Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6167-1996

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6167-1996 trình bày nội dung về phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan. Tiêu chuẩn này áp dụng cho các loại phân bón chứa các chủng vi sinh vật sống có khả năng phân giải hợp chất photpho khó tan và quy định các yêu cầu kỹ thuật; phương pháp kiểm tra đánh giá đối với phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan.

tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Tiêu chuẩn việt nam TCVN 6167-1996 Phân bón vi sinh vật phân giải hợp chÊt photpho khã tan Phosphat-solubilizing microbial fertilizer Ph¹m vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho loại phân bón chứa chủng vi sinh vật sống có khả phân giải hợp chất photpho khó tan qui định yêu cầu kỹ thuật; phơng pháp kiểm tra đánh giá phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan Tiêu chuẩn trÝch dÉn TCVN 4833-89 (ISO 4833-1978) Híng dÉn chung ®Õm vi sinh vật, kỹ thuật đếm khuẩn lạc 300C TCVN 4881-89 (ISO 6887-1983) Híng dÉn chung vỊ c¸ch pha chế dung dịch pha loãng để kiểm nghiệm vi sinh vật TCVN 5815-1994 Phân hỗn hợp NPK Phơng pháp thư TCVN 6169 - 1996 Ph©n bãn vi sinh vËt-Tht ngữ Thuật ngữ, định nghĩa Phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan (tên thờng gọi: phân lân vi sinh) sản phẩm chứa hay nhiều chủng vi sinh vật sống đợc tuyển chọn với mật độ đạt tiêu chuẩn hành, có khả chuyển hoá hợp chất photpho khó tan thành dạng dễ tiêu cung cấp cho đất trồng, tạo điều kiện nâng cao suất (hoặc) chất lợng nông sản Phân lân vi sinh chủng vi sinh vật không gây ảnh hởng xấu đến ngời, động, thực vật, môi trờng sinh thái chất lợng nông sản Yêu cầu kỹ thuật 4.1 Phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan phải chứa nhiều chủng vi sinh vật có khả tạo vòng phân giải môi trờng chứa nguồn photpho tricanxi photphat [Ca3(PO4)2] lexitin 4.2 Phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan phải có mật độ vi sinh vật sống phù hợp với qui định bảng tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Bảng 1- Mật độ vi sinh vật Tên tiêu Mật độ vi sinh vật CFU*/g hay ml phân bón Chất mang không Chất mang trïng trïng Khi xuÊt xCuèi h¹n Khi xuÊt xCuối hạn ởng bảo hành ởng bảo hành Vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó 1,0 x 109 tan, không nhỏ Vi sinh vật tạp, không 1,0 x 106 lín h¬n 1,0 x 108 1,0 x 107 1,0 x 106 1,0 x 106 - - *CFU: Đơn vị hình thành khuẩn lạc 4.3 Phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan phải có tác dụng tốt trồng đất Hiệu phân bón phải đạt đợc tiêu chuẩn lợng nh ghi nhãn đợc xác định phòng thử nghiệm đợc công nhận hay định 4.4 Độ an toàn chủng vi sinh vật chứa phân bón phải đợc xác định công nhận phòng thí nghiệm đợc công nhận hay định 4.5 Thời hạn bảo hành phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan không tháng 4.6 Thành phần chất dinh dỡng độ ẩm phân bón phải đợc đăng ký quan quản lý nhà nớc chất lợng đợc xác định, đánh giá phòng thí nghiệm đợc công nhận hay định Lấy mẫu 5.1 Qui định chung 5.1.1 Việc lấy mẫu đợc tiến hành cho mẫu kiểm tra phải mẫu đại diện cho lô hàng Ngời lấy mẫu đợc huấn luyện có kinh nghiệm việc lấy mẫu 5.1.2 Trong trình lấy mẫu, vận chuyển xử lý mẫu, phải đảm bảo tránh lây nhiễm từ bên phải bảo đảm mẫu đợc nguyên trạng nh ban đầu đem phân tích phòng thí nghiệm 5.1.3 Không đợc bổ sung thêm tác nhân bảo quản, diệt khuẩn diệt nấm vào mẫu kiểm tra 5.1.4 Mẫu đợc lấy phải bao nguyên gói 97 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón 5.1.5 Phải tiến hành lấy mẫu nơi nớc nóng, hoá chất độc hại, ánh nắng gay gắt bụi đợc đa vào dơng chøa mÉu 5.1.6 C¸c dơng lÊy mÉu chứa mẫu phải vô trùng 5.2 Chuẩn bị dụng cụ lấy chứa mẫu 5.2.1 Dụng cụ lấy mẫu phải loại đợc làm thép không gỉ thuỷ tinh 5.2.2 Các dụng cụ lấy chứa mẫu vô trùng cách sấy tủ sấy nhiệt độ 1700C thời gian không 1h nồi hấp nhiệt độ 1210C thời gian không 30 đợc bảo quản dụng cụ thích hợp, đảm bảo tránh lây nhiễm từ bên 5.3 Số lợng mẫu 5.3.1 Lô hàng bao gồm bao (túi) sản phẩm phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan đợc sản xuất đợt với nguồn nguyên liệu 5.3.2 Số lợng bao (túi) cần lấy để kiểm tra lô hàng phụ thuộc vào độ lớn lô hàng phù hợp với qui định bảng Bảng Số lợng bao (túi) cần lấy để kiểm tra Cả lô hàng (bao, túi) Số lợng mẫu cần lấy (bao, túi) 11 15 19 Đến 100 Từ 101 đến 1000 Từ 1001 đến 10000 Lớn 10000 5.3.3 Các bao (túi) mẫu đợc lựa chọn ngẫu nhiên theo TCVN 1694-75 Tiến hành lấy mẫu trung bình từ mẫu chung tập hợp mẫu ban đầu lô hàng kiểm tra Chia mẫu trung bình làm phần bao gói phù hợp với yêu cầu sản phẩm Một phần dùng để kiểm tra phần để lu bảo quản điều kiện qui định mà loại sản phẩm yêu cầu để dùng phân tích trọng tài Trên gói mẫu phải có nhãn ghi rõ: ưTên mẫu đối tợng trồng đợc sử dụng; ưTên sở sản xuất; ưThời gian sản xuất; ưThời gian địa điểm lấy mẫu; ưTên ngời lấy mẫu, quan lấy mẫu Tiến hành kiểm tra xác định 98 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón 6.1 Xác định hiệu phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan Hiệu phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan đất trồng đợc xác định theo qui trình khảo nghiệm phân bón qui định văn quan có thẩm quyền Chú thích: Trong khảo nghiệm diện hẹp cần thêm công thức đối chứng với phân vi sinh vật đợc diệt hết tế bào vi sinh vật sống có phân 6.2 Kiểm tra mật độ vi sinh vËt 6.2.1 Chn bÞ kiĨm tra 6.2.1.1 Trang thiÕt bÞ, dụng cụ kiểm tra Trang thiết bị phòng kiểm nghiƯm vi sinh vËt th«ng thêng, bao gåm: - ThiÕt bị để khử trùng khô (tủ sấy) khử trùng nớc (nồi hấp); - Tủ ấm, điều chỉnh đợc 300 10C; - Hộp lồng thuỷ tinh chất dẻo, đờng kính từ 90 đến 100mm; - Pipet thñy tinh cã dung tÝch 1,0ml; 5,0ml; 10,0 ml; - Máy đếm khuẩn lạc có đáy đợc chiếu sáng với tối có gắn thấu kính phóng đại, độ phóng đại 1,5 lần dụng cụ đếm học số điện tử; - Máy đo độ pH có độ xác đến 0,1 đơn vị ®o pH; - Nåi c¸ch thủ ỉn nhiƯt; - èng nghiệm thuỷ tinh 18mmx180mm; - Bình tam giác có dung tích thích hợp; - ống đong dụng cụ thuỷ tinh khác Ngoài dụng cụ khử trùng sẵn, tất dụng cụ dùng kiểm tra vi sinh vật phải khử trùng cách: - Giữ 170 đến 1750C không 1h tủ sấy, - Giữ áp suất 1,0 atmotphe (1210C) không 30 nồi hấp Các thiết bị pha trộn: - Máy trộn quay có tần số quay từ 8.000 đến 45.000 vòng/min, có bình chứa kim loại thuỷ tinh, chịu đợc điều kiện tiƯt trïng; - Dơng trén nhu ®éng (stomacher) víi túi chất dẻo vô trùng; - Dụng cụ trén: cã thĨ trén tõ 1ml ®Õn 2ml mÉu thư; - Cân kỹ thuật có độ xác tới 0,01 g 6.2.1.2 Dịch pha loãng dung dịch muối ăn (NaCl) 0,85 %, không chứa hợp chất photpho, có ®é pH lµ 7,0 sau khư trïng ë 250C 99 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Lấy 90ml dịch pha loãng vào bình cầu lọ chất dẻo (cho dịch huyền phù ban đầu), Lấy 9ml dịch pha loãng vào ống nghiệm (cho dịch pha loãng thập phân) Nút lại mỡ, khử trùng nåi hÊp ¸p lùc, ë 1210C 30min NÕu cha sử dụng ngay, dịch pha loãng cần đợc bảo quản tủ lạnh nhiệt độ từ đến 50C, thời gian bảo quản không tháng kể từ ngày chuẩn bị Chú thích: Để tránh làm ảnh hởng đến vi sinh vật thay đổi nhiệt độ đột ngột, nên điều chỉnh nhiệt độ dịch pha loãng đến nhiệt độ phòng thử nghiệm 6.2.1.3 Chuẩn bị môi trờng kiểm tra Môi trờng dùng để kiểm tra mật độ phân vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan đợc sử dụng môi trờng chứa nguồn photpho tricanxi photphat [Ca3(PO4)2] lexitin Thành phần môi trờng phụ thuộc vào chủng loại vi sinh vật mà nhà sản xuất sử dụng Nếu yêu cầu nhà sản xuất, kiểm tra sư dơng m«i trêng theo phơ lơc A M«i trờng đợc pha chế theo thứ tự hoá chất thành phần cho phân vào dụng cụ thuỷ tinh chuẩn bị trớc khử trùng điều kiện 1atmotphe (1210C) 30 Phân chia môi trờng vào hộp lồng khử trùng điều kiện vô trùng Kiểm tra độ môi trờng sau ngày để nhiệt độ từ 28 ®Õn 30 o C ChØ sư dơng c¸c hép lång chứa môi trờng nuôi cấy vi sinh vật không phát thấy tạp nhiễm Chú thích: Đối với phân vi sinh vật chứa loại vi sinh vật dới dạng tiềm sinh, trớc kiểm tra cần phải hoạt hoá 6.2.2 TiÕn hµnh kiĨm tra 6.2.2.1 Pha lo·ng mÉu a) Đối với mẫu dạng lỏng: dùng pipet vô trùng có nút phần hút, lấy 10ml mẫu để trộn lắc tay hay thiết bị lắc học đa vào 90ml dịch pha loãng theo 6.2.1.2 Chú ý tránh chạm pipet vào dịch pha loãng, trộn cẩn thận mẫu chuẩn bị cách hút - thả lại 10 lần với pipet có nút phần hút vô trùng khác dụng cụ trộn học 5-10s, nhịp quay dụng cụ đợc chọn cho mẫu trộn nh cuộn xoáy dâng lên cách mép lọ chứa khoảng đến cm Dung dịch tạo gọi dung dịch huyền phù ban đầu; b) Đối với mẫu dạng đặc: cân 10g mẫu có độ xác tới 0,01g cho vào bình chứa vô trùng, thêm 90 ml dịch pha loãng theo 6.1.1.2 Đặt bình vào máy trộn đến cho có đợc dung dịch có phân bố đồng Để lắng phần tử nặng, khoảng 15 min, gạn đợc dung dịch huyền phù ban đầu; 100 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón c) Dùng pipet vô trùng lấy 1ml dịch huyền phù ban đầu (a b) cho vào ống nghiệm chứa 9ml dịch pha loãng theo 6.2.1.2 chuẩn bị sẵn nhiệt độ phòng, tránh chạm pipet vào dịch pha loãng Trộn kỹ cách hút thả khoảng 10 lần với pipet khác có nút đầu hút vô trùng, để có dịch pha loãng mẫu có nồng độ 10 -2 Quá trình đợc lặp lại liên tục để có dịch mẫu có nồng độ pha loãng theo qui định sau: - Đối với phân vi sinh vật chất mang trùng sử dụng nồng độ pha loãng 10-7; - Đối với phân vi sinh vật chất mang không trùng sử dụng nồng độ pha loãng 10-5 6.2.2.2 Cấy mẫu Dùng pipet vô trùng cho độ pha loãng riêng lấy từ dịch mẫu cã nång ®é pha lo·ng 10-5, 10-6, 10-7®èi víi mÉu phân vi sinh vật chất mang trùng; 10-3, 10-4, 10-5 mẫu phân vi sinh vật chất mang không trùng, lợng dịch 0,05ml, cấy vào hộp lồng chứa môi trờng chuẩn bị sẵn theo 6.2.1.3 Mỗi mẫu đợc cấy lặp lại hộp lồng Lắc nhẹ hộp lồng để dịch mẫu dàn trải bề mặt thạch, ý không để dịch mẫu dính vào thành hộp lồng, đợi bề mặt thạch khô, úp ngợc hộp lồng đa vào tủ ấm, điều chỉnh nhiệt độ tủ ấm cho phù hợp với yêu cầu loại vi sinh vật Thời gian nuôi từ 48 đến 72 h 6.2.3 Đọc kết Vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan đợc tính số khuẩn lạc hộp lồng tạo vòng phân giải (vòng tròn suốt) bao quanh khuẩn lạc Vi sinh vật tạp tất khuẩn lạc đặc điểm đặc trng 6.2.4 Cách tính mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra (gam hay mililit) Mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra (A) đợc tính theo công thức: A a.20 d Trong đó: a- số khuẩn lạc theo yêu cầu có hộp lồng; d- nồng độ dịch pha loãng Chú thích 1) Số lợng khuẩn lạc trung bình đợc tính trung bình cộng số khuẩn lạc hộp lồng đợc cấy từ độ pha loãng, tính hộp lồng có chứa từ 20 đến 300 khuẩn lạc; 2) Số lợng khuẩn lạc trung bình đợc tính từ trung bình cộng số khuẩn lạc hộp lồng đợc cấy từ hai độ pha loãng kÕ tiÕp b»ng c¸ch tÝnh sè khn 101 tun tập tiêu chuẩn phân bón lạc trung bình ®é pha lo·ng, ®ã sè khuÈn l¹c ë ®é pha loãng cao đợc nhân với 10 sau lấy trung bình cộng hai giá trị nêu tỷ số giá trị lớn giá trị nhỏ không lớn hai Nếu tỷ số lớn hai lấy giá trị nhỏ làm kết quả; 3) Mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra đợc biểu thị số 1,00 9,99 nhân với 10n, n số mũ thích hợp 6.3 Xác định hàm lợng chất dinh dỡng 6.3.1 Xác định hàm lợng nitơ (N) Tiến hành theo TCVN 5815-1994 6.3.2 Xác định hàm lợng photpho (P2O5 hữu hiệu) Tiến hành theo TCVN 5815-1994 6.3.3 Xác định hàm lợng kali (K2O) Tiến hành theo TCVN 5815-1994 6.3.4 Xác định hàm lợng chất hữu vi lợng Tiến hành theo phơng pháp qui định hành 6.2.5 Xác định độ ẩm Tiến hành theo TCVN 5815-1994 6.4 Báo cáo kết kiểm tra Trong báo cáo kết kiểm tra phải mô tả lại tình trạng mẫu trớc tiến hành kiểm tra (các chi tiết cần đủ để xác định mẫu), phơng pháp kiểm tra kết đạt đợc Báo cáo phải nêu tất điều kiện thao tác không qui định tiêu chuẩn đợc coi tuỳ ý lựa chọn nh tình ảnh hởng đến kết Yêu cầu bao gói, ghi nhãn, bảo quản hớng dÉn sư dơng 7.1 Ph©n bãn vi sinh vËt ph©n giải hợp chất photpho khó tan đợc bao gói chất liệu không độc hại tới vi sinh vật, ngời, động, thực vật môi trờng sinh thái; đảm bảo thời hạn bảo hành phân trớc điều kiện bất lợi từ bên 7.2 Trên bao (gói) sản phẩm phân bón vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan phải có nhãn ghi với đầy đủ nội dung sau: ưTên sở sản xuất; ưTên sản phẩm tên khoa học loài vi sinh vật sử dụng; ưThành phần chất dinh dỡng độ ẩm; ưCông dụng; ưNgày sản xuất thời hạn bảo hành; 102 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón ưKhối lợng tịnh; ưSố đăng ký chất lợng 7.3 Sản phÈm ph¶i cã b¶n híng dÉn sư dơng kÌm theo (in bao bì in riêng) Nội dung hớng dẫn phải ghi đủ liều lợng qui trình sử dụng nh hiệu phân bón trồng hay khả thay loại phân bón khác Phụ lục A (Qui định) A.1 Môi trờng kiểm tra vi sinh vật phân giải hợp chất photpho vô khó tan Glucoza 10,0g 5,0g 0,5g 0,2g 0,1g vÕt vÕt 0,5g 20,0g 1000ml 6,8-7,0 Ca3(PO4)2 (NH4)2SO4 KCl MgSO4.7H2O MnSO4 FeSO4 NÊm men Th¹ch Níc cÊt pH A.2 Môi trờng kiểm tra vi sinh vật phân giải hợp chất photpho hữu khó tan Glucoza 10,0g 0,5g 0,2g 0,1g vÕt vÕt 0,5g 5,0g (NH4)2SO4 KCl MgSO4.7H2O MnSO4 FeSO4 Nấm men Lexitin 103 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Thạch Nớc cất vừa đủ pH 20,0g 1000ml 6,8-7,0 104 ...tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Bảng 1- Mật độ vi sinh vật Tên tiêu Mật độ vi sinh vật CFU*/g hay ml phân bón Chất mang không ChÊt mang... tuyển tập tiêu chuẩn phân bón 5.1.5 Phải tiến hành lấy mẫu nơi nớc nóng, hoá chất độc hại, ánh nắng gay gắt bụi đợc đa vào c¸c dơng chøa mÉu 5.1.6 C¸c dơng lÊy mẫu chứa mẫu phải vô trùng 5.2 Chuẩn. .. phù ban đầu; 100 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón c) Dùng pipet vô trùng lấy 1ml dịch huyền phù ban đầu (a b) cho vào ống nghiệm chứa 9ml dịch pha loãng theo 6.2.1.2 chuẩn bị sẵn nhiệt độ phòng,