Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9018:2011 quy định phương pháp xác định dư lượng hoạt chất thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) abamectin trong rau và quả tươi bằng sắc kí lỏng khối phổ hai lần (LC/MS-MS). Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9018 : 2011 RAU VÀ QUẢ - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT ABAMECTIN – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG KHỐI PHỔ Vegetables and fruits – Determination of abamectin pesticide residues – Liquid chromatography and tandem mass spectrometry method Lời nói đầu TCVN 9018:2011 Cục Bảo vệ thực vật biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố RAU VÀ QUẢ - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT ABAMECTIN – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG KHỐI PHỔ Vegetables and fruits – Determination of abamectin pesticide residues – Liquid chromatography and tandem mass spectrometry method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định dư lượng hoạt chất thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) abamectin rau tươi sắc kí lỏng khối phổ hai lần (LC/MS-MS) Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm – u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Dư lượng hoạt chất thuốc BVTV abamectin mẫu thử chiết dung môi diclometan, ete dầu mỏ axeton, xác định thiết bị sắc kí lỏng khối phổ hai lần Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích sử dụng nước phù hợp với loại quy định TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác 4.1 Axeton 4.2 Diclometan 4.3 Ete dầu mỏ 4.4 Metanol, dùng cho sắc kí 4.5 Natri sulfat khan, hoạt hóa 130 C h, để nguội, cho vào bình đậy kín, bảo quản bình hút ẩm 4.6 Pha động 1: cân khoảng 0,385 g amoni axetat (CH3COONH4) vào bình định mức 1000 ml, thêm 200 ml metanol, sau thêm nước cất đến vạch siêu âm 15 4.7 Pha động 2: cân khoảng 0,385 g amoni axetat (CH3COONH4) vào bình định mức 1000 ml, thêm 200 ml metanol, sau thêm nước cất đến vạch siêu âm 15 4.8 Chất chuẩn abametic, biết độ tinh khiết 4.9 Dung dịch chuẩn gốc, nồng độ 1000 µg/ml Cân khoảng 0,01 g chất chuẩn abamectin, xác đến 0,01 mg, cho vào bình định mức dung tích 10 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.10 Dung dịch chuẩn trung gian 1, nồng độ 10 µg/ml Dùng micropipet lấy 200 µl dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.11 Dung dịch chuẩn trung gian 2, nồng độ µg/ml Dùng pipet lấy ml dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12 Dung tích chuẩn làm việc 4.12.1 Dung dịch chuẩn làm việc 1, nồng độ ng/ml Dùng micropipet lấy 40 µl dung dịch chuẩn làm trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12.2 Dung dịch chuẩn làm việc 2, nồng độ 20 ng/ml Dùng micropipet lấy 400 µl dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12.3 Dung dịch chuẩn làm việc 3, nồng độ 40 ng/ml Dùng micropipet lấy 800 µl dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12.4 Dung dịch chuẩn làm việc 4, nồng độ 60 ng/ml Dùng micropipet lấy 120 µl dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12.5 Dung dịch chuẩn làm việc 5, nồng độ 80 ng/ml Dùng micropipet lấy 160 µl dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.13 Khí nitơ, có độ tinh khiết không nhỏ 99,999 % Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 5.1 Bình định mức, dung tích 10ml; 20ml 1000 ml 5.2 Pipet, dung tích ml ml, chia vạch đến 0,1 ml 5.3 Micropipet, đo từ 20 µl đến 100 µl; 50 µl đến 200 µl 200 µl đến 1000 µl 5.4 Ống đong, dung tích 50 ml 1000 ml 5.5 Ống li tâm, dung tích 250 ml 5.6 Ống nghiệm, dung tích 15 ml 5.7 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 5.8 Cân, cân xác đến 0,1 g 5.9 Thiết bị đồng hóa, tốc độ không nhỏ 18 000 r/min loại tương đương 5.10 Thiết bị thổi khí nitơ 5.11 Máy nghiền mẫu 5.12 Máy lắc siêu âm 5.13 Máy li tâm, tốc độ khơng nhỏ 000 r/min, có ống li tâm dung tích 250 ml 5.14 Thiết bị sắc kí lỏng khối phổ, trang bị sau: - bơm, tạo tốc độ dòng 0,7 ml/min; - đuổi khí; - buồng cột, kiểm soát nhiệt độ; - detector khối phổ tứ cực hai lần, có khoảng phổ từ 15 m/z đến 1650 m/z, độ phân giải tiêu chuẩn 0,7 amu; - bơm mẫu tự động; - cột Zorbax SB 18, dài 150 mm, có đường kính 4,6 mm, kích cỡ hạt µm, loại tương đương; - máy sinh khí nitơ, tạo nitơ có độ tinh khiết 99,999 %; - máy vi tính Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1994) [4] Cách tiến hành 7.1 u cầu chung Tồn quy trình phân tích cần thực ngày Nếu lúc chuẩn bị nhiều mẫu tất mẫu cần phân tích ngày, sử dụng bơm mẫu tự động 7.2 Chuẩn bị mẫu Mẫu thử nghiền máy nghiền mẫu đến đồng 7.3 Chuẩn bị phần mẫu thử Cân khoảng 20 g mẫu thử đồng nhất, xác tới 0,1 g, vào ống li tâm dung tích 250ml Thêm 40 ml axeton, đồng hóa 30s thiết bị đồng hóa với tốc độ 13500 r/min, thêm 40 ml ete dầu mỏ, 40 ml diclometan, g natri sulfat khan, đồng hóa 30 s thiết bị đồng hóa với tốc độ 13500 r/min, sau li tâm với tốc độ 2000 r/min 10 Dùng pipet 5ml lấy xác 4ml dịch lỏng thu cho vào ống nghiệm thổi khơ hồn tồn thiết bị thổi khí nitơ nhiệt độ 40 C Hòa cặn ml metanol để thu phần mẫu thử 7.4 Chuẩn bị phần mẫu trắng Mẫu trắng mẫu không chứa dư lượng thuốc abamectin, chuẩn bị phần (7.3) 7.5 Chuẩn bị phần mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi Cân khoảng 20 g mẫu trắng đồng xác tới 0,1 g vào ống li tâm dung tích 250 ml Dùng micropipet thêm 500 µl dung dịch chuẩn trung gian 2, để yên nhiệt độ phòng tối thiểu 15 Tiếp tục thực (7.3) 7.6 Điều kiện phân tích Nhiệt độ buồng cột: Nhiệt độ phòng Pha động: (xem 4.6 đến 4.7) Tốc độ dòng: 0,7 ml/min Thể tích bơm mẫu: Điều kiện detector khối phổ 20 µl Nguồn ion: APCI/positive/MRM scan Nhiệt độ khử khí (degas heater): Nitơ, 140 C Nhiệt độ bay (vapourier): 120 C Dòng khử khí (degas flow): Nitơ, ml/min Áp suất nebulizer (neulizer pressure): 60 psi Vcap: 2000 V Crona: µA V charging: 2000 V Điều kiện MRM scan: Hoạt chất Abamectin B1a Abamectin B1b Mảnh khối Mảnh khối mẹ Thời gian quét Fragmentor Collision energy (Q1) (Q3) (ms) (V) (V) 890,5 305,1 500 40 18 567 500 40 25 303,9 500 40 18 553,3 500 40 18 876,4 7.7 Dựng đường chuẩn Dựng đường chuẩn (tương quan diện tích píc nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc 2, dung dịch chuẩn làm việc 3, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn làm việc 7.8 Xác định Bơm dung dịch phần mẫu trắng (xem 7.4), dung dịch phần mẫu thử (xem 7.3), dung dịch phần mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi (xem 7.5) vào thiết bị sắc ký lỏng khối phổ Dùng đường chuẩn để xác định nồng độ phần mẫu thử phần mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi bơm vào máy Nếu nồng độ mẫu thử nằm đường chuẩn điều chỉnh cách pha lỗng dung dịch phần mẫu thử (khơng pha lỗng lượng mẫu bơm) Tính kết Dư lượng hoạt chất thuốc BVTV abamectin, X, biểu thị miligam kilogam (mg/kg), tính theo công thức: X X0 VE V4 V1 V2 V3 P m 100 Trong X0 nồng độ phần mẫu thử xác định từ đường chuẩn, tính microgam mililit (µg/ml); VE thể tích phần mẫu thử định mức metanol, tính mililít (ml); V1 thể tích axeton dùng để chiết, tính mililít (ml); V2 thể tích ete dầu mỏ dùng để chiết, tính mililít (ml); V3 thể tích diclometan dùng để chiết, tính mililít (ml); V4 thể tích dịch chiết lấy để cạn, tính mililít (ml); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); P độ tinh khiết chất chuẩn, tính phần trăm (%) 9 Hiệu suất thu hồi giới hạn xác định 9.1 Hiệu suất thu hồi phương pháp: từ 70 % đến 110 % 9.2 Giới hạn xác định phương pháp (LOQ): 0,01 mg/kg 9.3 Độ lặp lại phương pháp: ≤ 15 % 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu Phụ lục A (tham khảo) Giới thiệu hoạt chất thuốc bảo vệ thực vật abamectin Tên hóa học: Hỗn hợp ≥ 80% (10E,14E,16E) – (1R,4S,5’S,6S,6’R,8R,12S,13S,20R,21R,24S)-6’-[(S)-sec-bultyl]-21,24-dihydroxy-5’,11,13,22tetramethyl-2-oxo-(3,7,19-trioxatetracyclo [15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-tetraene)6-spiro-2’-(5’,6’-dihydro-2’H-pyran)-12-yl 2,6-dideoxy-4-O-(2,6-dideoxy-3-O-methy-α-L-arabinohexopyranosyl)-3-O-methyl-α-L-arabino-hexopyranoside ≤ 20 % (10E,14E,16E)-(1R,4S,5’S,6S,6’R,8R,12S,13S,20R,21R,24S)-21,24-dihydroxy-6’isopropyl-5’,11,13,22-tetramethyl-2-oxo-(3,7,19-trioxatetracyclo[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa10,14,16,22-tetraene)-6-spiro-2’-(5’,6’-dihydro-2’H-pyran) -12-yl 2,6-dideoxy-4-O- (2,6-dideoxy-3O-methyl-α-L-arabino-hexopyranoxyl)-3-O-methyl-α-L-arabino-hexopyranoside Công thức cấu tạo: Công thức phân tử: C48H72O14 (avermectin B1a)+ C47H70O14 (avermectin B1b) Khối lượng phân tử: avermectin B1a: 873,1; avermectin B1b: 859,1 Độ hòa tan (25 C): nước: đến 10 µg/L; toluen: 350 g/L, axeton: 100g/l, isopropanol: 70 g/l THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] British Crop Protection Council 2003, The Pesticide Manual [2] CEN/TC 275/WG Food analysis – Determination of pesticide residues by LC-MS/MS – Tandem mass spectrometric parameters [3] Food and Drug Aministration of USA, 1994 Pesticide Analysis Manual Volume I Section 302, E1 [4] TCVN 5139:2008 (CAC/GL 333-1999), Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ phù hợp với giới hạn dư lượng tối đa (MRL) ... tích píc nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc 2, dung dịch chuẩn làm việc 3, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn làm việc 7.8 Xác... dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12.3 Dung dịch chuẩn làm việc 3, nồng độ 40 ng/ml Dùng micropipet lấy 800 µl dung dịch chuẩn trung gian... 4.11 Dung dịch chuẩn trung gian 2, nồng độ µg/ml Dùng pipet lấy ml dung dịch chuẩn trung gian cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch trộn 4.12 Dung tích chuẩn làm việc 4.12.1