Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8138:2009 giới thiệu nội dung về thịt và sản phẩm thịt - phát hiện polyphosphat. Tiêu chuẩn do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F8 Thịt và sản phẩm thịt biên soạn. Mời các bạn cùng tham khảo.
Lời nói đầu TCVN 8138 : 2009 hồn tồn tương đương với ISO 5553 : 1980; TCVN 81 38 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F8 Thịt sản phẩm thịt biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8138 : 2009 Thịt sản phẩm thịt - Phát polyphosphat Meat and meat products - Detection ofpolyphosphates Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp phát phosphat đậm đặc thịt sản phẩm thịt sắc ký lớp mỏng Lĩnh vực áp dụng Vì polyphosphat thuỷ phân từ từ enzym có mặt thịt sản phẩm thịt trình xử lý nhiệt thịt sản phẩm thịt, nên tiêu chuẩn áp dụng để phát polyphosphat bổ sung có mặt mẫu thời điểm kiểm tra Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau rắt cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) ISO 3100, Thịt sản phẩm thịt - lấy mẫu 1) Nguyên tắc Chiết thịt sản phẩm thịt axit tricloaxetic Làm dịch chiết thu hỗn hợp etanol/dietyl ete Tách phosphat sắc ký lớp mỏng phát polyphosphat cách phun thuốc thử để màu Thuốc thử ) ISO 3100 đã được thay thế bằng hai tiêu chuẩn ISO 31001: 1991 (đã được biên soạn thành TCVN 48331:2002) và ISO 31002: 1991 (đã được biên soạn thành TCVN 48332:2002) Hiện nay, ISO 31001: 1991 đã bị huỷ và được thay thế bằng ISO 17604: 2003 (được biên soạn thành TCVN 7925:2008 Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn ni Phương pháp lấy mẫu thân thịt tươi để phân tích vi sinh vật) Tất thuốc thử sử dụng phải loại phân tích Nước sử dụng phải nước cất nước có độ tinh khiết tương đương Cảnh báo - Tuân thủ tất ý an tồn thích hợp tiến hành theo quy trình quy định tiêu chuẩn 5.1 Axit tricloaxetlc 5.2 Ete dietyl 5.3 Etanol, 95 % (thể tích) 5.4 Bột xenluloza, dùng cho sắc ký lớp mỏng 5.5 Tinh bột hồ tan 5.6 Hỗn hợp đối chứng Hoà tan 100 ml nước: - 200 mg natri dihydro phosphat ngậm phân tử nước (NAH2PO4.H2O); - 300 mg tetranatri diphosphat ngậm mười phân tử nước (Na 4P2O7 10H2O); - 200 mg pentanatri triphosphat (Na5P3O10) - 200 mg natri hexametaphosphat (Na5PO3)x[x> 10] Hỗn hợp đối chứng bảo quản oC bền tuần 5.7 Dung mơi triển khai Trộn 140 ml isopropyl alcohol, 40 ml dung dịch axit tricloaxetic 135 g/1, 0,6 ml amoni hydroxlt 20 = 0,90 g/ml, dung dịch khoảng 25 % (khối lượng) Giữ dung mơi chai kín khí: 5.8 Thuốc thử dạng phun sương Trộn thể tích dung dịch amoni molybdat ngậm bốn phân tử nước [(NH4)6Mo7O24.4H2O)] 75 g/1 axit nitric đậm đặc (p20 = ,40 g/ml) hoà tan 10 g axit tartaric 100 ml hỗn hợp Chuẩn bị thuốc thử ngày sử dụng 5.9 Thuốc thử dạng phun sương 11 Hoà tan 0,5 g axit 1-amino-2naphtol-4sulphonic 195 ml hỗn hợp natn disulphit (natri metabisulphit; Na2S2O5) 150 g/1 ml dung dịch natri sulphit (Na2SO3) 200 g/l Hoà tan 40 g natri axetat ngậm ba phân tử nước (NaOOCCH3H2O) hỗn hợp Bảo quản thuốc thử chai màu nâu đậy kín để tủ lạnh Loại bỏ dung dịch sau tuần 6 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường, trừ có qui định khác cụ thể sau: 6.1 Tấm thuỷ tinh, khử chất béo, 10 cm x 20 cm 6.2 Dụng cụ dàn mẫu, dùng để chuẩn bị lớp có bề dày 0,25 mm Nếu khơng sẵn có dụng cụ dùng lớp mỏng bán sẵn, có độ dày lớp 0,25 mm với điều kiện tinh bột sử dụng làm chất kết dính Các chứa thạch cao (canxi sulfat) khơng phù hợp 6.3 Máy trộn phòng thử nghiệm 6.4 Tủ hút ẩm 6.5 Máy xay thịt cơ, cỡ phòng thử nghiệm, có gắn đục lỗ, đường kính lỗ khơng q mm 6.6 Giấy lọc gấp nếp, đường kính 15 cm 6.7 Micro-pipet, l, micro-xyranh có vít định lượng đầu thuỷ tinh uốn cong 6.8 Bể thuỷ tinh lót giấy, kích thước thích hợp, có nắp đậy kín khí, dùng cho sắc ký lớp mỏng 6.9 Máy sấy tóc, có khả cung cấp luồng khơng khí nhiệt độ phòng dòng khí ẩm 6.10 Bình phun 6.1 Tủ sấy, có khả kiểm sốt 60 oC Lấy mẫu 7.1 Lấy 200 g mẫu phòng thử nghiệm Xem ISO 3100 7.2 Chuẩn bị mẫu thử ngày nhận mẫu phòng thử nghiệm Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị lớp mỏng Hoà tan 0,3 g tinh bột (5.5) 90 ml nước sôi Để nguội, thêm khoảng 15 g bột xenluloza (5.4) đồng hố máy trộn phòng thử nghiệm (6.3) Dàn hỗn hợp lên tầm thuỷ tinh (6.1) dụng cụ dàn (6.2), điều chỉnh để thu lớp dày 0,25 mm Sắc khô lớp mỏng để n 60 khơng khí nhiệt độ phòng cuối khơng khí nòng 10 100 oC Bảo quản tủ hút ẩm (6.4) Cách khác, sử dụng lớp mỏng sẵn có (6.2) 8.2 Chuẩn bị mẫu tử Đồng hoá mếu cách xay hai lần máy xay (6.5) trộn Giữ đầy mẫu chai kín khí, đậy nắp chai bảo quản tủ lạnh, cần Phân tích mẫu sớm tốt, vòng h 8.3 Chuẩn bị huyết 8.3.1 Làm ướt 50 g mẫu thử (8.2) 15 ml nước 40 oC đền 60 oC cốc có mỏ, dùng dao trộn đũạ khuấy đầu dẹt để trộn thu khối lượng đồng nhất, không 8.3.2 Thêm 10 g axit tricloaxetic (5.1) trộn kỹ lại 8.3.3 Cho vào tủ lạnh h gạn qua giấy lọc gấp nếp (6.6) để thu lấy huyết tách 8.3.4 Nếu dịch lọc bị đục, lắc lần với thể tích tương tự ete dietyl (5.2) Dùng pipet nhỏ loại bỏ lớp ete thêm thể tích tương tự etanol (5.3) vào pha lỏng Lắc Để yên hỗn hợp vài phút lọc qua giấy lọc gấp nếp (6.6) 8.4 Tách sắc ký 8.4.1 Rót dung mơi triển khai (5.7) vào bể triển khai (6.8) với độ sâu từ mm đến 10 mm đậy nắp Để yên 30 nhiệt độ môi trường, tránh ánh nắng mặt trời gió lùa 8.4.2 Chấm l huyết thanh, l thực quy trình làm 8.3.4, vào lớp xenluloza (8.1) đường kẻ bút chì cách đáy khoảng cm Giữ điểm nhỏ cách chấm lần l Dùng máy sấy tóc (6.9) chế độ ẩm để sấy khơ Chú thích Phải tránh nóng nguy làm thuỷ phân phosphat 8.4.3 Tương tự, chấm l hỗn hợp đối chứng (5.6) lên lớp mỏng, cách điểm mẫu từ cm đến 1,5 cm, có khoảng cách xác tính từ đáy 8.4.4 Mở nắp bể cẩn thận đặt xenluloza vào bể Đậy nắp Triển khai lớp mỏng nhiệt độ môi trường, tránh ánh nắng mặt trời gió lùa 8.4.5 Tiếp tục triển khai mặt dung môi dâng lên khoảng 10 cm kể từ đường bút chì Lấy lớp mỏng khỏi bể sấy 10 tủ sắt (6.11) 60 oC, 30 nhiệt độ môi trường, luồng khí lạnh 8.5 phát phosphat 8.5.1 Đặt lớp mỏng theo phương thẳng đứng tủ hút, phun nhẹ lên lớp mỏng thuốc thử dạng phun sương (5.8) Nếu có polyphosphat, xuất chấm vàng 8.5.2 Dùng máy sấy tóc (6.9) chế độ ẩm để sấy khô lớp mỏng Sau sấy khơ tủ sấy h 100 oC đến loại bỏ hẳn axit nitnc Lấy lớp mỏng khỏi tủ sắt kiểm tra để biết chắn khơng mùi hăng axit nitric 8.5.3 Để lớp mỏng nguội đến nhiệt độ phòng đặt tủ hút Phun nhẹ lên lớp mỏng thuốc thử dạng phun sương II (5.9) Nếu có polyphosphat, xuất chấm màu xanh nước biển Chú thích khơng thiết phải phun thuốc thử II Tuy nhiên, cường độ màu chấm xanh tạo thuốc thử giúp cho việc phát dễ dàng Diễn giải So sánh khoảng cách di chuyển điểm phosphat từ mẫu so với điểm phosphat khác hỗn hợp đối chứng Luôn ln có mặt điểm chấm ortophosphat, mẫu có chứa phosphat đậm đặc, thấy điểm diphosphat và/hoặc điểm phosphat trùng hợp cao Giá trị RF phosphat hỗn hợp đối chứng là: orthophosphat từ 0,80 đền 0,90 diphosphat (pyrophosphat) từ 0,50 đến 0,60 triphosphat từ 0,25 đến 0,35 hexametapolyphosphat (muỗi Graham's) 0,0 Nhìn chung, giá trị RF polyphosphat chất chiết thịt sản phẩm thịt thấp Chú thích việc hiệu chỉnh chênh lệch giá trị RF phosphat chất chiết mẫu hỗn hợp đối chứng thu cách cho chất chiết mẫu thịt tươi lên lớp mỏng Vì thịt tươi chứa monophosphat, nên phần trăm hiệu chỉnh thu cách so sánh khoảng di chuyển điểm chuẩn với điểm tương ứng hỗn hợp đối chứng 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm cần rõ phương pháp sử dụng kết thu Bảo cáo thử nghiệm cần đề cập đến chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, xem tuỳ ý, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm chi tiết cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu ... khiết tương đương Cảnh báo - Tuân thủ tất ý an tồn thích hợp tiến hành theo quy trình quy định tiêu chuẩn 5.1 Axit tricloaxetlc 5.2 Ete dietyl 5.3 Etanol, 95 % (thể tích) 5.4 Bột xenluloza, dùng... oC Lấy mẫu 7.1 Lấy 200 g mẫu phòng thử nghiệm Xem ISO 3100 7.2 Chuẩn bị mẫu thử ngày nhận mẫu phòng thử nghiệm Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị lớp mỏng Hoà tan 0,3 g tinh bột (5.5) 90 ml nước sôi... sẵn có (6.2) 8.2 Chuẩn bị mẫu tử Đồng hoá mếu cách xay hai lần máy xay (6.5) trộn Giữ đầy mẫu chai kín khí, đậy nắp chai bảo quản tủ lạnh, cần Phân tích mẫu sớm tốt, vòng h 8.3 Chuẩn bị huyết 8.3.1