Nghiên cứu phát hiện virus gây bệnh thối đen mũ chúa (black queen cell virus) trên ong mật ở miền bắc việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRỊNH THỊ THU NGHIÊN CỨU PHÁ T HIỆN VIRUS GÂY BỆNH THỐI ĐEN MŨ CHÚA (BLACK QUEEN CELL VIRUS) TRÊN ONG MẬT Ở MIỀN BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội, năm 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRỊNH THỊ THU NGHIÊN CỨU PHÁ T HIỆN VIRUS GÂY BỆNH THỐI ĐEN MŨ CHÚA (BLACK QUEEN CELL VIRUS) TRÊN ONG MẬT Ở MIỀN BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: Vi sinh vâ ̣t ho ̣c Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Đồng Văn Quyền TS Trầ n Thi Thanh Huyền ̣ Hà Nội, năm 2014 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn này, nhận nhiều động viên , giúp đỡ các cá nhân tập thể Trước tiên xin được gửi lời biết ơn chân thành nhấ t tới TS Đồng Văn Quyền – Trưởng phòng Vi sinh vật học phân tử, Phó Viện trưởng Viện Công nghệ sinh học hướng dẫn tạo điều kiện tốt cho nghiên cứu thực luận văn phòng Vi sinh vật học phân tử Qua đây, xin gửi lời cảm ơn tới NCS Hà Thị Thu cô chú, anh chị em công tác phòng VSVHPT nhiệt tình giúp đỡ, tạo cho môi trường nghiên cứu làm việc nghiêm túc Tôi xin gửi lời biết ơn tới ban lãnh đạo trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội đã tạo điều kiện tốt cho học tập phát triển Đồng thời xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS.Trần Thị Thanh Huyền, thầy cô môn Vi sinh vật học giúp đỡ suốt trình học tập trường Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, người thân, người sát cánh tôi, chia sẻ động viên không ngừng nỗ lực vươn lên học tập sống Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Trịnh Thị Thu MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Error! Bookmark not defined 1.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA LOÀI ONG Error! Bookmark not defined 1.1.1 Nguồ n gố c củ a ong Error! Bookmark not defined 1.1.2 Hình thái cấu tạo ngoài ong Error! Bookmark not defined 1.1.3 Vị trí phân loại của ong Error! Bookmark not defined 1.1.4 Các loài ong Việt Nam Error! Bookmark not defined 1.1.5 Miễn dịch học ong Error! Bookmark not defined 1.2 TÌNH HÌNH THỊ TRƢỜNG MẬT ONG TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƢỚC Error! Bookmark not defined 1.2.1 Tình hình thị trƣờng mật ong giới Error! Bookmark not defined 1.2.2 Tình hình thị trƣờng mật ong Việt Nam Error! Bookmark not defined 1.3 MỘT SỐ BỆNH THƢỜNG GẶP Ở ONG Error! Bookmark not defined 1.3.1 Bệnh ong các tác nhân gây bệnh virus Error! Bookmark not defined 1.3.2 Bệnh ong virus gây Error! Bookmark not defined 1.4 CÁC PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN PHÁT HIỆN VIRUS Ở ONG MẬT Error! Bookmark not defined 1.4.1 Phƣơng pháp ELISA (xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme) Error! Bookmark not defined 1.4.2 Phƣơng pháp phản ứng chuỗi trùng hợp (PCR) Error! Bookmark not defined 1.4.3 Phƣơng pháp RT – PCR Error! Bookmark not defined 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CHẨN ĐOÁN VIRUS GÂY BỆNH TRÊN ONG VIỆT NAM Error! Bookmark not defined CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark not defined 2.1 ĐỊA ĐIỂM THU MẪU Error! Bookmark not defined 2.2 VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT Error! Bookmark not defined 2.2.1 Vật liệu Error! Bookmark not defined 2.2.2 Hóa chất và sinh phẩm Error! Bookmark not defined 2.2.3 Trang thiết bị Error! Bookmark not defined 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Error! Bookmark not defined 2.3.1 Phƣơng pháp thu mẫu Error! Bookmark not defined 2.3.2 Phƣơng pháp tách chiết RNA tổng số Error! Bookmark not defined 2.3.3 Xác định nồng độ RNA máy quang phổ nanodrop Error! Bookmark not defined 2.3.4 Tổng hợp cDNA từ RNA tổ ng số Error! Bookmark not defined 2.3.5 Khuế ch đa ̣i đoa ̣n DNA đă ̣c hiê ̣u cho BQCV tƣ̀ cDNA bằ ng phản ƣ́ng PCR Error! Bookmark not defined 2.3.6 Điện di kiểm tra gel agarose 1% Error! Bookmark not defined 2.3.7 Gắ n sản phẩm PCR vào vector pCR2.1 Error! Bookmark not defined 2.3.8 Biến nạp plasmid tái tổ hơ ̣p vào vi khuẩ n E coli Error! Bookmark not defined 2.3.9 Tách chiết plasmid Error! Bookmark not defined 2.3.10 Cắt kiểm tra plasmid với enzyme giới ̣n EcoRI Error! Bookmark not defined 2.3.11 Tinh sạch plasmid tái tổ hợp Error! Bookmark not defined 2.3.12 Giải trình tự gen máy xác định trình tự tự động ABI 3100 Error! Bookmark not defined 2.3.13 Nhân dòng gen mã hóa helicase và xây dƣ̣ng phát sinh loài Error! Bookmark not defined CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 PHÁT HIỆN SỰ LÂY NHIỄM BQCV TRÊN ONG MẬT Ở MIỀN BẮC VIỆT NAM Error! Bookmark not defined 3.1.1 Kết tách chiết RNA tổng số Error! Bookmark not defined 3.1.2 Phát BQCV kỹ thuật RT-PCR Error! Bookmark not defined 3.1.3 Tách dòng sản phẩm RT-PCR đoa ̣n DNA đă ̣c hiê ̣u BQCV Error! Bookmark not defined 3.1.4 Kế t quả giải trình tự đoa ̣n DNA đă ̣c hiê ̣u BQCVError! Bookmark not defined 3.2 SỰ PHÂN BỐ CỦA BQCV TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM Error! Bookmark not defined 3.3 XÁC ĐỊNH NGUỒN GỐC CỦA BQCV LƢU HÀNH TRÊN ONG MẬT TẠI CÁC TỈNH MIỀN BẮC VIỆT NAM Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên Tiếng Anh đầy đủ Tên Tiếng Việt BLAST Basic Local Alignment Search Tool Bp Base pair BQCV Black queen cell virus Virus gây bệnh thối đen mũ chúa cDNA Complementary DNA DNA bổ sung DEPC Diethyl pyrocacbonate DNA Deoxyribonleotide acid DTT Dithiothreito dNTP Deoxyribonleotide triphosphate Et - Br Ethidium bromide IPTG Isopropylthio-β-D-glactoside kDa Kilo Dalton LB Luria Bertani NCBI National Centre for Biotechnology Information Trung tâm quốc gia thông tin công nghệ sinh học OD Optical Density Mật độ quang học PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp Rnase Ribonuclease RT-PCR Reverse transcriptase Polymerase Chain Reaction Công cụ tìm kiếm trình tự Cặp bazơ Phản ứng chuỗi trùng hợp chép ngƣợc DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Ong chúa đàn ong nội Error! Bookmark not defined Hình 1.2 Ong chúa đàn ong ngoại Error! Bookmark not defined Hình 1.3 Tốp 10 nƣớc đạt kim ngạch xuất mật ong lớn giới năm 2013 Error! Bookmark not defined Hình 1.4 Ấu trùng bị nhiễm BQCV Error! Bookmark not defined Hình 1.5 Nhộng bị nhiễm BQCV Error! Bookmark not defined Hình 1.6 Ong chúa khỏe mạnh với mũ chúa mở nắpError! Bookmark not defined Hình 1.7 Sơ đồ cấu trúc genom BQCV Error! Bookmark not defined Hình 2.1 Sơ đồ mô tả các bƣớc thực nghiên cứuError! Bookmark not defined Hình 2.2 Vector tách dòng pCR2.1 Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Kế t quả điê ̣n di gel agarose xác đinh ̣ các mẫu dƣơng tính với Error! Bookmark n BQCV tƣ̀ các mẫu ong ở miề n Bắ c Viê ̣t Nam Error! Bookmark not defined Hình 3.2 Kết tách chiết plasmid tƣ̀ các khuẩ n la ̣c màu trắ ng và khuẩ n la ̣c màu xanh Error! Bookmark not defined Hình 3.3 Kết điện di gel agarose 1% sản phẩm cắt plasmidError! Bookmark not defi tái tổ hợp bằ ng EcoRI Error! Bookmark not defined Hình 3.4 Trình tự đoa ̣n DNA ngoa ̣i lai gắ n vector pCR2.1 tái tổ hợpError! Bookmark n Hình 3.5: Kế t quả so sánh trin ̀ h tƣ̣ nucleotide đoa ̣n DNA đă ̣c hiê ̣u BQCV lƣu hành Việt Nam với trình tự nucleotide BQCV từ Nam Phi.Error! Bookmark not defined Hình 3.6 Tỷ lệ nhiễm BQCV các tỉnh miền Bắc Việt NamError! Bookmark not defined Hình 3.7 Cây phát sinh loài BQCV dựa trình tự gen mã hóa HelicaseError! Bookmark no DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tình hình nhập mật ong vào Mỹ năm 2013Error! Bookmark not defined Bảng 2.1.Thành phần phản ứng hỗn hợp A Error! Bookmark not defined Bảng 2.2.Thành phần phản ứng hỗn hợp B Error! Bookmark not defined Bảng 2.3 Chu trình nhiệt cho phản ứng tổng hợp cDNAError! Bookmark not defined Bảng 2.4 Chu trình nhiê ̣t cho phản ứng PCR khuếch đại đoạn DNA đặc hiệu Error! Bookmark Bảng 2.5 Thành phần phản ứng gắn nối DNA vào vector tách dòngError! Bookmark not defi Bảng 2.6 Thành phần phản ứng cắt plasmid Error! Bookmark not defined Bảng 2.7.Thành phần phản ứng giải trình tự gen Error! Bookmark not defined Bảng 2.8 Chu trình nhiê ̣t cho phản ứng PCR khuếch đại đoạn DNA mã hóa helicase Error! Bookmark not defined Bảng 3.1 Kế t quả so sánh trình tƣ̣ nuclotide đoa ̣n DNA tách dòng với các trình tƣ̣ gen của BQCV Genbank Error! Bookmark not defined MỞ ĐẦU Từ xa xƣa, ong nhƣ các sản phẩm từ ong là quà quý giá mà thiên nhiên ban tặng cho ngƣời Ong có mặt khắp nơi trái đất đặc biệt là nơi có thảm thực vật phong phú và đa dạng Nghề nuôi ong và mô ̣t đóng vai trò quan trọng đời sống ngƣời Ong cung cấp cho các sản phẩm có giá trị cao nhƣ mật ong, phấn hoa, sữa chúa, keo ong, nọc ong Mật ong, phấn hoa là sản phẩm thu từ ong mật, có tác dụng cung cấp chất dinh dƣỡng cho ngƣời mà là phƣơng thuốc quý chữa bệnh Sáp ong, keo ong, nọc ong là sản phẩm có giá trị dùng để chữa bệnh và là nguyên liệu cho số ngành công nghiệp [6] Ngoài việc cung cấp các sản phẩm quý kể thì ong có vai trò quan trọng nông nghiê ̣p, góp phần làm tăng suất cho nhiều loại trồng thông qua quá trình thụ phấn cho hoa Việt Nam nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, khí hậu nóng ẩm mƣa nhiều, thảm thực vật phong phú và đa dạng Đó là điều kiện tốt để nƣớc ta phát triển nghề nuôi ong mật, nhƣng là điều kiện thuận lợi cho các bệnh ong phát triển [1] Hiện nay, Việt Nam có khoảng 1.500.000 đàn ong với sản lƣợng 37.000 mâ ̣t ong Đây là mô ̣t 10 sản phẩm xuất hàng đầu nƣớc và có xu hƣớng tăng theo tƣ̀ng năm Tuy nhiên năm gần đây, ngành ong của nƣớc ta phải đối mặt với việc xuất không ổn định tình hình dich ̣ bê ̣nh và vấn đề tồn dƣ kháng sinh có mật ong Ong mật thƣờng bị công nhiều tác nhân gây bệnh bao gồm virus , vi khuẩn, nấm và ký sinh trùng… Các liệu nghiên cƣ́u bệnh ong nhƣ̃ng năm gầ n cho thấ y, nguyên nhân chính gây tổ n thấ t cho nghề nuôi ong của nƣớc ta là virus, đặc biệt là virus gây bệnh thối đen mũ chúa (Black queen cell virus) Do thiếu kiến thức bệnh ong mật, hoă ̣c không biế t chin ́ h xác nguyên nhân gây bê ̣nh , ngƣời nuôi ong thƣờng sử dụng kháng sinh để kiểm soát tất các loại bệnh bao gồ m cả virus Tuy nhiên, bệnh ong virus đƣợc điều trị kháng sinh Việc sử dụng rộng rãi thuốc kháng sinh nhƣ là điều trị dự phòng cho bệnh không xác dẫn đến xuất vi khuẩn kháng kháng sinh, đồ ng thời dẫn đến tồn dƣ kháng sinh các sản phẩm ong Vì vậy, nghiên cứu phát các virus gây bệnh ong mâ ̣t đó có virus gây bệnh thối đen mũ chúa là cần thiết và là sở khoa học cho việc phòng chống bệnh, đề các biện pháp khoanh vùng dập tắt dịch bệnh góp phần phát triển bề n vƣ̃ng ngành nuôi ong Xuất phát từ các sở trên, thƣ̣c hiê ̣n đề tài: "Nghiên cứu phát virus gây bệnh thối đen mũ chúa (Black queen cell virus) ong mật miền Bắc Việt Nam" với các mục đích nghiên cứu nhƣ sau: - Chẩn đoán Black queen cell virus ong mật - Xác định phân bố Black queen cell virus tại các trại nuôi ong mật miền Bắc Việt Nam - Xác định nguồn gốc tiến hóa Black queen cell virus gây bê ̣nh ong mâ ̣t ở miề n Bắ c Viê ̣t Nam Đề tài đƣợc thực tại Phòng Vi sinh vật học Phân tử - Viện Công nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa ho ̣c và Công nghệ Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phùng Hữu Chính (2008), Cẩm nang nuôi ong, Nhà xuất Hà Nội Hồ Huỳnh Thuỳ Dƣơng (2003), Sinh học phân tử, Nhà xuất Giáo dục Nguyễn Duy Hoan, Phùng Đức Toàn, Ngô Nhật Thắng (2008), Giáo trình kỹ thuật nuôi ong mật, Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên 4 Lê Thanh Hoà, Phạm Viết Liên, Phạm Công Hoạt (2004), “Giám định virut gây bệnh "nhộng bọc" (Sacbrood) ong mật Việt Nam phƣơng pháp sinh học phân tử”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 11(2), tr.19-26 Võ Thị Thƣơng Lan (2011), Giáo trình sinh học phân tử tế bào ứng dụng, Nhà xuất giáo dục Việt Nam Nguyễn Văn Long, Nguyễn Huy Trí, Bùi Thị Điểm, Trần Thị Ngọc (2005), Giáo trình dâu tằm – ong mật, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lê Đình Lƣơng (2001), Nguyên lý kỹ thuật di truyền, Nhà xuất Khoa học và Kỹ thuật Phạm Hồng Thái, Hà Viết Cƣờng, Nguyễn Văn Giang, Trần Đình Chiến, Nguyễn Văn Đĩnh, Hà Quang Hùng (2011), “Molecular detections of sacbrood and deformed wing virus infected on Apis mellifera in the northern Vietnam”, Science and technology journal of agriculture and rural development,165, pp 33 – 36 Trƣơng Văn Tuấn, Đinh Quyết Tâm, Trần Văn Toàn, Lê Quang Trung, Phùng Quốc Chƣớng, Nguyễn Chi Mai (2012), “Virus ong Apis Mellifera và Apis Cerana Việt Nam”, Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn kỳ tháng 12 năm 2012, tr 28-33 10 Phạm Văn Ty (2013), Virut học, Nhà xuất giáo du ̣c Viê ̣t Nam 11 Nguyễn Ngọc Vững (2010), “Điều tra, đánh giá thực trạng sản xuất ngành ong Việt Nam”, Báo cáo kết thực dự án điều tra Tiếng Anh 12 Alippi, A.M (1999), “Bacterial diseases”, CIHEAM - Options Mediterraneennes, pp 31-46 13 Anderson, D L (1993), “Pathogens and queen bees”, Australasian Beekeeper 94, pp 292- 296 14 Anderson D.L, Gibbs A.J (1988), “Inapparent virus infections and their interactionsin pupae of honey bee (Apis mellifera Linnaeus) in Australia”, J.Gen Virol, 69, pp 1617- 1625 15 Allen and Ball (1996), “The incidence and word distribution of honeybee viruses”, Bee World, 77, pp 141 – 162 16 Aubert M., Ball B V., Fries I., Moritz R., Milani N., Bernardinelli I (2008), Virology and the honey bee Directorate - General for Research EUR, European Community 17 Bailey L., Wood LD., (1977), “Two small RNA viruses from honeybees and further obervations on sacbrood and acture bee paralysis viruses”, J Gen Virol 37,pp 175 – 182 18 Bailey L., Ball B.V., Perry J.N, (1981a), “The prevalence of viruses of honey bees in Britain”, Ann Appl Biol, 97, pp 109-118 19 Bailey L., Ball B.V., Perry J.N, (1983a), “Association of viruses with two protozoal pathogens of the honey bee”, Ann Appl Biol ,103, pp 13-20 20 Bailey L and Ball BV, (1991), “Honeybee pathology”, 2nd end, Academic, London 21 Ball and Gosh, et al (1999 ), “The nucleotide sequence of sacbrood virus of the honey bee: an insect picorna-like virus ”, Journal of General Virology, 80, pp.1541 1549 22 Byoung-Su Yoon, Lien Thi Kim Nguyen, Thuy Thi Dieu Nguyen, Dong Van Quyen, Suk-Chan Jung, Ki-Yoon Chang, Seung Won Kang (2012) “Phylogenetic analysis of black queen cell virus genotypes in South Korea”, Springer Science+Business Media New York 23 Bakonyi, T., Farkas, R., Szendroi, A., Dobos-Kovacs, M., Rusvai, M (2002), “Detection of acute bee paralysis virus by RT-PCR in honeybee and Varroa destructor field samples” rapid screening of representative Hungarian apiaries Apidologie, 33, pp 63-74 24 Chen Y.P Pettis J.S., Collins A., and Feldlaufer M.F (2006a), “Prevalence and Transmission of Honeybee Viruses”, Applied and Enviromental microbiology, Vol 72, No 1, pp 606-611 25 David Stone, M.S (2005), “An Introduction to Bee Biology”, Prepared for the UIUC BeeSpace Project, pp 13-14 26 Elize Lindsay Topley (2009), Molecular detection and characterisation of RNA viruses of honeybees, University of the Western Cape 27 Ellis, J.D and Munn, P (2005), “The worldwide health status of honey bees”, Bee World 86, pp.88-101 28 FAO, (2006), “Honey bee diseases and pests: a practical guide”, Agricultural and Food Engineering Technical reports, pp – 29 Glinski, Z., and Buczek, K (2003), “Response of the Apoidea to fungal infections”, Apiacta,38, pp.183–189 30 Grabensteiner E., Bakonyi T., Ritter W., Pechhacker H and Nowotny N (2007), “Development of a multiplex RT-PCR for the simultaneous detection of three viruses of the honeybee (Apis mellifera L.): Acute bee paralysis virus, Black queen cell virus and Sacbrood virus”, Journal of Invertebrate Pathology, Vol 94, No 3, March 2007, pp 222-225 31 Genersch,E., C.Yue, I.Fries, and J.R.Miranda (2006), “Detection of Deformed wing virus (DWV), a honeybee viral pathogen, in bumble bees (Bombus terrestris and Bombus pascuorum) with wing deformities”, J.Inver-tebr.Pathol,91, pp.61–63 32 Kondreddy Eswar Reddy, Jin Hyeong Noh, Se Eun Choe, Chang Hee Kweon, Mi Sun Yoo, Huong Thi Thanh Doan, Mummadireddy Ramya, Byoung-Su Yoon, Lien Thi Kim Nguyen, Thuy Thi Dieu Nguyen, Dong Van Quyen, Suk-Chan Jung, Ki-Yoon Chang, Seung Won Kang (2013), “Analysis of the complete genome sequence and capsid region of black queen cell viruses from infected honeybees (Apis mellifera) in Korea”, Springer Science+Business Media New York 33 Kilani, M (1999), “Nosemosis”, CIHEAM - Options Mediterraneennes, pp 99- 106 34 Moore, N, F., Reavy, B & King, L.A (1985) “General characteristic gene organization and expression of small RNA viruses of insects”, Journal of Gennal Virology, 66, pp.647459 35 Mayo, M A (2002), “Virus Taxonomy- Houston”, Arch Virol 147, pp.1071–1076 36 Mongi Benjeddou (2002), Molecular detection and genetic manipulation of the black queen cell virus, University of the Western Cape 37 Mongi Benjeddou, Neil Leat, Mike Allsopp, and Sean Davision, “Detection of Acute Bee Paralysis Virus and Black Queen Cell Virus from Honeybees by Reverse Transcriptase PCR” Appl Environ Microbiol May 2001; 67(5),pp 2384–2387 38 M Higes, F Esperón and J M Sánchez-Vizcaíno (2007), “Short communication First report of black queen-cell virus detection in honey bees (Apis mellifera) in Spain”, Spanish Journal of Agricultural Research 39 Neil Leat, Brenda Ball, Vandana Govan, and Sean Davision, “Analysis of the complete genome sequence of black queen-cell virus, a picorna-like virus of honey bees”, Journal of General Virologyvir.sgmjournals.org, 81, pp.2111–2119 40 Olivier V., Blanchard P., Chaouch S., Lallemand P., Schurr F., Celle O., Dubios E., Tordo, N., Thiéry, R., Houglgatte, R & Ribière, M., (2008), “Molecular Characterisation and phylogenetic analysis of chronic bee paralysis virus, a honey bee virus”,Virus Res, 132, pp 59-68 41 Rinderer T.E., Rothenbuhler W.C (1975a) “Responses of three genetically different stocks of the honeybee to a virus from bees with hairless-black syndrome”, J Invertebr Pathol 25, pp 297-300 42 Shimanuki H., and Knox D.A (2000), “Diagnosis of Honey Bee Diseases, U.S Department of Agriculture”, Agriculture Handbook, AH–690 43 Siede R., Büchler R (2003), “Symptomatic black queen cell virus infection of drone brood in Hessian apiaries”, Berl Munch Tierarztl Wochenschr 116, pp 130-133 44 Sambrook J., Russell D.W (2001), Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NewYork 45 Tentcheva D., Gauthier L., Zappulla N., Dainat B., Cousserans F., Colin M.E and Bergoin M (2004) “Prevalence and Seasonal Variations of Six Bee Viruses in Apis mellifera L and Varroa destructor Mite Populations in France, Appl Environ Microbiol, 70, pp 7185-7191 46 Yanping Chen, Yan Zhao, John Hammond, Hei-ti Hsu, Jay Evans, Mark Feldlaufer, “Multiple virus infections in the honey bee and genome divergence of honey bee viruses”, Journal of Invertebrate Pathology, 87 (2004),pp 84–93 47 Yang X., and Cox-Foster D L (2005), “Impact of an ectoparasite on the immunity and pathology of an invertebrate: Evidence for host immunosuppression and viral amplification”, Proc Nat Acad Sci USA 102, pp.7470–7475 Các website: 48 Agriculture and Agri-Food Canada 49 Báo Kinh tế Việt Nam, http://ven.vn/ 50 http://ongmiennui.com/ [...]... sở trên, chúng tôi thƣ̣c hiê ̣n đề tài: "Nghiên cứu phát hiện virus gây bệnh thối đen mũ chúa (Black queen cell virus) trên ong mật ở miền Bắc Việt Nam" với các mục đích nghiên cứu nhƣ sau: - Chẩn đoán Black queen cell virus trên ong mật - Xác định sự phân bố của Black queen cell virus tại các trại nuôi ong mật ở miền Bắc Việt Nam - Xác định nguồn gốc tiến hóa của Black queen cell virus gây. .. đến sự xuất hiện của vi khuẩn kháng kháng sinh, đồ ng thời dẫn đến tồn dƣ kháng sinh trong các sản phẩm của ong Vì vậy, nghiên cứu phát hiện các virus gây bệnh trên ong mâ ̣t trong đó có virus gây bệnh thối đen mũ chúa là rất cần thiết và là cơ sở khoa học cho việc phòng chống bệnh, đề ra các biện pháp khoanh vùng dập tắt dịch bệnh góp phần phát triển bề n vƣ̃ng ngành nuôi ong Xuất... Phùng Quốc Chƣớng, Nguyễn Chi Mai (2012), Virus trên ong Apis Mellifera và Apis Cerana ở Việt Nam , Tạp chí nông nghiệp và phát triển nông thôn kỳ 1 tháng 12 năm 2012, tr 28-33 10 Phạm Văn Ty (2013), Virut học, Nhà xuất bản giáo du ̣c Viê ̣t Nam 11 Nguyễn Ngọc Vững (2010), “Điều tra, đánh giá thực trạng sản xuất ngành ong Việt Nam , Báo cáo kết quả thực hiện dự án điều tra cơ bản Tiếng Anh 12... RNA viruses of insects”, Journal of Gennal Virology, 66, pp.647459 35 Mayo, M A (2002), Virus Taxonomy- Houston”, Arch Virol 147, pp.1071–1076 36 Mongi Benjeddou (2002), Molecular detection and genetic manipulation of the black queen cell virus, University of the Western Cape 37 Mongi Benjeddou, Neil Leat, Mike Allsopp, and Sean Davision, “Detection of Acute Bee Paralysis Virus and Black Queen Cell Virus. .. thuật nuôi ong mật, Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên 4 Lê Thanh Hoà, Phạm Viết Liên, Phạm Công Hoạt (2004), “Giám định virut gây bệnh "nhộng bọc" (Sacbrood) ong mật ở Việt Nam bằng phƣơng pháp sinh học phân tử”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 11(2), tr.19-26 5 Võ Thị Thƣơng Lan (2011), Giáo trình sinh học phân tử tế bào và ứng dụng, Nhà xuất bản giáo dục Việt Nam 6 Nguyễn Văn Long, Nguyễn... Việt Nam - Xác định nguồn gốc tiến hóa của Black queen cell virus gây bê ̣nh trên ong mâ ̣t ở miề n Bắ c Viê ̣t Nam Đề tài đƣợc thực hiện tại Phòng Vi sinh vật học Phân tử - Viện Công nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa ho ̣c và Công nghệ Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1 Phùng Hữu Chính (2008), Cẩm nang nuôi ong, Nhà xuất bản Hà Nội 2 Hồ Huỳnh Thuỳ Dƣơng (2003), Sinh học phân tử, Nhà... “Development of a multiplex RT-PCR for the simultaneous detection of three viruses of the honeybee (Apis mellifera L.): Acute bee paralysis virus, Black queen cell virus and Sacbrood virus , Journal of Invertebrate Pathology, Vol 94, No 3, March 2007, pp 222-225 31 Genersch,E., C.Yue, I.Fries, and J.R.Miranda (2006), “Detection of Deformed wing virus (DWV), a honeybee viral pathogen, in bumble bees (Bombus terrestris... J M Sánchez-Vizcaíno (2007), “Short communication First report of black queen- cell virus detection in honey bees (Apis mellifera) in Spain”, Spanish Journal of Agricultural Research 39 Neil Leat, Brenda Ball, Vandana Govan, and Sean Davision, “Analysis of the complete genome sequence of black queen- cell virus, a picorna-like virus of honey bees”, Journal of General Virologyvir.sgmjournals.org, 81,... Ball and Gosh, et al (1999 ), “The nucleotide sequence of sacbrood virus of the honey bee: an insect picorna-like virus ”, Journal of General Virology, 80, pp.1541 1549 22 Byoung-Su Yoon, Lien Thi Kim Nguyen, Thuy Thi Dieu Nguyen, Dong Van Quyen, Suk-Chan Jung, Ki-Yoon Chang, Seung Won Kang (2012) “Phylogenetic analysis of black queen cell virus genotypes in South Korea”, Springer Science+Business Media... J.Inver-tebr.Pathol,91, pp.61–63 32 Kondreddy Eswar Reddy, Jin Hyeong Noh, Se Eun Choe, Chang Hee Kweon, Mi Sun Yoo, Huong Thi Thanh Doan, Mummadireddy Ramya, Byoung-Su Yoon, Lien Thi Kim Nguyen, Thuy Thi Dieu Nguyen, Dong Van Quyen, Suk-Chan Jung, Ki-Yoon Chang, Seung Won Kang (2013), “Analysis of the complete genome sequence and capsid region of black queen cell viruses from infected honeybees (Apis mellifera) in