Mối liên quan giữa IL28B với genotype và đột biến vùng core HCV (TT)

1. Đặt vấn đề: Bệnh viêm gan virút C là một trong những nguyên nhân chính gây xơ gan và ung thư gan. Theo Tổ chức Y tế thế giới, năm 2015 có 71 triệu người trên toàn thế giới nhiễm HCV mạn tính. Trung bình hàng năm có 399.000 người chết do các bệnh có liên quan đến virút viêm gan C (xơ gan, ung thư biểu mô tế bào gan và suy gan). Khác với viêm gan virút B, hiện tại vẫn chưa có vắc-xin phòng ngừa HCV. Việt Nam chưa có một điều tra hệ thống dịch tễ học nhiễm HCV. Kết quả nghiên cứu của các tác giả dựa trên các đối tượng không mang tính chất đại diện với số lượng hạn chế nên tỷ lệ nhiễm HCV rất khác biệt từ 0,08 đến 3,9%. Theo Hiệp hội nghiên cứu bệnh gan của Mỹ, tỷ lệ nhiễm HCV của vùng Đông Nam Á là 1,5-3,5%. Tuy tỷ lệ nhiễm HCV ở Việt Nam không cao như HBV (1020%) nhưng xét về mức độ trầm trọng thì bệnh nhân nhiễm HCV phải gánh chịu những biến chứng nặng nề hơn. Theo WHO, dưới 5% người lớn nhiễm HBV sẽ chuyển sang giai đoạn nhiễm mạn tính trong khi tỷ lệ này ở người nhiễm HCV là 60-80%. Trong số này, 15-30% bệnh nhân sẽ bị xơ gan trong vòng 20 năm. Bệnh nhân nhiễm HCV mạn tính sẽ là nguồn lây chủ yếu cho cộng đồng trong khi hiện tại vẫn chưa có sẳn một loại vắc-xin phòng ngừa viêm gan C. Rất may, khác với viêm gan B, bệnh nhân viêm gan C có thể được chữa lành hoàn toàn. Chẳng hạn, với phác đồ Interferon-Ribavirin tỷ lệ đạt đáp ứng virút bền vững là 40-76%. Ngoài việc dựa vào kiểu gen HCV, các nhà khoa học đã phát hiện kiểu gen IL28B có liên quan đến kết quả SVR ở bệnh nhân viêm gan C mạn tính khi sử dụng phác đồ này. Mặt khác, đột biến vùng core HCV cũng đã được ghi nhận có ảnh hưởng đến kết quả điều trị và biến chứng ung thư biểu mô tế bào gan ở bệnh nhân viêm gan C mạn tính. Như vậy, hiện tại có ba chỉ dấu sinh học ảnh hưởng đến kết quả điều trị bệnh nhân viêm gan C với phác đồ Interferon-Ribavirin. Vấn đề đặt ra là các chỉ dấu sinh học này có liên hệ gì với nhau hay không ? Hơn nữa, tại khu vực tỉnh Trà Vinh chưa thấy công bố một đề tài nghiên cứu về tình hình nhiễm HCV nên chúng tôi thực hiện đề tài “Mối liên quan giữa IL28B với genotype và đột biến vùng core HCV” với ba mục tiêu sau: 1. Xác định tỷ lệ kiểu gen HCV, đột biến vùng core HCV và kiểu gen SNP rs12979860 của IL28B. 2. Xác định mối liên quan giữa đột biến vùng core HCV với kiểu gen HCV. 3. Xác định mối liên quan giữa kiểu gen SNP rs12979860 của IL28B với kiểu gen HCV và đột biến vùng core HCV.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM BÁ CHUNG MỐI LIÊN QUAN GIỮA SNP CỦA IL28B VỚI GENOTYPE VÀ ĐỘT BIẾN VÙNG CORE CỦA HCV Ngành: Khoa học y sinh Mã số: 9720101 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC TP HỒ CHÍ MINH - Năm 2018 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề: Bệnh viêm gan virút C nguyên nhân gây xơ gan ung thư gan Theo Tổ chức Y tế giới, năm 2015 có 71 triệu người tồn giới nhiễm HCV mạn tính Trung bình hàng năm có 399.000 người chết bệnh có liên quan đến virút viêm gan C (xơ gan, ung thư biểu mô tế bào gan suy gan) Khác với viêm gan virút B, chưa có vắc-xin phòng ngừa HCV Việt Nam chưa có điều tra hệ thống dịch tễ học nhiễm HCV Kết nghiên cứu tác giả dựa đối tượng khơng mang tính chất đại diện với số lượng hạn chế nên tỷ lệ nhiễm HCV khác biệt từ 0,08 đến 3,9% Theo Hiệp hội nghiên cứu bệnh gan Mỹ, tỷ lệ nhiễm HCV vùng Đông Nam Á 1,5-3,5% Tuy tỷ lệ nhiễm HCV Việt Nam không cao HBV (1020%) xét mức độ trầm trọng bệnh nhân nhiễm HCV phải gánh chịu biến chứng nặng nề Theo WHO, 5% người lớn nhiễm HBV chuyển sang giai đoạn nhiễm mạn tính tỷ lệ người nhiễm HCV 60-80% Trong số này, 15-30% bệnh nhân bị xơ gan vòng 20 năm Bệnh nhân nhiễm HCV mạn tính nguồn lây chủ yếu cho cộng đồng chưa có sẳn loại vắc-xin phòng ngừa viêm gan C Rất may, khác với viêm gan B, bệnh nhân viêm gan C chữa lành hồn tồn Chẳng hạn, với phác đồ Interferon-Ribavirin tỷ lệ đạt đáp ứng virút bền vững 40-76% Ngoài việc dựa vào kiểu gen HCV, nhà khoa học phát kiểu gen IL28B có liên quan đến kết SVR bệnh nhân viêm gan C mạn tính sử dụng phác đồ Mặt khác, đột biến vùng core HCV ghi nhận có ảnh hưởng đến kết điều trị biến chứng ung thư biểu mô tế bào gan bệnh nhân viêm gan C mạn tính Như vậy, có ba dấu sinh học ảnh hưởng đến kết điều trị bệnh nhân viêm gan C với phác đồ Interferon-Ribavirin Vấn đề đặt dấu sinh học có liên hệ với hay khơng ? Hơn nữa, khu vực tỉnh Trà Vinh chưa thấy công bố đề tài nghiên cứu tình hình nhiễm HCV nên thực đề tài “Mối liên quan IL28B với genotype đột biến vùng core HCV” với ba mục tiêu sau: Xác định tỷ lệ kiểu gen HCV, đột biến vùng core HCV kiểu gen SNP rs12979860 IL28B Xác định mối liên quan đột biến vùng core HCV với kiểu gen HCV Xác định mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV đột biến vùng core HCV Tính cấp thiết đề tài luận án: Cho đến chưa có cơng trình khoa học nghiên cứu tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B nhóm bệnh nhân có Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) đột biến vùng core bệnh nhân viêm gan C mạn tính khu vực Tỉnh Trà Vinh Kết nghiên cứu kiểm chứng vai trò kiểu gen IL28B CC việc thải virút tự phát cung cấp liệu đột biến vùng core HCV, có ích cho nghiên cứu liên quan nghiên cứu đánh giá vai trò dấu sinh học việc dự đoán kết phác đồ điều trị DAAs (Direct-acting antiviral) Đồng thời, nghiên cứu tỉnh Trà Vinh viêm gan virút C, giúp xác định tỷ lệ kiểu gen HCV lưu hành địa phương tỷ lệ kiểu gen IL28B đột biến vùng core HCV, góp phần vào hiểu biết nhiễm HCV khu vực Trà Vinh Những đóng góp luận án: Luận án đạt mục tiêu đề ra, bật điểm sau: - Xác định kiểu gen HCV lưu hành khu vực Trà Vinh 6, Đặc biệt, kiểu gen HCV-2a chiếm tỷ lệ 40,3%, cao so với kết nghiên cứu khác thực Thành phố Hồ Chí Minh (< 20%) - Xác định tỷ lệ dạng đột biến vùng core HCV bệnh nhân viêm gan C mạn tính chưa điều trị thuốc kháng virút - Phát đột biến vùng core phổ biến bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen có tỷ lệ đột biến vùng core HCV thấp Bố cục luận án Luận án gồm 113 trang: phần đặt vấn đề trang, tổng quan tài liệu 33 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 17 trang, kết nghiên cứu 34 trang, bàn luận 25 trang, kết luận trang, kiến nghị trang Có 23 hình, biểu đồ, sơ đồ, 32 bảng 99 tài liệu tham khảo (21 tài liệu tham khảo tiếng Việt 78 tài liệu tiếng nước ngoài) 4 NỘI DUNG LUẬN ÁN Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Virút viêm gan C HCV virút phát kỹ thuật sinh học phân tử, thuộc họ Flaviviridae, giống Hepacivirus Virút có đường kính 55-65 nm, trọng lượng phân tử vào khoảng 4.106 daltons Bộ gen gồm sợi đơn RNA có cực tính dương nằm bên phần nucleocapsid hình đa diện Ngoài lớp màng bọc lipid chứa protein E1 E2 tạo thành phức hợp dimer 1.2 Dịch tễ học nhiễm HCV Bảng 1.2 Dân số nguy nhiễm HCV Các nhóm dân số có nguy nhiễm HCV Nguy Người tiêm chích ma túy Nguy nhiễm HCV cao nhất: 67% Truyền sản phẩm máu bị nhiễm khuẩn, thủ Nguy lây nhiễm HCV tùy thuộc thuật xâm lấn khơng kiểm sốt tốt nhiễm vào tần suất thực thủ thuật khuẩn mức độ kiểm soát nhiễm khuẩn Nguy lây nhiễm HCV 4-8% Trẻ em sinh từ mẹ bị nhiễm HCV Nếu mẹ bị đồng nhiễm HIV, nguy lây nhiễm HCV 10,8-25% Lây từ bạn tình bị nhiễm HCV Lây từ bạn tình bị đồng nhiễm HIV Người hít cocain Xăm Nguy lây nhiễm HCV thấp Nguy lây nhiễm HCV cao không sử dụng biện pháp phòng ngừa Nguy lây nhiễm HCV cao dùng chung dụng cụ hít cocain Người xăm có nguy nhiễm HCV cao người bình thường Tổ chức Y tế giới dự đoán năm 2015 có 71 triệu người bị nhiễm HCV mạn tính hàng năm có khoảng 399.000 người chết bệnh Phần lớn bệnh nhân bị nhiễm virút nhiều bệnh nhân dù chẩn đốn khơng tiếp cận với chế độ điều trị Đa số bệnh nhân điều trị có kết tốt tỷ lệ thành công tương tự quốc gia phát triển phát triển Các nghiên cứu cho thấy kiểu gen HCV lưu hành phổ biến Việt Nam 6, 1.3 Điều trị HCV Trước sử dụng phác đồ Interferon-Ribavirin, hiệu 50%, có nhiều tác dụng phụ Gần phác đồ DAAs (thuốc ức chế protease) trở nên phổ biến hiệu 95%, tác dụng phụ, dùng đường uống giá thành ngày giảm 1.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc Các nghiên cứu khác Việt Nam cho thấy phù hợp với đặc điểm phân bố kiểu gen HCV IL28B khu vực Đông Nam Á Kiểu gen HCV phổ biến kiểu gen kiểu gen IL28B CC chiếm ưu nhóm bệnh nhân viêm gan C mạn tính Tuy nhiên, chưa có liệu kiểu gen IL28B bệnh nhân đào thải virút tự phát, có Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) Nói chung nghiên cứu cho thấy đột biến vùng core HCV thường xuất vị trí axít amin 70 91, chủ yếu đột biến R70Q/H L91M, xảy bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 1b Tuy nhiên, khu vực Tỉnh Trà Vinh chưa có cơng trình nghiên cứu đột biến vùng core HCV 6 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu: bệnh nhân có Anti-HCV (+), khơng sử dụng thuốc kháng virút, đến khám phòng khám viêm gan Bệnh viện đa khoa Tỉnh Trà Vinh 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu - Thiết kế nghiên cứu: nghiên cứu mô tả cắt ngang - Cỡ mẫu: n = Z2(1-/2) x p x (1-p)/d2 Z(1-/2) = 1,96 (độ tin cậy 95%,  = 0,05) p = 90% (tỷ lệ kiểu gen IL28B CC vùng Đông Nam Á theo tác giả David L Thomas) d = 5% (sai số cho phép) n = 138 Trong thời gian từ tháng 01/2014 đến tháng 12/2015 thu thập 164 mẫu huyết tương từ bệnh nhân chọn vào mẫu nghiên cứu - Phương pháp chọn mẫu: chọn mẫu thuận tiện 2.3 Các bƣớc tiến hành nghiên cứu - Khám, chọn bệnh - Lấy bệnh phẩm - Làm xét nghiệm Anti-HCV - Làm xét nghiệm sinh học phân tử: HCV-RNA, HCV Genotype, HCV Core, IL28B 2.4 Xử lý số liệu Thống kê xử lý số liệu phần mềm EXCEL EPIINFO 7.2 Trình bày kết nghiên cứu dạng tần số, tỷ lệ phần trăm bảng, biểu đồ So sánh hai tỷ lệ phép kiểm chi bình phương Fisher’s exact test với khoảng tin cậy 95% Giá trị p < 0,05 xem có ý nghĩa thống kê 2.5 Đạo đức nghiên cứu Đề tài không vi phạm y đức lý sau: - Định lượng HCV-RNA, định kiểu gen HCV xét nghiệm thường quy bệnh nhân có Anti-HCV (+) - Việc lấy máu bệnh nhân xét nghiệm tư vấn trước nhận đồng thuận bệnh nhân - Mẫu máu bảo quản cẩn thận trước trình xét nghiệm Sau hoàn thành xét nghiệm, mẫu máu tiêu hủy theo quy định Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đặc điểm mẫu nghiên cứu Trong thời gian từ tháng 01/2014 đến tháng 12/2015 thu thập 164 mẫu huyết tương từ bệnh nhân đến khám phòng khám viêm gan Bệnh viện đa khoa Tỉnh Trà Vinh Có 71 bệnh nhân nam (43,3%), 93 bệnh nhân nữ (56,7%) Bệnh nhân nhỏ 26 tuổi, bệnh nhân lớn tuổi 95 tuổi, tuổi trung bình 58,7 ± 11,7 Trong đó, nhóm tuổi ≤ 60 có tỷ lệ cao với 91 bệnh nhân (55,5%), nhóm tuổi > 60 tuổi có 73 bệnh nhân (44,5%) 8 3.2 Tỷ lệ kiểu gen HCV, đột biến vùng core HCV kiểu gen SNP rs12979860 IL28B 3.2.1 Tỷ lệ kiểu gen HCV nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (+) Bảng 3.1 Tỷ lệ kiểu gen HCV 134 bệnh nhân có HCV-RNA (+) Kiểu gen HCV n 1a 1b 15 2a 54 6a 16 11,9 6e 30 22,4 6h 6l 4,5 6o 2,9 6p 0,8 Tổng cộng Tổng (n=134) 22 Tỷ lệ (%) 16,4 5,2 11,2 54 58 134 40,3 43,3 0,8 100 100 3.2.2 Tỷ lệ đột biến vùng core HCV Có 76 bệnh nhân có đột biến vùng core HCV, chiếm tỷ lệ 56,7% (76/134) Tần số tỷ lệ dạng đột biến vùng core HCV trình bày bảng 3.2 9 Bảng 3.2 Tỷ lệ đột biến vùng core HCV Dạng đột biến n Tỷ lệ đột biến 76 Tỷ lệ đột biến trƣờng hợp có đột biến 134 trƣờng hợp (%) khảo sát (%) L91C 11 14,5 8,2 L91M 6,6 3,7 R70H L91C 31 40,8 23,1 L91C R70Q 3,9 2,2 R70Q L91C 21 27,6 15,7 R70Q L91M 6,6 3,7 76 100 56,7 3.2.3 Tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B 81,1% 17,7% 1,2% Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ kiểu gen IL28B bệnh nhân nhiễm HCV Bệnh nhân nhiễm HCV có IL28B kiểu gen CC chiếm tỷ lệ cao (81,1%) so với hai nhóm kiểu gen lại Tỷ lệ nhiễm HCV (%) 10 Kiểu gen IL28B Biểu đồ 3.4 Tỷ lệ kiểu gen IL28B nhóm bệnh nhân nhiễm HCV có HCV-RNA (+) HCV-RNA (-) Khác biệt tỷ lệ kiểu gen IL28B hai nhóm HCV-RNA (+) HCV-RNA (-) khơng có ý nghĩa thống kê, p = 0,1 > 0,05 (chi bình phương test) 3.3 Mối liên quan đột biến vùng core HCV với kiểu gen HCV Kiểu gen có tỷ lệ đột biến vùng core cao 72,4% (55/76) kiểu gen 1b chiếm tỷ lệ 17,1% (13/76) kiểu gen 2a có đột biến vùng core chiếm tỷ lệ thấp 1,3% (1/76) kiểu gen 1a chiếm 9,2% (7 /76) Đột biến vùng core dạng R70H L91C chiếm tỷ lệ cao 40,8% (31 trường hợp) Chiếm tỷ lệ thấp dạng đột biến R70Q, 3,9% (3 trường hợp) Khác biệt nhóm có ý nghĩa thống kê với p < 0,0001 (Fisher’s exact test) 11 Bảng 3.20 Tần suất dạng đột biến vùng core HCV theo kiểu gen HCV Đột R70H biến L91C L91M R70Q R70Q R70Q L91C Tổng L91C L91M HCV 0 0 (100%) (0%) (0%) (0%) (0%) (0%) 5 1a 1b 13 (0%) (38,5%) (0%) (23,1%) (0%) (38,5%) 0 0 (100%) (0%) (0%) (0%) (0%) (0%) 31 21 (5,5%) (0%) (56,4%) (0%) (38,2%) (0%) 11 31 21 (14,5%) (6,6%) (40,8%) (3,9%) (27,6%) (6,6%) 2a 55 Tổng 76 12 Bảng 3.21 Tần suất đột biến vùng core HCV theo kiểu gen HCV, nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (+) (n=134) Đột biến vùng core Khơng Có Tổng n (%) n (%) (n) PR Kiểu gen p KTC 95% HCV 47,8 (9,1%) 20 (90,9%) 22 (0,764-0,102) 2a 53 (98,1%) (1,9%) 54 0,0001 49,9 (5,2%) 55 (94,8%) 58 (0,861-0,997) Tổng (n) 58 76 134 Đột biến vùng core HCV chủ yếu xảy bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen HCV kiểu gen Khác biệt nhóm có ý nghĩa thống kê với p = 0,0001 < 0,05 (chi bình phương test) 13 3.4 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV đột biến vùng core HCV 3.4.1 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV Bảng 3.23 Tỷ lệ SNP rs12979860 IL28B theo kiểu gen HCV, nhóm bệnh nhân có HCV- RNA (+) (n=134) Kiểu gen IL28B CC IL28B CT, TT Tổng cộng HCV n (%) n (%) n (%) 15 (68,2%) (31,8%) 22 2a 44 (81,5%) 10 (18,5%) 54 46 (79,3%) 12 (20,7%) 58 105 29 134 Khác biệt tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B ba nhóm bệnh nhân nhiễm HCV mạn tính kiểu gen 1, 2a khơng có ý nghĩa thống kê, p = 0,43 > 0,05 (chi bình phương test) 14 3.4.2 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với đột biến vùng core HCV Khác biệt tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B hai nhóm bệnh nhân có khơng có đột biến vùng core HCV khơng có ý nghĩa thống kê, p = 0,65 > 0,05 (chi bình phương test – Bảng 3.29.) Bảng 3.29 Tần suất IL28B theo đột biến vùng core HCV, nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (+) (n=134) Đột IL28B CT, TT CC Tổng OR n (%) n (%) (n) KTC 95% 11 (19%) 47 (81%) 58 p biến HCV core Không 0,754 Có 18 (23,7%) 58 (76,3%) 76 0,65 (0,325-1,752) Tổng 29 105 134 15 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 4.1 Tỷ lệ kiểu gen HCV, đột biến vùng core HCV kiểu gen SNP rs12979860 IL28B 4.1.1 Tỷ lệ kiểu gen HCV Kết nghiên cứu bảng 3.1 cho thấy định kiểu gen HCV cuûa 134 bệnh nhân có HCV-RNA (+) xác định ba kiểu gen 6, với tỷ lệ 43,3%, 40,3% 16,4% Khi so sánh với kết nghiên cứu Phạm Hùng Vân năm 2011 kết nghiên cứu Cao Minh Nga năm 2014 có khác biệt tỷ lệ kiểu gen thấp tương tự với kiểu gen cao kiểu gen Nghiên cứu Phạm Hùng Vân xác định kiểu gen HCV 842 bệnh nhân viêm gan virút C Kiểu gen chiếm tỷ lệ cao (458 bệnh nhân; 54,4%), kiểu gen (256 bệnh nhân; 30,4%) kiểu gen (128 bệnh nhân; 15,2%) Như vậy, kiểu gen có tỷ lệ thấp Nghiên cứu Cao Minh Nga 480 trường hợp, kiểu gen chiếm tỷ lệ cao 52,7%, kiểu gen với tỷ lệ 26,9% kiểu gen có tỷ lệ 19,8% Trong nghiên cứu Nhật tác giả Yasumi Furui tiến hành vào năm 2011 114 người hiến máu tình nguyện Kết cho thấy kiểu gen (2a 2b) chiếm ưu (78,2%), kiểu gen 1b (21,2%) Với kết nghiên cứu chúng tơi kiểu gen chiếm ưu (43,3%), gồm kiểu gen (6a, 6e, 6h, 6l, 6o, 6p), kiểu gen 2a (40,3%) thấp kiểu gen (1a 1b) với tỷ lệ 16,4% (5,2% 11,2%) Thực tế Nhật, kiểu gen lây truyền qua đường truyền máu, kiểu gen lây truyền qua thủ thuật vệ sinh xăm 16 tiêm chích ma túy Theo Yasumi Furui, tỷ lệ kiểu gen thấp hiệu việc kiểm soát nhiễm khuẩn bệnh viện Như vậy, Việt Nam kiểu gen kiểu gen HCV phổ biến Riêng kiểu gen chiếm tỷ lệ cao kiểu gen nghiên cứu chúng tơi đặc điểm địa phương, lưu hành kiểu gen Có khả tỷ lệ lây truyền HCV kiểu gen giảm việc sàng lọc HCV tất bịt máu trước truyền Tuy nhiên, để khẳng định cần có nghiên cứu khác với số mẫu lớn hơn, bao gồm người hiến máu (được xét nghiệm HCV-RNA) 4.1.2 Tỷ lệ đột biến vùng core HCV Khảo sát tần suất đột biến vùng core HCV bảng 3.2 cho thấy tỷ lệ bệnh nhân có kiểu gen HCV đột biến 56,7% với 76 trường hợp, chiếm ưu so với nhóm khơng có kiểu gen HCV đột biến Trong nhóm này, dạng đột biến chiếm tỷ lệ cao R70H L91C, 23,1% dạng R70Q L91C, 15,7% Tuy nhiên, dạng đột biến L91C (n=11) xem khơng có ảnh hưởng đến kết điều trị biến chứng lâu dài bệnh nhân viêm gan virút C mạn tính Do tỷ lệ đột biến vùng core HCV thực 65/134 (48,5%) Tỷ lệ cao nhiều so với nghiên cứu Yasumi Furui cộng năm 2011 Tác giả tìm thấy 7/85 (8,24%) trường hợp bệnh nhân người Nhật hiến máu tình nguyện nhiễm HCV giai đoạn cấp có đột biến vùng core HCV (tuổi trung bình nam 34 ± 3, nữ 29 ± 11) Khác biệt nghiên cứu chúng tơi, bệnh nhân thuộc nhóm viêm gan C mạn tính, nhiễm HCV thời gian dài (tuổi trung bình nam 57,6 ± 12,0; nữ 59,5 ± 11,4) Như vậy, áp lực 17 miễn dịch dịch thể, Interferon nội sinh vùng core HCV bệnh nhân bị đột biến với tỷ lệ cao Ba dạng đột biến quan tâm nhiều R70Q, R70H L91M có tỷ lệ 17,9%; 23,1% 3,7% Có trường hợp diện hai dạng đột biến R70Q L91M (3,7%) 4.1.3 Tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B Trong nghiên cứu này, xác định kiểu gen IL28B vị trí rs12979860 bệnh nhân bị nhiễm HCV có kết sau (biểu đồ 3.3): kiểu gen CC chiếm tỷ lệ cao (81,1%), kiểu gen CT (17,7%) kiểu gen TT có tỷ lệ thấp (1,2%) Kết tương đồng với hai kết nghiên cứu khác Việt Nam Năm 2012, Phạm Hoàng Phiệt cộng xác định kiểu gen IL28B Kết quả: CC (78%), CT (20%), TT (2%) Cũng năm này, tác giả Nguyễn Bảo Tồn cơng bố kết tần suất kiểu gen IL28B 239 bệnh nhân: CC (77%), CT (22%) TT (1%) Biểu đồ 3.4 cho thấy 164 bệnh nhân có Anti-HCV (+), nhóm mang kiểu gen CC chiếm tỷ lệ cao 81,1% (trong hai nhóm HCV-RNA (-) HCV-RNA (+)) Đặc biệt, có 30 bệnh nhân có AntiHCV (+) HCV-RNA (-) Có khả người đào thải HCV tự phát Khác biệt tỷ lệ kiểu gen CC CT, TT hai nhóm HCV-RNA (+) HCV-RNA (-) khơng có ý nghĩa thống kê, p = 0,1 > 0,05 Tần suất kiểu gen IL28B CC cao bệnh nhân viêm gan C mạn tính người Việt Nam lợi cho việc điều trị, bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen ZhiFang Jia cộng tổng quan 46 nghiên cứu độc lập cho thấy kiểu gen IL28B CC giữ vai trò tiên lượng 18 đạt đáp ứng virút bền vững bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen Sau phân tích thống kê, nghiên cứu khác biệt tyû lệ kiểu gen IL28B CC IL28B CT, TT hai nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (-) HCV-RNA (+) Kết khác với kết nghiên cứu Thomas cộng Nhóm nghiên cứu định kiểu gen SNP rs12979860 IL28B hai nhóm bệnh nhân, nhóm thứ gồm 388 người đào thải virút tự phát, nhóm thứ hai gồm 620 người viêm gan virút C mạn tính Kết phân tích thống kê cho thấy tần suất kiểu gen IL28B CC nhóm cao đáng kể so với nhóm (80,3% so với 66,7% bệnh nhân người da trắng, p = 7×10−8; 56,2% so với 37% bệnh nhân người da đen, p = 1×10−5) Như vậy, kiểu gen IL28B CC có tác động đáng kể đến đào thải HCV tự phát Nhóm nghiên cứu chúng tơi thu thập 30 bệnh nhân có Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) Có thể cỡ mẫu nhỏ nên chưa thấy khác biệt tần suất kiểu gen IL28B CC so với nhóm bệnh nhân viêm gan virút C mạn tính Để khẳng định vai trò có lợi kiểu gen IL28B CC việc thải HCV cần có thiết kế nghiên cứu mạnh có cỡ mẫu lớn hơn, thu thập nhiều bệnh nhân đào thải virút tự phát 4.2 Mối liên quan đột biến vùng core HCV với kiểu gen HCV Phân tích tần suất đột biến vùng core HCV theo kiểu gen HCV liệt kê bảng 3.20, ghi nhận khác biệt nhóm có ý nghĩa thống kê với p < 0,0001 (Fisher’s exact test) Kiểu gen có 19 tỷ lệ đột biến vùng core cao 72,4% (55/76), nhóm 1b chiếm tỷ lệ 17,1% (13/76) kiểu gen 1a chiếm 9,2% (7/76) Trong kiểu gen 2a có đột biến vùng core chiếm tỷ lệ thấp nhất, 1,3% (1/76) Đột biến vùng core dạng R70H L91C chiếm tỷ lệ cao 40,8% (31 trường hợp), đột biến dạng R70Q L91C L91C có tỷ lệ 27,6% (21 trường hợp) 14,5% (11 trường hợp) Tiếp theo hai dạng đột biến L91M R70Q L91M có tỷ lệ nhau, 6,6% (5 trường hợp) Dạng đột biến R70Q chiếm tỷ lệ thấp nhất, 3,9% (3 trường hợp) Năm 2012, Rossana C Jaspe cộng tiến hành xác định đột biến vùng core HCV bệnh nhân Venezuela, có 266 người tham gia với kiểu gen HCV gồm 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2j 3a Kết ghi nhận có hai dạng đột biến R70Q L/C91M chủ yếu xuất kiểu gen 1b (lần lượt 30/38-79% 26/38-68%) Kết khác với kết nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ đột biến R70Q (gồm ba dạng: R70Q, R70Q L91C, R70Q L91M) L91M (gồm hai dạng: L91M, R70Q L91M) 38,1% 13,2% Như vậy, nghiên cứu chúng tơi có tỷ lệ đột biến R70Q L91M thấp nhiều Khác biệt kết chúng tơi có thêm dạng đột biến R70H (31 trường hợp, 40,8%) dạng đột biến L91C (11 trường hợp, 14,5%) Khảo sát bảng 3.21 tần suất đột biến vùng core HCV theo kiểu gen HCV nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (+) cho thấy tỷ lệ đột biến vùng core cao kiểu gen (90,9%) (94,8%), kiểu gen 2a lại có tỷ lệ đột biến thấp (1,9%) với trường hợp thuộc dạng đột biến L91C (không ảnh hưởng đến đáp ứng điều trị với phác đồ Interferon-Ribavirin biến chứng ung thư biểu mơ tế bào gan) 20 Phân tích cho thấy khác biệt nhóm có ý nghĩa thống kê với p = 0,0001 < 0,05 Theo nghiên cứu Yasumi Furui cộng năm 2011 người hiến máu tình nguyện, đột biến vùng core HCV xảy nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 1b, không xuất kiểu gen khác Trong nghiên cứu chúng tơi, hai nhóm bệnh nhân bị đột biến vùng core nhiều nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen (72,4%) kiểu gen 1b (17,1%) Trong đó, đột biến kiểu gen xuất vùng 70Q (21 trường hợp, 27,6%) vùng 70H (31 trường hợp, 40,8%) Đột biến kiểu gen 1b xuất đa dạng hơn, gồm đột biến 91M có tỷ lệ 6,6% (5 trường hợp), 70Q có tỷ lệ 3,9% (3 trường hợp) quan trọng xuất đồng thời đột biến hai vị trí 70Q 91M có tỷ lệ 6,6% (5 trường hợp) Tương tự Yasumi Furui, kết nghiên cứu Rossana C Jaspe cộng cho thấy hai dạng đột biến vùng core R70Q L91M xuất nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 1b (p < 0,001) Như vậy, đặc điểm phân bố kiểu gen HCV theo địa phương nên hai nghiên cứu tác giả khơng tìm thấy bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen nghiên cứu có tỷ lệ đột biến vùng core R70Q lên đến 27,6% bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen Đây đặc thù phân bố kiểu gen HCV vùng Đơng Nam Á, khu vực khác phân lập kiểu gen Trong nghiên cứu chưa thấy xuất dạng đột biến quan trọng (R70Q, R70H, L91M) nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 1a, 2a mà có dạng đột biến L91C Ngược lại, 21 nhóm bệnh nhân nhiễm kiểu gen 1b có tỷ lệ đột biến vùng core HCV cao Đối với HCV-1b 13/15-86,7% HCV-6 52/58-89,7% (đã loại bớt trường hợp đột biến dạng L91C) Mặc dù HCV kiểu gen nhóm có tỷ lệ đột biến vùng core nhiều HCV kiểu gen 1b có vai trò quan trọng việc tiên lượng đáp ứng điều trị tỷ lệ đột biến thấp lại xuất vị trí đột biến đa dạng, phức tạp 4.3 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV đột biến vùng core HCV 4.3.1 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV Sau phân tích tỷ lệ SNP rs12979860 IL28B theo kiểu gen HCV nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (+) (n=134) bảng 3.23, chúng tơi nhận thấy khác biệt nhóm khơng có ý nghĩa thống kê, p = 0,43 > 0,05 Kết tương tự với kết nghiên cứu Maryam cộng năm 2016, kết nghiên cứu Fateme Zare cộng năm 2016, khơng tìm thấy mối liên quan SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV Ngược lại, kết nghiên cứu khác với kết Christoph Sarrazin Với 267 trường hợp nhiễm viêm gan C mạn tính kiểu gen vaø 378 trường hợp nhiễm viêm gan C mạn tính kiểu gen 1, so sánh với nhóm chứng 200 người khỏe mạnh, tần suất kiểu gen IL28B CC lại thấp nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen so với nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen Theo kết luận Christoph Sarrazin, nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 3, kiểu gen IL28B CC có liên quan với đáp ứng virút bền vững (p = 0,01) 22 Có thể khơng có chọn lọc q trình nhiễm HCV theo kiểu gen HCV kiểu gen IL28B bệnh nhân nên hai dấu sinh học độc lập với Nhìn chung, nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen chiếm tỷ lệ cao nghiên cứu chúng tơi Tuy nhiên, khơng có khác biệt hai nhóm có kiểu gen IL28B CC nhóm có kiểu gen IL28B CT, TT Nghiên cứu đưa nhận xét khách quan, chưa thể xác định tính thải virút bệnh nhân có kiểu gen IL28B CC Để đưa kết luận xác hơn, cần có nghiên cứu khác với thiết kế nghiên cứu tốt hơn, cỡ mẫu lớn với thời gian dài hơn, khảo sát nhiều yếu tố giúp loại trừ khả gây nhiễu 4.3.2 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với đột biến vùng core HCV Khảo sát mối liên quan IL28B với đột biến vùng core HCV nhóm bệnh nhân có HCV-RNA dương tính (n=134) bảng 3.29, chúng tơi nhận thấy khác biệt nhóm khơng có ý nghĩa thống kê với p = 0,65 > 0,05 Kết tương tự với kết Alestig cộng năm 2011 50 bệnh nhân da trắng nhiễm HCV kiểu gen 1b Erik Alestig kết luận IL28B đột biến vùng core HCV độc lập với Tuy nhiên, kết nghiên cứu khác với kết hai nghiên cứu sau: - Năm 2010, Mariko Kobayashi cộng nghiên cứu đề tài “Mối liên quan SNP IL28B đột biến axít amin vùng core HCV bệnh nhân người Nhật viêm gan C mạn tính” Tác giả kết luận tần 23 suất đột biến dạng R70Q chiếm ưu nhóm bệnh nhân nữ mang kiểu gen CT, TT: Tỷ lệ đột biến R70Q bệnh nhân nữ mang kiểu gen CT, TT: 19/32 (59,3%) Tỷ lệ đột biến R70Q bệnh nhân nam mang kiểu gen CT, TT: 26/50 (52,0%) Tỷ lệ đột biến R70Q bệnh nhân nữ mang kiểu gen CC: 26/81 (32,1%) Tỷ lệ đột biến R70Q bệnh nhân nam mang kiểu gen CC: 27/125 (21,6%) - Năm 2016, Danesh Kadjbaf cộng khảo sát đề tài “Tần suất đột biến axít amin 70 vùng core HCV kiểu gen đa hình gần gen IFNL3 bệnh nhân viêm gan virút C mạn tính” Có 429 bệnh nhân tham gia nghiên cứu số 426 bệnh nhân định kiểu gen rs12979860 Kết có 75 bệnh nhân mang kiểu gen TT Tác giả kết luận đột biến axít amin 70 vùng core HCV phổ biến nhóm bệnh nhân mang kiểu gen rs12979860 TT so với nhóm bệnh nhân không mang kiểu gen (17,3% so với 8,5%, p = 0,022) Như vậy, theo kết hai nghiên cứu trên, đột biến axít amin 70 vùng core HCV thường xuất bệnh nhân viêm gan virút C mạn tính có kiểu gen IL28B CT, TT Do mẫu nghiên cứu không đủ lớn, thu dung 29 trường hợp bệnh nhân có kiểu gen CT, TT nên kiểm chứng kết hai nghiên cứu Cần có nghiên cứu khác với số mẫu lớn hơn, có nhiều bệnh nhân viêm gan C mạn tính mang kiểu gen CT, TT 24 KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 164 bệnh nhân nhiễm HCV, có 30 bệnh nhân khơng phát HCV-RNA 134 bệnh nhân định lượng HCV-RNA kỹ thuật real-time PCR Xác định ba kiểu gen HCV lưu hành 6, với tỷ lệ 43,3%, 40,3% 16,4% Phát dạng đột biến vùng core HCV với tỷ lệ sau: R70H L91C (40,8%), R70Q L91C (27,6%), L91C (14,5%), L91M (6,6%), R70Q L91M (6,6%) R70Q (3,9%) Xác định tỷ lệ kiểu gen SNP rs12979860 IL28B là: CC (81,1%), CT (17,7%) TT (1,2%) Khơng tìm thấy khác biệt tần suất kiểu gen IL28B CC hai nhóm bệnh nhân có HCV-RNA (-) HCV-RNA (+) Tỷ lệ đột biến vùng core cao với HCV kiểu gen (90,9% 94,8%) thấp với HCV kiểu gen 2a (1,9%), p = 0,0001 Khơng tìm thấy mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với kiểu gen HCV đột biến vùng core HCV KIẾN NGHỊ Kết nghiên cứu cho thấy đột biến vùng core HCV phổ biến nhóm bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 1b Do đó, cần có nghiên cứu đánh giá vai trò đột biến vùng core HCV việc theo dõi biến chứng ung thư biểu mô tế bào gan bệnh nhân này, sau đạt đáp ứng virút bền vững  ... Mối liên quan IL28B với genotype đột biến vùng core HCV với ba mục tiêu sau: Xác định tỷ lệ kiểu gen HCV, đột biến vùng core HCV kiểu gen SNP rs12979860 IL28B Xác định mối liên quan đột biến vùng. .. trừ khả gây nhiễu 4.3.2 Mối liên quan kiểu gen SNP rs12979860 IL28B với đột biến vùng core HCV Khảo sát mối liên quan IL28B với đột biến vùng core HCV nhóm bệnh nhân có HCV- RNA dương tính (n=134)... đột biến vùng core HCV Có 76 bệnh nhân có đột biến vùng core HCV, chiếm tỷ lệ 56,7% (76/134) Tần số tỷ lệ dạng đột biến vùng core HCV trình bày bảng 3.2 9 Bảng 3.2 Tỷ lệ đột biến vùng core HCV