TIỂU-LUẬN-ĐIỆN-DI-SẮC-KÝ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ KHOA DƯỢC-BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM HÓA PHÂN TÍCH TIỂU LUẬN ĐIỆN DI VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ HUẾ, THÁNG 6, 2017 Theo dược điển việt nam VIÊN NÉN AMOXICILIN VÀ ACID CLAVULANIC ( AUGMENTIN 500mg) Tabellae Amoxicillini Acidum clavulanicum a Quy trình kiểm nghiệm Là viên nén bao phim chứa amoxicilin kali clavulanat Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận "Thuốc viên nén" mục "Viên bao" (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau: Hàm lượng amoxicilin, C16H19N3O5S, từ 95,0% đến 105,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng acid clavulanic, C8H9NO5, từ 95,0% đến 105,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Viên bao phải nhẵn, không nứt cạnh, không dính tay, đồng màu sắc Bên viên bao có màu trắng Định tính Trong phần định lượng, hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn Nước (Phụ lục 10.3) Không 7,5% hàm lượng nhãn amoxicilin không lớn 250 mg không 10,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 250 mg không lớn 500 mg Không 11,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 500 mg Với viên nén dùng để nhai, không 6,0% hàm lượng nhãn amoxicilin không lớn 125 mg không 8,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 125 mg Dùng 0,3g bột viên nghiền mịn Độ hòa tan (Phụ lục 11.4) Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường: 900 ml nước Tốc độ quay: 75 vòng/phút Thời gian: 45 phút Tiến hành: Lấy phần dung dịch môi trường hoà tan mẫu thử, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Pha loãng dịch lọc thu tới nồng độ thích hợp với môi trường hòa tan (nếu cần) Tiến hành định lượng amoxicilin acid clavulanic hoà tan phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) với pha động, điều kiện sắc ký dung dịch chuẩn phần định lượng Yêu cầu: Không 70% lượng amoxicilin, C16H19N3O5S, so với lượng ghi nhãn hoà tan 45 phút Không 70% lượng acid clavulanic, C8H9NO5, so với lượng ghi nhãn hoà tan 45 phút Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp thể tích methanol (TT) 95 thể tích dung dịch natri dihydrophosphat monohydrat 0,78% (kl/tt) điều chỉnh đến pH 4,4 acid phosphoric (TT) Dung dịch chuẩn: Dung dịch amoxicilin trihydrat chuẩn 0,05% (kl/tt) lithi clavulanat chuẩn 0,02% (kl/tt) nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên loại bỏ lớp bao phim nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,250 g amoxicilin vào bình định mức 500 ml, thêm 400 ml nước lắc siêu âm 15 phút Pha loãng nước vừa đủ đến vạch, lắc Lọc qua giấy lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu, lọc lại dịch lọc qua màng lọc 0,45 mm Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 mm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 220 nm Tốc độ dòng: 2,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 ml Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ phân giải hai pic amoxicilin acid clavulanic không nhỏ 3,5 hệ số cân xứng pic pic acid clavulanic không lớn 1,5 Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng amoxicilin, C16H19N3O5S, acid clavulanic, C8H9NO5, có đơn vị chế phẩm dựa vào diện tích pic thu từ sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch chuẩn; hàm lượng amoxicilin, C16H19N3O5S, acid clavulanic, C8H9NO5 , dung dịch chuẩn Mỗi mg lithi clavulanat, C8H8LiNO5, tương ứng với 0,9711 mg acid clavulanic, C8H9NO5 Bảo quản Trong vỉ nhôm hay chai lọ nút kín Để nơi khô mát, tránh ánh sáng Loại thuốc Thuốc kháng sinh Hàm lượng thường dùng Viên nén 500 mg amoxicilin trihydrat 125 mg dạng muối clavulanat b Quy trình thẩm định đề xuất  Định tính ( độ xác trung gian) Tiến hành phần định lượng , quy trình thực phòng thí nghiệm, thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên thiết bị khác Kết hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn  Nước • Độ xác trung gian: Tiến hành xác định hàm lượng nước theo Phụ lục 10.3, Dược điển Việt Nam IV Dùng 0,3g bột viên nghiền mịn Quy trình thực phòng thí nghiệm, thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên thiết bị khác Kết tất lần tiến hành: Không 7,5% hàm lượng nhãn amoxicilin không lớn 250 mg không 10,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 250 mg không lớn 500 mg Không 11,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 500 mg Với viên nén dùng để nhai, không 6,0% hàm lượng nhãn amoxicilin không lớn 125 mg không 8,0% hàm lượng nhãn amoxicilin lớn 125 mg • Tính đặc hiệu  Độ hòa tan + Định lượng • Độ đúng: Độ hòa tan: Tiến hành sắc ký theo điều kiện quy định với mẫu chuẩn: - Mẫu 1: cân xác khoảng 31,110 mg amoxicilin trihydrat chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml - Lọc qua màng lọc 0,45 mm Mẫu 2: cân xác khoảng 38,890 mg amoxicilin trihydrat chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml Lọc qua màng lọc 0,45 mm - Mẫu 3: cân xác khoảng 46,670 mg amoxicilin trihydrat chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml Lọc qua màng lọc 0,45 mm Mỗi mẫu chuẩn tiến hành sắc ký lần, tính hàm lượng amoxicilin trihydrat tìm thấy Suy % hàm lượng tìm thấy Tỷ lệ phục hồi trung bình 98-102% Tiến hành tương tự với lithi clavulanat Khối lượng ba mẫu chuẩn 7,780mg; 9,720 mg; 11,670 mg Tỷ lệ phục hồi trung bình 98-102% • Độ xác: độ hòa tan định lượng: tiến hành quy trình Lặp lại lần với mẫu thử Tính hàm lượng hoạt chất so với nhãn Tính kết trung bình, SD, RSD RSD không 1,3% • Giới hạn định lượng: tỉ lệ đáp ứng nhiễu 10 tính : độ lệch chuẩn đáp ứng : độ dốc đường chuẩn (xây dựng đường chuẩn tính tuyến • tính bên dưới) Tính tuyến tính: Độ hòa tan Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: Dung dịch amoxicilin trihydrat chuẩn 0,31; 0,34; 0,37; 0,40; 0,43; 0,46 (mg/ml) lithi clavulanat chuẩn 0,077; 0,085; 0,093; 0,100; 0,11; 0,117 (mg/ml) nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Tiến hành sắc ký theo điều kiện quy định Vẽ đồ thị nồng độdiện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt Định lượng Tiến hành theo quy trình định lượng nêu Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: Dung dịch amoxicilin trihydrat chuẩn 0,04%; 0,045%; 0,05%; 0,055%; 0,06% (kl/tt) lithi clavulanat chuẩn 0,016%; 0,018%; 0,02%; 0,022%; 0,024% (kl/tt) nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Vẽ đồ thị nồng độ- diện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt VIÊN NÉN PARACETAMOL VÀ CLORPHENIRAMIN ( SLOCOL) Tabellae Paracetamoli et chlorpheniramini Là viên nén chứa paracetamol clorpheniramin Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: Hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng Clorpheniramin maleat, C16H19ClN2.C4H4O4, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Viên nén mầu đồng Định tính A Trong phần định lượng paracetamol, thời gian lưu pic sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu pic paracetamol sắc ký đồ dung dịch chuẩn B Trong phần định lượng clorpheniramin maleat, thời gian lưu pic sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu pic clorpheniramin maleat sắc ký đồ dung dịch chuẩn Độ hoà tan ( phụ lục 11.4) Thiết bị : Kiểu cánh khuấy Môi trường hoà tan: 900 ml nước Tốc độ quay: 50 vòng/ phút Thời gian: 45 phút Cách tiến hành: Lấy phần dung dịch môi trường sau hoà tan, lọc, bỏ dịch lọc đầu Pha loãng dịch lọc dung dịch natri hydroxyd 0,1 M để dung dịch có nồng độ paracetamol khoảng 7,5 mg/ ml Đo độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) dung dịch thu bước sóng cực đại 257 nm, mầu trắng dung dịch natri hydroxyd 0,1 M Tính hàm lượng paracetamol hoà tan theo A (1%,1 cm) Lấy 715 giá trị A (1%, cm) paracetamol bước sóng 257 nm Yêu cầu: Không 75 % lượng paracetamol, C8H9NO2, so với lượng ghi nhãn hòa tan 45 phút Định lượng paracetamol Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Nước - methanol - acid acetic băng (79 : 20 : 1), điều chỉnh tỉ lệ cần Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 50 mg paracetamol đối chiếu vào bình định mức 100 ml, thêm ml methanol (TT), lắc cho tan hoàn toàn, pha loãng với dung dịch acid phosphoric 1% (TT) đến định mức, trộn Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 100 mg paracetamol vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 7,5 ml methanol (TT), siêu âm cho bột phân tán hoàn toàn, thêm 0,5 ml acid phosphoric (TT), pha loãng với nước đến định mức, trộn Hút xác 25,0 ml dịch lọc cho vào bình định mức 100 ml, pha loãng với nước đến định mức, trộn Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh B (octylsilyl silica gel, hạt -10 mm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 280 nm Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 10 ml Cách tiến hành: Kiểm tra tính thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn, hệ số đối xứng pic paracetamol không lớn 2,0 độ lệch chuẩn tương đối diện tích đáp ứng từ lần tiêm lặp lại không 2,0% Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng paracetamol, C8H9NO2 , có viên dựa vào diện tích pic săc ký đồ thu từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C8H9NO2 paracetamol chuẩn Định lượng clorpheniramin maleat Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp methanol - nước (60 : 40) có chứa 0,34 g kali dihydrophosphat (TT); 0,3 g triethylamin hydroclorid (TT); 0,15 g natri laurylsulfat (TT) 0,1ml acid phosphoric (TT) 100 ml dung dịch, điều chỉnh tỉ lệ cần Dung dịch chuẩn: Cân xác hòa tan vào nước lượng clorpheniramin maleat chuẩn để thu dung dịch có nồng độ khoảng 0,8 mg/ml Tiếp tục pha loãng dung dịch dung dịch acid phosphoric 0,1% (TT) để thu dung dịch có nồng độ khoảng µg/ml Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng mg clorpheniramin maleat vào bình định mức 250 ml, thêm 25 ml methanol (TT), siêu âm cho bột phân tán hoàn toàn, thêm ml acid phosphoric (TT), pha loãng với nước vừa đủ đến vạch, trộn Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh silica liên kết với nhóm phenyl (hạt -10 mm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 214 nm Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 10 ml Kiểm tra tính thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn, hệ số đối xứng pic clorpheniramin maleat không lớn 2,0 độ lệch chuẩn tương đối diện tích đáp ứng từ lần tiêm lặp lại không 2,0% Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng clorpheniramin maleat, C16H19ClN2.C4H4O4 ,có viên dựa vào diện tích pic săc ký đồ thu từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C16H19ClN2.C4H4O4 clorpheniramin maleat chuẩn Độ đồng hàm lượng clorpheniramin maleat Chế phẩm có lượng clorpheniramin maleat mg viên phải đạt yêu cầu “đồng hàm lượng” clorpheniramin maleat (Phụ lục 11.2) Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động, điều kiện sắc ký tiến hành mô tả mục “Định lượng clorpheniramin maleat ” Dung dịch thử: Lấy viên nghiền thành bột mịn chuyển vào bình định mức 250 ml, thêm 25 ml methanol (TT), siêu âm cho bột phân tán hoàn toàn, thêm ml acid phosphoric (TT), pha loãng với nước vừa đủ đến vạch, trộn Dung dịch chuẩn: Tiến hành mô tả mục “Định lượng clorpheniramin maleat” Pha loãng (nếu cần) để có nồng độ clorpheniramin maleat tương ứng với nồng độ clorpheniramin maleat dung dịch thử Tính hàm lượng clorpheniramin maleat, C16H19ClN2.C4H4O4 , viên dựa vào diện tích pic sắc ký đồ thu từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C16H19ClN2.C4H4O4 clorpheniramin maleat chuẩn Hàm lượng clorpheniramin maleat,C16H19ClN2.C4H4O4 ,có viên chế phẩm tính từ kết trung bình 10 viên Bảo quản Trong bao bì kín nhiệt độ từ 15-30 oC Loại thuốc Thuốc giảm đau, kháng histamin Hàm lượng thường dùng 500 mg paracetamol; mg mg clorpheniramin maleat a Quy trình thẩm định đề xuất  Định tính ( độ xác trung gian) Tiến hành phần định lượng , quy trình thực phòng thí nghiệm, thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên thiết bị khác Kết hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn Tính đặc hiệu  Độ hòa tan + Định lượng • Độ đúng: Độ hòa tan: Tiến hành đo quang theo điều kiện quy định • với mẫu chuẩn: - Mẫu 1: dung dịch paracetamol chuẩn khoảng mg/ml - NaOH 0,1M Mẫu 2: dung dịch paracetamol chuẩn khoảng 7,5 mg/ml NaOH 0,1M - Mẫu 3: dung dịch paracetamol chuẩn khoảng mg/ml NaOH 0,1M Đo quang lần, tính hàm lượng paracetamol tìm thấy Suy % hàm lượng tìm thấy Tỷ lệ phục hồi trung bình 98-102% • Độ xác: độ hòa tan định lượng: tiến hành quy trình Lặp lại lần với mẫu thử Tính hàm lượng hoạt chất so với nhãn Tính kết trung bình, SD, RSD RSD không 1,3% • Giới hạn định lượng: tỉ lệ đáp ứng nhiễu 10 tính : độ lệch chuẩn đáp ứng : độ dốc đường chuẩn (xây dựng đường chuẩn tính tuyến • tính bên dưới) Tính tuyến tính: Độ hòa tan Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn cách tiến hành dược điển với khối lượng là: Paracetamol chuẩn 30; 33,750; 50,750; 41,25; 45 mg dung dịch chlopheniramin chuẩn 0,480; 0,540; 0,600; 0,660; 0,720 (mg/ml) nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Tiến hành sắc ký theo điều kiện quy định Vẽ đồ thị nồng độdiện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt Định lượng Tiến hành theo quy trình định lượng nêu Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: Paracetamol chuẩn 40; 45; 50; 55; 60 mg dung dịch chlopheniramin chuẩn 0,640; 0,720; 0,800; 0,880; 0,960 (mg/ml) Lọc qua màng lọc 0,45 mm Vẽ đồ thị nồng độ- diện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt VIÊN NÉN PARACETAMOL VÀ CAFEIN (HAPACOL EXTRA) Tabellae Paracetamoli et caffeinum a Quy trình kiểm nghiệm Là viên nén chứa paracetamol cafein Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: Hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, cafein, C8H10N4O2, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Viên nén màu trắng Định tính Trong phần định lượng, thời gian lưu tương đối pic paracetamol cafein so với pic chuẩn nội sắc ký đồ thu dung dịch thử dung dịch chuẩn phải phù hợp với Độ hòa tan (Phụ lục 11.4) Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường hòa tan: 900 ml nước Tốc độ quay: 100 vòng/phút Thời gian: 60 phút Pha động, dung dịch chuẩn nội, hỗn hợp dung môi, dung dịch đối chiếu gốc, điều kiện sắc ký cách tiến hành thực mô tả phần Định lượng Dung dịch chuẩn: Hút xác 20,0 ml dung dịch đối chiếu gốc vào bình định mức 50 ml, thêm xác 3,0 ml dung dịch chuẩn nội 20 ml nước, trộn đều, để yên khoảng 30 giây Pha loãng hỗn hợp dung môi đến định mức, trộn Dung dịch sử dụng vòng Dung dịch thử: Lấy phần dung dịch môi trường sau hòa tan, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Lấy thể tích xác dịch lọc cho vào bình định mức 50 ml cho dung dịch thu có nồng độ paracetamol 0,1 mg/ml nồng độ cafein 0,1J mg/ml, J xác định dung dịch đối chiếu gốc Thêm xác 3,0 ml dung dịch chuẩn nội 20 ml hỗn hợp dung môi, trộn đều, để yên khoảng 30 giây Pha loãng hỗn hợp dung môi đến định mức, trộn Tính hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, cafein, C8H10N4O2, hòa tan viên từ tỷ số diện tích pic paracetamol cafein diện tích pic chuẩn nội sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch chuẩn nồng độ paracetamol cafein dung dịch chuẩn Yêu cầu: Không 75% lượng paracetamol, C8H9NO2, cafein, C8H10N4O2, so với lượng ghi nhãn hòa tan 60 phút Định lượng Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp nước - methanol - acid acetic băng (69 : 28 : 3), điều chỉnh tỉ lệ cần Dung dịch chuẩn nội: Chuẩn bị dung dịch acid benzoic methanol (TT) có nồng độ khoảng mg/ml Hỗn hợp dung môi: Chuẩn bị hỗn hợp methanol - acid acetic băng (95 : 5) Dung dịch chuẩn gốc: Hòa tan xác lượng paracetamol đối chiếu cafein đối chiếu hỗn hợp dung môi để thu dung dịch có nồng độ 0,25 mg/ml paracetamol 0,25J mg/ml cafein, J tỷ lệ lượng ghi nhãn cafein lượng ghi nhãn paracetamol viên Dung dịch chuẩn: Hút xác 20,0 ml dung dịch chuẩn gốc 3,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng hỗn hợp dung môi đến định mức, trộn Dung dịch thu có nồng độ paracetamol khoảng 0,1 mg/ml nồng độ cafein khoảng 0,1J mg/ml Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 250 mg paracetamol vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 75 ml hỗn hợp dung môi, lắc máy lắc 30 phút Pha loãng hỗn hợp dung môi đến định mức, trộn Hút xác 2,0 ml dung dịch 3,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng hỗn hợp dung môi đến định mức, trộn Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (10 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C ( mm) Nhiệt độ cột: 45 ± 1oC Detector quang phổ tử ngoại đath bước sóng 275 nm Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 10 ml Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn Hệ số đối xứng pic tương ứng với paracetamol cafein không lớn 1,2 Độ phân giải pic tương ứng với paracetamol, cafein pic chuẩn nội không nhỏ 1,4 Độ lệch chuẩn tương đối diện tích đáp ứng từ lần tiêm lặp lại không lớn 2,0% Tiến hành sắc ký với dung dịch đối chiếu dung dịch thử Thời gian lưu tương đối paracetamol khoảng 0,3, cafein khoảng 0,5 acid benzoic 1,0 Căn vào diện tích pic thu từ dung dịch thử, dung dịch đối chiếu dựa vào hàm lượng C8H9NO2 paracetamol đối chiếu C8H10N4O2 cafein đối chiếu, tính hàm lượng paracetamol C8H9NO2, cafein, C8H10N4O2, có đơn vị chế phẩm từ tỷ số diện tích pic paracetamol cafein diện tích pic chất chuẩn nội sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch chuẩn nồng độ paracetamol cafein dung dịch chuẩn Bảo quản Trong bao bì kín nhiệt độ từ 15 - 30 oC Loại thuốc Thuốc giảm đau, hạ nhiệt Hàm lượng thường dùng 200 mg paracetamol, 50 mg cafein 500 mg paracetamol, 30 mg cafein b Quy trình thẩm định đề xuất  Định tính ( độ xác trung gian) Tiến hành phần định lượng , quy trình thực phòng thí nghiệm, thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên thiết bị khác Kết hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn Tính đặc hiệu  Độ hòa tan + Định lượng • Độ đúng: Độ hòa tan: Tiến hành sắc ký theo điều kiện quy định • với mẫu chuẩn: - Mẫu 1: cân xác khoảng 33,333 mg paracetamol chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml Lọc qua màng lọc 0,45 mm - Mẫu 2: cân xác khoảng 41.667 mg paracetamol chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml Lọc qua - màng lọc 0,45 mm Mẫu 3: cân xác khoảng 50.000 mg paracetamol chuẩn, định mức nước cất bình định mức 100ml Lọc qua màng lọc 0,45 mm Mỗi mẫu chuẩn tiến hành sắc ký lần, tính hàm lượng paracetamol tìm thấy Suy % hàm lượng tìm thấy Tỷ lệ phục hồi trung bình 98-102% Tiến hành tương tự với cafein Khối lượng ba mẫu chuẩn 4.333mg; 5.417 mg; 6.500 mg Tỷ lệ phục hồi trung bình 98-102% • Độ xác: độ hòa tan định lượng: tiến hành quy trình Lặp lại lần với mẫu thử Tính hàm lượng hoạt chất so với nhãn Tính kết trung bình, SD, RSD RSD không 1,3% • Giới hạn định lượng: tỉ lệ đáp ứng nhiễu 10 tính : độ lệch chuẩn đáp ứng : độ dốc đường chuẩn (xây dựng đường chuẩn tính tuyến • tính bên dưới) Tính tuyến tính: Độ hòa tan Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: Dung dịch paracetamol chuẩn 0,31; 0,34; 0,37; 0,40; 0,43; 0,46 (mg/ml) cafein chuẩn 0,040; 0,044; 0,048; 0,052; 0,056; 0,060 (mg/ml) nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Tiến hành sắc ký theo điều kiện quy định Vẽ đồ thị nồng độdiện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt Định lượng Tiến hành theo quy trình định lượng nêu Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: Dung dịch paracetamol chuẩn 0.15mg/ml ; 0,20mg/ml; 0.25mg/ml; 0,30mg/ml; 0,35mg/ml cafein chuẩn 0.0195mg/ml; 0,0260mg/ml; 0,0325mg/ml; 0,0390mg/ml; 0,0455mg/ml nước Lọc qua màng lọc 0,45 mm Vẽ đồ thị nồng độ- diện tích pic chất, tính giá trị r, │r│>0,90, mức độ tương quan tốt VIÊN NÉN SULFADOXIN VÀ PYRIMETHAMIN Tabellae Sulfadoxini Pyrimethamini Là viên nén chứa sulfadoxin pyrimethamin Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận "Thuốc viên nén" mục (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau: Hàm lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Viên nén màu trắng Định tính A Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel GF254 dày 0,25 mm Dung môi khai triển: Heptan - cloroform - dung dịch methanol 5% (tt/tt) ethanol - acid acetic băng (4 : : : 1) Dung dịch thử: Lấy lượng bột viên tương ứng với khoảng 100 mg sulfadoxin, thêm 10 ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol, lắc kỹ phút lọc Dung dịch đối chiếu (1): Dung dịch sulfadoxin chuẩn có nồng độ 10 mg/ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol Dung dịch đối chiếu (2): Dung dịch pyrimethamin chuẩn có nồng độ 0,5 mg/ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 ml dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 3/4 chiều dài mỏng Lấy mỏng để khô không khí Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Hai vết sắc ký đồ dung dịch thử phải phù hợp với hai vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu vị trí màu sắc B Trong phần định lượng, thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn Độ hòa tan (Phụ lục 11.4) Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường: 1000 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8 (TT) Tốc độ quay: 75 vòng/phút Thời gian: 30 phút Tiến hành: Lấy phần dung dịch môi trường hoà tan mẫu thử, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Pha loãng dịch lọc thu tới nồng độ thích hợp với pha động (nếu cần) Tiến hành định lượng sulfadoxin pyrimethamin hoà tan phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động, điều kiện sắc ký dung dịch chuẩn phần định lượng, thay đổi điều kiện sắc ký cho phù hợp Yêu cầu: Không 60% lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Không 60% lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp dung dịch đệm pH 5,9 acetonitril (4 : 1) Dung dịch đệm pH 5,9: Thêm 1ml triethylamin 200ml acetonitril vào 700ml nước, điều chỉnh đến pH 5,9 dung dịch acid acetic 1%, sau thêm nước vừa đủ 1000ml, trộn đều, lọc Dung dịch chuẩn nội: Dung dịch phenacetin có nồng độ mg/ml acetonitril (TT) Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác khoảng 500 mg sulfadoxin chuẩn 25 mg pyrimethamin chuẩn vào bình định mức 100 ml, thêm 35 ml acetonitril (TT), lắc kỹ để hòa tan pha loãng pha động đến định mức, lắc Dung dịch chuẩn (1): Hút xác 25,0 ml dung dịch chuẩn gốc 2,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 mm Dung dịch chuẩn (2): Hút xác 2,0 ml dung dịch chuẩn gốc 10,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 250 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 mm Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 500 mg sulfadoxin 25 mg pyrimethamin vào bình định mức 100 ml, thêm 35 ml acetonitril (TT) lắc siêu âm 30 phút Pha loãng pha động đến định mức, lắc Lọc qua giấy lọc bỏ 20 ml dịch lọc đầu Hút xác 25,0 ml dịch lọc 2,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 mm thu dung dịch thử (1) Hút xác 2,0 ml dịch lọc 10,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 250 ml, pha loãng pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc 0,45 mm thu dung dịch thử (2) Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (30 cm x 3,9 mm) nhồi pha tĩnh B (5 mm) ( Cột RP8 thích hợp) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 230 nm Tốc độ dòng: 2,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 ml Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ phân giải hai pic sulfadoxin phenacetin không nhỏ 1,0; độ phân giải hai pic pyrimethamin phenacetin không nhỏ 1,0; độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic không lớn 2,5% Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử Thời gian lưu tương đối khoảng 0,7 sulfadoxin, 1,0 phenacetin 1,3 pyrimethamin Tính hàm lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, có viên dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch thử (1), dung dịch chuẩn (1) hàm lượng C12H13ClN4 pyrimethamin chuẩn Tính hàm lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, có viên dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch thử (2), dung dịch chuẩn (2) hàm lượng C12H14N4O4S sulfadoxin chuẩn Bảo quản Trong vỉ nhôm hay chai lọ nút kín Để nơi khô mát, tránh ánh sáng Loại thuốc Kháng sinh Hàm lượng thường dùng Sulfadoxin 500 mg pyrimethamin 25 mg