4,99 ± 1,14 4,97 ± 0,92 Lô 2: Gliclazid 80mg/kg 3,55 ± 0,51 4,12 ± 0,58* 3,95 ± 0,72** % giảm so lô chứng ↓ 17,44 % ↓ 20,52 % Lô 3: Andiabet 0,68g/kg 3,34 ± 0,21 5,03 ± 0,25 4,26 ± 0,44* % giảm so lô chứng ↓ 14,3 % Lô 4: Andiabet g/kg 3,40 ± 0,60 4,92 ± 0,79 4,12 ± 0,61* % giảm so lô chứng ↓ 1,4 % ↓ 17,1 % p so với lô chứng: *: p < 0,05; **: p < 0,01 Lô chuột (n = 10) Nhận xét: nồng độ glucose máu tất lô thời điểm T0 tương đương (p > 0,05) Sau tuần uống thuốc thử (T1) có lơ làm HGM 17,44 % (p < 0,05) Sau tuần (T2): glucose máu lô giảm 20,52% (p < 0,01), lơ giảm 14,3%, lô giảm 17,1% so với lô (p < 0,05) 3.2.2 Tác dụng HGM chuột nhắt gây ĐTĐ typ 10 3.2.2.1 Thay đổi cân nặng chuột sau chế độ ăn giàu chất béo Bảng 3.2 Sự thay đổi cân nặng chuột thời điểm nghiên cứu Trọng lượng (g) (X ± SD) Thời gian Bắt đầu nghiên cứu Sau tuần % tăng Sau tuần % tăng Sau tuần % tăng Nhóm NFD (n = 10) p so lơ Nhóm HFD (n = 100) 25,45 ± 0,98 26,09 ± 1,30 > 0,05 29,60 ± 1,15*** 37,17 ± 1,89*** < 0,001 ↑ 16,3 ↑ 42,5 33,60 ± 1,43*** 42,89 ± 1,93*** ↑ 32,0 ↑ 64,4 35,90 ± 1,45*** 48,47 ± 2,27*** ↑ 41,1 ↑ 85,8 < 0,001 < 0,001 ***: p < 0,001: So sánh với thời điểm trước nghiên cứu Nhận xét: Cân nặng chuột lô ăn HFD sau 4, 6, tuần tăng 42,5%; 64,4% 85,8% so với lô chứng (p < 0,001) 3.2.2.2 Thay đổi nồng độ glucose máu chuột sau gây ĐTĐ Bảng 3.3 Thay đổi nồng độ glucose máu chuột sau tuần ăn HFD Glucose máu (mmol/l) (X ± SD) Nhóm NFD Nhóm HFD p so lơ (n=10) (n=100) Bắt đầu nghiên cứu 5,37 ± 0,56 5,56 ± 1,02 > 0,05 Sau tuần 5,77 ± 0,67 6,32 ± 0,93 > 0,05 % thay đổi ↑ 7,4 ↑ 13,7 Sau tiêm STZ 72h 5,98 ± 0,92 17,09 ± 6,33*** < 0,001 % thay đổi ↑ 11,4 ↑ 207,4 (∆∆∆) ***: p < 0,001: p so trước nghiên cứu; : p < 0,001: p so sau tuần Thời gian Nhận xét: Sau 72 tiêm STZ, nồng độ glucose máu nhóm HFD tăng cao rõ rệt (207,4%) so với nhóm chứng (tăng 11,4%) (p < 0,001) so với thời điểm trước tiêm STZ (p < 0,001) 3.2.2.3 Tác dụng HGM chuột nhắt gây ĐTĐ typ 11 Bảng 3.4 Ảnh hưởng viên nang lên nồng độ glucose máu chuột nhắt trắng ĐTĐ typ sau tuần uống thuốc Nồng độ glucose máu mmol/l (X ± SD) Lô chuột (n=10) To T1 T2 Lô 1: Chứng sinh học 5,54 ± 0,86 5,51 ± 0,81 5,46 ± 0,46 Lô 2: Chứng bệnh 17,88 ± 6,23 18,38 ± 4,46 18,38 ± 4,39 Lô 3: Gliclazid 80mg/kg 17,36 ± 5,26 14,18 ± 5,23* 13,83 ±3,45** % giảm so lô chứng bệnh ↓ 22,9 % ↓ 24,8 % Lô 4: Andiabet 0,68g/kg 17,89 ± 6,3 13,99 ± 3,61* 16,71 ± 4,46 % giảm so lô chứng bệnh ↓ 23,9 % ↓ 9,1% Lô 5: Andiabet 1g/kg 19,23 ± 6,3 17,53 ± 3,61 11,83 ± 3,91** % giảm so lô chứng bệnh ↓ 4,6 % ↓ 35,6 % Lô 6: Andiabet 2g/kg 18,04 ± 5,27 11,69 ± 3,78** 14,84 ± 5,01* % giảm so lô chứng bệnh ↓ 36,4 % ↓ 19,3 % p so với lô chứng bệnh: *: p < 0,05; **: p < 0,01; ***: p < 0,001 Nhận xét: Sau tuần uống thuốc thử, chuột lô làm HGM 23,9% 36,4% so với lô chứng bệnh (p < 0,05 p < 0,01) Sau tuần uống Andiabet, chuột lô làm HGM 35,6% (p < 0,01) 3.2.2.4 Tác dụng hạ lipid máu chuột nhắt ĐTĐ typ Bảng 3.5 Ảnh hưởng viên Andiabet lên nồng độ lipid máu chuột nhắt trắng ĐTĐ typ sau tuần uống thuốc Lô chuột (n=10) Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Chứng bệnh Lô 3: Gliclazid 80mg/kg Lô 4: Andiabet 0,68g/kg TC Nồng độ lipid máu mmol/l (X ± SD) TG HDL-C LDL-C 2,75 ± 0,55 0,50 ± 0,17 1,40 ± 0,11 1,12 ± 0,40 3,85 ± 0,56∆∆∆ 0,89 ± 0,28 ∆∆∆ 1,79 ± 0,22 ∆∆∆ 1,64 ± 0,47 ∆∆∆ 3,86 ± 0,52 0,81 ± 0,18 1,89 ± 0,31 1,60 ± 0,63 3,70 ± 0,61 0,81 ± 0,22 2,29 ± 0,21*** 1,05 ± 0,66*** 12 Lô 5: Andiabet 3,63 ± 0,38 0,9 ± 0,13 2,07 ± 0,16** 1,15 ± 0,32** 1g/kg Lô 6: Andiabet 3,23 ± 0,50** 0,62 ± 0,16** 2,15 ± 0,21*** 0,81 ± 0,43*** 2g/kg p so lô chứng sinh học: ∆∆∆: p 0,05) 3.2.2.6 Ảnh hưởng cân nặng tụy chuột gây ĐTĐ typ Nhận xét: Cân nặng tụy chuột tất lô tương tự lô chứng sinh học, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 3.2.2.7 Thay đổi mô bệnh học v Quan sát đại thể gan: Lơ có màu hồng sẫm, đồng màu sắc Mật độ mô đồng Gan chuột lơ tiêm STZ có màu sắc bạc, đều, mật độ mơ có phần lỏng lẻo so với lô chứng sinh học v Quan sát vi thể gan: Ở lô uống Andiabet: 2/3 mẫu bệnh phẩm có thối hóa mỡ nhẹ: bào tương tế bào gan có hốc sáng nhỏ 1/3 mẫu bệnh phẩm có thối hóa mỡ vừa: bào tương tế bào gan có hốc sáng khơng đều, tế bào gan tăng kích thước, so sánh với lơ chứng bệnh, 100% mẫu bệnh phẩm thối hóa mỡ nặng: tế bào gan sưng phồng, có hốc sáng to, bào tương sáng, số tế bào nhân, có nhiều ổ tế bào thối hóa mỡ v Quan sát đại thể tụy: tụy tất lô chuột có màu hồng nhạt, 13 mật độ dai chắc, không xung huyết, không thấy tổn thương đại thể v Quan sát vi thể tụy: lô chứng bệnh 100% mẫu bệnh phẩm tụy bị thối hóa: mật độ tiểu đảo tụy giảm Đảo tụy biến dạng, giảm kích thước, tế bào đảo tuỵ thối hóa, teo lại Ở lô uống Andiabet, 100% mẫu bệnh phẩm tụy cải thiện tình trạng thối hóa tế bảo đảo tụy, tiểu đảo tụy giảm nhẹ kích thước, mật độ tiểu đảo so với bình thường 3.2.3 Tác dụng ức chế dung nạp glucose máu sau uống glucose / sucrose / tinh bột Andiabet 3.2.3.1 Tác dụng ức chế dung nạp glucose máu chuột nhắt bình thường v Tác dụng ức chế dung nạp glucose máu sau uống glucose Andiabet Bảng 3.6 Ảnh hưởng Andiabet PBG AUC glucose máu sau uống glucose (2g/kg) chuột bình thường Lơ chuột PBG % hạ AUC (n =10) (mmol/L) PBG (mmol/L) Chuột Bình thường Lơ chứng trắng 9,28 ± 2,15 13,58 ± 3,05 Lô acarbose 14 mg/kg 7,86 ± 0,99 15,3 11,33 ± 1,58 Lô metformin250 mg/kg 7,37 ± 1,13* 20,58 11,95 ± 1,23 Lô Andiabet g/kg 9,95 ± 1,87 13,88 ± 2,55 Lô Andiabet g/kg 8,22 ± 1,90 11,4 11,65 ± 1,99 p so với lô chứng: * p