Một trong những tác nhân truyền nhũng bệnh hiểm nghèo cho người như sốt rét, sốt xuất huyết, viêm n•o Nhật Bản… là do muỗi gây ra. Muỗi sinh trưởng và phát triển rất tốt ở những vùng có điều kiện thuận lợi cho nhiều loài côn trùng phát triển như những vùng nhiệt đới trong đó có Việt Nam . Theo thống kê của Tổ chức Y tế thế giới (WHO) thì hàng năm, trên Việt Nam thế giới có tới hàng triệu trường hợp mắc các bệnh do muỗi truyền. Riêng ở Việt Nam , theo thống kê 6 tháng đầu năm 2001vẫn còn 126.000 ca sốt rét, 8.700 ca sốt xuất huyết, trong đó 20-25% ca tử vong và 60-70% để lại di chứng. Các bệnh hiểm nghèo do muỗi truyền đ• có mặt ở hầu hết các tỉnh thành trong cả nước làm ảnh hưởng đến tình hình kinh tế x• hội. Bên cạnh đó, sự tiềm ẩn nguy cơ bùng nổ thành dịch do hiện tượng kháng thuốc của côn trùng làm cho các nhà quản lý phải có những nỗ lực để thanh toán các bệnh trên. Sở dĩ có những nguy cơ đó là do một thời gian khá dài từ trước những năm đầu của thập kỉ 80, chúng ta đ• sử dụng thường xuyên các hoá chất độc thuộc nhóm lân hữu cơ, các chất thuộc nhóm Pyrethroid để tẩm nhuộm màn. Điều này không những phá vỡ cân bằng sinh thái, gây hiện tượng bùng nổ côn trùng do kháng thuốc mà còn ảnh hưởng tới sức khoẻ con người. Loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis (Bti) được phát hiện vào năm 76 tại Israel có khả năng diệt muỗi đ• mở ra một triển vọng mới cho việc kiểm soát các vectơ truyền bệnh hiểm nghèo cho người. Nhiều chế phẩm sinh học diệt muỗi từ Bacillus thuringiensis var.israelensis đ• được sản xuất và ứng dụng thành công như Bactimos (Bỉ), Skeetan (Anh), Vectobac (Mỹ)… Theo tổ chức Y tế thế giới thì việc sử dụng chế phẩm sinh học diệt muỗi từ các chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis là một biện pháp rất an toàn và hiệu quả.
Mở Đầu Một trong những tác nhân truyền nhũng bệnh hiểm nghèo cho ngời nh sốt rét, sốt xuất huyết, viêm não Nhật Bản là do muỗi gây ra. Muỗi sinh trởng và phát triển rất tốt ở những vùng có điều kiện thuận lợi cho nhiều loài côn trùng phát triển nh những vùng nhiệt đới trong đó có Việt Nam . Theo thống kê của Tổ chức Y tế thế giới (WHO) thì hàng năm, trên Việt Nam thế giới có tới hàng triệu trờng hợp mắc các bệnh do muỗi truyền. Riêng ở Việt Nam , theo thống kê 6 tháng đầu năm 2001vẫn còn 126.000 ca sốt rét, 8.700 ca sốt xuất huyết, trong đó 20-25% ca tử vong và 60-70% để lại di chứng. Các bệnh hiểm nghèo do muỗi truyền đã có mặt ở hầu hết các tỉnh thành trong cả nớc làm ảnh hởng đến tình hình kinh tế xã hội. Bên cạnh đó, sự tiềm ẩn nguy cơ bùng nổ thành dịch do hiện tợng kháng thuốc của côn trùng làm cho các nhà quản lý phải có những nỗ lực để thanh toán các bệnh trên. Sở dĩ có những nguy cơ đó là do một thời gian khá dài từ trớc những năm đầu của thập kỉ 80, chúng ta đã sử dụng thờng xuyên các hoá chất độc thuộc nhóm lân hữu cơ, các chất thuộc nhóm Pyrethroid để tẩm nhuộm màn. Điều này không những phá vỡ cân bằng sinh thái, gây hiện tợng bùng nổ côn trùng do kháng thuốc mà còn ảnh hởng tới sức khoẻ con ngời. Loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis (Bti) đợc phát hiện vào năm 76 tại Israel có khả năng diệt muỗi đã mở ra một triển vọng mới cho việc kiểm soát các vectơ truyền bệnh hiểm nghèo cho ngời. Nhiều chế phẩm sinh học diệt muỗi từ Bacillus thuringiensis var.israelensis đã đợc sản xuất và ứng dụng thành công nh Bactimos (Bỉ), Skeetan (Anh), Vectobac (Mỹ) Theo tổ chức Y tế thế giới thì việc sử dụng chế phẩm sinh học diệt muỗi từ các chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis là một biện pháp rất an toàn và hiệu quả. ở nớc ta, việc nghiên cứu về Bacillus thuringiensis var.israelensis mới chỉ bắt đầu từ một vài năm gần đây nhng cũng đã thu đợc những kết quả đáng kể. Nhiều chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis có hoạt lực cao đã đợc phân lập, một vài dòng gen đã đợc nghiên cứu tách dòng, đọc trình tự và biểu hiện. Chúng ta cũng đã bớc đầu thử nghiệm thành công chế phẩm trong phạm vi phòng thí 1 nghiệm. Tuy nhiên việc sản xuất và ứng dụng chế phẩm diệt muỗi từ Bacillus thuringiensis var.israelensis cần phải đợc nghiên cứu thêm nữa. 2 Phần I:Tổng quan về Bacillus thuringiensis 1.1. Tóm tắt về lịch sử nghiên cứu và ứng dụng của Bacillus thuringiensis Lịch sử về Bacillus thuringiensis bắt đầu từ khi Loius Pasteur phát hiện thấy một loài vi khuẩn có khả năng gây bệnh cho tằm ông đặt tên là Bacillus bombyces. Năm 1901, Ishiwata phân lập ra một loại vi khuẩn từ ấu trùng tằmbị bệnh và đặt tên là Bacillus sotto, năm 1911, Berliner đã phân lập đợc một loại vi khuẩn tơng tự từ xác ấu trùng bớm ĐịaTrung Hải. Đến năm 1915, vi khuẩn này chính thức mang tên Bacillus thuringiensis . Năm 1928, Huszddax phân lập chủng B.thuringiensis (Bt ) từ Ephestia, thử nghiệm nó trên sâu đục thân ngô ở Châu Âu, đây đợc coi là ứng dụng đầu tiên của Bacillus thuringiensis .Chế phẩm thơng mại đầu tiên , Sporeine, đợc sản xuất ở Pháp năm 1938. Năm 1951-1956 Steinhaus nghiên cứu khả năng diệt côn trùng của Bacillus thuringiensis và đã sản xuất ở Mỹ. Trong suốt những năm 1960, nhiều chế phẩm thơng mại của Bt đã đợc sản xuất ở nhièu quy mô khác nhau tại Mỹ, Pháp, Đức.Sau đó Howard Dulmage và Clayton Beesle của viện nghiên cứu Nông Nghiệp USDA đã thu thập đợc bộ su tầm đầu tiên về các chủng Bt. Năm 1970, Dulmage đã phân lập đợc chủng HD-1 và cho đến nay nó vẫn đợc sử dụng cho nhiều nghiên cứu và trong chế phẩm Bt. Thập niên 80, nhiều công ty sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh đã đăng ký sản xuất và kinh doanh các chế phẩm BT. Đầu những năm 90 tại một số quốc gia nh Cuba, Trung Quốc, Mỹ đẫ sản xuất chế phẩm BT ở quy mô công nghiệp. Ngày nay một số lợng lớn thơng phẩm trừ sâu sinh học BT đợc sử dụng trong việc kiểm soát ấu trùng bộ cánh vẩy, hai cánh và cánh cứng 1.2. Sự phân bố của B.thuringiensis Bacillus thuringiensis tồn tại ở khắp mọi nơi trong đất và trên bề mặt lá, ở đất rừng, thảo nguyên, sa mạc hay ở môi trờng có điều kiện thuận lợi cho sâu bọ phát triển nh bụi hạt từ các nhà máy xay lúa mì, trong các kho bảo quản ngũ cốc 3 Sự phân bố của Bt là không liên quan đến sự phân bố của côn trùng đích. Tuy nhiên ,Bt thờng có xu hớng tồn tại nhiều trong môi tròng có nhiều sâu bọ phát triển và giàu dinh dỡng.Có thể phân lập Bt từ nhiều loại môi trờng khác nhau. Bt dễ dàng phát triển trong môi trờng thí nghiệm chỉ với một lợng tối thiểu chất dinh dỡng. Mặc dù bào tử Bt tồn tại trong nhiều năm, nhng chúng không nảy mầm và nhân lên nh các tế bào sinh dỡng trong đất tự nhiên. Điều này chứng tỏ rằng Bt không thích nghi với môi trờng đất. 1.3. Đặc điểm sinh thái của B.thuringiensis B.thuringiensis là thành viên của nhóm I, chi Bacillus. Đây là loại vi khuẩn sinh bào tử, Gram dơng, hô hấp hiếu khí hoặc hiếu khí không bắt buộc. Tế bào có kích thớc 3x6 à m, có phủ tiêm mao không dày, có khả năng chuyển động , tế bào đứng riêng rẽ hoặc xếp thành chuỗi. Là một loài thuộc chi Bacillus nên khi gặp điều kiện không thuận lợi nh thiếu dinh dỡng, nhiệt độ cao, khô hạnBt có khả năng sinh nội bào tử giúp cho chúng chống chịu với điều kiện khắc nghiệt đó. Bào tử của vi khuẩn có dạng hình trứng với kích thớc 1,5x2 à m và có thể nảy mầm thành tế bào sinh dỡng khi có điều kiện thuận lợi. Sự hình thành bào tử diễn ra đồng thời với sự tạo thành protein tinh thể có khả năng diệt côn trùng. Tinh thể có nhiều hình dạng khác nhau ( hình vuông, chữ nhật, hình tháp, hình ôvan hoặc vô định hình ). Khi tế bào phân giải tinh thể và bào tử đợc giải phóng ra ngoài. Tinh thể có kích thớc khoảng 0,6x0,2 à m, và có thể chiếm tới 30% trọng lợng khô của tế bào. Tinh thể này đợc gọi là thể vùi. Tinh thể và bào tử có thể quan sát dới kính hiển vi đối pha ở vật kính đầu. Tinh thể bắt màu sẫm còn bào tử không bắt màu nhng có mép sáng. Hình dạng của tinh thể đợc quyết định bởi gen mã hoá cho tổng hợp protein của tinh thể nằm trên plasmid. 1.4. Đặc điểm sinh hoá của B.thuringiensis Nói chung B.thuringiensis không lên men sinh axít đối với arabinoza, xiloza, và manitol,khử nitơrat thanh nitơrit, có phản ứng với lòng đỏ trứng gà, phát 4 triển đợc trong môi trờng thạch kị khí có chứa 1% lizozym. Sinh trởng tốt nhất ở nhiệt độ 28-30 0 C, pH 6,8-7,2. 1.5.Phân loại B.thuringiensis Bt đợc chia làm nhiều loại phụ dựa trên các đặc điểm sau: + Khả năng hình thành enzym leucitinase. + Cấu trúc tinh thể và khả năng gây bệnh cho côn trùng. + Đặc tính huyết thanh học. + Phản ứng ngng kết của các tế bào sinh dỡng với các huyết thanh t- ơng ứng. Cho đến nay phơng pháp phân loại Bt đợc sử dụng khá phổ biến là dựa trên các đặc tính huyết thanh học. Đặc tính huyết thanh học của chủng Bt đợc xác định chủ yếu dựa trên kháng nguyên tiên mao H và đợc tiến hành bằng phản ứng ngng kết các tế bào sinh dỡng với các kháng huyết thanh tơng ứng. Tuy nhiên việc phân loại chỉ dựa trên typ huyết thanh vẫn cha phản ánh đợc mối liên hệ giữa chủng giống và hoạt lực diệt côn trùng. Viẹc phân lập và tuyển chọn các chủng Bt có giá trị vẫn gặp khó khăn. Chính vì vậy, gần đây một số nhà khoa học đã đề nghị đa ra phơng pháp phân loại mới dựa trên kết quả xác định typ huyết thanh, hình dạng tinh thể, hoạt lực diệt côn trùng, gen Cry và thành phần protein tinh thể, hình dạng tinh thể và hoạt lực diệt côn trùng. 5 Bảng 1: Quan hệ giữa các lớp Cry, hình dạng tinh thể, thành phần protein và hoạt lực diệt côn trùng. Lớp gen Thành phần Protein (KDa) Hình dạng tinh thể Typ huyết thanh Hoạt lực diệt côn trùng Cry1A Cry1B Cry1C Cry1D Cry1E 131 138 135 133 133 Tháp đôi Tháp đôi Tháp đôi Tháp đôi Tháp đôi 1 3 6 7 8 Cánh vẩy Cánh vẩy Cánh vẩy Cánh vẩy Cánh vẩy Cry2A Cry2B 71 71 Tròn Tròn 3 3 Cánh vẩy, hai cánh Cánh vẩy Cry3A Cry3B Cry3C Cry3D 73 74 129 73 Tháp đôi Tháp đôi Tháp đôi Tháp đôi 8 8 8 8 Cánh cứng Cánh cứng Cánh cứng Cánh cứng Cry4A Cry4B Cry4C Cry4D 135 128 78 67 Hình cầu Hình cầu Hình cầu Hình cầu 14 14 14 14 Hai cánh Hai cánh Hai cánh Hai cánh Cry5 81 Tháp đôi 3 Cánh vẩy, cánh cứng Cry6 ? ? ? Giun tròn CytA 28 14 1.6.Các loại độc tố do B.thuringiensis sinh ra Trong quá trình hình thành bào tử Bt có khả năng sinh ra 4 loại độc tố: +-Exotoxin hay ngoại đọc tố A Năm 1954 lần đầu tiên Tomanaff phát hiện thấy vi khuẩn Bt var.elesti sản sinh ra enzym leucintinase. Tác động độc của enzym này liên quan đến sự phân 6 huỷ mang tính chất cảm ứng của phospholopit trong mô của côn trùng, làm côn trùng chết.Enym này lần đầu tiên liên kết với tế bào ruột sau đó tách ra và đợc hoạt hoá bởi một chất không bền nhiệt. Chất này có trọng lợng phân tử thấp, có thể là lipit. -Exotoxin có khả năng hoà tan vào nớc và đặc biệt chỉ tác động vào loài ong xẻ có pH đờng ruột phù hợp với hoạt đông của enzym này. -Exotoxin cũng có hiệu lực với sâu thuộc bộ cánh cứng, cánh vẩy +-Exotoxin hay ngoại đọc tố B Đọc tố này bền nhiệt ở 120 0 C trong vòng 15 phút vẫn giữ đợc hoạt tính. Một số Bt không sinh ra tinh thể độc nhng có thể sinh ra ngoại độc tố . Hoạt tính của ngoại độc tố bắt đầu xuất hiện trong giai đoạn phát triển mạnh trớc khi hình thành bào tử. Ngoại độc tố là một nucleotid có trọng lợng phân tử thấp. Ngoại độc tố còn có tác dụng cộng hởng với nội độc tố , sau khi có tác dụng gây dập vỡ, phá huỷ hoàn toàn biểu mô ruột giữa của ôn trùng mẫn cảm, ngoại độc tố nhanh chóng xâm nhập vào huyết tơng và máu gây thay đổi sinh lý dẫn tới cái chết nhanh của côn trùng. +-exotoxin hay độc tố tan trong nớc -exotoxin thuộc nhóm photpholipaza, nó tác động lên photpholipit và giải phóng ra axit béo -exotoxin có chứa các peptid với trọng lợng phân tử thấp và một số axitamin tự do. Ngoại độc tố này tan trong nớc, không ổn định, mẫn cảm với ánh sáng, oxy, không khí và nhiệt độ. +-endotoxin (tinh thể độc) Đặc điểm quan trọng nhất của vi khuẩn Bt là có khả năng tạo thành trong té bào một loại tinh thể có bản chất là protein độc tính đối với nhiều loại côn trùng. Nội độc tố là một loại protein kết tinh từ 1180 gốc axitamin. Các axitamin chủ yếu gồm axit glutamic, axit asparaginic chiếm trên 29% tổng số axitamin trong phân tử protein, là nguyên nhân gây điểm đẳng điện thấp. Nguyên tố của tinh thể, ngoài C, H, O, N, S còn thấy một số nguyên tố khác nh là Ca, Mg, Si, Fe với một lợng nhỏ Ni, Zn, Al và hầu nh không có P. 7 Sự tổng hợp tinh thể xẩy ra khoảng 3 giờ sau pha cân bằng. Mỗi tế bào sinh bào tử chỉ có thể có từ 1 đến 3 tinh thể độc. Tinh thể độc không tan trong dung môi hữu cơ. Có những tinh thể khi mới tách khỏi bào tử chỉ tan trong pH rất kiềm. Tinh thể đọc rất bền nhiệt,ủ 1 giờ ở 65 0 C vẫn không bị mất hoạt tính, tính độc chỉ mất đi nếu ủ ở 100 0 C trong 30-40 phút. 1.7. Phân loại gen độc tố diệt côn trùng của B.thuringiensis Ngày nay ngời ta đã phân tích 50 gen độc tố của Bt và nhận thấy một số hoàn toàn giống nhau, đại diện cho cùng một gen hay biến dạng từ một gen. Trong đó có khoảng 20 gen phân biệt chịu trách nhiệm tổnh hợp các protein tinh thể, nhất là các protein tinh thể độc. Bảng 2. Phân loại gen độc tố và phổ tác dụng của Bt Tên độc tố Trọng lợng phân tử, kDa Côn trùng đích Chủng Bacillusthuringiensis Hình dạng tinh thể Cry1A(a, b, c) Cry1B Cry1C Cry1D, E, F 130-133 138 135 130-134 Cánh vẩy Cánh vẩy Hai cánh Hai cánh B. berliner B. kurstaki KTO B. entomocidus B. aizawai Lỡng tháp Cry2A Cry2B, C 71 71 Cánh vẩy Hai cánh B. aizawai B. kurstaki HD-1 Lập ph- ơng Cry3A, B, C, D 66-73 Cánh cứng B. tenebrionis Thoi dẹt Cry4A, B Cry4C, D 125-140 68 Hai cánh B. morrisoni PG14 B. israelensiss Cầu Chữ nhật Cry5A Cry5C 81 Hai cánh Cánh cứng B. kurstaki JHCC Lỡng tháp Cry6 44 Giun tròn B. thómponi Lỡng tháp 8 Phần II. Tổng quan về Bacillus thuringiensis var.israelensis 2.1. Lịch sử phát triển của loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis Bacillus thuringiensis đợc chia làm nhiều loài phụ. Theo bộ su tập của trung tâm Bacillus diệt côn trùng Quốc tế, Viện Pasteur Paris năm 1996,đã có tới hơn 69 loài phụ khác nhau nh: cánh vẩy, cánh cứng, hai cánh. ở một số loài phụ của Bacillus thuringiensis var.berliner, Bacillus thuringiensis var.thompsoni Khác với loài Bacillus thuringiensis, loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis mới đợc phát hiện gần đây. Loài phụ này có tác dụng diệt ấu trùng muỗi. Các nhà khoa học Goldberg, Margarit là những ngời đầu tiên phân lập, nghiên cứu loài vi khuẩn này và De Bajac đặt tên cho là Bacillus thuringiensis var.israelensis. Họ đã phân lập và nuôi cấy,thử hoạt lực diệt ẩutùng muỗi với hàng trăm chủng khác nhau. Tuy nhiên chỉ có một số chủng có hoạt lực diệt các loài muỗi Culex pipens, Culex univttatus, Aedes aegypti và Anopheles sergentti Chủng đầu tiên đó đợc kí hiệu là ORN-60A và thuộc typ huyết thanh H 14 . Khả năng sinh độc tố và tác dụng diệt muỗi của vi khuẩn này đã có nhiều công trình công bố. Ngày nay đã có rất nhiều chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis đợc tìm thấy và đợc phân loại làm phong phú thêm bộ su tập về Bacillus diệt côn trùng. Các chủng thờng đợc sử dụng trong việc sản xuất chế phẩm sinh học diệt muỗi với các tên gọi khác nhau: Bactimos (Bỉ), Skeetan (Anh), Vectobac (Mỹ) chế phẩm dạng lỏng, dạng bột thấm nớc, dạng viên, bánh nổi có tác dụng diệt ấu trùng của nhiều loài ruồi muỗi trong đó có loài Aedes Aegypti ( là vectơ truyền bệnh sốt xuất huyết). Chế phẩm Bacillus thuringiensis var.israelensis có tác dụng tốt trong môi trờng nớc sạch, nớc không tù đọng hoặc nớc có nồng độ muối loãng và đợc Tổ chức Y tế thế giới lựa chọn để diệt trừ các vectơ truyền bệnh sốt rét, sốt xuất huyết ở các nớc nhiệt đới. 2.2.Đặc điểm phân loại loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis Bacillus thuringiensis var.israelensis là loài phụ của loài Bacillus thuringiensis. De Bajac là ngời đầu tiên đã phân loại loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis thuộc typ huyết thanh H 14 . Tuy nhiên vào năm 1988, 9 Ohba và Aiawa (Nhật Bản) đã phân lập đợc hai chủng Bacillus thuringiensis thuộc typ huyết thanh H 14 nhng lại không có hoạt lực diệt muỗi, ruồi đen. Trớc đó (năm 1982) Pachun và cộng sự đã phân lập đợc chủng PG-14 thuộc typ huyết thanh H8A,B có hoạt lực cao đối với ấu trùng muỗi Aedes Aegypti, Culex pipens, Culex univttatus, Aedes aegypti và Anopheles sergentti Do đó nếu chỉ dựa trên đặc diểm typ huyêt thanh thì không thể đảm bảo đợc phân loại một cách chính xác mà phải dựa trên những đặc điểm khác nhau nh lớp Cry, thành phần và hình dạng protein tinh thể. Hofte và Whiteley là những ngời đầu tiên đa ra ý tởng phân loại loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis dựa trên sự kết hợp của tất cả các đặc điểm: gen Cry, thành phần và hình dạng protein tinh thể, hoạt lực diệt côn trùng và typ huyết thanh. ý tởng này đẵ đợc rất nhiều nhà khoa học hởng ứng và đợc sử dụng chủ yếu cho đến nay để phân loại Bacillus thuringiensis var.israelensis. 10 [...]... protein tinh thể sẽ cho hiệu quả cao hơn do có sự tác động qua lại giữa 2 hay nhiều protein 12 Bảng 3: So sánh hoạt lực diệt ấu trùng muỗi Aedes aegypti của protein riêng rẽ và hỗn hợp protein ( theo Chichott và Ellar ,1988 ) LC50 ( à g/ml ) 0,32 1,0 32,0 4,0 115,0 Chế phẩm Hỗn hợp tinh thể Tinh thể hoà tan Protein 130 kDa Protein 67 kDa Protein 28 kDa 13 Phần III Cơ chế gây độc của protein tinh thể. .. protein tinh thể do Bacillus thuringiensis var.israelensis tổng hợp Knowles đã nghiên cứu ảnh hởng của một số chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis lên tế bào côn trùng thì có thể thấy rằng cơ chế hoạt động của tinh thể độc chủ yếu diễn ra trong ruột của côn trùng Bởi khi nuốt phải tinh thể (hay gọi là tiền độc tố) dới tác dụng của pH cao và enzyme proteaza của đờng ruột mà tinh thể đợc hoà tan,... E.coli Các thể tái tổ hợp mang các gen Cry đều có khả năng tổng hợp protein độc tố nhng chỉ có protein do gen Cry4B có tính độc cao đối với ấu trùng Bacillus megaterium cũng đợc sử dụng nh chủng chủ để biến nạp gen Cry4D, tổng hợp protein 70 kDa Tuy nhiên tính độc của thể tái tổ hợp vẫn thấp hơn chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis ban đầu Những thể tái tổ hợp Bacillus thuringiensis var.israelensis. .. giải của protein này vẫn cha đợc xác định Gen Cry4C mã hóa tổng hợp protein 77,8 kDa và một số tơng đồng với đầu 5 của gen Cry4A, Cry4B Khi gắn gen này vào vi khuẩn Bacillus sudtilí hoặc một trong thể Bacillus thuringiensis var.israelensis đột biến không độc thì gen này trực tiếp tổng protein độc tố 58 kDa, tơng tự protein độc tố 58kDa của Bacillus thuringiensis var.israelensis Gen Cry4D mã hóa tổng hợp. .. chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis thờng tổng hợp các tinh thể protein hình cầu chỉ gây độc đối với bộ côn trùng hai cánh Tinh thể độc của Bti gồm ba loại thể vùi protein khác nhau gắn với nhau bằng các lớp vỏ bọc Mỗi thể vùi đợc bảo quản bởi một hay nhiều lớp nguyên liệu giống thành phần vỏ bọc mà đây cũng là một đặc điểm chỉ có vỏ Bacillus thuringiensis var.israelensis giúp cho tinh thể độc. .. tinh thể, không độc) mang gen Cry4D tổng hợp protein 70 kDa của chủng Bacillus thuringiensis morrisoni Pg14 biểu hiện tính độc cao Gen Cry4D cũng đã đợc tách và biểu hiện trong tế bào Bacillus subtilis và Bacillus sphaericus 2362 Điều đáng chú ý là khi thử nghiệm độc tố của thể tái tổ hợp với Aedes aegypty thì kết quả thu đọc cho thấy độc tố của thể tái tổ hợp có tính độc gấp 100 lần so với chủng Bacillus. .. loại độc tố do B .thuringiensis sinh ra 6 1.7 Phân loại gen độc tố diệt côn trùng của B .thuringiensis .8 Phần II Tổng quan về Bacillus thuringiensis var.israelensis .9 2.1 Lịch sử phát triển của loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis 9 2.2.Đặc điểm phân loại loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis 9 2.3 .Protein diệt muỗi của loài phụ Bacillus thuringiensis var.israelensis. .. crystal protein of Bacillus thuringiensis Microbiol.Rev 19 Mục lục Mở Đầu 1 Phần I :Tổng quan về Bacillus thuringiensis 3 1.1 Tóm tắt về lịch sử nghiên cứu và ứng dụng của Bacillus thuringiensis 3 1.2 Sự phân bố của B .thuringiensis 3 1.3 Đặc điểm sinh thái của B .thuringiensis 4 1.4 Đặc điểm sinh hoá của B .thuringiensis 4 1.5.Phân loại B .thuringiensis 5 1.6.Các loại độc. .. Nhóm Cry4 mã hoá tổng hợp các protein tinh thể có trọng lợng 130, 128, 78 và 67 KDa, có kích thớc thông thờng khoảng từ 0.7-1.2 à m Nhóm gen Cry4 mã hoá tổng hợp các protein tinh thể có trọng lợng 130, 128, 78và 67 kDa có kích 11 thớc thông thờng đạt từ 0.7-1.2 à m Nhóm gen Cyt bao gồm hai lớp CytA và CytB thờng tồn tại ở các chủng Bacillus thuringiensis mang nhóm gen Cry4 và tổng hợp các protein có trọng... Bacillus thuringiensis var.israelensis Thực chất sự tăng tính độc 15 một cách bất thờng của thể tái tổ hợp này là do một mình protein 128 kDa hay là có sự tơng tác giữa protein này với thành phần bào tử của hai chủng Bacillus subtilis và Bacillus sphaericus 2362 đến nay vẫn cha đợc lý giải Delécluse cùng cộng sự (1993) đã tiến hành tách dòng và biểu hiện gen Cry4A, B trên chủng Bacillus thuringiensis var.israelensis . kDa 32,0 Protein 67 kDa 4,0 Protein 28 kDa 115,0 13 Phần III . Cơ chế gây độc của protein tinh thể do Bacillus thuringiensis var. israelensis tổng hợp Knowles. 2.3 .Protein diệt muỗi của loài phụ Bacillus thuringiensis var. israelensis 11 Phần III . Cơ chế gây độc của protein tinh thể do Bacillus thuringiensis