Quy trình nhân giống lan hồ điệp

Lan hồ điệp là một trong những giống lan rất được yêu thích không chỉ về màu sắc, kiểu dáng mà còn mang một nét đẹp rất sang trọng và trang nhã. Chính vì vậy, nó đã nhanh chóng trở thành sản phẩm trồng trọt mang lại hiểu quả kinh tế cao không chỉ ở Việt Nam mà còn nhiều nước trên thế giới như Đài Loan, Nhật Bản, Hà Lan, Mỹ… Hồ Điệp là một loài lan rất khó nhân giống, thường cho hệ số nhân thấp trong điều kiện vườn ươm. Để có được số lượng lớn cây giống, đồng đều đáp ứng nhu cầu thị trường thật nan giải. Trong những năm gần đây, công nghệ lai giống kết hợp gieo hạt trong ống nghiệm cho tỷ lệ nảy mầm cao, tạo nên sự đa dạng về màu sắc, cấu trúc, kích thước hoa sau mỗi thế hệ. Tuy nhiên, nhân giống bằng phương pháp gieo hạt mang tính ngẫu nhiên thu được cây có tính trạng yêu thích và gần như không thể có được cây con cho hoa đẹp như cây mẹ. Để khắc phục điều này, các nhà nuôi cấy mô đã dùng phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để tạo dòng cây ổn định về mặt di truyền. Cây giống tạo ra theo phương pháp này gọi là cây tạo dòng (cloning). Phương pháp này có ưu điểm tạo nên được những quần thể cây con đồng tính trạnh, có sự tăng trưởng và chất lượng hoa đồng đều. Tuy nhiên, phương pháp này thực hiện rất khó thành công, đỉnh sinh trưởng quá nhỏ bé nên không thể tái sinh hoặc chết đi qua lần khử trùng.

Quy trình nhân giống lan Hồ Điệp Hồ Điệp lồi lan khó nhân giống, thường cho hệ số nhân thấp điều kiện vườn ươm Để có số lượng lớn giống, đồng đáp ứng nhu cầu thị trường thật nan giải Lan hồ điệp giống lan yêu thích khơng màu sắc, kiểu dáng mà mang nét đẹp sang trọng trang nhã Chính vậy, nhanh chóng trở thành sản phẩm trồng trọt mang lại hiểu kinh tế cao không Việt Nam mà nhiều nước giới Đài Loan, Nhật Bản, Hà Lan, Mỹ… Hồ Điệp lồi lan khó nhân giống, thường cho hệ số nhân thấp điều kiện vườn ươm Để có số lượng lớn giống, đồng đáp ứng nhu cầu thị trường thật nan giải Trong năm gần đây, công nghệ lai giống kết hợp gieo hạt ống nghiệm cho tỷ lệ nảy mầm cao, tạo nên đa dạng màu sắc, cấu trúc, kích thước hoa sau hệ Tuy nhiên, nhân giống phương pháp gieo hạt mang tính ngẫu nhiên thu có tính trạng u thích gần khơng thể có cho hoa đẹp mẹ Để khắc phục điều này, nhà nuôi cấy mô dùng phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để tạo dòng ổn định mặt di truyền Cây giống tạo theo phương pháp gọi tạo dòng (cloning) Phương pháp có ưu điểm tạo nên quần thể đồng tính trạnh, có tăng trưởng chất lượng hoa đồng Tuy nhiên, phương pháp thực khó thành cơng, đỉnh sinh trưởng q nhỏ bé nên tái sinh chết qua lần khử trùng Lan Hồ Điệp loại lan đơn thân, thân ngắn cho đỉnh sinh trưởng nên để có nguồn mẫu cấy mơ cần phải có nhiều mẫu ban đầu làm tăng chi phí q trình ni Vì vậy, nhà ni cấy mô nước giới thường dùng phát hoa làm vật liệu nuôi cấy, phát hoa Hồ Điệp có chứa mắt ngủ phần gốc, có bề mặt nhẵn bóng dễ khử trùng, tỷ lệ thành cơng cao mà tạo dòng ổn định di truyền Quá trình nhân giống lan Hồ Điệp tiến hành sau: Cách nhân giống thứ nhất: Tạo chồi sinh dưỡng từ phát hoa Vật liệu: Phát hoa lan Hồ Điệp thu hoa nở hết cành Chọn phát hoa to khỏe, cắt đốt chứa mắt ngủ dài 4cm, tách bỏ vỏ bao quanh mắt ngủ Tình trạng mắt ngủ phải trắng xanh hay đỏ màu phát hoa, loại bỏ mắt ngủ bị hóa đen bị trầy xước Tiến hành khử trùng: + Lau nhẹ mắt ngủ cồn 70 độ + Tiến hành lắc với xà phòng lỗng phút rửa lại nước để loại bỏ hết xà phòng + Trong tủ cấy, mẫu ngâm cồn 70 độ phút, sau khử trùng với dung dịch javel có nồng độ 1:5 25 phút + Tiến hành rửa lại mẫu nước cất vô trùng (3 lần) + Loại bỏ hoại tử, cấy mẫu lên môi trường có bổ sung BA 3mg/l Điều kiện ni cấy: mẫu nuôi cấy đặt điều kiện 25 độ C, 12 chiếu sáng độ ẩm 80% Sau 10 tuần ni cấy, chồi sinh dưỡng hình thành từ mắt ngủ phát hoa mang non đủ rộng để làm nguyên liệu khởi tạo PLB từ mô – Khởi tạo việc cấy mô từ mô Các mẫu thu từ chồi sinh dưỡng cắt theo kích thước 5x5mm Các mẫu đặt nuôi môi trường MS 1/2 bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật NAA 1mg/l, BA 10mg/l, Adenin 10mg/l Sau 10 tuần nuôi cấy: + Các mơ hình thành chủ yếu từ mảnh phần gốc mảnh phần đỉnh Lá thân có nét giống hình thái giải phẫu khác cách sinh trưởng cách xếp mô + Sau thời gian, chồi xuất xung quanh mép tiếp tục phát triển phần mô ban đầu bị hoại Phiến ban đầu sử dụng nguồn dinh dưỡng khởi đầu cho chồi sau hệ thống mạch chồi hình thành hồn tồn độc lập với hệ thống mạch mô mẹ – Sự rễ Thông thường, chồi tái sinh rễ phát triển mạnh mơi trường có bổ sung nước dừa, chuối, khoai tây…mà khơng cần chất điều hòa tăng trưởng hết Tuy nhiên, việc tùy thuộc vào giống, có giống dễ đẻ chồi nách làm chồi phân nhánh khơng phát triển rễ được, nhỏ, thân chồi kéo dài, chồi thường tồn dạng cụm chồi Để khắc phục điều này, cấy chồi riêng lẻ lên môi trường có hormon tăng trưởng IBA với nồng độ 0.5-1mg/l, chồi rễ dài, to Sau 3-4 tháng ni cấy đem trồng ngồi vườn ươm Cách nhân giống thứ hai: Phương pháp học Đây phương pháp dễ dàng Khi đạt kích thước mong muốn, ta cắt với rễ đem trồng vào chậu mới, phần gốc lại sau thời gian mọc lên vài ba chồi Nên nhớ phải cắt kéo cắt cành khử trùng sau phải trét Vadolin có trộn Zineb, sơn, vôi vào vết cắt để tránh nhiễm trùng cuối ta làm động tác tiếp tục thay chậu Một phương pháp khác đề cập đến, đơn giản có hiệu cao Dây đồng dụng cụ dùng cho công tác này, buộc vào thân xiết chặt, thể mạch dẫn nhựa bị ức chế nguyên nhân tạo kích thích mọc chồi Khi chồi nhú khỏi thân, ta gỡ dây đồng ra, lớn dần Tốt đợi phát triển thành thục mọc rễ ta cắt lìa khỏi thân mẹ Tuyệt đối đừng cắt mẹ để phần gốc lại ni dưỡng con, mắc phải khuyết điểm phương pháp Với phương pháp ta có sức khỏe mẹ bình thường, khơng bị sốc bảo đảm hoa mùa Cách nhân giống thứ ba: Phương pháp kích thích tố Một vài loại kích thích tố dùng có hiệu rõ rệt nhanh chóng mọc chồi lồi lan Hồ Điệp Với dung dịch kích thích tố pha sẵn phun sương vào rễ, tháng sau có dấu hiệu mọc chồi Có thể phun lần cách ngày có kết chắn Chất dùng Cytokinin, với nồng độ phần triệu Ở phương pháp tạo phát hoa cũ (Phương pháp Griesbacil) Sau Hồ Điệp trổ hoa xong, cắt bỏ phần phát hoa chừa lại 3-4 mắt phía gốc bơi Ianohn có trộn 50mg/l axit Cinnamic + 5mg/ml 6-Benzyiamino-purine Sau 4-8 tuần lễ, mọc vị trí mắt rễ tạo lập lớn dần Lúc cắt bỏ phát hoa đem trồng chậu QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA LAN HỒ ĐIỆP BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO 1.Vào mẫu tạo nguyên liệu khởi đầu - Vào mẫu từ ngồng hoa: Ngồng hoa non (chưa nở hoa) có chứa mắt ngủ lấy để vào mẫu Rửa mẫu vòi nước chảy, dùng dao sắc cắt mẫu thành đoạn, đoạn chứa mắt ngủ Tráng lại nước cất đưa vào khử trùng Box cấy vô trùng Tiến hành khử trùng mẫu lần dung dịch HgCl2 0,1% thời gian phút, tráng lại 4-5 lần nước cất vơ trùng, bóc bỏ phần bao bên để lộ mắt ngủ khử trùng tiếp lần dung dịch HgCl2 0,1% thời gian phút Rửa mẫu, cắt bỏ phần mẫu bị tổn thương hoá chất khử trùng gây dùng panh cấy mẫu vào môi trường chuẩn bị sẵn, mẫu bình Mơi trường vào mẫu: VW+ 100 ml ND + 10g Đường + 2mg/lBA +0,3 mg/lKi Nhân nhanh tạo hoàn chỉnh - Nhân nhanh từ gieo hạt: Hạt gieo sau 5-7 ngày bắt đầu nảy mầm, sau 20 ngày bắt đầu hình thành thể tiền chồi (PLBs: Protocorm Like Bodies) Sau 1,5 tháng cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh: VW + 100ml/l Nước dừa+ 10g/l Đường + 30g/l Khoai tây+ 30g/l Cà rốt +1g/l pep ton + 0,3 g/l Than hoạt tính + 6,5 g/l agar Định kỳ tháng cấy chuyển lần Sau 4-5 vòng cấy chuyển môi trường nhân nhanh tạo thành hoàn chỉnh với 4-5 lá, trọng lượng ≥3 gram đủ tiêu chuẩn ngơi trồng ngồi vườn ươm - Nhân nhanh nuôi cấy lát mỏng: Nguyên liệu để cắt lớp mỏng thể Protocorm chồi non hình thành qua lần cấy chuyển cấy Chiều dày lát mỏng 0,3-0,5cm Môi trường nuôi cấy lát mỏng: VW + 100mlND + 0,5mm 2,4D + 0,3mg Kinetin + 10g đường Saccaroza + 6,5g agar/lít Sau nuôi cấy khoảng 30 ngày mẫu cấy bắt đầu phát sinh hình thái hình thành nên PLBs Sau PLBs hình thành, tiến hành cấy chuyển PLBs sang môi trường nhân nhanh để chúng tiếp tục phát sinh hình thái tạo thành hồn chỉnh Trong q trình ni cấy, bổ sung 1g PVP (polyvinyl pirollidon)/lít mơi trường để ngăn ngừa tượng hố đen mơi trường Số vòng cấy chuyển 4-5 lần, sau phải vào mẫu để thay Loại bình cấy thích hợp sử dụng ni in vitro bình trụ thủy tinh miệng rộng 110 Nút đ y bình nút cao su có màng trao đổi khí Điều kiện phòng ni in vitro: - Nhiệt độ: 25± 20C - ánh sáng: 2.500-3.000 lux - Quang chu kỳ: 12-14 chiếu sáng/24 Ra ngơi chăm sóc ngồi vườn ươm - Tiêu chuẩn ngơi: Cây có đủ thân lá, rễ, không bị nấm bệnh, trọng lượng tươi ≥ g/cây - Huấn luyện trước cách mở nút bình từ 90-120 phút vào buổi sáng điều kiện môi trường vườn ươm tốt - Cây lấy khỏi bình rửa sạch, xử lý thuốc trừ nấm Ridomil (nồng độ g/lít) khoảng phút - Giá thể rêu khô (dớn) dược xử lý chế phẩm EM, nồng độ 1ml/lít nước ngâm 30 phút, sau vắt - Trồng vào giá thể bầu có đường kính cm lưu ý quấn giá thể quanh gốc đảm bảo chặt sau đưa vào bầu - Đặt khay, loại khay có rãnh, chiều ngang rãnh cm - Che lưới đen cho đảm bảo cường độ ánh sáng 3000 - 4000lux - Nhiệt độ: 25 – 31 oC, ẩm độ khơng khí 65-85% - Tưới nước dinh dưỡng: Trong 15 ngày đầu tưới nước, phun nhẹ vòi phun tay, giữ ẩm cho giá thể Sau 15 ngày, phun cho chế phẩm Vitamin B1, nồng độ 50ml/100 lít, định kỳ phun ngày/lần Sau tháng, tưới cho phân NPK với tỷ lệ 30:20:10 với nồng độ 40g/100 lít nước, định kỳ tưới ngày/lần - Những ngày không phun, tưới dinh dưỡng phải ý giữ ẩm cho cây, thông thường 2-3 ngày tưới lần vòi phun tay - Sau tháng sang bầu 8,3 cm  ... phát hoa Hồ Điệp có chứa mắt ngủ phần gốc, có bề mặt nhẵn bóng dễ khử trùng, tỷ lệ thành cơng cao mà tạo dòng ổn định di truyền Quá trình nhân giống lan Hồ Điệp tiến hành sau: Cách nhân giống thứ... mà nhiều nước giới Đài Loan, Nhật Bản, Hà Lan, Mỹ… Hồ Điệp lồi lan khó nhân giống, thường cho hệ số nhân thấp điều kiện vườn ươm Để có số lượng lớn giống, đồng đáp ứng nhu cầu thị trường thật... việc tùy thuộc vào giống, có giống dễ đẻ chồi nách làm chồi phân nhánh không phát triển rễ được, nhỏ, thân chồi kéo dài, chồi thường tồn dạng cụm chồi Để khắc phục điều này, cấy chồi riêng lẻ lên