therapeutic effect of TG extract on chronic skin ulcers

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO PHÒNG BỘ QUỐC VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN QUÂN ĐỘI LƯƠNG THỊ KỲ THỦY NGHIÊN CỨU HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ LOÉT DA MẠN TÍNH CỦA CAO TG Chuyên ngành : Y học cổ truyền Mã số : 62 72 02 01 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC HÀ NỘI - 2016 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN QUÂN ĐỘI Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ ĐÌNH ROANH PGS.TS PHẠM VIẾT DỰ Phản biện 1: PGS TS Lê Lương Đống Phản biện 2: PGS TS Lê Văn Đoàn Phản biện 3: TS Phạm Thị Vân Anh Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nước Viện Y học cổ truyền Quân đội Vào hồi ngày tháng năm 2016 CÓ THỂ TÌM HIỂU LUẬN ÁN TẠI: - Thư viện Quốc gia - Thư viện Thông tin Y học Trung ương - Thư viện Viện Y học cổ truyền Quân đội ĐẶT VẤN ĐỀ Lý lựa chon đề tài Loét da mạn tính (chronic skin ulcer - CSU) tổn thương thường thấy lâm sàng ngoại khoa gặp nhiều bệnh Về khái niệm, loét da mạn tính tổn thương kéo dài tuần xu hướng liền cách đáng ý tái diễn thường xuyên Các vết thương mạn tính làm suy sụp người bệnh gánh nặng lớn hệ thống chăm sóc sức khỏe Mặc dù có cố gắng đặc biệt phòng ngừa điều trị nay, vết loét da mạn tính thách thức y học đại Loét da mạn tính, theo y học cổ truyền, với chứng trạng lở loét cục bộ, đau ngứa liên miên không dứt, khỏi lại tái phát Y dược học cổ truyền sử dụng để phòng ngừa điều trị loét da mạn tính từ lâu Ứng dụng y học cổ truyền vào điều trị loét da mạn tính xu ngày giới quan tâm khai thác nhiều “Cao TG” hay dầu lòng đỏ trứng gà nói đến “Nam dược thần hiệu” Tuệ Tĩnh (thế kỷ XIV) “Bản thảo cương mục, Bộ gia cầm” (Lý Thời Trân 1518-1593), thuốc dùng để trị liệu chứng lở, loét, có tác dụng nhiệt, giảm nhiễm khuẩn, giảm đau, làm ẩm da giúp hình thành mô Tuy nhiên, nước, thành phần, chế hiệu điều trị cao TG loét da mạn tính chưa nghiên cứu Mục tiêu đề tài: Xác định thành phần hóa học tính an toàn cao TG Nghiên cứu tác dụng cao TG loét da mạn tính mô hình thỏ thực nghiệm Đánh giá hiệu điều trị lâm sàng cao TG vết loét da mạn tính độ II, III Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài: Xác định thành phần cao TG Kết nghiên cứu cho thấy cao TG, có hiệu điều trị tốt loét da mạn tính: kích thích tăng sinh, tăng di trú hoạt hóa nguyên bào sợi, tăng sinh tổng hợp chất ngoại bào, tăng sinh mạch tăng tái tạo biểu mô, giảm MMP9, giảm phá hủy chất ngoại bào giúp làm nhanh liền vết loét da mạn tính Đưa giả thuyết chế tác dụng cao TG điều trị loét da mạn tính Cung cấp thuốc đơn giản, dễ sản xuất, áp dụng rộng rãi điều trị loét da mạn tính Đề tài áp dụng thành công mô hình nghiên cứu loét da mạn tính động vật thực nghiệm làm sở cho nghiên cứu tương tự Cấu trúc luận án: Luận án gồm: 129 trang Đặt vấn đề: trang; Tổng quan: 33 trang; Đối tượng phương pháp: 25 trang; Kết quả: 37 trang; Bàn luận: 29 trang; Kết luận: trang; Kiến nghị: trang; 158 tài liệu tham khảo (tiếng Việt: 21, tiếng Anh: 119, tiếng Trung: 18); 29 bảng; biểu đồ; 68 hình; 14 phụ lục Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm mô học da Thành phần chân bì chất ngoại bào (extracellular matrix - ECM) Hiểu biết cấu trúc vai trò chìa khóa ECM liền vết thương định thành công điều trị loét da mạn tính 1.2 Sinh bệnh học liền vết thương cấp tính Quá trình liền vết thương cấp tính trải qua bốn giai đoạn: Giai đoạn xung huyết; viêm; tăng sinh; tái tạo sửa chữa ECM 1.3 Loét da mạn tính theo y học đại Loét da mạn tính không liền theo trật tự thời gian thường thấy, chăm sóc tích cực, liền vết thương thất bại Các rối loạn bệnh lý chỗ: (1) Giảm yếu tố tăng sinh mô; (2) Mất cân men thủy phân protein chất ức chế; (3) Xuất tế bào già yếu 1.3.5 Điều trị loét da mạn tính Điều trị toàn thân (theo bệnh lý) Điều trị chỗ: cắt lọc hoại tử; chống viêm, chống nhiễm khuẩn; trì cân ẩm; điều trị chỗ tác nhân sinh học, ghép da liệu pháp khác Tuy nhiên, nay, loét da mạn tính thách thức lớn y học đại, chưa có thuốc phương pháp điều trị đặc hiệu 1.4 Quan điểm y học cổ truyền loét da mạn tính Theo Danh pháp y học cổ truyền, loét da mạn tính thuộc phạm trù ác sang (mụn nhọt độc lở loét), ung dương (mụn nhọt), sang dương (mụn nhọt, lở da), ung thư (ung nhọt), hay sang ung (sưng nóng, mủ), tịch sang (tỳ nén), kim sang (vết thương đao thương) Bệnh căn: “nguyên từ hư cảm tà, tà hư dẫn đến ứ, từ ứ gây trở ngại thương tổn khí” Bản bệnh hư, tiêu bệnh thực Chính khí không đủ, âm khí lưỡng hư gốc bệnh, có liên kết dư tà thấp nhiệt, khí huyết ứ trệ dấu hiệu “Hư” “ứ” nguyên nhân then chốt làm cho vết loét không liền miệng Vương Nhã Kiệt Khuyết Hoa Phát (2009) chia chứng trạng lâm sàng thành: thấp nhiệt ứ trở, khí hư huyết ứ tỳ hư thấp thịnh Lấy pháp “thanh – hóa – bổ” làm cốt áp dụng cho thể bệnh mà có 1) Thanh nhiệt, trừ thấp, hóa ứ, sinh điều trị chứng thấp nhiệt ứ trở; 2) Ích khí, hóa ứ, sinh điều trị chứng khí hư huyết ứ; 3) Kiện tỳ trừ thấp sinh điều trị chứng tỳ hư thấp thịnh để đạt đích “khứ hủ sinh cơ, bình bì trưởng” 1.5 Các mô hình loét da mạn tính thực nghiệm Năm 1979, Rudolph R đưa mô hình gây vết loét da động vật tiêm Adriamycin da Thời gian tổn thương >50 ngày (chuột) từ 45 - 65 ngày (thỏ) phù hợp cho nghiên cứu thực nghiệm 1.6 Cao TG Cao TG, tên đề tài cao trứng gà, Tuệ Tĩnh (thế kỷ thứ 14) nhắc đến “Nam dược thần hiệu - Mười khoa chữa bệnh”, dùng điều trị nhọt lở, thứ lở bị Cao trứng gà chế theo phương pháp gia nhiệt truyền thống có tính vị: cam, ôn, không độc Phương thuốc sử dụng bệnh da liễu, loét, bỏng… Rastegar F cộng (2011) nghiên cứu hiệu điều trị liền vết thương bỏng độ III dầu lòng đỏ trứng gà thực nghiệm cho thấy vết bỏng liền nhanh, biểu mô tái tạo hoàn toàn, không thành sẹo Mặc dù sử dụng lâm sàng điều trị bệnh da mạn tính, thẩm mỹ, thành phần, hiệu điều trị loét da mạn tính cao TG chưa nghiên cứu nước nước Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thuốc hoá chất nghiên cứu Cao TG sản xuất khoa Dược - Viện Y học cổ truyền Quân đội Cao lỏng bào chế tỷ lệ 6g dược liệu/ml (hình 2.1) 2.2 Đối tượng nghiên cứu Xác định thành phần cao TG: mẫu cao TG lấy ngẫu nhiên lô sản phẩm sản xuất Xác định tính an toàn cao TG: Kích ứng da: 03 thỏ chủng Newzealand White Nghiên cứu độc tính cấp đường tiêm da đường uống: Chuột nhắt trắng chủng Swiss, (Viện Vệ sinh dịch tễ TƯ) Mỗi lô 10 Nghiên cứu độc tính cấp da: 36 thỏ chủng Newzealand White Hình 2.1 Dạng đóng gói cao TG Độc tính bán trường diễn da: 30 thỏ chủng Newzealand White Nghiên cứu hiệu điều trị cao TG thực nghiệm: 30 thỏ chủng Newzealand White Đánh giá hiệu điều trị lâm sàng: 64 vết loét da mạn tính độ II, độ III 59 bệnh nhân điều trị nội, ngoại trú khoa: A1, A2, A6, A7, A10, A15, B1A, B1B, B1C Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 từ tháng 10/2012 đến tháng 4/2015 * Tiêu chuẩn lựa chọn: vết loét da mạn tính độ II, III * Tiêu chuẩn loại trừ: loại trừ vết loét da độ IV, vết loét giang mai, lao, hủi; bệnh nhân suy giảm miễn dịch toàn thân, bệnh hệ thống, tâm thần, bệnh lý máu, bệnh nhân nguy kịch đến tính mạng, không chịu hợp tác, bỏ thời gian điều trị 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Xác định thành phần hóa học tính an toàn cao TG 2.3.1.1 Xác định thành phần hóa học cao TG Xác định acid béo sắc ký khí khối phổ (GC/MS) Định lượng số kim loại máy đo quang phổ hấp thụ nguyên tử Xác định pH thiết bị Seven Easy 2.3.1.2 Xác định tính an toàn cao TG * Nghiên cứu độc tính cấp: theo đường uống, đường tiêm da (hướng dẫn WHO) bôi da (hướng dẫn Tổ chức hợp tác phát triển kinh tế (OECD) * Nghiên cứu độc tính bán trường diễn đường da 90 ngày thỏ theo hướng dẫn 411 OECD, 1981 2.3.2 Nghiên cứu hiệu điều trị cao TG mô hình thực nghiệm loét da mạn tính Phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm đối chứng tự thân động vật Sử dụng mô hình thực nghiệm gây loét Adriamycin thỏ theo Rudolph R cộng (1979) * Thiết lập mô hình điều trị thử nghiệm cao TG Trên thỏ tiến hành song song phương pháp điều trị: Vết loét chứng: Nhóm (10 thỏ): Thay băng, rửa đắp vết loét gạc tẩm dung dịch NaCl 0,9% Nhóm (20 thỏ): bôi mỡ silver sulfadiazine (SS) Vết loét nghiên cứu (30 thỏ): bôi cao TG Thay băng: ngày/lần, chụp ảnh vết loét Địa điểm thực hiện: Labo Nghiên cứu ứng dụng điều trị bỏng, Viện bỏng Quốc gia Lê Hữu Trác Hình 2.5 Đo diện tích vết loét chương trình Image Pro Plus, * Đánh giá hiệu điều trị đại thể Đo kích thước thực ảnh chụp vết loét (với thước chuẩn (cm) Askina, B.Braun) thời điểm bắt đầu điều trị, sau 14 ngày 22 ngày phần mềm Image Pro Plus 4.5 (Mỹ) chế độ polygon (hình 2.5) Đánh giá hiệu cao TG tỉ lệ giảm kích thước vết loét: Tỉ lệ giảm kích thước vết loét (%) = (kích thước ban đầu – kích thước thời điểm kiểm tra)/ (kích thước ban đầu) x 100 Đánh giá hiệu điều trị thực nghiệm hệ thống tính điểm DESIGN Sanada H cộng (2004) (bảng 2.2) * Nghiên cứu mô bệnh học Sinh thiết vết loét lần: bắt đầu điều trị, ngày thứ 14, ngày thứ 22 - Xét nghiệm mô bệnh học: Nhuộm HE (hematoxylin eosin), đọc kính hiển vi quang học - Phương pháp hóa mô miễn dịch: Chọn ngẫu nhiên mẫu sinh thiết động vật, nhuộm hóa mô miễn dịch xác định có mặt kháng nguyên CD34; Vimentin; MMP9 theo kỹ thuật nhuộm ABC - Nghiên cứu siêu cấu trúc: Làm tiêu mẫu sinh thiết, đọc kết kính hiển vi điện tử quét (JSM 5410LV, JEOL, Nhật), kính hiển vi điện tử truyền qua (JEM 1400, JEOL, Nhật Bản) 2.3.3 Đánh giá hiệu điều trị cao TG lâm sàng Phương pháp thử nghiệm lâm sàng, nghiên cứu dọc cắt ngang Điều trị toàn thân: theo phác đồ Điều trị chỗ: Chuẩn bị vết loét: tiến hành làm bề mặt, cắt lọc Tất vết loét thay băng, rửa bôi thuốc lần/ngày Cách dùng thuốc: Xịt cao TG lên bề mặt vết loét lần/ngày Liều lượng: 0,5 - ml cao TG/1000 mm2 da Phủ lớp gạc mỏng cố định * Phương pháp đánh giá hiệu điều trị lâm sàng Đo kích thước vết loét: Đo kích thước ảnh chụp thời điểm: bắt đầu điều trị, kết thúc điều trị phần mềm Image Pro Plus 4.5 (Mỹ) chế độ polygon Bảng 2.2 Cách tính điểm vết loét dựa tiêu DESIGN Chỉ tiêu DESIGN Độ sâu Tiết dịch Kích thước (mm2) Nhiễm trùng Mô hạt Mô hoại tử Hốc Giá trị Điểm Độ I, II, III, IV - Không; - Ít đến trung bình; - Nhiều 0; 3; 0; [...]... (EGF) Như vậy, có thể thấy rằng cao TG có tác dụng làm tăng mức các yếu tố này và thông qua đó giúp thúc đẩy nhanh quá trình liền vết thương Trong đó, vai trò chủ yếu đối với quá trình tăng sinh mô hạt là do acid arachidonic (AA) và acid docosahexaenoic (DHA) có trong thành phần cao TG Acid arachidonic có vai trò kiểm soát đối với nhiều hệ thống của cơ thể, chủ yếu là trong viêm và miễn dịch, tham gia... phá hủy mô tế bào, giúp ngăn chặn một trong những nguyên nhân gây rối loạn bệnh lý tại chỗ của vết loét da mạn tính Về cơ chế tác dụng của cao TG có thể khái quát trong sơ đồ sau: Hình 4.1 Sơ đồ cơ chế tác dụng của cao TG trên loét da mạn tính 4.3 Hiệu quả điều trị loét da mạn tính của cao TG trên lâm sàng Đặc điểm bệnh nhân, vết loét điều trị bằng cao TG Trong nghiên cứu của chúng tôi, nhóm bệnh nhân... giảm mạnh ở các vết loét được điều trị bằng cao TG vào ngày thứ 14 cho thấy giảm quá trình phá hủy các protein Với thành phần chủ yếu là các acid béo và cholesterol cho thấy cao TG tạo ra môi trường không thuận lợi cho sự phát triển của vi khuẩn Bên cạnh đó, các ion magie, kẽm ảnh hưởng tới sự hoạt hóa của các men thủy phân protein Trong thành phần cao TG có mặt của các acid béo như acid oleic, acid... toàn của cao TG 4.1.1 Thành phần hóa học của cao TG Thành phần cao TG chứa các acid béo no và không no thuộc các nhóm omega-3, omega-6, omega-7 và omega-9, các chất đang đặc biệt được y học hiện đại quan tâm bởi hoạt tích sinh học của chúng Acid oleic (omega-9): là một chất chống oxy hóa bởi tác dụng ngăn chặn các gốc tự do Acid linolenic có tác dụng chống oxy hóa, đặc biệt được sử dụng trong các thuốc... sử dụng trong điều trị các bệnh tự miễn Ngoài ra, cao TG có chứa cholesterol là môi trường không thuận lợi cho sự phát triển của các vi khuẩn Sự có mặt của các kim loại Mg và Zn tham gia thành phần của các men thủy phân protein phụ thuộc kim loại, giúp tạo ra sự cân bằng cho các rối loạn bệnh lý kéo dài tại các vết loét 4.1.2 Đánh giá tính an toàn của cao TG Xác định độc tính cấp của cao TG Theo các... tính cấp theo đường uống, đường tiêm dưới da và đường ngoài da Xác định độc tính bán trường diễn của cao TG Trên cơ sở các hướng dẫn của OECD (1981) chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên da 90 ngày của cao TG trên thỏ Kết quả nghiên cứu cho thấy: bôi liên tục cao TG trong 12 tuần với mức liều cao nhất (14,4g/kg/ngày), không gây ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung như vận động,... da mạn tính độ II, độ III được điều trị bằng cao TG có thời gian điều trị trung bình là 25,67±14,34 ngày Mặc dù các vết loét độ III chiếm đa số 85,9% vết loét nhưng rõ ràng thời gian điều trị bằng cao TG ngắn hơn so với các kết quả điều trị bằng các phương pháp khác được áp dụng trong điều trị tại các bệnh viện Với thời gian điều trị trung bình của cao TG, có tới 58/64 vết loét (90.6%) giảm kích thước... chứng Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy cao TG có hiệu quả làm giảm tiết dịch, tăng sinh mô, tăng sinh mô hạt mạnh Điều trị bằng cao TG làm tổng số điểm DESIGN giảm ≥50% ở 57/64 vết loét (89.1%) Tương ứng với y học cổ truyền, như vậy, cao TG có tác dụng sinh cơ và liễm sang tốt 26 Trên lâm sàng, điều trị các vết loét da mạn tính bằng cao TG làm giảm kích thước, tăng sinh mô hạt, giảm hoại... LUẬN Qua kết quả nghiên cứu cho phép rút ra một số kết luận sau: 1 Thành phần của cao TG chứa các acid béo mạch dài không no: acid arachidonic, acid docosahexaenoic acid oleic, acid linolenic và cholesterol Cao TG không gây kích ứng trên da, không có độc tính cấp theo đường uống, đường tiêm dưới da và đường ngoài da Cao TG không gây độc tính bán trường diễn theo đường ngoài da ở cả liều tương đương sử... và công nhận cao TG là thuốc điều trị loét da mạn tính 2 Sử dụng thêm các kỹ thuật nghiên cứu hiện đại để làm sáng tỏ hơn cơ chế tác dụng của cao TG và khả năng sử dụng trong điều trị vết thương mạn tính 28 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 1 Lương Thị Kỳ Thủy, Phạm Viết Dự, Nguyễn Thị Tuyết Nga, (2014), Nghiên cứu tính an toàn của cao TG trên động vật