ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA Sangrovit® LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus Sauvage, 1878) ĐỐI VỚI VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA Sangrovit® LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus Sauvage, 1878) ĐỐI VỚI VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri Họ tên sinh viên: LÊ THỊ BÍCH LIỂU Ngành: NI TRỒNG THỦY SẢN Chun ngành: NGƯ Y Niên khóa: 2008– 2012 Tháng 7/2012 ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA Sangrovit® LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus Sauvage, 1878) ĐỐI VỚI VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri Tác giả LÊ THỊ BÍCH LIỂU Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Nuôi Trồng Thủy Sản, chuyên ngành Ngư Y Giáo viên hướng dẫn: TS NGUYỄN NHƯ TRÍ KS TRUYỆN NHÃ ĐỊNH HUỆ Tháng năm 2012 i LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lòng biết ơn vô hạn đến Cha Mẹ, người thân gia đình ni dưỡng, dạy dỗ, động viên ln sát cánh bên để có ngày hơm Trong suốt q trình học tập, tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Khoa Thủy Sản tồn thể q thầy ngồi Khoa Thủy Sản tận tình giảng dạy giúp đỡ tơi suốt q trình học tập trường Xin gửi lòng biết ơn, kính trọng sâu sắc đến thầy TS Nguyễn Như Trí, KS Truyện Nhã Định Huệ, người quan tâm, tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ để tơi hồn thành tốt khóa luận Chân thành cảm ơn anh Lê Hồng Ngọc - lớp CH10TS, tất bạn lớp DH08NY giúp đỡ tơi suốt thời gian qua Do có hạn chế mặt thời gian mặt kiến thức nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, khuyết điểm Rất mong nhận ý kiến đóng góp q thầy bạn để khóa luận hồn thiện ii TĨM TẮT Đề tài “ Đánh giá hiệu Sangrovit® lên khả đề kháng cá tra (Pangasianodon hypophthalmus Sauvage, 1878) vi khuẩn Edwardsiella ictaluri” tiến hành từ tháng 10/2011 đến tháng 3/2012 Trại Thực Nghiệm Phòng Thí Nghiệm Bệnh Học Thủy Sản, Khoa Thủy Sản Trường Ðại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, nhằm đánh giá hiệu Sangrovit® lên khả đề kháng cá tra (Pangasianodon hypophthalmus Sauvage, 1878) vi khuẩn Edwardsiella ictaluri Thí nghiệm thực cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) giống khỏe mạnh bệnh, trọng lượng trung bình ban đầu từ 9,15 ± 0,06g có nguồn gốc từ trại cá giống Củ Chi Vi khuẩn Edwardsiella ictaluri từ Phòng Thí Nghiệm Bệnh Học, Khoa Thủy Sản Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh dùng để gây bệnh thí nghiệm Thức ăn ép đùn bổ sung Sangrovit® với hàm lượng 0, 25, 50, 75, 100 g/tấn thức ănđược sử dụng thí nghiệm, tương ứng với thức ăn nghiệm thức đối chứng, nghiệm thức 1, nghiệm thức 2, nghiệm thức 3, nghiệm thức Sau gây cảm nhiễm phương pháp ngâm vi khuẩn Edwardsiella ictalurivới mật độ 3,39 x 105 CFU/mL, tỉ lệ chết nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05), cụ thể nghiệm thức đối chứng, nghiệm thức 1, nghiệm thức 2, nghiệm thức 3, nghiệm thức có tỉ lệ chết 88,89± 3,85%, 82,22± 3,85%, 86,67± 6,67%, 77,78± 3,85%, 80,00± 6,67% Kết định danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri test IDS 14GNR (công ty Nam Khoa) cho thấy vi khuẩn tác nhân gây chết cá nghiệm thức tương ứng Về triệu chứng bệnh tích nghiệm thức tương tự Sau cảm nhiễm cá kiểm tra tiêu đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu hoạt lực lysozyme khả tiêu diệt vi khuẩn huyết Kết thu cho thấy, cá nghiệm thức có bổ sung Sangrovit® với tỉ lệ 75, 100 g/tấn thức ăn cho hiệu cao việc tăngkích thíchmiễn dịch khơng đặc hiệu thông qua gia tăng hàm lượng lysozymeở nghiệm thức đối chứng, nghiệm thức nghiệm thức 161,67 ± 34,03,381,67 ± 25,66 339,17 ± 61.Tuy nhiên, iii kết cho thấy việc bổ sung Sangrovit® vào thức ăn khơng mang lại hiệu gia tăng khả tiêu diệt vi khuẩn huyết iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC v DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x DANH SÁCH BIỂU ĐỒ xi Chương MỞ ĐẦU .1 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI .2 Chương TỔNG QUAN .3 2.1 Sơ Lược Về Bệnh Gan Thận Mủ 2.1.1 Lịch sử bệnh số nghiên cứu bệnh E ictaluri gây .3 2.1.2 Tác nhân gây bệnh 2.1.3 Dịch tễ bệnh .5 2.1.4 Dấu hiệu bệnh lý 2.1.5 Phòng bệnh 2.1.6 Trị bệnh 2.2 Sơ Lược Về Miễn Dịch Học Ở Cá Xương .7 2.2.1 Miễn dịch không đặc hiệu (miễn dịch tự nhiên) 2.2.2 Miễn dịch đặc hiệu (miễn dịch thu được) 10 2.2.3 Các đáp ứng miễn dịch niêm mạc 12 2.3 Sản phẩm Sangrovit® 12 v 2.3.1 Cây Plume poppy (Macleaya cordata) 12 2.3.2 Sanguinarine 13 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 18 3.1 Thời gian địa điểm 18 3.2 Nội dung nghiên cứu 18 3.3 Vật liệu nghiên cứu 18 3.3.1 Ðối tượng nghiên cứu 18 3.3.2 Dụng cụ hóa chất thí nghiệm 19 3.3.3 Nguồn nước 20 3.3.4 Thức ăn 20 3.4 Phương Pháp Nghiên Cứu 20 3.4.1 Nuôi tăng trưởng theo dõi sức khỏe cá trước gây cảm nhiễm 20 3.4.2 Phương pháp kiểm tra ký sinh trùng 21 3.4.3 Phương pháp chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn 22 3.4.4 Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn sống 22 3.4.5 Phương pháp gây cảm nhiễm thực nghiệm 23 3.5 Phương pháp phân tích xử lý số liệu .32 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Kết Quả Kiểm Tra Sức Khỏe Cá Trước Khi Thí Nghiệm 33 4.1.1 Kết kiểm tra ký sinh trùng 33 4.1.2 Kết kiểm tra vi khuẩn 34 4.1.3 Trọng lượng cá tiến hành thí nghiệm 34 4.1.4 Các tiêu mơi trường nước q trình thí nghiệm .34 4.2 Mật độ vi khuẩn ngâm cá .38 4.2.1 Mật độ vi khuẩn ngâm cá thí nghiệm 38 vi 4.2.2 Mật độ vi khuẩn ngâm cá thí nghiệm 38 4.3 Kết q trình gây cảm nhiễm thí nghiệm 38 4.3.1 Kết định danh vi khuẩn 38 4.3.2 Tỉ lệ cá chết nghiệm thức .41 4.3.3 Triệu chứng, bệnh tích cá thí nghiệm .43 4.4 Kết q trình gây cảm nhiễm thí nghiệm 44 4.4.1 Hoạt lực lysozyme 44 4.4.2 Khả tiêu diệt vi khuẩn Edwardsiella ictaluri huyết .47 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC .54 vii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT ESC: Enteric Septicemia of Catfish BHIA: Brain Heart Infusion Agar CFU: Colony Forming Unit cm: centimeter ctv: cộng tác viên g: gram kg: kilogram mg: milligram mL: milliliter mm: millimeter o degree Celsius µm: micrometer DO: Dissolved Oxygen pH: Potential of hydrogen NH3: Ammonia OD: Optical Density IDS 14 GNR Indentification System with 14 biochemical reationsfor C: Indentification of non fastidious Gram Negative Rods ONPG: Ortho-Nitrophenyl-β-galactoside PAD: Phenyl Alanin Deaminnase VP: Voges-poskauer LDC: Lysin decarboncylase SD: Standard deviation XHGV: Xuất huyết gốc vây XHTT: Xuất huyết tồn thân BT: Bình thường MIC: Minimal Inhibitory Concentration viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Nồng độ MIC (µg/mL) số alkaloid chiết xuất từ M cordata 15 Bảng 3.1 Sơ đồ bước thực thí nghiệm .23 Bảng 3.2 Sơ đồ bố trí gây bệnh thí nghiệm 24 Bảng 3.3 Số thứ tự đĩa giấy giếng 27 Bảng 3.4 Sơ đồ bố trí gây bệnh thí nghiệm 30 Bảng 4.1 Cường độ cảm nhiễm sán đơn chủ trung bình (sán/cung mang/cá) 33 Bảng 4.2 Trọng lượng trung bình cá trước tiến hành gây bệnh 34 Bảng 4.3 Các tiêu môi trường nước ao nuôi trước gây bệnh 35 Bảng 4.4 Kết phản ứng sinh hóa E ictaluri .40 Bảng 4.5 Tỉ lệ chết trung bình cá thí nghiệmở nghiệm thức 42 Bảng 4.6 Hoạt lực lysozyme huyết cá nghiệm thức 45 Bảng 4.7 Tỉ lệ vi khuẩn sống (%) sau tương tác với huyết 47 ix Phụ lục 3: Trọng lượng cá thí nghiệm TLTB(**) NGHIỆM TỔNG SỐ TỔNG TLTB THỨC TLBĐ(*) CON BAN ĐẦU TLC(***) SỐ CON DC1 390,6 40 9,8 2901 39 74,4 DC2 391,0 40 9,8 2789 38 73,4 DC3 391,2 40 9,8 2793 35 79,8 1.1 391,2 40 9,8 2741 37 74,1 1.2 390,4 40 9,8 3305 36 91,8 1.3 391,8 40 9,8 3301 38 86,9 2.1 389,2 40 9,7 3104 35 88,7 2.2 388,4 40 9,7 3089 37 83,5 2.3 388,8 40 9,7 3308 37 89,4 3.1 390,2 40 9,8 3182 36 88,4 3.2 389,2 40 9,7 3796 40 94,9 3.3 389,6 40 9,7 3537 37 95,6 4.1 398,8 40 10,0 3415 36 94,9 4.2 390,0 40 9,8 2819 36 78,3 4.3 390,0 40 9,8 3504 37 94,7 Ghi chú: (*) Trọng lượng ban đầu (**) Trọng lượng trung bình (***) Trọng lượng cuối CUỐI Phụ lục 4: Bảng số liệu cá chết 14 ngày thí nghiệm Ngày theo dõi Bể 10 11 12 13 14 DC1 0 0 2 0 0 DC2 0 0 2 1 0 DC3 0 0 1 0 1.1 0 0 0 1.2 0 0 0 0 1.3 0 0 0 2.1 0 0 2 0 0 2.2 0 0 2 0 0 2.3 0 0 0 3.1 0 0 1 0 0 3.2 0 2 0 0 3.3 0 2 1 0 0 4.1 0 4 1 0 4.2 0 0 1 0 0 4.3 0 0 3 1 0 0 Bể DC1 DC2 DC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 TỈ LỆ CÁ CHẾT TRONG THÍ NGHIỆM Ngày theo dõi 10 11 12 13 14 0 0 6,6667 13,333 0 0 0 0 6,6667 33,333 13,333 6,6667 13,333 6,6667 6,6667 0 0 0 13,333 33,333 6,6667 13,333 6,6667 6,6667 6,6667 0 0 0 13,333 20 26,667 6,6667 0 0 20 40 13,333 0 0 6,6667 13,333 0 0 6,6667 26,667 0 0 20 26,667 0 6,6667 13,333 26,667 20 0 0 26,667 13,333 20 0 6,6667 20 13,333 13,333 0 6,6667 26,667 0 6,6667 0 0 0 40 13,333 13,333 6,6667 13,333 6,6667 0 6,6667 0 0 33,333 6,6667 13,333 6,6667 0 0 0 0 0 6,6667 13,333 6,6667 0 0 6,6667 6,6667 6,6667 0 0 6,6667 13,333 0 0 6,6667 13,333 13,333 6,6667 6,6667 0 0 26,667 6,6667 26,667 6,6667 0 0 20 26,667 0 0 20 20 0 0 20 13,333 13,333 6,6667 13,333 13,333 6,6667 20 0 6,6667 6,6667 6,6667 6,6667 13,333 6,6667 6,6667 6,6667 Bể DC1 DC2 DC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 TỈ LỆ CÁ CHẾT CỘNG DỒN TRONG THÍ NGHIỆM Ngày theo dõi 10 11 0 0 6,6667 20 60 0 0 6,6667 40 53,333 0 0 13,333 46,667 0 0 13,333 33,333 0 0 20 60 73,333 73,333 0 0 6,6667 20 53,333 0 0 6,6667 33,333 0 0 20 46,667 0 6,6667 20 46,667 0 0 26,667 40 0 6,6667 26,667 40 53,333 53,333 0 6,6667 33,333 40 53,333 66,667 73,333 80 0 6,6667 33,333 40 66,667 73,333 73,333 80 0 0 20 46,667 66,667 73,333 80 0 0 20 40 12 13 14 73,333 86,667 93,333 93,333 93,333 93,333 93,333 73,333 80 86,667 86,667 86,667 86,667 53,333 66,667 73,333 80 86,667 86,667 86,667 86,667 60 60 66,667 66,667 60 53,333 66,667 60 73,333 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 73,333 73,333 80 80 86,667 86,667 86,667 86,667 86,667 86,667 86,667 86,667 80 80 80 80 80 66,667 73,333 86,667 93,333 93,333 93,333 93,333 93,333 60 53,333 66,667 73,333 60 60 80 80 80 80 80 80 73,333 73,333 73,333 73,333 73,333 80 80 80 80 86,667 86,667 86,667 86,667 80 80 80 80 66,667 73,333 73,333 73,333 73,333 73,333 Phụ lục 5: Bảng theo dõi bệnh tích cá bệnh qua trình thí nghiệm Ngày Nghiệm Số thức lượng NT 2.3 NT 3.2 NT 3.3 NT 4.1 XHGV(****) DC DC DC NT 1.1 NT 1.2 NT 1.3 NT 2.1 1 2 1 NT 2.2 Biểu bên ngồi XHTT(*) XHTT, tích dịch xoang bụng XH(***) đi, hàm NT 2.3 NT 3.1 NT 3.2 NT 3.3 4 BT BT XHGV BT XHGV XHGV BT Con 1: XHTT Con 2: XHGV XHTT XHGV XHTT XHTT NT 4.1 XHTT NT 4.2 NT 4.3 DC DC DC NT 1.1 NT 1.2 3 5 BT XHGV BT BT XHGV XHTT XHGV NT 1.3 XHGV NT 2.1 NT 2.2 NT 2.3 NT 3.1 NT 3.2 NT 3.3 NT 4.1 NT 4.2 4 2 1 XHGV BT XHGV XHGV XHTT XHTT XHTT XHTT NT 4.3 XHTT Gan BT(**) Biểu bên Thận Mủ nhiều Lách BT Phân lập Có Định danh Có Nhạt màu Mủ nhiều Mủ nhiều Có Có BT Mủ BT Có Có Sung huyết, có mủ BT BT Mủ Nhạt màu Nhạt màu Mủ Nhạt màu Mủ nhiều Teo,nhạt màu Có Có Mủ Mủ Sưng,mủ Mủ Sưng, mủ Mủ Sưng, mủ BT BT Nhạt màu, mủ Nhạt màu Mủ Mủ Mủ Có Có Có Có Có Có Có Khơng Khơng Có Khơng Có Có Có Nhạt màu Sưng,mủ Nhạt màu Có Có BT Mủ Sưng,mủ Không Không Nhạt màu Sưng,mủ Mềm nhũn Sưng Có Có Có Có Khơng Khơng Có Có BT Mủ Sưng, mủ Sưng,mủ nhiều Mềm nhũn Mủ Sưng Mủ Nhạt màu, Mủ sung huyết Nhạt màu Mủ Nhạt màu Sưng, mủ BT Mủ BT Mủ Sưng, mủ Sưng,mủ nhiều Mềm nhũn Mủ BT Mủ Sưng, mủ Mủ nhiều Sưng Mủ BT Mủ Mủ Sưng,mủ Sưng, mủ Sưng,mủ nhiều Mềm nhũn Mủ Sưng Mủ Nhạt màu Mủ Sưng Mủ Sưng, mủ BT nhiều Nhạt màu, mủ Có Có Nhạt màu Mủ BT BT Sưng,mủ Mềm nhũn BT Có Có Có Có Có Khơng Có Khơng Có Khơng Khơng Có Khơng Khơng Sưng Có Có Sưng Có Có BT Có Khơng Nhạt màu, mủ Có Có Sưng,mủ Có Có Mềm nhũn Khơng Khơng Sưng Có Có Nhạt màu, mủ Có Có Sưng Có Có Nhạt màu, mủ Có Khơng Ngày Nghiệm Số thức lượng DC DC 2 DC NT 1.1 NT 1.2 NT 1.3 NT 2.1 NT 2.2 NT 2.3 NT 3.1 NT 3.2 NT 3.3 3 2 Biểu bên XHGV XHGV XHGV BT XHGV XHGV XHGV Con 1: XHGV Con 2: XHTT XHTT XHGV XHTT XHTT NT 4.1 XHTT NT 4.2 NT 4.3 BT XHGV DC BT DC DC NT 1.1 NT 1.3 1 BT XHGV XHGV XHGV NT 2.1 XHTT NT 2.2 XHTT NT 2.3 NT 3.1 1 XHGV XHGV NT 3.3 XHTT NT 4.1 XHGV NT 4.2 NT 4.3 1 XHTT XHTT DC BT DC 2 BT DC XHGV NT 1.2 XHGV NT 1.3 XHGV NT 2.1 XHGV Biểu bên Gan Thận Lách Sưng Mủ Sưng Sưng Mủ Sưng Sưng Mủ Sưng Nhạt màu Mủ Nhạt màu Nhạt màu Sưng, mủ Mủ Mủ Mủ Mủ Nhạt màu Mủ Nhạt màu Mủ Sưng, mủ Mủ Phân lập Có Có Có Có Có Có Có Định danh Khơng Khơng Khơng Khơng Có Có Khơng Có Có Nhạt màu, Sưng, mủ Mủ Có Có mủ nhiều Sưng Mềm nhũn Sưng Có Khơng Sưng, mủ Sưng,mủ nhiều Sưng,mủ Có Có Mềm nhũn Mủ Mềm nhũn Khơng Khơng Sưng Mủ Sưng Có Có Nhạt màu, Mủ Nhạt màu, mủ Có Có sung huyết Nhạt màu Mủ Nhạt màu Có Khơng Nhạt màu Sưng, mủ Mủ Có Có Thận mềm Nhạt màu Nhạt màu Có Có nhũn Nhạt màu Mủ BT Có Có BT Mủ nhiều Mủ nhiều Có Có Nhạt màu Sưng Nhạt màu Có Khơng BT Mủ nhiều Mủ nhiều Có Có Sưng, mủ Nhạt màu Mủ nhiều Có Có nhiều Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Sung huyết Có Khơng nhiều nhiều Nhạt màu Sưng, mủ Mủ Có Có Nhạt màu Mềm nhũn Nhạt màu Có Khơng Nhạt màu, Sưng, mủ Mủ Có Có mủ Nhạt màu, Mềm nhũn, mủ Nhạt màu Có Khơng mủ ít Nhạt màu Mủ nhiều Mủ nhiều Có Có Nhạt màu Mủ nhiều Mủ nhiều Có Có Nhạt màu, Sưng, mủ Mủ Có Có mủ nhiều Nhạt màu Sưng Nhạt màu Có Khơng Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có Có mủ nhiều Nhạt màu, Mềm nhũn, mủ Mủ Có Có mủ ít Sưng, mủ Nhạt màu Mủ Có Có nhiều Nhạt màu, Mềm nhũn, mủ Mủ Có Khơng Ngày Nghiệm Số thức lượng Biểu bên NT 2.2 XHGV NT 2.3 BT NT 3.1 XHGV NT 3.2 XHTT NT 3.3 XHGV NT 4.2 XHGV NT 4.3 XHTT DC 1 XHGV DC XHGV DC XHGV NT 1.1 XHGV NT 2.1 BT NT 2.3 XHGV NT 3.1 XHGV NT 3.2 XHGV NT 3.3 XHGV NT 4.1 XHGV NT 4.3 XHGV DC 2 XHTT DC XHGV NT 1.3 XHGV NT 4.1 XHGV NT 1.1 XHGV 10 11 12 Biểu bên Phân lập Gan Thận Lách mủ ít Nhạt màu, Mềm nhũn, mủ Nhạt màu Có mủ ít Nhạt màu Mềm nhũn Nhạt màu, mủ Có Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ Sưng Mềm nhũn Sưng Có Nhạt màu, Sưng, mủ Mủ Có mủ Mềm nhũn, Mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Nhạt màu, Sưng, mủ Mủ nhiều Có mủ nhiều Mềm nhũn, Mủ Nhạt màu, mủ Khơng mủ nhiều Mềm nhũn, Mủ Nhạt màu, mủ Khơng mủ nhiều Mủ Mủ nhiều Nhạt màu, mủ Có Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Nhạt màu Mềm nhũn Nhạt màu, mủ Có Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ Mủ Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có Sưng, mủ Sưng, mủ Sưng,mủ Có nhiều Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Khơng mủ nhiều Sung huyết, Mủ nhiều Teo,nhạt màu Có có mủ Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ Mềm nhũn, Mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Mềm nhũn, Mủ Nhạt màu, mủ Có mủ nhiều Nhạt màu, Sưng, mủ Nhạt màu, mủ Có mủ Ghi chú: (*) Xuất huyết tồn thân (***) Xuất huyết (**) Bình thường (****) Xuất huyết góc vây Định danh Khơng Có Có Khơng Có Khơng Có Khơng Khơng Có Khơng Có Có Khơng Có Khơng Có Có Khơng Có Có Khơng Có Phụ lục 6: Hoạt lực lysozyme q trình thí nghiệm Lysozyme 0h NT SAU 1' SAU 5' ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 Sự giảm mật độ quang 0,678 0,713 0,770 0,795 0,711 0,708 0,709 0,691 0,690 0,710 0,758 0,730 0,683 0,786 0,749 0,643 0,644 0,710 0,755 0,647 0,660 0,634 0,643 0,638 0,656 0,717 0,663 0,635 0,719 0,687 0,035 0,069 0,060 0,040 0,064 0,048 0,075 0,048 0,052 0,054 0,041 0,067 0,048 0,067 0,062 Hoạt lực lysozyme 0h 87,50 172,50 150,00 100,00 160,00 120,00 187,50 120,00 130,00 135,00 102,50 167,50 120,00 167,50 155,00 Lysozyme 72h NT SAU 1' SAU 5' ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 Sự giảm mật độ quang Hoạt lực lysozyme 72h 0,597 0,608 0,625 0,599 0,630 0,583 0,579 0,611 0,596 0,672 0,630 0,654 0,566 0,594 0,578 0,517 0,548 0,571 0,518 0,532 0,501 0,478 0,475 0,457 0,522 0,486 0,490 0,481 0,412 0,438 0,080 0,060 0,054 0,081 0,098 0,082 0,101 0,136 0,139 0,150 0,144 0,164 0,085 0,182 0,140 200,000 150,000 135,000 202,500 245,000 205,000 252,500 340,000 347,500 375,000 360,000 410,000 212,500 455,000 350,000 Lysozyme 24h NT SAU 1' SAU 5' ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 Sự giảm mật độ quang Hoạt lực lysozyme 24h 0,741 0,663 0,665 0,675 0,682 0,681 0,659 0,708 0,679 0,701 0,736 0,693 0,665 0,739 0,711 0,700 0,598 0,595 0,616 0,600 0,637 0,588 0,651 0,618 0,626 0,663 0,659 0,638 0,648 0,639 0,041 0,065 0,070 0,059 0,082 0,044 0,071 0,057 0,061 0,075 0,073 0,034 0,027 0,091 0,072 102,50 162,50 175,00 147,50 205,00 110,00 177,50 142,50 152,50 187,50 182,50 85,00 67,50 227,50 180,00 Phụ lục 7: Kết tiêu diệt vi khuẩn huyết Ở NT ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 NT ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 Số khuẩn lạc 200 140 220 187 Trung bình Bactericidal activity (% cfu/control) 200 12,66 180 21,40 187 18,34 163 183 173 24,45 153 146 149,5 34,72 175 136 155,5 32,10 199 164 181,5 20,74 200 220 210 8,30 114 148 131 42,79 180 148 164 28,38 180 139 159,5 30,35 166 191 178,5 22,05 112 189 150,5 34,28 174 245 209,5 8,52 189 99 Số khuẩn lạc 185 169 152 153 183 132 155 219 146 172 144 Ở 72 37,12 Trung bình 185 161 168 144 Bactericidal activity (% cfu/control) 19,21 29,91 26,64 37,34 183 20,31 172 24,89 130 180 155 32,31 133 196 165 28,17 139 131 135 41,05 141 38,43 141 194 76 135 41,05 156 159 158 31,22 141 170 156 32,10 121 47,16 172 24,89 121 199 145 NT ĐC1 ĐC2 ĐC3 1.1 1.2 1.3 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 4.1 4.2 4.3 Ở 24 Trung bình Bactericidal activity (% cfu/control) 187 187 18,34 173 129 151 34,06 151 110 131 43,01 183 196 190 17,25 100 138 119 48,03 158 84 121 47,16 130 80 105 54,15 130 120 125 45,41 240 139 190 17,25 141 38,43 Số khuẩn lạc 141 176 150 163 28,82 138 145 142 38,21 128 44,10 128 174 167 171 25,55 106 110 108 52,84 Phụ lục 8:Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 trọng lượng đầu Dependent Variable: trongluongdau Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.01857333 0.00464333 1.37 0.3105 Error 10 0.03380000 0.00338000 Corrected Total 14 0.05237333 R-Square Coeff Var Root MSE trongluongdau Mean 0.354633 0.595145 0.058138 9.768667 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F treatment 0.01857333 0.00464333 1.37 0.3105 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for trongluongdau NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.00338 Number of Means Critical Range 1058 1105 1133 1151 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 9.82333 NT4 A A 9.78000 NT1 A A 9.77667 ĐC A A 9.74333 NT3 A A 9.72000 NT2 Phụ lục 9: Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 trọng lượng cuối Dependent Variable: trongluongcuoi Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 499.5640000 124.8910000 2.94 0.0758 Error 10 424.5800000 42.4580000 Corrected Total 14 924.1440000 R-Square Coeff Var Root MSE trongluongcuoi Mean 0.540569 7.583776 6.515980 85.92000 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F treatment 499.5640000 124.8910000 2.94 0.0758 Duncan's Multiple Range Test for trongluongcuoi Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 42.458 Number of Means Critical Range 11.85 12.39 12.70 12.90 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 92.967 NT3 A A 89.300 NT4 A B A 87.200 NT2 B A B A 84.267 NT1 B B 75.867 ĐC Phụ lục 10: Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 tỈ lệ chết Dependent Variable: tylechet Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 254.8829733 63.7207433 2.39 0.1204 10 266.7112000 26.6711200 14 521.5941733 Coeff Var Root MSE tylechet Mean 6.213844 5.164409 83.11133 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 254.8829733 63.7207433 2.39 0.1204 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for tylechet NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 26.67112 Number of Means Critical Range 9.40 9.82 10.07 10.23 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 88.890 ĐC A B A 86.667 NT2 B A B A 82.223 NT1 B A B A 80.000 NT4 B B 77.777 NT3 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.488661 Source treatment Phụ lục 11: Thống kê hoạt lực lysozyme Minitab 16 SAS V8 PHẦN MỀM MINITAB 16 One-way ANOVA: LYSOZYME 0h versus NT Source DF SS MS F P NT 871 218 0.19 0.941 Error 10 11725 1172 Total 14 12596 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT4 147.50 A NT2 145.83 A DC 136.67 A NT3 135.00 A NT1 126.67 A One-way ANOVA: LYSOZYME 24h versus NT Source DF SS MS F P NT 269 67 0.02 0.999 Error 10 28417 2842 Total 14 28686 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT4 158.33 A NT2 157.50 A NT1 154.17 A NT3 151.67 A DC 146.67 A One-way ANOVA: LYSOZYME 72h versus NT Source DF SS MS F P NT 98464 24616 6.16 0.009 Error 10 39929 3993 Total 14 138393 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT3 381.67 A NT4 339.17 A NT2 313.33 A B NT1 217.50 A B DC 161.67 B One-way ANOVA: GIAM MD QUANG 0h versus NT Source DF SS MS F P NT 0.000139 0.000035 0.19 0.941 Error 10 0.001876 0.000188 Total 14 0.002015 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT4 0.05900 A NT2 0.05833 A DC 0.05467 A NT3 0.05400 A NT1 0.05067 A One-way ANOVA: GIAM MD QUANG 24h versus NT Source DF SS MS F P NT 0.000043 0.000011 0.02 0.999 Error 10 0.004547 0.000455 Total 14 0.004590 Pooled StDev = 0.02132 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT4 0.06333 A NT2 0.06300 A NT1 0.06167 A NT3 0.06067 A DC 0.05867 A One-way ANOVA: GIAM MD QUANG 72h versus NT Source DF SS MS F P NT 0.015754 0.003939 6.16 0.009 Error 10 0.006389 0.000639 Total 14 0.022143 Pooled StDev = 0.02528 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping NT3 0.15267 A NT4 0.13567 A NT2 0.12533 A B NT1 0.08700 A B DC 0.06467 B PHẦN MỀM SAS V8 Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 Lysozyme 0h Dependent Variable: lysozyme0h Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 1120.83333 280.20833 0.27 0.8902 Error 10 10350.00000 1035.00000 Corrected Total 14 11470.83333 R-Square Coeff Var Root MSE lysozyme0h Mean 0.097712 23.54006 32.17142 136.6667 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr >F Ftreatment 1120.833333 280.208333 0.27 0.8902 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for lysozyme0h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 1035 Number of Means Critical Range 58.53 61.16 62.71 63.70 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 147.50 A A 145.83 3 A A 135.00 A A 128.33 A A 126.67 Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 Lysozyme sau 24h Dependent Variable: lysozyme24h Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 3002.50000 750.62500 0.52 0.7210 Error 10 14333.33333 1433.33333 Corrected Total 14 17335.83333 R-Square Coeff Var Root MSE lysozyme24h Mean 0.173196 23.13201 37.85939 163.6667 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F treatment 3002.500000 750.625000 0.52 0.7210 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for lysozyme24h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 1433.333 Number of Means Critical Range 68.88 71.98 73.80 74.97 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 185.00 A A 175.00 A A 157.50 3 A A A A 154.17 146.67 Kết xử lý thống kê phần mềm SAS V.8 Lysozyme sau 72h Dependent Variable: lysozyme72h Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 98464.1667 24616.0417 6.16 0.0091 Error 10 39929.1667 3992.9167 Corrected Total 14 138393.3333 R-Square Coeff Var Root MSE lysozyme72h Mean 0.711481 22.35479 63.18953 282.6667 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F treatment 98464.16667 24616.04167 6.16 0.0091 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for lysozyme72h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 3992.917 Number of Means Critical Range 115.0 120.1 123.2 125.1 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 381.67 A A 339.17 A B A 313.33 3 B B C 217.50 C C 161.67 Phụ lục 12: Thống kê khả diệt khuẩn huyết Dependent Variable: bactericidal0h Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 279.006493 69.751623 0.55 0.7026 10 1264.819667 126.481967 14 1543.826160 Coeff Var Root MSE bactericidal0h Mean 44.92099 11.24642 25.03600 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 279.0064933 69.7516233 0.55 0.7026 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for bactericidal0h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 126.482 Number of Means Critical Range 20.46 21.38 21.92 22.27 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 30.423 A A 26.927 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.180724 Source treatment A A A A A A 26.420 23.943 3 17.467 Dependent Variable: bactericidal24h Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 146.815693 36.703923 0.17 0.9471 10 2118.464400 211.846440 14 2265.280093 Coeff Var Root MSE bactericidal24h Mean 39.50782 14.55495 36.84067 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 146.8156933 36.7039233 0.17 0.9471 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for bactericidal24h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 211.8464 Number of Means Critical Range 26.48 27.67 28.37 28.82 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 40.83 A A 38.94 3 A A 37.48 A A 35.15 A A 31.80 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.064811 Source treatment Dependent Variable: bactericidal72h Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 299.4207067 74.8551767 1.22 0.3607 10 612.0090667 61.2009067 14 911.4297733 Coeff Var Root MSE bactericidal72h Mean 24.72118 7.823101 31.64533 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 299.4207067 74.8551767 1.22 0.3607 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for bactericidal72h Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 61.20091 Number of Means Critical Range 14.23 14.87 15.25 15.49 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N treatment A 36.900 A A 34.717 A A 33.843 3 A A 27.513 A A 25.253 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.328518 Source treatment ... Eicosanoids bao gồm prostaglandin, thromboxane leukotriene Leukotriene lipoxin làm gia tăng thực bào hoạt động chất hấp dẫn hóa học bạch cầu trung tính (Rowley, 1991; Secombes, 1996) 2.2.1.3 Các yếu... khuẩn gây bệnh cá Plecoglossus altivelis 2.1.2 Tác nhân gây bệnh 2.1.2.1 Phân loại Edwardsiella ictaluri thuộc: Ngành: Proteobacteria Lớp: Gamma proteobacteria Bộ: Enterobacteriales Họ: Enterobacteriaceae... để nhận biết tình trạng viêm nhiễm thể; Do gan tiết ra, có viêm tiết nhiều hơn), lectins glubulin miễn dịch (Fletcher, 1982; Ellis, 1989; Yano, 1996) Các loại bạch cầu cá nhìn chung tương tự