Nghiên cứu chọn tạo một số dòng tạm bội ở cây ăn quả có múi

B󰗙 GIÁO D󰗥C VÀ ÀO T󰖡O B󰗙 NÔNG NGHI󰗇P VÀ PTNT VI󰗇N KHOA H󰗍C NÔNG NGHI󰗇P VI󰗇T NAM LÊ QU󰗑C HÙNG NGHIÊN C󰗩U CH󰗍N T󰖡O M󰗙T S󰗑 DÒNG TAM B󰗙I 󰗟 CÂY N QU󰖣 CÓ MÚI CHUYÊN NGÀNH DI TRUY󰗁N VÀ CH󰗍N GI󰗑NG CÂY TR󰗓NG Mã s󰗒: 62. 62. 01.11 TÓM T󰖯T LU󰖭N ÁN TI󰖿N S NÔNG NGHI󰗇P Hà N󰗚i - 2015 Công trình 󰗤c hoàn thành t󰖢i VI󰗇N KHOA H󰗍C NÔNG NGHI󰗇P VI󰗇T NAM Ng󰗞i h󰗜ng d󰖬n khoa h󰗎c: 1. GS.TS. 󰗘 Nng V󰗌nh 2. TS.Hà Th󰗌 Thúy Ph󰖤n bi󰗈n 1: Ph󰖤n bi󰗈n 2: Ph󰖤n bi󰗈n 3: Lu󰖮n án d󰗲 ki󰗀n s󰖾 󰗤c b󰖤n v󰗈 tr󰗜c h󰗚i 󰗔ng ch󰖦m lu󰖮n án ti󰗀n s c󰖦p Vi󰗈n, h󰗎p t󰖢i Vi󰗈n Khoa h󰗎c Nông nghi󰗈p Vi󰗈t Nam vào ngày tháng nm 󰜧 Có th󰗄 tìm hi󰗄u lu󰖮n án t󰖢i: Hà N󰗚i - 2015 1 M󰗟 󰖧U * Tính c󰖦p thi󰗀t c󰗨a 󰗂 tài Cây n qu󰖤 có múi (Citrus) là lo󰖢i cây n qu󰖤 có giá tr󰗌 dinh d󰗢ng và kinh t󰗀 cao. T󰗖ng s󰖤n l󰗤ng qu󰖤 có múi trên th󰗀 gi󰗜i 󰖢t 85,6 tri󰗈u t󰖦n niên v󰗦 2012/2013, trong ó cam chi󰗀m 50% t󰗖ng s󰖤n l󰗤ng (USDA, 2013). S󰖤n xu󰖦t qu󰖤 có múi v󰖬n ang ti󰗀p t󰗦c tng do thu nh󰖮p c󰗨a ng󰗞i dân 󰗠 m󰗚t s󰗒 qu󰗒c gia tng nhanh nh Trung qu󰗒c, Hàn Qu󰗒c, Nga, 󰖥n 󰗚, các n󰗜c ông Âu, các n󰗜c ASEAN 󰗟 Trung Qu󰗒c, t󰗖ng l󰗤ng hoa qu󰖤 ti tiêu th󰗦 tng r󰖦t nhanh, trong ó tiêu th󰗦 qu󰖤 có múi tng nhanh hn c󰖤. Trung Qu󰗒c vn lên chi󰗀m v󰗌 trí th󰗪 2 v󰗂 s󰖤n l󰗤ng qu󰖤 có múi ch󰗊 sau Brasil (Deng, 2008). N󰗜c ta n󰖲m 󰗠 trung tâm phát sinh c󰗨a r󰖦t nhi󰗂u gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi (Võ Vn Chi, 1997), (Ph󰖢m Hoàng H󰗚, 1992). Di󰗈n tích cây n qu󰖤 có múi 󰗠 n󰗜c ta nm 2011 󰖢t 138.200 ha, chi󰗀m kho󰖤ng 18% di󰗈n tích cây n qu󰖤 c󰖤 n󰗜c v󰗜i s󰖤n l󰗤ng hàng nm là 1,35 tri󰗈u t󰖦n (C󰗦c tr󰗔ng tr󰗎t, B󰗚 NN và PTNT, 2013). Tuy nhiên, hàng nm n󰗜c ta v󰖬n ph󰖤i nh󰖮p kh󰖪u m󰗚t l󰗤ng l󰗜n cam quýt t󰗬 n󰗜c ngoài. S󰖤n xu󰖦t cây n qu󰖤 có múi 󰗠 n󰗜c ta còn g󰖸p r󰖦t nhi󰗂u khó khn do b󰗈nh d󰗌ch và ch󰖦t l󰗤ng gi󰗒ng. H󰖨u h󰗀t các gi󰗒ng tr󰗔ng ph󰗖 bi󰗀n 󰗠 n󰗜c ta là các gi󰗒ng ch󰖦t l󰗤ng th󰖦p, nhi󰗂u h󰖢t, cha áp 󰗪ng 󰗤c yêu c󰖨u n ti và ch󰗀 bi󰗀n. Trong khi ó, tính tr󰖢ng không h󰖢t có vai trò r󰖦t quan tr󰗎ng 󰗒i v󰗜i s󰖤n xu󰖦t qu󰖤 có múi ch󰖦t l󰗤ng cao. Tính tr󰖢ng có h󰖢t và nhi󰗂u h󰖢t làm gi󰖤m giá tr󰗌 thng m󰖢i c󰗨a công nghi󰗈p ch󰗀 bi󰗀n qu󰖤 có múi (Saunt J, 1990). Hi󰗈n nay, h󰖨u h󰗀t các nghiên c󰗪u ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t 󰗠 các n󰗜c trên th󰗀 gi󰗜i ang 󰗤c th󰗲c hi󰗈n theo các phng pháp nh gây 󰗚t bi󰗀n, lai t󰖢o gi󰗰a các gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i, t󰖢o dòng gi󰗒ng tam b󰗚i b󰖲ng lai h󰗰u tính gi󰗰a các dòng gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i v󰗜i các dòng gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i (Roose và Williams, 2000), nuôi c󰖦y n󰗚i nh h󰖢t non (Gmitter và c󰗚ng s󰗲, 1990), ch󰗎n các phôi tam b󰗚i hình thành t󰗲 nhiên (Esen và c󰗚ng s󰗲, 1971), c󰗪u phôi tam b󰗚i 󰗠 các h󰖢t lép, h󰖢t nh󰗐 (Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 1996), dung h󰗤p t󰗀 bào tr󰖨n nh󰗌 b󰗚i v󰗜i t󰗀 bào tr󰖨n n b󰗚i (Ollitraul và c󰗚ng s󰗲, 2000). 󰗩ng d󰗦ng các phng pháp công ngh󰗈 sinh h󰗎c trong t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t nh c󰗪u phôi, dung h󰗤p t󰗀 bào tr󰖨n, ch󰗎n bi󰗀n d󰗌 t󰗀 bào soma (Froelicher và c󰗚ng s󰗲, 2003); (Grosser và c󰗚ng s󰗲, 2000); (Juárez và c󰗚ng s󰗲, 1990); (Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 1998). Các gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi ang tr󰗔ng ph󰗖 bi󰗀n 󰗠 n󰗜c ta là cam Xã oài, cam Vân Du, cam Sành, cam Bù, b󰗠i Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, b󰗠i oan Hùng, 󰗂u là gi󰗒ng nhi󰗂u h󰖢t. Trong khi ó, công tác nghiên c󰗪u ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t m󰗜i 󰗤c các vi󰗈n trong n󰗜c tri󰗄n khai m󰖦y nm g󰖨n ây, tuy v󰖮y, còn nhi󰗂u v󰖦n 󰗂 ph󰖤i nghiên c󰗪u ti󰗀p. Do ó, 󰗄 phát huy th󰗀 m󰖢nh ngu󰗔n gen cây có múi và th󰗌 tr󰗞ng tiêu th󰗦 qu󰖤 có múi, n󰗜c ta c󰖨n t󰖮p trung cho nghiên c󰗪u c󰖤i t󰖢o các gi󰗒ng cây có múi 󰖸c s󰖤n, có u th󰗀 phát tri󰗄n nh cam Sành, b󰗠i Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, theo h󰗜ng t󰖢o các gi󰗒ng không h󰖢t t󰗬 các gi󰗒ng này v󰗜i yêu c󰖨u gi󰗒ng không h󰖢t, u th󰗀 lai, thích nghi t󰗒t và ch󰗒ng ch󰗌u sâu b󰗈nh. Xu󰖦t phát t󰗬 các phân tích trên ây, chúng tôi ã th󰗲c hi󰗈n 󰗂 tài: 󰜝Nghiên c󰗪u ch󰗎n t󰖢o m󰗚t s󰗒 dòng tam b󰗚i 󰗠 cây n qu󰖤 có múi󰜞. * M󰗦c ích nghiên c󰗪u: 2 (i) M󰗦c ích nghiên c󰗪u c󰗨a chúng tôi là t󰖢o ra s󰗒 l󰗤ng l󰗜n các dòng b󰗠i và cam Sành tam b󰗚i làm v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t, ít h󰖢t. (ii) Kh󰖤o nghi󰗈m, ánh giá và ch󰗎n l󰗎c các dòng b󰗠i và cam Sành tam b󰗚i nh󰖲m b󰗜c 󰖨u xác 󰗌nh 󰗤c m󰗚t s󰗒 dòng tri󰗄n v󰗎ng và các phng pháp ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i không h󰖢t. * Tính m󰗜i c󰗨a 󰗂 tài: (i) L󰖨n 󰖨u tiên 󰗠 n󰗜c ta, 󰗂 tài ã t󰖢o ra s󰗒 l󰗤ng l󰗜n các dòng cây n qu󰖤 có múi tam b󰗚i b󰖲ng phng pháp lai gi󰗰a các gi󰗒ng b󰗠i, cam Sành b󰖤n 󰗌a nh󰗌 b󰗚i v󰗜i các gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i (2x 󽞵 4x) và cam Sành lai t󰗲 nhiên (2x 󽞵 2x). 󰗂 tài ã góp ph󰖨n t󰖢o ra 󰗤c 92 dòng b󰗠i tam b󰗚i và 22 dòng cam Sành tam b󰗚i làm v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t. (ii) K󰗀t qu󰖤 󰗄 tài ã ch󰗎n 󰗤c 2 dòng cam Sành và 6 dòng b󰗠i tam b󰗚i có sinh tr󰗠ng kh󰗐e, ít nhi󰗆m sâu b󰗈nh, trong ó có 2 dòng b󰗠i tam b󰗚i ghép m󰖰t lên cây b󰗠i chua 5 tu󰗖i ã ra hoa k󰗀t qu󰖤 không h󰖢t. Qu󰖤 có d󰖢ng tròn, 󰖺p, v󰗐 vàng, kh󰗒i l󰗤ng trung bình 494,16 g/qu󰖤, múi qu󰖤 󰗂u, tép qu󰖤 vàng, m󰗎ng n󰗜c, v󰗌 ng󰗎t, không the 󰖰ng. (iii) L󰖨n 󰖨u tiên 󰗠 n󰗜c ta 󰗂 tài ã kh󰖴ng 󰗌nh 󰗤c kh󰖤 nng t󰖢o dòng gi󰗒ng b󰗠i không h󰖢t tam b󰗚i b󰖲ng phng pháp lai t󰖢o cây. Phng pháp ghép m󰖰t non lên cây b󰗠i chua 5 tu󰗖i ã cho phép rút ng󰖰n 󰗤c th󰗞i gian ra hoa k󰗀t qu󰖤 c󰗨a các dòng tam b󰗚i m󰗜i ch󰗎n l󰗎c so v󰗜i ghép m󰖰t trên g󰗒c Ch󰖦p non 7 󰗀n 8 tháng. * Nh󰗰ng óng góp c󰗨a 󰗂 tài + Ý ngha khoa h󰗎c: L󰖨n 󰖨u tiên 󰗠 n󰗜c ta, 󰗂 tài ã t󰖢o 󰗤c s󰗒 l󰗤ng l󰗜n các dòng cây n qu󰖤 có múi tam b󰗚i t󰗬 các ngu󰗔n gi󰗒ng cây n qu󰖤 b󰖤n 󰗌a. Trong ó có các dòng b󰗠i tam b󰗚i sinh tr󰗠ng t󰗒t và hai dòng ã ra qu󰖤 không h󰖢t. 󰖸c bi󰗈t 󰗂 tài ã góp ph󰖨n xây d󰗲ng h󰗜ng nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng b󰗠i, cam Sành không h󰖢t tam b󰗚i. 󰗂 tài ã xây d󰗲ng và 󰗪ng d󰗦ng thành công các quy trình công ngh󰗈 t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi tam b󰗚i. Quy trình ã 󰗤c 󰗪ng d󰗦ng thành công v󰗜i 8 c󰖸p lai gi󰗰a 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 2x 󽞵 4x và ã t󰖢o ra nhi󰗂u dòng tam b󰗚i khác nhau. 󰗂 tài cng ã ph󰗒i h󰗤p gi󰗰a các phng pháp ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng truy󰗂n th󰗒ng (t󰖢o dòng t󰗪 b󰗚i th󰗄, lai gi󰗰a 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau) v󰗜i các phng pháp Công ngh󰗈 Sinh h󰗎c nh c󰗪u phôi in vitro, k󰗺 thu󰖮t rút ng󰖰n th󰗞i gian ch󰗎n gi󰗒ng thông qua k󰗺 thu󰖮t ghép m󰖰t non lên cây b󰗠i chua 5 tu󰗖i. Các dòng tam b󰗚i, các quy trình công ngh󰗈 ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i và các d󰗰 li󰗈u khoa h󰗎c thu 󰗤c có th󰗄 làm tài li󰗈u tham kh󰖤o có giá tr󰗌 cho gi󰖤ng d󰖢y và nghiên c󰗪u khoa h󰗎c 󰗠 cây n qu󰖤 có múi. + Ý ngha th󰗲c ti󰗆n: 󰗂 tài ã cung c󰖦p s󰗒 l󰗤ng l󰗜n các dòng tam b󰗚i (3x) t󰗬 lai gi󰗰a các gi󰗒ng có m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau ph󰗦c v󰗦 cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t 󰗠 n󰗜c ta. B󰗜c 󰖨u 󰗂 tài ã tuy󰗄n ch󰗎n 󰗤c 2 dòng b󰗠i tam b󰗚i không h󰖢t t󰗬 b󰗠i 󰖸c s󰖤n Vi󰗈t Nam và m󰗚t s󰗒 các dòng b󰗠i và cam Sành tam b󰗚i tri󰗄n v󰗎ng khác ang 󰗤c ti󰗀p t󰗦c kh󰖤o nghi󰗈m. 󰗂 tài m󰗠 ra tri󰗄n v󰗎ng 󰗪ng d󰗦ng các k󰗺 thu󰖮t ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t vào th󰗲c ti󰗆n n󰗜c ta. * 󰗒i t󰗤ng và ph󰖢m vi nghiên c󰗪u 󰗒i t󰗤ng: Cây b󰗒 cho ph󰖦n là các gi󰗒ng b󰗠i Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, cam Sành, cam Vân Du t󰗪 b󰗚i ch󰗎n t󰖢o 󰗤c t󰗬 x󰗮 lý colchicine các gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i thu󰗚c 󰗂 tài 󰜝Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng cây có múi không h󰖢t có ngu󰗔n g󰗒c b󰖤n 󰗌a󰜞 giai o󰖢n 3 t󰗬 nm 2001 󰗀n 2005 và 󰗤c tr󰗔ng t󰖢i Tr󰖢i th󰗲c nghi󰗈m Vn Giang - Hng Yên c󰗨a Vi󰗈n Di truy󰗂n Nông nghi󰗈p. Các gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i ã 󰗤c C󰗦c tr󰗔ng tr󰗎t, B󰗚 Nông nghi󰗈p và Phát tri󰗄n Nông thôn c󰖦p b󰖲ng b󰖤o h󰗚 gi󰗒ng cây tr󰗔ng m󰗜i theo Quy󰗀t 󰗌nh s󰗒 515/Q-TT-VPBH, ngày 12 tháng 11 nm 2013. Cây m󰖺 (2x) 󰗤c ch󰗎n t󰗬 nh󰗰ng cây kho󰖼 m󰖢nh, hoa n󰗠 t󰖮p trung 󰗠 các gi󰗒ng b󰗠i Nm Roi, Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, cam Sành. Các dòng b󰗠i tam b󰗚i t󰖢o 󰗤c t󰗬 các c󰖸p lai gi󰗰a b󰗠i t󰗪 b󰗚i v󰗜i b󰗠i nh󰗌 b󰗚i và các dòng cam Sành tam b󰗚i ch󰗎n t󰖢o 󰗤c t󰗬 c󰗪u phôi h󰖢t nh󰗐 h󰖢t lép in vitro t󰗬 󰗂 tài 󰜝Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng b󰗠i và cam, quýt không h󰖢t b󰖲ng công ngh󰗈 sinh h󰗎c󰜞 giai o󰖢n t󰗬 nm 2006 󰗀n 2010. Ph󰖢m vi nghiên c󰗪u: 󰗂 tài nghiên c󰗪u và s󰗮 d󰗦ng các ngu󰗔n v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u g󰗔m gi󰗒ng b󰗠i, cam Sành, cam Vân Du nh󰗌 b󰗚i và t󰗪 b󰗚i. Các phng pháp ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i b󰖲ng lai gi󰗰a hai m󰗪c b󰗚i th󰗄 và c󰗪u phôi in vitro, các phng pháp o m󰗪c b󰗚i th󰗄 và kh󰖤o nghi󰗈m, ánh giá các dòng tam b󰗚i ã 󰗤c s󰗮 d󰗦ng trong nghiên c󰗪u. 󰗂 tài 󰗤c tri󰗄n khai t󰖢i Phòng Thí nghi󰗈m Tr󰗎ng i󰗄m Công ngh󰗈 t󰗀 bào Th󰗲c v󰖮t, Vi󰗈n Di truy󰗂n Nông nghi󰗈p, Tr󰖢i th󰗲c nghi󰗈m Vn Giang - Hng Yên, Tr󰖢i th󰗲c nghi󰗈m Vi󰗈n Nghiên c󰗪u Rau qu󰖤 và m󰗚t s󰗒 v󰗞n 󰗠 các 󰗌a phng nh Cao Phong - Hòa Bình, Hàm Yên - Tuyên Quang. * B󰗒 c󰗦c c󰗨a lu󰖮n án Lu󰖮n án dày trang, g󰗔m 3 chng v󰗜i 47 b󰖤ng, 27 hình 󰖤nh và 4 ph󰗦 l󰗦c. Có 129 tài li󰗈u tham kh󰖤o 󰗤c s󰗮 d󰗦ng. CHNG 1 T󰗕NG QUAN TÀI LI󰗇U 1. Các phng pháp nghiên c󰗪u ch󰗎n t󰖢o cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t trên th󰗀 gi󰗜i Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi trên th󰗀 gi󰗜i t󰖮p trung theo h󰗜ng c󰖢nh tranh v󰗂 nng su󰖦t, ch󰖦t l󰗤ng và kh󰖤 nng kháng b󰗈nh, trong ó u tiên hàng 󰖨u là t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t (Esen và Soost, 1971; Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 1998; Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 2000; Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 2006; Koltunow và c󰗚ng s󰗲, 1998; Ray, 2002; Deng X.X, 2006; Grosser và c󰗚ng s󰗲, 2006; Jean Baptiste Bassenet và c󰗚ng s󰗲, 2009). T󰖢o gi󰗒ng quýt theo h󰗜ng d󰗆 bóc v󰗐, không h󰖢t, giàu dinh d󰗢ng, d󰗆 b󰖤o qu󰖤n và kháng b󰗈nh (Ollitrault và c󰗚ng s󰗲, 2000; Roose và Williams, 2000). Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng lai, gi󰗒ng a b󰗚i th󰗄, lai t󰗀 bào tr󰖨n và bi󰗀n d󰗌 t󰗀 bào soma t󰖢o dòng gi󰗒ng không h󰖢t, ch󰗒ng ch󰗌u b󰗈nh ph󰗦c v󰗦 công nghi󰗈p ch󰗀 bi󰗀n n󰗜c qu󰖤 và n ti (Guo và c󰗚ng s󰗲, 2004; Grosser và Gmitter, 2005; Gmitter và c󰗚ng s󰗲, 2007; Febres và c󰗚ng s󰗲, 2009). Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng chuy󰗄n gen kháng b󰗈nh và ch󰖦t l󰗤ng qu󰖤 (Gmitter và c󰗚ng s󰗲, 2007). 1.2. T󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t b󰖲ng phng pháp 󰗚t bi󰗀n chi󰗀u x󰖢 và ch󰗎n l󰗎c các bi󰗀n d󰗌 t󰗲 nhiên Trong 10 nm qua Trung Qu󰗒c ã công nh󰖮n 17 gi󰗒ng Citrus m󰗜i, các gi󰗒ng m󰗜i ch󰗨 y󰗀u ã 󰗤c t󰖢o ra b󰖲ng 2 phng pháp: ch󰗎n l󰗎c các 󰗚t bi󰗀n t󰗲 nhiên và gây 󰗚t bi󰗀n b󰖲ng chi󰗀u x󰖢. Trong s󰗒 các gi󰗒ng m󰗜i có 3 gi󰗒ng quýt không h󰖢t, m󰗚t gi󰗒ng ít h󰖢t. Trong s󰗒 4 gi󰗒ng cam m󰗜i 󰗤c công nh󰖮n, có 3 gi󰗒ng không h󰖢t, m󰗚t gi󰗒ng ít h󰖢t. Gi󰗒ng b󰗠i Pummelos m󰗜i g󰗔m 5 gi󰗒ng, trong ó có 2 gi󰗒ng không h󰖢t. 4 Ngoài ra, các gi󰗒ng 󰗚t bi󰗀n còn có các 󰖸c tính khác nh chín mu󰗚n hn, 2 gi󰗒ng chín s󰗜m, các gi󰗒ng 󰗂u có ch󰖦t l󰗤ng và nng su󰖦t t󰗒t hn 󰗒i ch󰗪ng (Deng, 2000). 1.3. T󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i th󰗄 không h󰖢t b󰖲ng lai gi󰗰a m󰗪c b󰗚i th󰗄 nh󰗌 b󰗚i v󰗜i t󰗪 b󰗚i (2x × 4x) M󰗚t chi󰗀n l󰗤c t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t quan tr󰗎ng là t󰖢o ra và tuy󰗄n ch󰗎n các gi󰗒ng tam b󰗚i th󰗄 t󰗬 các phép lai gi󰗰a các gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i v󰗜i các gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i (Soost và Cameron, 1975), (Starrantino và Recupero, 1981). Ví d󰗦, thành công i󰗄n hình trong t󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i th󰗄 b󰖲ng phng pháp lai gi󰗰a các m󰗪c b󰗚i th󰗄 là 2 gi󰗒ng b󰗠i chùm tam b󰗚i Oroblanco, Melagold (Soost và Cameron, 1980, 1985). Nhng t󰖢o gi󰗒ng không h󰖢t có ch󰖦t l󰗤ng cao g󰖸p nhi󰗂u khó khn do thi󰗀u ngu󰗔n gen t󰗪 b󰗚i th󰗄 thích h󰗤p. Trong ki󰗄u lai này, gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i có h󰖢t n phôi th󰗞ng 󰗤c dùng làm cây m󰖺 và cây t󰗪 b󰗚i dùng làm cây b󰗒. Phôi tam b󰗚i thu 󰗤c sau lai th󰗞ng b󰗌 kìm hãm phát tri󰗄n do tng quan phôi/n󰗚i nh b󰗌 phá v󰗢. Áp d󰗦ng k󰗺 thu󰖮t c󰗪u phôi tam b󰗚i in vitro trong tr󰗞ng h󰗤p này là r󰖦t c󰖨n thi󰗀t (Gmitter, 1995). Phôi tam b󰗚i 󰗤c nuôi c󰖦y và tái sinh thành công trong 󰗒ng nghi󰗈m (Gmitter và c󰗚ng s󰗲, 1990). V󰗜i vi󰗈c th󰗦 ph󰖦n nhân t󰖢o, s󰗒 h󰖢t tam b󰗚i có s󰗪c s󰗒ng thu 󰗤c nói chung là r󰖦t ít, giao 󰗚ng t󰗬 d󰗜i 2 h󰖢t 󰗀n kho󰖤ng 10 h󰖢t/100 hoa 󰗤c th󰗦 ph󰖦n. M󰗚t s󰗒 c󰖸p lai 2x × 4x cho nhi󰗂u qu󰖤 nh󰗐 v󰗜i h󰖢t tam b󰗚i có s󰗪c s󰗒ng. Tuy nhiên, các qu󰖤 nh󰗐 th󰗞ng b󰗌 r󰗦ng hàng lo󰖢t vào tháng 6, làm gi󰖤m áng k󰗄 s󰖤n l󰗤ng cây tam b󰗚i. Các nhà khoa h󰗎c 󰗠 bang California (M󰗺) ã phát tri󰗄n k󰗺 thu󰖮t c󰗪u các phôi tam b󰗚i t󰗬 các qu󰖤 non r󰗦ng b󰖲ng tách nuôi các phôi này trên môi tr󰗞ng không có ch󰖦t i󰗂u hoà sinh tr󰗠ng nhng có hàm l󰗤ng 󰗞ng cao k󰗀t h󰗤p v󰗜i axít citric. K󰗀t qu󰖤 ã làm tng s󰗒 cây thu 󰗤c lên 3 l󰖨n (Williams và Roose, 2000). 1.4. T󰖢o gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i th󰗄 làm v󰖮t li󰗈u lai t󰖢o gi󰗰a cây t󰗪 b󰗚i và cây nh󰗌 b󰗚i Ch󰗎n t󰖢o dòng t󰗪 b󰗚i có th󰗄 th󰗲c hi󰗈n b󰖲ng nhi󰗂u phng pháp khác nhau. Các d󰖢ng t󰗪 b󰗚i xu󰖦t hi󰗈n t󰗲 nhiên v󰗜i t󰖨n s󰗒 khá cao 󰗠 cây n qu󰖤 có múi. Cameron và Frost (1968) ã nh󰖮n 󰗤c 2,5% s󰗒 cây t󰗪 b󰗚i th󰗄 trong t󰗖ng s󰗒 3600 cây t󰗬 phôi tâm 󰗠 các gi󰗒ng khác nhau. Tachikawa và c󰗚ng s󰗲, (1961) ã s󰗮 d󰗦ng colchicine 󰗄 t󰖢o cây quýt t󰗪 b󰗚i th󰗄 và sau ó lai cây t󰗪 b󰗚i v󰗜i cây nh󰗌 b󰗚i 󰗄 t󰖢o gi󰗒ng quýt tam b󰗚i không h󰖢t. G󰖨n ây, các d󰖢ng t󰗪 b󰗚i ã 󰗤c t󰖢o ra b󰖲ng x󰗮 lý colchicine in vitro (Gmitter và Ling, 1991). Các d󰖢ng d󰗌 t󰗪 b󰗚i lai ã 󰗤c t󰖢o ra hàng lo󰖢t thông qua lai t󰗀 bào tr󰖨n (Grosser và c󰗚ng s󰗲, 2000). Nh󰗞 v󰖮y, các nhà t󰖢o gi󰗒ng ã có thêm s󰗒 l󰗤ng l󰗜n ngu󰗔n v󰖮t li󰗈u di truy󰗂n b󰗖 sung cho ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng tam b󰗚i. Có 3 ba phng pháp t󰖢o gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i ch󰗨 y󰗀u nh sau: (1) Ch󰗎n các t󰗪 b󰗚i th󰗄 t󰗲 nhiên. (2) X󰗮 lý a b󰗚i hóa b󰖲ng colchicine. (3) Dung h󰗤p t󰗀 bào tr󰖨n c󰗨a 2 gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i th󰗄 t󰖢o ra dòng lai t󰗪 b󰗚i. 1.5. Nghiên c󰗪u các quy trình công ngh󰗈 nuôi c󰖦y mô và t󰗀 bào in vitro ph󰗦c v󰗦 cho ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi tam b󰗚i th󰗄 a. Quy trình k󰗺 thu󰖮t c󰗪u phôi in vitro M󰗦c tiêu là c󰗪u các phôi tam b󰗚i th󰗄 t󰗬 các t󰗖 h󰗤p lai 2x × 4x và t󰗬 các phép lai 2x × 2x. Tu󰗖i phôi khi c󰗪u phôi có th󰗄 󰗠 các giai o󰖢n phát tri󰗄n khác nhau c󰗨a phôi. Starrantino và Redupero (1981) ã nh󰖮n 󰗤c cây tam b󰗚i lai t󰗬 t󰗖 h󰗤p lai 2x × 4x b󰖲ng c󰗪u phôi 󰗠 tu󰗖i t󰗬 3 󰗀n 4 tháng sau khi hoa th󰗦 ph󰖦n. C󰗪u phôi có th󰗄 󰗠 giai 5 o󰖢n qu󰖤 chín b󰖲ng nuôi c󰖦y phôi c󰗨a các h󰖢t nh󰗐 kém phát tri󰗄n (Froelicher và c󰗚ng s󰗲, 2003). Môi tr󰗞ng nuôi c󰖦y c󰗪u phôi 󰗤c s󰗮 d󰗦ng ph󰗖 bi󰗀n nh󰖦t là môi tr󰗞ng MT (Murashige và Tucker, 1969): M󰗚t s󰗒 ch󰖦t b󰗖 sung vào môi tr󰗞ng ã có tác d󰗦ng tích c󰗲c 󰗒i v󰗜i tái sinh cây t󰗬 phôi non ho󰖸c h󰖢t kém phát tri󰗄n. Ví d󰗦: (1) Thêm Adenine Sulfate (25 mg/l) và Malt extract (500 mg/l) có tác d󰗦ng t󰗒t 󰗒i v󰗜i c󰗪u phôi. (2) Thêm m󰗚t s󰗒 hormones có th󰗄 h󰗘 tr󰗤 phôi n󰖤y m󰖨m và kéo dài ch󰗔i, ví d󰗦 thêm GA 3 : 1 mg/l, thêm t󰗸 l󰗈 cân 󰗒i gi󰗰a các hormones BAP (0,5 mg/l) + Kinetin (0,5 mg/l) + 0,1 mg/l NAA khi s󰗲 n󰖤y m󰖨m g󰖸p khó khn. Quy trình c󰗪u phôi tam b󰗚i ã 󰗤c ã 󰗤c các nhà khoa h󰗎c CIRAD - INRA xây d󰗲ng (Froelicher và c󰗚ng s󰗲, 2003). Môi tr󰗞ng c󰗪u phôi là: MT (Murashige và Tulecker, 1969) + 30 g/l Sucrose + 25 mg/l Adenine Sulfate + 500 mg/l Malt extract + 1 mg/l GA 3 + 8 g/l Agar, pH = 5,7. b. C󰗪u phôi tam b󰗚i (3x) in vitro t󰗬 phép lai (2x × 4x) Vi󰗈c t󰖢o các cây có múi tam b󰗚i t󰗬 phép lai gi󰗰a cây m󰖺 l󰗢ng b󰗚i v󰗜i h󰖢t ph󰖦n c󰗨a cây b󰗒 t󰗪 b󰗚i ã 󰗤c nghiên c󰗪u (Esen và Soost, 1972). Tuy nhiên, s󰗲 phát tri󰗄n không 󰖨y 󰗨 c󰗨a phôi tam b󰗚i là hi󰗈n t󰗤ng ph󰗖 bi󰗀n trong phép lai này. S󰗒 l󰗤ng h󰖢t phát tri󰗄n bình th󰗞ng th󰖦p (Cameron và Frost, 1968; Tachikawa và c󰗚ng s󰗲, 1961; Esen và Soost, 1972). Nhi󰗂u báo cáo ã ch󰗊 ra r󰖲ng, s󰗲 phát tri󰗄n không hoàn ch󰗊nh c󰗨a h󰖢t t󰗬 nh󰗰ng phép lai gi󰗰a các b󰗒 m󰖺 có m󰗪c 󰗚 b󰗚i th󰗄 khác nhau liên quan ch󰖸t ch󰖾 v󰗜i hi󰗈n t󰗤ng không t󰖢o n󰗚i nh hay phát tri󰗄n b󰖦t th󰗞ng c󰗨a n󰗚i nh. V󰖦n 󰗂 v󰗂 s󰗲 phát tri󰗄n không hoàn ch󰗊nh c󰗨a phôi trong các phép lai 2x 󽞵 4x là h󰖢n ch󰗀 l󰗜n nh󰖦t 󰗒i v󰗜i t󰖢o cây tam b󰗚i t󰗬 phng pháp này. Ta có th󰗄 t󰖢o ra nhi󰗂u cây tam b󰗚i k󰗀t h󰗤p 󰗤c nh󰗰ng 󰖸c i󰗄m mong mu󰗒n c󰗨a các cây b󰗒 m󰖺 l󰗢ng b󰗚i và t󰗪 b󰗚i n󰗀u 󰜙c󰗪u󰜚 󰗤c phôi tam b󰗚i b󰖲ng phng pháp nuôi c󰖦y mô. Vi󰗈c c󰗪u phôi tam b󰗚i 󰗠 nh󰗰ng qu󰖤 non và qu󰖤 chín t󰗬 phép lai 2x 󽞵 4x ã 󰗤c báo cáo. Starrantino và Recupero (1981) ã nuôi c󰖦y 585 phôi ch󰗎n l󰗎c t󰗬 các phép lai gi󰗰a 3 dòng m󰖺 l󰗢ng b󰗚i n phôi v󰗜i 6 dòng t󰗪 b󰗚i trên môi tr󰗞ng MS (1962) + 500 mg/l d󰗌ch chi󰗀t malt + 25 mg/l adenine sulfate. H󰗎 ã thu 󰗤c 211 cây con tam b󰗚i và 89 cây con có s󰗒 l󰗤ng nhi󰗆m s󰖰c th󰗄 cha xác 󰗌nh. H󰗎 th󰖦y r󰖲ng, khi nuôi c󰖦y in vitro các phôi 󰗤c tách ra sau khi th󰗦 ph󰖦n t󰗬 3 󰗀n 4 tháng s󰖾 làm phát sinh các phôi ph󰗦. T󰗬 nh󰗰ng phôi này, h󰗎 ã thu 󰗤c nhi󰗂u cây con. Theo Oiyama và Kobayashi (1993) ã thông báo v󰗂 vi󰗈c thu các cây tam b󰗚i nh󰗞 c󰗪u phôi t󰗬 nh󰗰ng h󰖢t lép trong các phép lai gi󰗰a hai gi󰗒ng có h󰖢t l󰗢ng b󰗚i n phôi là quýt 󰜙Clementin󰜚 (Citrus reticulata) và Miyauchi Iyokan (Citrus natsudaidai Hayata) v󰗜i h󰖢t ph󰖦n c󰗨a cây t󰗪 b󰗚i 󰜙Kawano Natsudaidai󰜚 (Citrus natsudaidai Hayata). Phôi lép 󰗤c nuôi c󰖦y trên môi tr󰗞ng MT + 500 mg/l d󰗌ch chi󰗀t malt (ME) + 40 mg/l adenin sulfate sau th󰗦 ph󰖦n 7 tháng. Ngoài ra, Oiyama cng thu 󰗤c t󰗸 l󰗈 cao c󰗨a cây tam b󰗚i b󰖲ng cách nuôi c󰖦y phôi nh󰗐 cha bi󰗈t hóa hình thành t󰗬 các h󰖢t kém phát tri󰗄n trong qu󰖤 chín trên môi tr󰗞ng MT + 1 mg/l GA. Quýt Clementin 󰗤c s󰗮 d󰗦ng làm cây m󰖺 và cây b󰗒 là con lai soma t󰗪 b󰗚i th󰗄 (lai gi󰗰a cam ng󰗎t (Citrus sinensis) v󰗜i cam ba lá (Poncirus trifoliata). 1.6. Các phng pháp ki󰗄m tra m󰗪c b󰗚i th󰗄 󰗠 cây n qu󰖤 có múi Xác 󰗌nh m󰗪c 󰗚 b󰗚i th󰗄 b󰖲ng máy FC là m󰗚t phng pháp m󰗜i, hi󰗈u qu󰖤 cho phép xác 󰗌nh nhanh m󰗪c b󰗚i th󰗄 c󰗨a các v󰖮t li󰗈u di truy󰗂n khác nhau 󰗠 nhi󰗂u loài 6 sinh v󰖮t a d󰖢ng. B󰖲ng cách s󰗮 d󰗦ng m󰗚t cây 󰗒i ch󰗪ng 2x, phng pháp FC cho phép xác 󰗌nh các cây có múi a b󰗚i m󰗚t cách nhanh chóng. Ollitrault và Michaux- Ferriere (1992) l󰖨n 󰖨u tiên ã thi󰗀t l󰖮p 󰗤c quy trình phát hi󰗈n nhanh cây a b󰗚i trong s󰗒 các cây con tái sinh t󰗬 phôi tâm 󰗠 cây có múi. Ngày nay, Phng pháp này ã tr󰗠 nên vô cùng h󰗰u hi󰗈u trong ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây có múi a b󰗚i. CHNG 2 V󰖭T LI󰗇U, N󰗙I DUNG VÀ PHNG PHÁP NGHIÊN C󰗩U 2.1. V󰖮t li󰗈u và th󰗞i gian nghiên c󰗪u Cây b󰗒 cho ph󰖦n là các gi󰗒ng b󰗠i Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, cam Sành, cam Vân Du t󰗪 b󰗚i ch󰗎n t󰖢o 󰗤c t󰗬 x󰗮 lý colchicine các gi󰗒ng nh󰗌 b󰗚i thu󰗚c 󰗂 tài 󰜝Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng cây có múi không h󰖢t có ngu󰗔n g󰗒c b󰖤n 󰗌a󰜞 giai o󰖢n t󰗬 nm 2001 󰗀n 2005 ã 󰗤c nghi󰗈m thu và tr󰗔ng t󰖢i Tr󰖢i th󰗲c nghi󰗈m c󰗨a Vi󰗈n Di truy󰗂n Nông nghi󰗈p 󰗠 huy󰗈n Vn Giang, t󰗊nh Hng Yên. Các gi󰗒ng t󰗪 b󰗚i ã 󰗤c C󰗦c tr󰗔ng tr󰗎t, B󰗚 Nông nghi󰗈p và Phát tri󰗄n Nông thôn c󰖦p b󰖲ng b󰖤o h󰗚 gi󰗒ng cây tr󰗔ng m󰗜i theo Quy󰗀t 󰗌nh s󰗒 515/Q-TT-VPBH, ngày 12 tháng 11 nm 2013. Cây m󰖺 (2x) 󰗤c ch󰗎n t󰗬 nh󰗰ng cây kho󰖼 m󰖢nh, hoa n󰗠 t󰖮p trung 󰗠 các gi󰗒ng b󰗠i Nm Roi, Phúc Tr󰖢ch, b󰗠i Di󰗆n, cam Sành. Các dòng b󰗠i và cam Sành tam b󰗚i ch󰗎n t󰖢o 󰗤c t󰗬 󰗂 tài 󰜝Nghiên c󰗪u t󰖢o gi󰗒ng b󰗠i và cam, quýt không h󰖢t b󰖲ng công ngh󰗈 sinh h󰗎c󰜞 giai o󰖢n t󰗬 nm 2006 󰗀n 2010 ã 󰗤c nghi󰗈m thu nm 2011. Th󰗞i gian nghiên c󰗪u t󰗬 nm 2011 󰗀n 2014 2.2. N󰗚i dung nghiên c󰗪u 2.2.1. T󰖢o v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t, ít h󰖢t (i) Lai h󰗰u tính gi󰗰a các c󰖸p lai cùng gi󰗒ng và khác gi󰗒ng (ii) T󰖢o v󰖮t li󰗈u kh󰗠i 󰖨u b󰖲ng c󰗪u phôi (iii) ánh giá 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c c󰗨a các dòng tam b󰗚i t󰖢o 󰗤c 2.2.2. ánh giá 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c các dòng cam Sành, b󰗠i tam b󰗚i trong nhà l󰗜i (i) ánh giá 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c các dòng cam Sành tam b󰗚i trong nhà l󰗜i (ii) ánh giá 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c các dòng b󰗠i tam b󰗚i trong nhà l󰗜i 2.2.3. B󰗜c 󰖨u kh󰖤o nghi󰗈m các dòng cam Sành và b󰗠i tam b󰗚i (i) Kh󰖤o nghi󰗈m các dòng cam Sành tam b󰗚i 󰗤c ghép trên g󰗒c ghép Ch󰖦p (ii) Kh󰖤o nghi󰗈m các dòng b󰗠i tam b󰗚i 󰗤c ghép trên g󰗒c ghép Ch󰖦p (iii) ánh giá k󰗀t qu󰖤 ghép dòng b󰗠i tam b󰗚i lên g󰗒c ghép cây b󰗠i chua 5 tu󰗖i và xác 󰗌nh m󰗚t s󰗒 dòng b󰗠i tam b󰗚i tri󰗄n v󰗎ng 2.3. Phng pháp nghiên c󰗪u 2.3.1. T󰖢o v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t, ít h󰖢t Mô t󰖤 v󰖮t li󰗈u nghiên c󰗪u các gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi nh󰗌 b󰗚i và t󰗪 b󰗚i s󰗮 d󰗦ng phng pháp ánh giá các 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c 󰗄 phát hi󰗈n và tuy󰗄n ch󰗎n các cá th󰗄 có nh󰗰ng 󰖸c tính di truy󰗂n có l󰗤i trong s󰖤n xu󰖦t 󰗄 lai t󰖢o. TT C󰖸p lai Gi󰗜i tính cây 1 󰵁 PT2x × 󰵃 PT4x 󰵁 Phúc Tr󰖢ch (2x) × 󰵃 Phúc Tr󰖢ch (4x) 7 2 󰵁 BD2x × 󰵃 PT4x 󰵁 B󰗠i Di󰗆n (2x) × 󰵃 Phúc Tr󰖢ch (4x) 3 󰵁 NR2x × 󰵃 PT4x 󰵁 B󰗠i Nm Roi (2x) × 󰵃 Phúc Tr󰖢ch (4x) 4 󰵁 PT2x × 󰵃 BD4x 󰵁 Phúc tr󰖢ch (2x) × 󰵃 B󰗠i Di󰗆n (4x) 5 󰵁 BD2x × 󰵃 BD4x 󰵁 B󰗠i Di󰗆n (2x) × 󰵃 B󰗠i Di󰗆n (4x) 6 󰵁 NR2x × 󰵃 BD4x 󰵁 B󰗠i Nm Roi (2x) × 󰵃 B󰗠i Di󰗆n (4x) 7 󰵁 CS2x × 󰵃 CS4x 󰵁 Cam Sành (2x) × 󰵃 Cam Sành (4x) 8 󰵁 CS2x × 󰵃 VD4x 󰵁 Cam Sành (2x) × 󰵃 Cam Vân Du (4x) 9 󰵁 CS2x × 󰵃 CS2x 󰵁 Cam Sành (2x) × 󰵃 Cam Sành (2x) Phng pháp lai: Ch󰗎n hoa c󰗨a cây m󰖺 s󰗮 d󰗦ng lai t󰖢o c󰖨n ph󰖤i ch󰗎n hoa 󰗠 󰗊nh cành, ch󰗎n nh󰗰ng hoa kh󰗐e n󰗠 s󰗜m nh󰖦t. Tr󰗜c khi hoa n󰗠 1 󰗀n 2 ngày ti󰗀n hành kh󰗮 󰗲c lo󰖢i b󰗐 bao ph󰖦n cha n󰗠 c󰗨a hoa. V󰗜i hoa có nh󰗦y chín thu󰖨n th󰗦c c󰖨n ph󰖤i th󰗦 ph󰖦n kh󰖪n trng r󰗔i cách ly hoa b󰖲ng túi chuyên d󰗦ng 󰗄 tránh s󰗲 xâm nh󰖮p c󰗨a h󰖢t ph󰖦n l󰖢 nh󰗞 gió ho󰖸c côn trùng. Có th󰗄 th󰗦 ph󰖦n b󰖲ng cách quét bao ph󰖦n ã m󰗠 c󰗨a hoa cây b󰗒 lên 󰖨u nh󰗦y hoa cây m󰖺. V󰗜i nh󰗰ng lo󰖢i hoa có kích th󰗜c nh󰗐 c󰖨n ph󰖤i dùng ch󰗖i lông 󰗄 th󰗦 ph󰖦n. Sau khi th󰗦 ph󰖦n xong ti󰗀n hành lo󰖢i b󰗐 nh󰗰ng hoa cùng m󰗚t chùm hoa còn l󰖢i nh󰖲m tránh s󰗲 c󰖢nh tranh dinh d󰗢ng. Sau khi hoa 󰗤c th󰗦 ph󰖦n t󰗬 2 󰗀n 3 tu󰖨n, ti󰗀n hành tháo b󰗐 túi cách ly và ánh d󰖦u hoa ã 󰗤c lai. 󰗒i v󰗜i c󰖸p lai 󰗒i ch󰗪ng th󰗦 ph󰖦n t󰗲 nhiên 󰵁 CS2x × 󰵃 CS2x, ánh d󰖦u 30 hoa 󰗄 theo dõi kh󰖤 nng th󰗦 ph󰖦n và ánh giá t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤. Khi qu󰖤 ã chín, thu ho󰖢ch qu󰖤 v󰗂 󰗄 ánh giá kh󰖤 nng 󰖮u qu󰖤 và ánh giá s󰗒 h󰖢t trên qu󰖤 c󰗨a các c󰖸p lai khác nhau. Các h󰖢t lai c󰗨a các c󰖸p lai bao g󰗔m các h󰖢t bình th󰗞ng, h󰖢t kém phát tri󰗄n có phôi 󰗠 các c󰖸p lai b󰗠i và các h󰖢t nh󰗐, h󰖢t lép có phôi 󰗠 các c󰖸p lai cam Sành s󰖾 󰗤c kh󰗮 trùng và a vào nuôi c󰖦y trên môi tr󰗞ng c󰗪u phôi. Môi tr󰗞ng c󰗪u phôi 󰗤c ch󰗎n t󰗬 công th󰗪c môi tr󰗞ng c󰗪u phôi thích h󰗤p nh󰖦t trong nghiên c󰗪u v󰗂 c󰗪u phôi tam b󰗚i h󰖢t nh󰗐, h󰖢t lép (Hà Th󰗌 Thuý và c󰗚ng s󰗲, 2009); MT: môi tr󰗞ng c b󰖤n (Murashige và Tucker, 1969) có b󰗖 sung 1,0 mg/l GA3, 15% n󰗜c d󰗬a, 30 g/l 󰗞ng sucrose và 5,0 g/l th󰖢ch. Xác 󰗌nh m󰗪c b󰗚i th󰗄 b󰖲ng máy o a b󰗚i Flow Cytometry: Quy trình 󰗤c th󰗲c hi󰗈n theo Ollitrault và c󰗚ng s󰗲 (1992) và h󰗜ng d󰖬n c󰗨a hãng Partec, 󰗪c. Các gi󰗒ng cây có múi ã bi󰗀t tr󰗜c m󰗪c 󰗚 b󰗚i th󰗄 (b󰖲ng 󰗀m nhi󰗆m s󰖰c th󰗄 󰗠 gi󰗒ng Phúc Tr󰖢ch nh󰗌 b󰗚i, cam Sành nh󰗌 b󰗚i) làm 󰗒i ch󰗪ng. Dung d󰗌ch tách và nhu󰗚m m󰖬u nhân t󰗀 bào do hãng Partec, 󰗪c cung c󰖦p. 2.3.2. Phng pháp ánh giá 󰖸c i󰗄m nông sinh h󰗎c các dòng cam Sành và b󰗠i tam b󰗚i trong nhà l󰗜i và ngoài 󰗔ng ru󰗚ng Nghiên c󰗪u 󰖸c i󰗄m hình thái theo tài li󰗈u h󰗜ng d󰖬n c󰗨a Vi󰗈n Tài nguyên Di truy󰗂n th󰗲c v󰖮t qu󰗒c t󰗀 (IPGRI) k󰗀t h󰗤p v󰗜i quy ph󰖢m kh󰖤o nghi󰗈m gi󰗒ng cam quýt b󰗠i c󰗨a B󰗚 Nông nghi󰗈p và Phát tri󰗄n Nông thôn (10TCN - 2007). Các ch󰗊 tiêu theo dõi g󰗔m: Hình d󰖢ng tán, 󰗞ng kính g󰗒c, 󰗚 phân cành, m󰖮t 󰗚 gai, hình thái lá, nghiên c󰗪u 󰖸c i󰗄m sinh tr󰗠ng các 󰗤t l󰗚c, nghiên c󰗪u v󰗂 hình thái, th󰗞i gian ra hoa và 󰖮u qu󰖤, các y󰗀u t󰗒 c󰖦u thành nng su󰖦t và nng su󰖦t. V󰗂 hình thái, c󰖦u trúc hoa g󰗔m 󰗚 cng, màu s󰖰c c󰗨a bao ph󰖦n, h󰖢t ph󰖦n 󰗤c quan sát b󰖲ng m󰖰t th󰗞ng và d󰗜i kính hi󰗄n vi Leica DM LS2 󰗠 v󰖮t kính 40 x 0,65 và 100 x 1,25. ánh giá s󰗪c s󰗒ng c󰗨a h󰖢t ph󰖦n hoa và t󰗸 l󰗈 n󰖤y m󰖨m c󰗨a h󰖢t ph󰖦n hoa. ánh giá s󰗪c s󰗒ng h󰖢t ph󰖦n v󰗜i 10 l󰖨n nh󰖰c l󰖢i/m󰗘i dòng, gi󰗒ng. Hoa 󰗤c thu hái 8 tr󰗜c khi hoa n󰗠 t󰗬 1 󰗀n 2 ngày, b󰖤o qu󰖤n trong a petri 󰗄 tránh l󰖬n t󰖢p ph󰖦n. Khi hoa n󰗠, ph󰖦n hoa 󰗤c nhu󰗚m b󰖲ng aceto carmine theo phng pháp tham kh󰖤o c󰗨a (Domingues và c󰗚ng s󰗲, 1999), (Yin Min và c󰗚ng s󰗲, 1981) và soi trên kính hi󰗄n vi 󰗄 ánh giá s󰗪c s󰗒ng c󰗨a h󰖢t ph󰖦n. Xác 󰗌nh t󰗸 l󰗈 n󰖤y m󰖨m c󰗨a h󰖢t ph󰖦n trên môi tr󰗞ng nhân t󰖢o v󰗜i 5 l󰖨n nh󰖰c l󰖢i. Ph󰖦n hoa 󰗤c th󰗮 s󰗪c m󰖤y m󰖨m theo (Shivanna, K.R, 2003). 2.4. X󰗮 lý s󰗒 li󰗈u thí nghi󰗈m v󰗜i ph󰖨n m󰗂m 󰗪ng d󰗦ng Excell CHNG 3 K󰖿T QU󰖣 NGHIÊN C󰗩U VÀ TH󰖣O LU󰖭N 3.1. T󰖢o v󰖮t li󰗈u ban 󰖨u cho công tác ch󰗎n t󰖢o gi󰗒ng cây n qu󰖤 có múi không h󰖢t, ít h󰖢t 3.1.1. Lai h󰗰u tính c󰗨a các c󰖸p lai cùng gi󰗒ng, khác gi󰗒ng và khác loài gi󰗰a 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau K󰗀t qu󰖤 nghiên c󰗪u ánh giá t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤 thu 󰗤c 󰗠 các c󰖸p lai cho th󰖦y: c󰖸p lai c󰖸p lai 󰵁 CS2x × 󰵃 CS4x cho t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤 cao nh󰖦t 36,6%, c󰖸p lai 󰵁 BD2x × 󰵃 BD4x cho t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤 cao th󰗪 hai 󰖢t 33,3% và c󰖸p lai 󰵁 NR2x × 󰵃 BD4x cho t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤 th󰖦p nh󰖦t 󰖢t 10,0%, còn các c󰖸p lai khác 󰵁 NR2x × 󰵃 BD4x, 󰵁 PT2x × 󰵃 BD4x, 󰵁 NR2x × 󰵃 PT4x, 󰵁 BD2x × 󰵃 PT4x, 󰵁 PT2x × 󰵃 PT4x, 󰵁 CS2x × 󰵃 VD4x, 󰵁 CS2x × 󰵃 CS2x cho t󰗸 l󰗈 󰖮u qu󰖤 t󰗬 13,3% 󰗀n 23,3%. Chúng tôi ti󰗀n hành tách h󰖢t c󰗨a qu󰖤 lai 󰗠 các c󰖸p lai b󰗠i (2x × 4x) và (2x × 2x) 󰗠 th󰗞i i󰗄m qu󰖤 chín. K󰗀t qu󰖤 cho th󰖦y c󰖸p lai 󰵁 BD2x × 󰵃 BD4x có s󰗒 h󰖢t/qu󰖤 th󰖦p nh󰖦t là 19,1 h󰖢t và cao nh󰖦t 󰗠 c󰖸p lai 󰵁 NR2x × 󰵃 PT4x có s󰗒 h󰖢t/qu󰖤 là 64,3 h󰖢t so sánh v󰗜i b󰗠i di󰗆n nh󰗌 b󰗚i có s󰗒 h󰖢t/qu󰖤 là 76,0 h󰖢t, b󰗠i Phúc Tr󰖢ch nh󰗌 b󰗚i có s󰗒 h󰖢t/qu󰖤 là 118,0 h󰖢t cao g󰖨n g󰖦p 2 l󰖨n. Ngoài ra, s󰗒 h󰖢t có phôi r󰖦t th󰖦p, th󰖦p nh󰖦t trung bình 2 h󰖢t/qu󰖤 󰗠 c󰖸p lai 󰵁 BD2x × 󰵃 BD4x và cao nh󰖦t là 5,5 h󰖢t/qu󰖤 󰗠 c󰖸p lai 󰵁 NR2x × 󰵃 PT4x, trong khi ó 󰗠 b󰗠i Di󰗆n và b󰗠i Phúc Tr󰖢ch nh󰗌 b󰗚i t󰖦t c󰖤 các h󰖢t 󰗂u có phôi phát tri󰗄n bình th󰗞ng, các h󰖢t này có kh󰖤 nng n󰖤y m󰖨m 100% (󰗘 Nng V󰗌nh, 2008). T󰗬 k󰗀t qu󰖤 này chúng tôi nh󰖮n th󰖦y trong qu󰖨n th󰗄 h󰖢t lai t󰗬 6 c󰖸p lai b󰗠i cùng gi󰗒ng, khác gi󰗒ng và 󰗠 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau a s󰗒 là h󰖢t r󰗘ng, không có phôi chi󰗀m t󰗸 l󰗈 l󰗜n t󰗬 89,5% 󰗀n 91,4%, nh󰗰ng h󰖢t r󰗘ng, không có phôi này s󰖾 b󰗌 lo󰖢i b󰗐. Trong khi ó, h󰖢t m󰖪y và h󰖢t kém phát tri󰗄n có phôi chi󰗀m t󰗸 l󰗈 th󰖦p t󰗬 8,6% 󰗀n 10,5%, nh󰗰ng h󰖢t m󰖪y và h󰖢t kém phát tri󰗄n có phôi này sau ó 󰗤c kh󰗮 trùng, a vào môi tr󰗞ng c󰗪u phôi 󰗄 tái sinh cây và xác 󰗌nh m󰗪c b󰗚i th󰗄 c󰗨a cây tái sinh thu 󰗤c. Cam Sành là gi󰗒ng thng m󰖢i 󰗤c tr󰗔ng nhi󰗂u 󰗠 các t󰗊nh phía B󰖰c và 󰗔ng b󰖲ng Sông C󰗮u Long n󰗜c ta. Tuy nhiên, ây cng là gi󰗒ng có nhi󰗂u h󰖢t và cng là nh󰗤c i󰗄m l󰗜n nh󰖦t c󰗨a h󰖨u h󰗀t các gi󰗒ng cây có múi 󰖸c s󰖤n n󰗜c ta. K󰗀t qu󰖤 cho th󰖦y s󰗒 h󰖢t trung bình trên qu󰖤 th󰖦p nh󰖦t 󰗠 c󰖸p lai 󰵁 CS2x × 󰵃 VD4x là 18,7 h󰖢t/qu󰖤 và cao nh󰖦t 󰗠 c󰖸p lai th󰗦 ph󰖦n t󰗲 nhiên 󰗒i ch󰗪ng 󰵁 CS2x × 󰵃 CS2x là 22,1 h󰖢t/qu󰖤, Tuy nhiên, khi so sánh s󰗒 h󰖢t trung bình trên qu󰖤 c󰗨a các c󰖸p lai cam Sành cùng gi󰗒ng và 󰗠 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau so v󰗜i s󰗒 h󰖢t trung bình trên qu󰖤 c󰗨a lai t󰗲 nhiên trong qu󰖨n th󰗄 tr󰗔ng thu󰖨n cùng gi󰗒ng 󰵁 CS2x × 󰵃 CS2x thì s󰗒 h󰖢t trên qu󰖤 c󰗨a các c󰖸p lai này tng ng nhau, ch󰗊 riêng có c󰖸p lai c󰖸p lai khác gi󰗒ng và 󰗠 2 m󰗪c b󰗚i th󰗄 khác nhau 󰵁 CS2x × 󰵃 VD4x cho s󰗒 h󰖢t trung bình trên qu󰖤 th󰖦p nh󰖦t. S󰗒 h󰖢t trên qu󰖤 c󰗨a các c󰖸p lai h󰖨u h󰗀t là h󰖢t bình th󰗞ng và h󰖢t lép không phôi, nhng t󰗸 l󰗈 [...]... dòng cam sành tam b i c kh o nghi m và ánh giá ngoài ng ru ng, chúng tôi ã ch n l c và xác nh c các dòng cam Sành có u i m v t tr i h n gi ng cam Sành nh b i i ch ng g m các dòng cam Sành tam b i CS.05.03 có d ng tán th a hình ch i x , dòng cam Sành CS.06.02 có d ng tán dày hình c u, dòng cam Sành CS.06.12 có d ng tán hình dù, dòng cam Sành CS.07.01 có d ng tán dày bán c u, dòng cam Sành CS.07.03 có. .. a các dòng b i tam b i m c dày so v i các gi ng b i N m Roi, b i Phúc Tr ch, b i Di n nh b i và t b i i ch ng là không có gai Cây b i tam b i 3 tu i (2013) có chi u cao cây t cao nh t là dòng b i tam b i PD.05.10 (290,80 cm), th p nh t là dòng b i tam b i PD.06.84 (121,47 cm) ng kính g c cây c a các dòng có s sai khác nhau nhi u, cao nh t là dòng b i tam b i PD.06.63 (7,03 cm), th p nh t là dòng b... u cao cây t cao nh t là dòng cam Sành tam b i CS.07.03 (231,53 cm), th p nh t là dòng cam Sành tam b i CS.06.11 (112,47 cm) ng kính g c cây c a các dòng không có s sai khác nhau nhi u ng kính tán có s chênh l ch gi a các dòng, cao nh t là dòng cam Sành tam b i CS.06.02 (198,32 cm), th p nh t là (95,06 cm) dòng cam Sành tam b i CS.06.11 18 K t qu nghiên c u sinh tr ng c a các dòng cam Sành th hi n qua... nh nh t dòng cam Sành tam b i CS.07.03 (1,0 cm) và t cao nh t t i dòng cam Sành tam b i CS.07.04 (2,5 cm) Các dòng cam Sành tam b i CS.07.02, CS.07.01, CS.07.04 có kh n ng phân cành cao Dòng cam Sành tam b i CS.07.04 co chi u cao cây cao nh t (192,6 cm), th p nh t là dòng cam Sành tam b i CS.07.02 (112,3 cm) ng kính g c c a các dòng cam Sành tam b i có s sai khác nhi u ng kính g c cao nh t là dòng cam... các dòng cam Sành tam b i c ng không rõ r t Các dòng cam Sành tam b i 8 tu i (2013) có chi u dài phi n lá t 7,16 cm (dòng cam Sành tam b i CS.05.04) n 10,42 cm (dòng cam Sành tam b i CS.05.01), chi u r ng phi n lá dao ng t 4,82 cm (dòng cam Sành tam b i CS.05.03) n 6,38 cm (dòng cam Sành tam b i CS.05.01) còn các dòng khác n m gi a giá tr trên Hình thái lá các cây cam Sành tam b i 7 tu i (2013) có chi... chi u dài phi n lá các dòng cam Sành t 7,56 cm (dòng cam Sành tam b i CS.06.05) n 9,96 cm (dòng cam Sành tam b i CS.06.08), chi u r ng phi n lá dao ng t 4,04 cm (dòng cam Sành tam b i CS.06.04) n 5,58 cm (dòng cam Sành tam b i CS.06.10) còn các dòng khác n m gi a giá tr trên Hình thái lá c a các dòng cam Sành tam b i 6 tu i (2013) có chi u dài phi n lá các dòng cam Sành t 5,84 cm (dòng cam Sành tam b... các dòng b i không có s sai khác nhi u ng kính tán có s chênh l ch gi a các dòng, th p nh t là dòng b i tam b i PD.06.16 (96,70 cm), cao nh t t (256,50 cm) dòng b i tam b i PD.06.42 Các dòng b i tam b i 6 tu i (2013) c ng r t a d ng ki u hình v thân tán, m t gai, các d ng phi n lá, trung bình các dòng b i tam b i có kho ng t 2,0 n 8,0 cành c p I và t 6,0 n 24,0 cành c p II ng kính cành c p I nh nh t dòng. .. cm) và t cao nh t t i dòng b i tam b i PD.07.71 (6,0 cm) Kh n ng phân cành cao là các dòng b i tam b i PD.07.64, PD.07.65, PD.07.58, Chi u cao cây cao nh t là dòng b i tam b i PD.07.47 (297,7 cm), th p nh t là dòng b i tam b i PD.07.48 (150,0 cm) ng kính g c c a các dòng b i tam b i có s sai khác nhi u, ng kính g c cây cao nh t là dòng b i tam b i PD.07.38 (9,3 cm), th p nh t là dòng b i tam b i PD.07.28... chúng tôi th ng kê s cây con s ng t t l cao trên 80% các dòng b i và trên 42,8% dòng cam Sành Cây tr c khi c y chuy n ra b u t s c ki m tra m c b i th K t qu ki m tra m c b i th c a 121 cây tái sinh ã thu c 114 cây tam b i (3x), 2 cây t b i (4x) và 5 cây nh b i (2x) T t c các cây tam b i thu ct 8c p lai (2x × 4x) và lai t nhiên trong qu n th tr ng thu n cam Sành (2x × 2x) nh sau: (1) S cây tam b i thu... cho ch n t o gi ng cây có múi không h t Do h u h t cây n qu là gi ng lai t nhiên (d h p t v di truy n) và c ch n l c nhân t o, nên các dòng b i tam b i s là các cá th khác bi t có ki u gen (genotype) c thù và sau khi nhân lên b ng con ng vô tính s tr thành dòng tam b i khác bi t v i các dòng khác (t cùng m t c p lai) v di truy n và các tính tr ng nông sinh h c 11 S NGHIÊN C U T O DÒNG GI NG CITRUS . 