Nghiên cứu tính an toàn và tác dụng cải thiện khả năng sinh tinh của viên nang y10 tt

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Vô sinh nam giới bệnh mang tính xã hội Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) dự báo, vô sinh bệnh nguy hiểm thứ ba kỷ 21, sau ung thư bệnh tim mạch Trên giới, tỷ lệ cặp vợ chồng bị mắc bệnh vô sinh trung khoảng 15% Tại Việt Nam, khoảng 8% số cặp vợ chồng khơng có khả sinh khơng có can thiệp y tế, tỷ lệ gia đình muộn có xu hướng tăng lên Vơ sinh, muộn nam có nhiều nguyên nhân, thường gặp vơ tinh thiểu tinh hay gọi chung suy giảm tinh trùng (SGTT) Y học đại (YHHĐ) đạt nhiều thành tựu điều trị vô sinh SGTT, kết chưa ổn định đa số thuốc sử dụng có tác dụng không mong muốn SGTT thường phải điều trị kéo dài Từ xa xưa, y học cổ truyền phương đơng trải qua hàng ngàn năm tích lũy kinh nghiệm có phương pháp điều trị vô sinh, muộn nam giới đặc thù mang lại kết tốt Ngày nay, nhiều công trình nghiên cứu khoa học chứng minh phương pháp điều trị Y học cổ truyền có tác dụng tốt việc điều trị vơ sinh nam nói chung SGTT nói riêng Lộc nhung (Cornu cervi parvum) Đông trùng hạ thảo nuôi cấy Việt Nam (Cordyceps militaris) loại dược liệu quí, dân gian sử dụng điều trị vô sinh, muộn chứng suy giảm chức sinh dục sinh sản nam, có tiềm tốt điều trị SGTT Hiện chưa có nghiên cứu khoa học chi tiết tác dụng Lộc nhung Đông trùng hạ thảo hiệu kết hợp vị thuốc nói chung lên chức sinh dục sinh sản.Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài với mục tiêu: Đánh giá tính an tồn tác dụng cải thiện khả sinh tinh viên nang Y10 động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng cải thiện khả sinh tinh viên nang Y10 bệnh nhân SGTT Ý NGHĨA THỰC TIỄN VÀ ĐĨNG GĨP MỚI CỦA LUẬN ÁN Tình hình sức khỏe sinh sản sinh dục Việt Nam có biến đổi rõ rệt năm gần Tỉ lệ cặp vợ chồng vô sinh muộn ngày gia tăng đặc biệt suy giảm tinh trùng dẫn tới vô sinh muộn nam giới Các phương pháp điều trị y học đại thể vai trò hiệu tích cực điều trị SGTT, chưa phổ cập gây nên sang chấn tâm sinh lý, tác dụng phụ Từ cho thấy, việc tiếp tục tìm kiếm chủ động thuốc nguồn gốc từ thảo dược có hiệu quả, kinh tế an tồn ln nhu cầu cần thiết, hướng nghiên cứu nhà khoa học nước giới quan tâm Cơng trình khoa học luận án nghiên cứu cách có hệ thống chặt chẽ thực nghiệm lâm sàng Việc nghiên cứu ứng dụng điều trị vô sinh nam SGTT từ thuốc kinh nghiệm dân gian dựa lý luận YHCT góp phần làm sáng tỏ lý luận YHCT bước đại hóa YHCT việc làm có ý nghĩa khoa học, thực tiễn CẤU TRÚC CỦA LUẬN ÁN Luận án gồm 126 trang: đặt vấn đề 02 trang, Tổng quan tài liệu 39 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 22 trang, kết nghiên cứu 34 trang, bàn luận 25 trang, kết luận 03 trang kiến nghị 01 trang Luận án có 141 tài liệu tham khảo (42 tiếng Việt, 64 tiếng Anh, 35 tiếng Trung Quốc), 45 bảng, biểu đồ, 01 sơ đồ, 15 ảnh phụ lục Chương TỔNG QUAN 1.1 Quan điểm y học đại SGTT 1.1.1 Các nguyên nhân gây SGTT SGTT yếu tố ảnh hưởng lên trình sinh trưởng tinh trùng gây rối loại trình sinh tinh trùng Chủ yếu gồm nhóm ngun nhân trước tinh hoàn, tinh hoàn tinh hồn * Nhóm ngun nhân trước tinh hồn: Nguyên nhân rối loạn nội tiết số sinh sản Một số nội tiết tố sinh sản giữ vai trò định việc sản sinh tinh trùng nói chung giai đoạn biệt hóa tinh trùng Những bệnh lý gây rối loạn nội tiết tố sinh sản dẫn tới thay đổi lớn số lượng chất lượng tinh trùng * Nhóm ngun nhân tinh hồn: yếu tố bất thường gen, di truyền, thương tổn tinh hoàn, yếu tố vi sinh vật, yếu tố nhiệt độ; Giãn tĩnh mạch thừng tinh; Tia X, tia phóng xạ hóa chất; Độ pH tinh dịch; Các thuốc nội khoa gây SGTT… * Nhóm nguyên nhân tinh hoàn: chế độ ăn uống, miễn dịch, môi trường sống làm việc, stress 3 1.1.2 Hướng điều trị SGTT theo Y học đại * Điều trị nội khoa: Các thuốc chống oxy hoá: Glutathion, L-arginin, vitamin C; Nội tiết tố: FSH (humegon, puregon), LH (pregnyl), hMG hay hCG; andriol testocaps, mesterolone, testosterone undecanoate; ; Dùng Corticoid vô sinh kháng thể kháng tinh trùng; Dùng kháng sinh: định trường hợp nhiễm trùng niệu, sinh dục Các vi khuẩn hay gặp Chlamydia trachomatis, E.coli, U Urealyticum - Dùng thuốc YHCT: xu hướng nghiên cứu sử dụng phương pháp YHCT dùng thuốc YHCT điều trị SGTT ngày phát triển Điều trị phẫu thuật: số bệnh gây ảnh hưởng tới đời sống tinh trùng cần phải tiến hành phẫu thuật như: giãn tĩnh mạch thừng tinh, tinh hoàn lạc chỗ, nước màng tinh hoàn thoát vị bẹn Phẫu thuật kết nối trường hợp vô tinh trùng tắc nghẽn: nối ống dẫn tinh hay nối ống dẫn tinh - mào tinh Các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản điều trị vô sinh nam SGTT IUI: phương pháp đưa thể tích nhỏ tinh trùng chọn lọc kỹ thuật lọc rửa tinh trùng vào buồng tử cung gần thời điểm rụng rứng; IVF chuyển phôi vào buồng tử cung: kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm ICSI : tiêm tinh trùng trực tiếp vào nỗn để tạo phơi 1.2 Quan niệm Y học cổ truyền SGTT 1.2.1 Quan niệm sinh dục sinh sản nam theo Y học cổ truyền Bệnh danh SGTT Y học cổ truyền: Y học cổ truyền khơng có tên bệnh danh suy giảm tinh trùng mà thuộc phạm trù chứng “bất dục”, “hư lao”, “vô tử”, “tinh thiểu chứng”, “tinh lãnh”, “tinh loãng”, 1.2.2 Nguyên nhân chế bệnh sinh SGTT theo YHCT Y học cổ truyền cho rằng, nguyên nhân thất tình, lục dâm, sang chấn, nội thương lâu ngày ảnh hưởng tới quan tạng phủ, gây rối loạn sinh lý quan tạng phủ, qua dẫn đến tinh thiểu, bất dục 1.2.3 Điều trị SGTT theo Y học cổ truyền Các phương pháp YHCT điều trị SGTT chủ yếu gồm dùng thuốc YHCT, châm cứu, điện châm, thực dưỡng kết hợp phương pháp để điều trị hiệu * Nội trị pháp - Thận tinh khuy tổn: Pháp điều trị Bổ thận điền tinh Bài thuốc: Ngũ tử diễn tơng hồn kết hợp tả quy hồn giả giảm Thành phần: gồm vị câu kỷ tử, thỏ ty tử, phúc bồn tử, lộc giác giao ngũ vị tử, hà thủ ô, bổ cốt chi, ngưu tất, xa tiền tử; phục linh kiện tỳ trừ thấp - Mệnh môn hỏa suy: Pháp điều trị ôn thận tráng dương, sinh tinh ích thận Bài thuốc: Kim quỹ thận khí hồn kết hợp bảo nguyên thang gia vị Thành phần: gồm vị phụ tử phiến, nhục quế, đảng sâm, hoàng kỳ, thục địa, sơn dược, sơn thù, mẫu đơn bì, trạch tả, phục linh, sinh khương, cam thảo - Tỳ hư tinh tổn: Pháp điều trị ôn bổ tỳ thận, ích khí sinh sinh Bài thuốc : Thập tử thang hợp lục quân tử thang gia giảm Thành phần: gồm vị thỏ ty tử, tang thầm tử, kỷ tử, nữ trinh tử, xà xàng tử, phúc bồn tử, kim anh tử, ngũ vị tử, kết hợp lục quân tử thang - Khí huyết lưỡng hư: Pháp điều trị bổ khí dưỡng huyết, bổ thận sinh tinh Bài thuốc: Ích tinh tự dục thang hợp bát quân tử thang gia giảm Thành phần: gồm vị tử hà xa, sơn thù, đảng sâm, hoàng kỳ, bạch truật, phục linh, hoài sơn, cam thảo, đương quy, bạch thược, thục địa, kỷ tử, thỏ ty tử, ba kích, dâm dương hoắc Can khí uất kết, khí trệ huyết ứ: Pháp điều trị sơ can giải uất, hành khí hoạt huyết sinh tinh Bài thuốc: Huyết phủ trục ứ thang gia giảm Thành phần: gồm vị đào nhân, hồng hoa, xích thược, xuyên khung, đương quy, sài hồ, lộ lộ thông, xuyên sơn giáp - Thấp nhiệt hạ trú: Phương pháp điều trị nhiệt, lợi thấp, giải độc, sinh tinh Bài thuốc: Long đởm tả can thang kết hợp lục vị địa hoàng hoàn gia giảm Thành phần: gồm vị long đởm thảo, hoàng bá, chi tử, kim ngân hoa, liên kiều, xa tiền tử, trạch tả, thục địa, sơn thù, sơn dược, đơn bì * Ngoại trị pháp: Ngoại trị pháp điều trị SGTT chủ yếu châm, cứu, điện châm Các phương pháp thường kết hợp sử dụng với phương pháp dùng thuốc YHCT uống để đạt hiệu tốt - Châm cứu: Thường dùng huyệt mệnh môn, yêu dương quan, quan nguyên, trung cực, tam âm giao, thận du, chí thất, thái uyên, túc tam lý 1.5 Tổng quan Lộc nhung Đông trùng hạ thảo Lộc nhung: Tính vị quy kinh: Vị ngọt, mặn tính ơn, vào kinh can thận Cơng dụng: Tráng thận dương, ích tinh huyết, cường gân cốt, điều hòa nhâm mạch, xung mạch Dùng trường hợp thận dương bất túc, tinh huyết khuy hư có triệu chứng dương nuy hoạt tinh, mệt nhọc, úy hàn, hoa mắt chóng mặt, đau lưng mỏi gối, băng lậu đới hạ Đơng trùng hạ thảo: Tính vị quy kinh: vị tính bình, quy kinh phế, thận Cơng dụng: Theo “Bản thảo cương mục thập di”: ĐTHT có tính ơn, bổ tinh ích tủy, dược liệu trì phế khí, có cơng dụng ích thận, phù hợp với người trung cao tuổi Trong YHCT, Lộc nhung Đơng trùng hạ thảo vị thuốc q có tác dụng bổ thận ích tinh Khi phối hợp vị thuốc có tác dụng bồi thận âm thận dương, âm dương tinh khí lưỡng bổ Vì vậy, từ lâu dân gian sử dụng thuốc kinh nghiệm từ Lộc nhung Đông trùng hạ thảo điều trị vô sinh, muộn nam giới đạt hiệu cao Bài thuốc kinh nghiệm dân gian điều trị vô sinh nam: Rượu Lộc nhung Trùng thảo ab Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Chất liệu nghiên cứu Thuốc nghiên cứu: Viên nang Y10 bào chế từ lộc nhung thu mua Hương Sơn - Hà Tĩnh đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) nuôi cấy Học viện Quân y, đạt tiêu chuẩn sở 2.2 Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu động vật: Chuột nhắt trắng trưởng thành, dòng Swiss chủng, giống, cân nặng 18 - 22g, tổng số 470 Chuột cống trắng trưởng thành, dòng Wistar chủng, giống, cân nặng 160 - 180g, tổng số 80 Nghiên cứu lâm sàng: 30 bệnh nhân nam quân nhân đến khám Trung tâm Đào tạo Nghiên cứu công nghệ phơi - Học viện Qn y chẩn đốn SGTT, phù hợp với tiêu chuẩn chọn bệnh tiêu chuẩn loại trừ theo YHCT YHHĐ, tự nguyện hợp tác 2.2.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm tiến hành Bộ môn Dược Lâm sàng Học viện Quân y, thời gian từ 5/2017 – 10/2017 Nghiên cứu lâm sàng tiến hành Trung tâm Đào tạo Nghiên cứu công nghệ phôi – Học viện Quân y, thời gian từ 10/2017 tới 12/2017 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên tính an toàn tác dụng cải thiện khả sinh tinh viên nang Y10 động vật thực nghiệm *Nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn Độc tính cấp: xác định theo hướng dẫn Bộ Y tế OECD chuột nhắt trắng theo đường uống, uống thuốc thử theo liều tăng dần Tính LD50 theo phương pháp Litchfield- Wilcoxon Nghiên cứu độc tính bán trường diễn theo quy định Bộ Y tế Việt Nam hướng dẫn OECD, WHO 30 chuột thực nghiệm chia lô, lô 10 con; lô chứng: Lô chứng: uống nước cất Lô trị 1: uống Y10 liều 224mg cao dược liệu/kg/ngày Lô trị 2: Y10 liều 672mg cao dược liệu/kg/ngày Cho uống thuốc 90 ngày liên tục, theo dõi: tình trạng chung, thể trọng chuột cống trắng, đánh giá chức phận tạo máu, đánh giá chức gan, thận, mô bệnh học gan, thận chuột cống trắng *Nghiên cứu độc tính sinh sản viên nang Y10 Chuột nhắt trắng hai giống, chia ngẫu nhiên thành lô nghiên cứu, lô 60 gồm 20 chuột đực 40 chuột Lô chứng: 20 chuột đực 40 chuột uống nước cất - Lơ 1: Gồm có 20 chuột đực 40 chuột uống thuốc Y10 liều 384mg cao dược liệu/kg/ngày - Lơ 2: Gồm có 20 chuột đực 40 chuột uống thuốc Y10 liều 1152mg cao dược liệu/kg/ngày - Lơ 3: Gồm có 20 chuột đực uống thuốc Y10 liều 384mg cao dược liệu/kg/ngày 40 chuột uống nước cất - Lô 4: Gồm có 20 chuột đực uống thuốc Y10 liều 1152mg cao dược liệu/kg/ngày 40 chuột uống nước cất Các chuột cho uống 60 ngày, vào định (8h sáng) Sau 60 ngày, tiến hành ghép chuột theo mơ hình: chuột đực ghép với chuột chuồng riêng (gọi hệ P) theo dõi trình sinh sản - Theo dõi thụ thai phát triển thai chuột *Nghiên cứu độc tính gây đột biến nhiễm sắc thể viên nang Y10 chuột nhắt trắng Tiến hành theo hướng dẫn 475 OECD (2002), 90 chuột nhắt trắng khỏe mạnh, chia thành lô, lô 30 gồm 15 chuột đực 15 chuột (nhốt riêng chuột đực chuột cái): + Lô (lô chứng): Uống nước cất + Lô 2: Uống thuốc Y10 liều 384mg cao dược liệu/kg/ngày + Lô 3: Uống thuốc Y10 liều 1152mg cao dược liệu/kg/ngày Chuột uống hàng ngày, ngày lần vào sáng, uống liên tục tuần (28 ngày) Sau nhận liều uống cuối lô, chuột tiêm colcemid vào ổ bụng nhằm làm ngừng phân chia tế bào kỳ lần phân bào, thời điểm mà NST có dạng điển hình sau tiêm colcemid, tiến hành làm tiêu NST từ tủy xương (theo phương pháp Ford) tiêu NST từ tinh hoàn (theo phương pháp Evan cải tiến) Đối với chuột, phân tích 50 tiêu NST giai đoạn Diakinesis- metaphase (giai đoạn hướng cực) đạt tiêu chuẩn phân tích (NST co ngắn, bung khơng bị chồng lên nhau) *Đánh giá tác dụng cải thiện khả sinh tinh viên nang Y10 chuột cống trắng gây SGTT natri valproat Chuột cống đực trưởng thành, chia ngẫu nhiên thành lô nghiên cứu, lô 10 + Lô (chứng sinh lý): không gây SGTT, uống nước cất + Lơ (lơ mơ hình): gây SGTT, uống nước cất + Lô (lô tham chiếu): gây SGTT, uống testosteron undecanoat liều 16 mg/kg/ngày + Lô (lô trị 1): gây SGTT, uống Y10 liều 224mg cao dược liệu/kg/ngày + Lô (lô trị 2): gây SGTT, uống Y10 liều 448mg cao dược liệu/kg/ngày Các lô chuột gây SGTT uống natri valproat liều 500 mg/kg/ngày tuần Chuột lô không gây SGTT cho uống nước cất với thể tích tuần Sau tuần uống thuốc, chuột giết để lấy mẫu đánh giá số nghiên cứu, bao gồm: testosteron, mật độ tinh trùng, độ di động tinh trùng, hình thái tinh trùng, xác định tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường Làm tiêu bản, đánh giá biến đổi mô bệnh học tinh hồn Đo kích thước đường kính ống sinh tinh Các quan sinh dục (tinh hoàn, mào tinh hoàn, túi tinh, tuyến Cowper, đầu dương vật, tuyến tiền liệt, nâng hậu mơn) bóc tách đem cân trọng lượng Xác định trọng lượng quan sinh dục 100g khối lượng thể 2.3.2 Nghiên cứu lâm sàng Nghiên cứu tiến cứu, thử nghiệm lâm sàng mở, so sánh khác biệt trước sau điều trị Các bệnh nhân SGTT qua thăm khám YHHĐ YHCT, làm đầy đủ xét nghiệm đủ tiêu chuẩn chọn vào nhóm nghiên cứu 8 * Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân Chọn 30 bệnh nhân (nam quân nhân) có tiêu chuẩn sau: Các bệnh nhân tự nguyện hợp tác, ngừng sử dụng thuốc làm ảnh hưởng đến số lượng, chất lượng tinh trùng 75 ngày - Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân theo y học đại: Tuổi: 16 đến 56 tuổi; Có SGTT theo tiêu chuẩn cách đánh giá tinh dịch đồ thực theo WHO (2010) - Tiêu chuẩn lựa chọn theo y học cổ truyền: nam giới suy giảm tinh trùng thể “Thận tinh khuy tổn” theo YHCT - Tiêu chuẩn loại trừ: Những bệnh nhân không đồng ý hợp tác Những bệnh nhân không chấp hành nghiêm phác đồ điều trị bỏ điều trị * Liều lượng cách dùng thuốc: Uống ngày 04 viên, chia lần, sau ăn giờ, uống liên tục tháng * Phương pháp thăm khám theo dõi lâm sàng Hồ sơ bệnh án cho bệnh nhân lập theo mẫu thống dựa tiêu chí Hội Nam học giới kết hợp với vọng văn vấn thiết theo YHCT, khám ghi đầy đủ tiêu nghiên cứu * Xét nghiệm cận lâm sàng - Sinh hoá máu trước sau điều trị: urê, creatinin, AST, ALT - Định lượng LH, FSH, testosteron huyết trước điều trị; định lượng LH, FSH, testosteron huyết bệnh nhân lựa chọn sau điều trị - Tinh dịch đồ trước sau điều trị Các xét nghiệm làm Viện Nghiên cứu Y Dược - Học viện Quân y * Các tiêu đánh giá - Một số đặc điểm dịch tễ: phân bố bệnh nhân theo lứa tuổi, phân bố bệnh nhân theo loại vô sinh (vô sinh I, vô sinh II) - Một số dấu hiệu lâm sàng tác dụng không mong muốn thuốc: mẩn, rối loạn tiêu hoá (phân nát, táo bón ), chóng mặt - Các triệu chứng lâm sàng thận tinh khuy tổn trước sau điều trị - ALT, AST, urê, creatinin huyết trước sau điều trị - Nồng độ testosteron, LH, FSH huyết trước sau điều trị - Tinh dịch đồ trước sau điều trị (Phân loại theo bảng 2.3) - Tỉ lệ bệnh nhân có vợ mang thai sinh sau điều trị Xử lý số liệu Các số liệu nghiên cứu xử lý theo phương pháp thống kê y sinh học, phần mềm thống kê SPSS.17.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p< 0,05 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn 3.1.1.Kết độc tính cấp: Chuột uống đến liều 20,0g cao dược liệu/kg thể trọng (tương đương 25,0 g bột viên nang/kg thể trọng) liều tối đa dùng đường uống để đánh giá độc tính cấp thuốc thử khơng có chuột chết, khơng xuất triệu chứng bất thường 72 sau uống thuốc lần cuối suốt ngày sau uống thuốc 3.1.2 Kết đánh giá độc tính bán trường diễn Trong thời gian thí nghiệm, chuột lơ hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, lơng mượt, ăn uống tốt, phân khô Trọng lượng chuột lô tăng Tần số biên độ điện tim lơ chuột khơng có thay đổi Số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, nồng độ hematocrit, số lượng bạch cầu, tỷ lệ phần trăm bạch cầu đa nhân trung tính bạch cầu lympho, số lượng tiểu cầu, hoạt độ enzym AST, ALT, bilirubin toàn phần nồng độ ure nồng độ creatinin huyết chuột cống trắng lơ khơng có khác biệt (p>0,05) * Thay đổi mơ bệnh học: Hình ảnh đại thể tạng gan, lách, thận chuột lơ thử1, lơ thử 2, có màu nâu đỏ thẫm đồng đều, bề mặt nhẵn, khơng có u cục xuất huyết, có đàn hồi ấn xuống, khơng khác biệt so với hình ảnh gan, lách, thận chuột lô chứng 3.1.3 Kết nghiên cứu độc tính sinh sản Bảng 3.1 Tỷ lệ chuột thụ thai lô Lô chuột Lô chứng Lô Lô Lô Lô Thế hệ P % chuột chửa p 60,94 % 59,86 % 63,28 % > 0,05 61,72 % 66,37% Thế hệ F1 % chuột chửa p 71,65 % 70,14 % 74,56 % > 0,05 72,43 % 77,91% Nhận xét: Khơng có khác biệt tỷ lệ mang thai lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.2: Số hoàng thể/1 chuột mẹ lô Lô chuột Thế hệ P Thế hệ F1 10 Lô chứng Lô Lô Lô Lơ Số hồng thể TB/1 chuột mẹ 12,36 ±2,08 12,45±3,14 12,18±2,56 13,09±2,81 12,27±2,35 p > 0,05 Số hoàng thể TB/1 chuột mẹ 13,64 ± 2,57 14,22 ±2,86 13,69±3,02 14,06 ±2,65 13,91 ±3,14 p > 0,05 Nhận xét: Khơng có khác biệt số hoàng thể TB/1 chuột mẹ lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.3: Số thai sống/1 chuột mẹ lô (%) Lô chuột Lô chứng Lô Lô Lô Lô Thế hệ P Số thai sống/1 p chuột mẹ 97,65 % 96,92% > 0,05 98,45% 97,26 % 98,19% Thế hệ F1 Số thai sống/1 p chuột mẹ 98,02% 97,65% > 0,05 98,69% 97,91% 98,54% Nhận xét: Khơng có khác biệt số thai sống/1 chuột mẹ lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.4: Số thai chết sớm/1 chuột mẹ lô (%) Lô chuột Lô chứng Lô Lô Lô Lô Thế hệ P Số thai chết p sớm/1 chuột mẹ 2,94 % 3,16 % 2,08 % > 0,05 2,75 % 3,21 % Thế hệ F1 Số thai chết sớm/1 p chuột mẹ 3,62 % 3,09% 4,17% > 0,05 2,98% 3,81% Nhận xét: Khơng có khác biệt số thai chết sớm/1 chuột mẹ lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.5: Số thai chết muộn/1 chuột mẹ lô (%) Lô chuột Lô chứng Lô Thế hệ P Số thai chết muộn/1 chuột mẹ 1,62 % 1,81% p > 0,05 Thế hệ F1 Số thai chết p muộn/1 chuột mẹ > 0,05 2,36% 2,09% 11 Lô Lô Lô 2,03% 2,16% 1,25% 1,86% 2,47% 2,18% Nhận xét: Khơng có khác biệt số thai chết muộn/1 chuột mẹ lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.6: Số trứng tiêu/1 chuột mẹ lô (%) Thế hệ P Thế hệ F1 Lô chuột Số trứng tiêu/ Số trứng tiêu/ p p chuột mẹ chuột mẹ Lô chứng 4,48% 3,96% Lô 4,62% > 0,05 4,12% Lô 4,26% 3,97% Lô 4,32% 4,31% > 0,05 Lô 3,98% 2,68% Nhận xét: Không có khác biệt số trứng tiêu/1 chuột mẹ lô uống Y10 lô chứng qua hệ P, F1 (p > 0,05) Bảng 3.7: Số lượng chuột con/1 lứa đẻ lô Thế hệ F1 Lô chuột Số lượng chuột con/1 lứa đẻ p Lô chứng 12,08 ±1,93 Lô 12,14 ± 2,54 Lô 12,19± 1,98 > 0,05 Lô 12,23 ± 1,64 Lơ 12,45± 2,46 Nhận xét: Khơng có khác biệt số lượng chuột con/1 lứa đẻ lô uống Y10 lô chứng hệ F1 (p > 0,05) Vì tỷ lệ chuột đực chuột lứa đẻ (chuột hệ F1) lô cân nhau, số lượng chuột lứa đẻ lô tương đương Do đó, ghép cặp chuột hệ F1, ta lựa ngẫu nhiên số chuột số chuột đực lô cho số cặp ghép lô Bảng 3.8: Số chuột chết/1 lứa đẻ lô (%) Lô chuột Thế hệ F1 12 Lô chứng Lô Lô Lô Lô Số chuột chết/1 lứa đẻ 1,68 % 2,08 % 1,98% 1,62 % 2,15% p > 0,05 Nhận xét: Quan sát chuột sinh từ chuột mẹ hệ F1: chuột hoạt động, vận động bình thường Quan sát tất lơ thử nghiệm, khơng có chuột có biểu dị tật Như vậy: Kết nghiên cứu độc tính di truyền qua hệ (độc tính sinh sản) cho thấy viên nang Y10 không gây ảnh hưởng rõ rệt đến phát triển bình thường thai sinh qua hệ P F1 3.1.4 Kết nghiên cứu độc tính nhiễm sắc thể Bảng 3.9 Ảnh hưởng Y10 đến số lượng NST tế bào tủy xương Chỉ số nghiên cứu Số tế bào đánh giá Số lệch bội Tỷ lệ lệch bội (%) Số đa bội Tỷ lệ đa bội (%) Lô 172 2,05 3,07 Lô chuột Lô 169 1,18 2,96 Lô 160 1,25 1,88 p > 0,05 > 0,05 Nhận xét:, tiêu NST từ tế bào tuỷ xương lô chuột uống chế phẩm liều thấp liều cao liên tục 28 ngày, tỉ lệ xuất rối loạn số lượng NST (lệch bội, đa bội) khơng có khác biệt so với lô chứng (p > 0,05) Bảng 3.10 Ảnh hưởng Y10 đến cấu trúc NST tế bào tủy xương Chỉ số nghiên cứu Số tế bào đánh giá Số rối loạn cấu trúc nhiễm sắc tử Tỉ lệ rối loạn cấu trúc nhiễm sắc tử (%) Số rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể Tỉ lệ rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể (%) Tỉ lệ rối loạn cụm NST Lô 172 1,12 1,69 Lô 169 0,00 0,00 Lô 160 0,00 0,00 p > 0,05 > 0,05 Nhận xét: tiêu NST từ tế bào tuỷ xương lô chuột uống chế phẩm liều thấp liều cao, tỉ lệ xuất rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể khơng có khác biệt so với lô chứng (p > 0,05) 13 Lô chứng Lô uống chế phẩm liều thấp Lô uống chế phẩm liều cao Ảnh 3.5 NST tế bào tuỷ xương chuột nhắt trắng ( X 1000) Sau nhận liều uống cuối lô, chuột tiêm colcemid vào ổ bụng nhằm làm ngừng phân chia tế bào kỳ lần phân bào, thời điểm mà NST có dạng điển hình sau tiêm colcemid, tiến hành làm tiêu NST từ tinh hoàn theo phương pháp Evan cải tiến Đối với chuột, phân tích 50 tiêu NST giai đoạn Diakinesismetaphase (giai đoạn hướng cực) đạt tiêu chuẩn phân tích (NST co ngắn, bung không bị chồng lên nhau) Bảng 3.11 Ảnh hưởng chế phẩm đến nhiễm sắc thể tinh hoàn Loại đột biến Số lượng NST < 40% Số lượng NST = 40% Lô chứng 6,48 ± 0,84 Lô Lô p 7,04 ± 0,80 7,30 ± 1,01 > 0,05 89,50 ± 90,87 ± 1,32 90,98 ± 1,43 > 0,05 0,65 1,23 ± 0,64 1,14 ± 0,54 1,08 ± 0,61 > 0,05 Số lượng NST > 40% Số lượng NST thường 1,25 ± 0,67 % Số lượng NST giới tính 7,82 ± 1,41 % 1,19 ± 0,59 1,10 ± 0,75 > 0,05 8,23 ± 1,52 8,90 ± 1,39 > 0,05 Nhận xét: khơng có khác tần số loại đột biến nhiễm sắc thể tinh hồn lơ thử nghiệm so với lơ chứng (p > 0,05) Kết luận: Viên nang Y10 không gây đột biến nhiễn sắc thể tủy xương tinh hoàn với mức liều dùng thời gian sử dụng nghiên cứu thực nghiệm chuột 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng cải thiện chức sinh tinh viên nang Y10 thực nghiệm 14 3.2.1 Tác dụng viên nang Y10 lên nồng độ testosteron huyết chuột Bảng 3.12 Nồng độ testosteron huyết chuột Lô Testosteron (ng/ml) 3,51 ± 2,10 Lô 1,55 ± 0,68 ↓ 55,95* % Lô 3,10 ± 1,27 ↑ 99,81** % Lô 2,77 ± 1,27 ↑ 78,71** % Lô 2,94 ± 1,38 ↑ 89,35** % Lô nghiên cứu % tăng giảm Giá trị p p1,3,4,5-2< 0,01 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 Nhận xét: Nồng độ testosteron huyết lô 3, 4, tăng rõ rệt so với lô (lơ mơ hình) (p< 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ (chứng sinh lý) (p > 0,05) So sánh lô 3, 4, dùng testosteron viên nang Y10 liều 1, liều cho khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 3.2.2 Tác dụng viên nang Y10 lên số lượng chất lượng tinh trùng chuột Bảng 3.13 Ảnh hưởng viên nang Y10 lên mật độ tinh trùng Lô nghiên cứu Lô Lô Lô Lô Lô Mật độ tinh trùng (× 106/mL) 81,58 ± 23,99 39,14 ± 11,90 69,11 ± 23,31 79,09 ± 15,44 82,45 ± 14,69 % tăng giảm Giá trị p ↓ 52,03* % ↑ 76,57**% ↑ 102,09**% ↑ 110,67**% p1,3,4,5-2< 0,01 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 - Nhận xét: Mật độ tinh trùng lơ (lơ mơ hình) giảm rõ rệt so với lô (chứng sinh lý), khác biệt có ý nghĩa thống kê với p< 0,01 Natri valproat cho uống liều 500 mg/kg/ngày tuần gây giảm rõ rệt mật độ tinh trùng chuột Mật độ tinh trùng lô 3, 4, tăng rõ rệt so với lơ (lơ mơ hình) (p< 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô (chứng sinh lý) (p > 0,05) Bảng 3.14 Mức độ di động tinh trùng (n = 10, X ± SD) Lô nghiên cứu Lô Tiến tới nhanh 38,20 ± 6,93 Tỉ lệ đánh giá mức độ di động (%) Tiến tới Không Không chậm tiến tới di động 4,47 ± 1,54 6,34 ± 1,60 51,00 ± 9,02 15 Lô Lô Lô Lô Giá trị p 20,99 ± 8,84 34,58 ± 8,80 34,75 ± 8,05 35,50 ± 9,47 p-2< 0,01 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 9,13 ± 4,10 5,46 ± 1,48 4,60 ± 1,61 4,95 ± 1,54 p-2< 0,05 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 9,43 ± 3,39 6,38 ± 1,60 6,94 ± 2,17 6,47 ± 1,50 p-2< 0,05 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 60,32 ± 9,42 53,59 ± 9,15 53,72 ± 9,72 53,08 ±10,19 p-2< 0,05 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 Nhận xét: Chuột lơ 3, 4, có tỉ lệ tinh trùng tiến tới nhanh tăng cao rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ (lơ mơ hình) (p< 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô (chứng sinh lý) (p > 0,05); tỉ lệ tinh trùng không tiến, tiến tới chậm không di động giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ (lơ mơ hình) (p < 0,05) Bảng 3.15 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường Lơ nghiên cứu Tỉ lệ % tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường % tăng giảm Lô Lô Lô Lô Lô 8,15 ± 2,88 15,67 ± 4,77 10,33 ± 2,61 9,53 ± 2,89 9,32 ± 3,06 ↑ 92,39* % ↓ 34,09** % ↓ 39,18** % ↓ 40,54** % pso sánh lô p1,3,4,5-2< 0,01 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 *so với chứng sinh lý; **so với lơ mơ hình Nhận xét: Tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường lơ 3, 4, giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ (lơ mơ hình) (p< 0,01) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô (chứng sinh lý) (p > 0,05) So sánh lô 3, 4, 5, lơ dùng thuốc tham chiếu testosteron có hình thái cấu trúc bất thường cao so với lô dùng Y10, nhiên chưa thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 3.2.3 Tác dụng viên nang Y10 lên trọng lượng quan sinh dục chuột cống trắng đực Bảng 3.16 Trọng lượng quan sinh dục chuột (n = 10) Lô nghiên cứu Trọng lượng quan sinh dục (g/100g thể trọng) 16 Lô Lô Lô Lô Lô X ± SD X± SD p2-1 X± SD p3-1 p3-2 X± SD p4-1 p4-2 X± SD p5-1 p5-2 Tinh hoàn Mào tinh hoàn 0,889 ± 0,165 0,252 ± 0,031 0,221 ± 0,062 Cơ nâng hậu môn 0,119 ± 0,032 ± 0,036 ± 0,326 ± 0,030 0,021 0,019 0,069 0,682 ± 0,174 < 0,05 0,831± 0,206 0,213 ± 0,024 < 0,05 0,247 ± 0,032 0,159 ± 0,028 < 0,05 0,208 ± 0,030 0,098 ± 0,026 ± 0,035 ± 0,291 ± 0,015 0,018 0,016 0,038 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 0,113 ± 0,027 ± 0,036 ± 0,328 ± 0,028 0,016 0,020 0,058 > 0,05 < 0,05 0,832 ± 0,201 > 0,05 < 0,05 0,834 ± 0,194 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 0,250 ± 0,103 > 0,05 < 0,05 0,252 ± 0,081 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 0,210 ± 0,041 > 0,05 < 0,05 0,211 ± 0,062 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 0,114 ± 0,028 ± 0,035 ± 0,325 ± 0,038 0,012 0,020 0,126 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 0,115 ± 0,026 ± 0,036 ± 0,330 ± 0,046 0,014 0,019 0,107 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Đầu Tuyến Tuyến Túi tinh dương tiền liệt cowper vật Nhận xét: Trọng lượng tinh hoàn, mào tinh hồn, túi tinh, tuyến tiền liệt, nâng hậu mơn chuột lơ mơ hình giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (p < 0,05) Trọng lượng quan hai lô dùng Y10 tăng so với lơ mơ hình (p < 0,05), tương đương với lô tham chiếu hồi phục tương đương với lô chứng sinh lý (p > 0,05) - Trọng lượng dương vật tuyến cowper lơ thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 3.2.4 Tác dụng Y10 lên mơ học tinh hồn chuột cống trắng đực A Hình ảnh mơ học tinh hồn (chuột 08, lơ chứng) HE, x 400 B Hình ảnh mơ học tinh hồn (chuột 15, lơ mơ hình) HE,x 400 17 C Hình ảnh mơ học tinh hồn (chuột 24, lơ tham chiếu) HE, x 400 D Hình ảnh mơ học tinh hồn (chuột 36, lơ trị 1) HE, x 400 E Hình ảnh mơ học tinh hồn (chuột 42, lơ trị 2) HE, x 400 Ảnh 3.8 Hình ảnh mơ học tinh hồn chuột đại điện lơ chuột nghiên cứu (HE x 400) Nhận xét: Ở lô dùng Y10 (lơ 4, lơ 5) lơ tham chiếu: Kích thước hình ảnh ống sinh tinh gần tương tự lô chứng sinh lý Không gian kẽ dày không đáng kể so với lô chứng sinh lý Bảng 3.17 Đường kính ống sinh tinh lơ nghiên cứu Lô nghiên cứu Lô Lô Lô Lô Lô (1) (2) (3) (4) (5) Đường kính ống sinh tinh (µm) 128,56 ± 8,60 116,81 ± 9,95 125,95 ± 10,18 125,86 ± 9,88 126,83 ± 10,21 p p1,3,4,5-2< 0,05 p3,4,5-1> 0,05 p4,5-3> 0,05 p4-5> 0,05 Nhận xét: Viên nang Y10 làm hồi phục có tổn thương mơ bệnh học tinh hồn, giúp làm tăng đường kính ống sinh tinh có ý nghĩa thống kê so với lô gây bệnh không dùng thuốc Viên nang Y10 hai mức liều dùng (280 560 mg/kg/24h) có tác dụng làm hồi phục đường kính ống sinh tinh tương đương với lô chứng sinh lý (p > 0,05) 3.3 Kết đánh giá tính an tồn tác dụng cải thiện khả kích thích sinh tinh viên nang Y10 bệnh nhân SGTT 3.3.1 Kết nồng độ testosteron, LH, FSH huyết Bảng 3.18 Nồng độ testosteron, LH, FSH huyết Chỉ số LH (IU/l) FSH (IU/l) Testosteron (nmol/l) Trước điều trị Sau điều trị x ± SD x ± SD ptrước-sau 6,02 ± 2,14 8,16 ± 4,01 14,65 ± 6,27 5,08 ± 2,06 6,85 ± 3,69 16,89 ± 6,42 < 0,05 < 0,05 < 0,05 18 Nhận xét: nồng độ LH FSH huyết sau điều trị giảm so với trước điều trị, nồng độ testosteron huyết sau điều trị tăng so với trước điều trị.Ở bệnh nhân có rối loạn nội tiết tố, LH FSH huyết tăng cao testosteron huyết giảm Sau điều trị LH FSH huyết giảm, testosteron huyết tăng thay đổi có tính tích cực, đưa nồng độ hormon sinh dục lại giới hạn sinh lý bình thường 3.3.2 Kết tinh dịch đồ bệnh nhân nghiên cứu Bảng 3.19 Tỉ lệ số mẫu tinh dịch đồ theo phân loại tinh trùng Trước điều trị Số mẫu tinh dịch Tinh trùng Tinh trùng yếu Tinh trùng dị dạng Tinh trùng yếu Tinh trùng yếu dị dạng Tinh trùng ít, yếu dị dạng Tinh dịch đồ bình thường Tổng Sau điều trị ptrước- n Tỉ lệ % n Tỉ lệ % 9 20,00 30,00 30,00 3,33 6,67 10,00 8 1 23,33 26,67 26,67 3,33 3,33 16,67 sau > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Nhận xét: Kết từ bảng 3.31 cho thấy tỉ lệ số mẫu tinh dịch đồ có tinh trùng ít, yếu dị dạng giảm rõ sau điều trị (p < 0,05) Tỉ lệ số mẫu tinh dịch đồ trở bình thường và/hoặc vợ có thai 16,67% Bảng 3.20.Thể tích tinh dịch, pH, số lượng bạch cầu Chỉ số Trước điều trị Sau điều trị ptrước-sau x ± SD 2,05 ± 1,08 7,42 ± 0,35 6,79 ± 1,26 x ± SD 2,34 ± 1,12 7,51 ± 0,27 6,34 ± 1,49 < 0,05 > 0,05 < 0,05 Thể tích (ml) pH Số BC (x106) Nhận xét: so với trước điều trị, thể tích tinh dịch sau điều trị tăng, số lượng bạch cầu sau điều trị giảm rõ (p < 0,05) Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê pH tinh dịch sau điều trị so với trước điều trị Bảng 3.21 So sánh số tinh dịch đồ trước - sau điều trị Chỉ số Mật độ (T/ml) Tổng số TT (T) TT sống (%) TT di TT tiến tới động KTT (%) (%) 19 Trước điều trị Sau điều trị ptrước-sau 13,54 ± 10,62 22,96 ± 12,65 < 0,01 31,05 ± 33,89 58,20 ± 49,01 < 0,01 24,05 ± 12,94 31,94 ± 18,26 < 0,01 8,26 ± 5,86 14,03 ± 6,98 < 0,01 25,01 ± 11,24 34,12 ± 12,93 < 0,01 Nhận xét: Mật độ tinh trùng, tỉ lệ tinh trùng sống, tỉ lệ tinh trùng tiến tới, tỉ lệ tinh di động không tiến tới sau điều trị tăng so với trước điều trị, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Bảng 3.22 Kết điều trị lâm sàng Kết điều trị lâm sàng Rất tốt Tốt Trung bình Khơng kết Số bệnh nhân 20 % 16,67% 66,67% 16,67% 0% Nhận xét: kết điều trị lâm sàng đạt tốt (có vợ mang thai tinh dịch đồ tăng lên bình thường) 16,67% - Tốt (tăng số lượng chất lượng tinh trùng so với trước điều trị) 66,67% - Trung bình (chỉ tăng số lượng chất lượng tinh trùng so với trước điều trị) 16,67% Không kết 0% 3.3.5 Kết cải thiện triệu chứng theo y học cổ truyền Bảng 3.23 Sự biến đổi triệu chứng theo YHCT Các triệu chứng Chóng mặt, hoa mắt Ù tai Lưng gối yếu mỏi Tinh thần mệt mỏi hay quên Mạch trầm tế, tế nhược Lượng tinh dịch Số lượng tinh trùng Trước điều trị n Tỉ lệ % 22 73,33 24 80,00 20 66,67 26,67 26 86,67 19 63,33 23 76,67 Sau điều trị n Tỉ lệ % 13,33 6,67 10,00 3,33 23,33 23,33 14 46,67 ptrước-sau < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,05 Nhận xét: Tất dấu hiệu lâm sàng thận tinh khuy tổn cải thiện rõ rệt sau điều trị (p < 0,01 p < 0,05) 3.3.6 Kết đánh giá tính an tồn viên nang Y10 lâm sàng Khơng thấy tác dụng không mong muốn lâm sàng dựa kết xét nghiệm số huyết học sinh hóa trước sau điều trị 20 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Độc tính viên nang Y10 4.1.1 Độc tính cấp: chưa tìm thấy LD50 viên nang Y10 theo đường uống chuột nhắt trắng với mức liều cao cho chuột uống 24h (gấp 52,08 lần mức liều dự kiến có hiệu quả), không phát thấy biểu bất thường tình trạng bị độc dùng thuốc liều cao, chứng tỏ viên nang Y10 có tính an tồn cao, khoảng an tồn điều trị rộng 4.1.2 Độc tính bán trường diễn Nghiên cứu độc tính bán trường diễn chuột cống trắng thực nghiệm viên nang Y10 với liều 224mg cao dược liệu/kg/ngày liều 672mg cao dược liệu/kg/ngày không làm ảnh hưởng tới phát triển chuột chưa thấy biến đổi số sóng điện tim, huyết học, hóa sinh máu hình ảnh đại thể, mô bệnh học gan, thận, lách chuột Kết cho thấy viên nang Y10 có tính an tồn cao 4.1.3 Về độc tính viên nang Y10 sinh sản Kết nghiên cứu cho thấy viên nang Y10 cho chuột uống hai liều, dùng cho chuột P đực chuột P đực dùng thuốc không gây đột biến đến trình tạo giao tử, trình thụ tinh, trình phân chia trứng thụ tinh làm tổ trứng hệ chuột P F1 Thai chuột chuột lô nghiên cứu khơng có dị tật bẩm sinh quan sát mắt, mũi, môi, tai, chân… Số chuột chết lô dùng thuốc tương đương so với lô chứng chuột F1, chứng tỏ Y10 không gây đột biến hệ chuột nhắt trắng Kết nghiên cứu NST tủy xương cho thấy tần số rối loạn số lượng NST tế bào tủy xương lệch bội đa bội lô chuột đực dùng thuốc khơng có khác biệt so với lô chứng Như dùng Y10 hai liều liều không gây đột biến số lượng cấu trúc NST mô tủy xương chuột nhắt trắng Mỗi lồi có số lượng NST đặc trưng, thể lưỡng bội 2n với hai NST đơn bội (n): có nguồn gốc từ cha, từ mẹ Bên cạnh thay đổi đặn nối tiếp số bội thể (n) chu trình sống (2n => n + n => 2n), có biến đổi số bội thể khác giá trị bình thường dẫn đến hậu đột biến Bình thường kỳ tinh bào I, NST tồn dạng thể lưỡng trị, NST thể lưỡng trị tách sớm gọi thể đơn trị, 21 đơn trị NST thường đơn trị NST giới tính Đột biến thường tác nhân gây rối loạn thoi vô sắc đứt thoi vô sắc Tần số rối loạn cấu trúc kiểu đơn trị NST thường tế bào mô tinh hoàn chuột hai liều liều khơng có khác biệt so với lô chứng 4.2 Về tác dụng cải thiện chức sinh tinh viên nang Y10 thực nghiệm Viên nang Y10 liều 224mg cao dược liệu/kg/ 448mg cao dược liệu/kg/ngày làm tăng nồng độ testosteron máu chuột lên 78,71% 89,35% so với lơ mơ hình Kết tương tự kết số nghiên cứu khác: thuốc bổ thận có tác dụng tăng tiết testosteron huyết Testosteron tăng sinh cho thuốc bổ thận có tác dụng tăng cường khả tiết toàn tuyến sinh dục Viên nang Y10 làm tăng mật độ tinh trùng, tăng khả di động tinh trùng, giảm tỷ lệ tinh trùng có hình thái cấu trúc bất thường Như vậy, chuột uống Y10 cải thiện rõ rệt số lượng chất lượng chất lượng tinh trùng Sự cải thiện có xu hướng tốt so với lô dùng testosterol ngoại sinh Theo dự đốn, thuốc bổ thận nói chúng viên nang Y10 nói riêng có tác dụng tăng sinh testosteron nội sinh giới hạn an toàn (do tăng cường khả tiết tuyến sinh dục), đồng thời làm tăng tính kích thích nội tiết tố sinh dục Cân nặng quan sinh dục phụ mào tinh, túi tinh, tuyến tiền liệt nhạy cảm với androgen Đánh giá cân nặng quan gián tiếp phản ánh nồng độ testosteron chức tinh hoàn Viên nang Y10 làm tăng cân nặng tinh hồn, túi tinh, nâng hậu mơn 4.3 Tác dụng viên nang Y10 điều trị bệnh nhân bị SGTT Thuốc bổ thận có tác dụng tăng tính kích thích nội tiết tố sinh dục tăng cường khả tiết toàn tuyến sinh dục Vì vậy, chúng tơi cho nồng độ testosteron huyết tăng cao Y10 kích thích tế bào Leydig làm tăng hoạt động, điều thể kết vi thể tinh hoàn tế bào chất tế bào Leydig bắt màu acid mạnh Nồng độ testosteron máu tăng có tác dụng ức chế tuyến huy làm giảm tiết LH FSH Ngoài ra, kết nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng cho thấy: Y10 làm số lượng chất lượng tinh trùng lòng ống sinh tinh tăng lên, theo chế sinh lý tự nhiên kích thích tế bào Sertoli tiết inhibin, tác dụng ức chế inhibin B lượng FSH tiết từ tuyến n giảm 22 Ngồi ra, Y10 tác động trực tiếp vào trục đồi - tuyến n tinh hồn làm điều hòa hoạt động tuyến nội tiết Chính vậy, bệnh nhân lượng LH, FSH testosteron giới hạn sinh lý tăng giảm giới hạn sinh lý bình thường Như Y10 có tác dụng kích thích thể tăng sản xuất testosteron huyết điều hòa tiết LH FSH Y10 khơng làm tăng thể tích tinh dịch lần xuất tinh, khơng làm thay đổi độ ly giải sinh lý tinh dịch, làm giảm số lượng bạch cầu so với trước điều trị Các số tinh dịch đồ mật độ tinh trùng, tỉ lệ tinh trùng sống, tỉ lệ tinh trùng tiến tới, tỉ lệ tinh trùng di động nhanh, tỉ lệ tinh trùng có hình dạng bình thường sau điều trị tăng so với trước điều trị Đặc biệt Y10 làm tăng tỉ lệ tinh trùng di động nhanh, tinh trùng khoẻ mạnh, có khả di chuyển sâu vào đường sinh dục nữ số quan trọng tinh trùng đóng vai trò định q trình thụ thai, đảm bảo cho việc tạo phơi thai hồn toàn khoẻ mạnh Kết hoàn toàn phù hợp với kết thực nghiệm: chuột cống trắng, Y10 làm tăng số lượng tăng tỉ lệ tinh trùng tiến tới, tăng tỉ lệ tinh trùng có hình dạng bình thường chuột cống trắng; mơ học tinh hồn thỏ, Y10 làm tế bào dòng tinh tăng sinh, có đầy đủ cân đối giai đoạn, số lượng tinh tử tinh trùng lòng OST nhiều tăng so với lô chứng Số lượng chất lượng tinh trùng tăng Y10 làm tăng tiết testosteron nội sinh, Y10 có tác dụng điều hòa tiết nội tiết tố sinh sản LH FSH Lộc nhung ĐTHT có chứa “các acid amin, chất béo, đường, vitamin ” chất cần thiết cho việc tăng sinh biểu mô tinh, tăng tạo thành tinh trùng Trong thành phần hóa học Lộc nhung ĐTHT có acid amin, vitamin, yếu tố vi lượng Dùng Y10, chất phối hợp với nên có tác dụng chống oxy hóa tế bào, có tế bào dòng tinh tuyến nội tiết sinh sản mà Y10 làm tăng số lượng, tăng tỉ lệ tinh trùng sống, tăng khả di động tinh trùng, tăng tỉ lệ tinh trùng có hình dạng bình thường sau điều trị Nghiên cứu 30 bệnh nhân chẩn đoán thận tinh khuy tổn sau tiến hành điều trị tháng, tất triệu chứng lâm sàng thận tinh khuy tổn cải thiện rõ rệt so với trước điều trị Có thể lý giải điều dựa thành phần Y10 từ Lộc 23 nhung ĐTHT Theo YHCT, ĐTHT có tác dụng ơn thận điền tinh, dùng để chữa thận dương bất túc, thận tinh khuy tổn Lộc nhung có tác dụng bổ can thận, ích tinh huyết Cả có tác dụng ơn thận, bổ tinh huyết, uống lâu ngày làm dương tinh vững chắc, âm tinh bình hòa, tinh huyết đầy đủ bền chặt Lộc nhung thiên bổ dương, đơng trùng hạ thảo có vai trò điều hòa bổ âm dương Sự phối hợp giúp điều hòa âm dương, phần tinh khí thiếu hụt bồi bổ làm cho thận tinh sung túc, âm dương cân bằng, lại kết hợp quy trình bào chế YHCT nghiên cứu dược lý khẳng định sở khoa học làm cho viên nang Y10 phát huy tác dụng điều trị * Tác dụng không mong muốn lâm sàng Theo dõi lâm sàng 30 bệnh nhân điều trị viên nang Y10 tháng khơng thấy có tác dụng không mong muốn nôn, đại tiện phân nát táo, mẩn ngứa KẾT LUẬN Về tính an toàn viên nang Y10 thực nghiệm - Độc tính cấp theo đường uống chuột nhắt trắng: Chưa tìm thấy LD50 viên nang Y10 theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao cho chuột uống 20,0g cao dược liệu/kg thể trọng (tương đương 25,0 g bột viên nang/kg thể trọng), mà khơng gây chết chuột nào, khơng có biểu độc tính cấp - Độc tính bán trường diễn chuột cống trắng: Trên lô chuột cống trắng uống viên nang Y10 liều 224mg cao dược liệu/kg/ngày liều 672mg cao dược liệu/kg/ngày cho thấy: - Chuột khỏe mạnh, tăng trọng tốt, đều, chưa thấy ảnh hưởng sóng điện tim chuột Khơng làm thay đổi số huyết học (hồng cầu, huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu) Không làm thay đổi tiêu sinh hóa đánh giá chức gan, thận (hoạt độ enzym AST, ALT máu, Albumin huyết tương, bilirubin toàn phần, Cholesterol tồn phần máu, Creatinin máu Khơng gây tổn thương mô bệnh học gan, lách, thận - Độc tính sinh sản: Viên nang Y10 cho chuột nhắt trắng uống liều 384mg cao dược liệu/kg/ngày liều 1152mg cao dược liệu/kg/ngày 60 ngày không gây ảnh hưởng đến phát triển bình thường thai sinh qua hệ P F1 24 - Độc tính nhiễm sắc thể: Ở lơ chuột nhắt trắng uống Y10 liều 384mg cao dược liệu/kg/ngày liều 1152mg cao dược liệu/kg/ngày 28 ngày khơng có khác tỉ lệ xuất rối loạn số lượng NST (lệch bội, đa bội), rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể; tần số loại đột biến nhiễm sắc thể tinh hồn lơ thử nghiệm so với lô chứng p > 0,05 Không thấy tượng rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể rối loạn cụm NST Về tác dụng cải thiện khả sinh tinh viên nang Y10 - Trên động vật thực nghiệm Trên chuột cống trắng đực gây thiểu tinh trùng natri valproat, viên nang Y10 liều 224mg cao dược liệu/kg/ngày 448mg cao dược liệu/kg/ngày cho chuột uống tuần làm hồi phục số nghiên cứu (nồng độ testosterol huyết thanh, số lượng chất lượng tinh trùng, trọng lượng quan sinh dục mơ học tinh hồn) mức tương đương so với lô chứng sinh lý Tác dụng tương đương với dùng testosteron liều 16mg/kg/ngày - Trên bệnh nhân suy giảm tinh trùng Viên nang Y10 liều viên/ngày, uống tháng có tính an toàn tác dụng tốt điều trị bệnh nhân bị SGTT thể thận tinh khuy tổn: - Làm tăng nồng độ testosteron huyết thanh, điều hòa tiết LH FSH Làm tăng số lượng, chất lượng tinh trùng bệnh nhân bị SGTT - Kết điều trị lâm sàng đạt tốt (tinh dịch đồ tăng bình thường) 16,67%; Tốt (tăng số lượng chất lượng tinh trùng so với trước điều trị) 66,67%; Trung bình (chỉ tăng số lượng chất lượng tinh trùng so với trước điều trị) 16,67%; Không kết 0% - Cải thiện triệu chứng bệnh theo y học cổ truyền - Không gây tác dụng không mong muốn; không biến đổi số sinh hóa máu; khơng làm thay đổi số huyết học KIẾN NGHỊ Có thể triển khai nghiên cứu đánh giá tác dụng chế phẩm thể SGTT khác theo YHCT, tác dụng dược lý khác chống oxy hóa, bảo vệ chức gan, nâng cao hệ miễn dịch, tác dụng lên tim mạch,…nhằm nâng cao giá trị viên nang Y10 Từ kết thu được, hướng tới việc triển khai dự án sản xuất chuyển giao cơng nghệ để đưa sản phẩm sử dụng rộng rãi cộng đồng  ... hóa sinh máu hình ảnh đại thể, mô bệnh học gan, thận, lách chuột Kết cho thấy viên nang Y10 có tính an tồn cao 4.1.3 Về độc tính viên nang Y10 sinh sản Kết nghiên cứu cho thấy viên nang Y10 cho... tác dụng làm hồi phục đường kính ống sinh tinh tương đương với lô chứng sinh lý (p > 0,05) 3.3 Kết đánh giá tính an tồn tác dụng cải thiện khả kích thích sinh tinh viên nang Y10 bệnh nhân SGTT... Viên nang Y10 không gây đột biến nhiễn sắc thể tủy xương tinh hoàn với mức liều dùng thời gian sử dụng nghiên cứu thực nghiệm chuột 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng cải thiện chức sinh tinh viên nang