AMPICILIN DÙNG ĐỂ PHA THUỐC TIÊM Ampicillini pro injectione Ampicilin để pha thuốc tiêm là bột kết tinh vô khuẩn của ampicilin natri đóng trong lọ thuỷ tinh nút kín. Chỉ pha với “nước vô khuẩn để tiêm” ngay trước khi dùng. Chế phẩm phải đạt các yêu cầu quy định trong chuyên luận chung về “Thuốc tiêm, thuốc tiêm truyền” (Phụ lục 1.19) và các yêu cầu sau đây: Hàm lượng ampicilin, C 16 H 19 N 3 O 4 S , phải đạt từ 95,0 đến 105,0% so với hàm lượng ghi trên nhãn. Tính chất Bột kết tinh trắng hoặc gần trắng, tan trong nước. Định tính Có thể chọn một trong hai nhóm định tính sau: Nhóm I: Các phép thử A và C Nhóm II: Các phép thử B, C và D A. Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) của chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại của ampicilin natri chuẩn. Nếu phổ không phù hợp thì thực hiện phương pháp sau: Hoà tan một lượng chế phẩm tương ứng với 0,25 g ampicilin trong 5 ml nước, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 2 M(TT), trộn đều và để yên 10 phút trong nước lạnh. Lọc qua phễu thuỷ tinh xốp số 3, rửa cắn với 2 - 3 ml hỗn hợp 9 thể tích aceton (TT) và 1 thể tích nước, làm khô cắn ở 60 o C trong 30 phút và đo phổ hồng ngoại. Phổ hồng ngoại của cắn phải phù hợp với phổ chuẩn của ampicilin trihydrat. B. Trong phần định lượng, pic chính trên sắc ký độ của dung dịch thử phải có cùng thời gian lưu với pic chính trên sắc ký đồ của dung dịch chuẩn. C. Chế phẩm phải có phản ứng đặc trưng của muối natri ( Phụ lục 8.1). D. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4). Bản mỏng: Silica gel GF 254 . Dung môi khai triển: Hỗn hợp dung dịch amoni acetat 15,4% (TT) đã được điều chỉnh tới pH 5,0 bằng acid acetic khan (TT) và aceton (TT) (90 : 10). Dung dịch thử: Hoà tan một lượng chế phẩm tương ứng với 25 mg ampicilin natri trong 10 ml dung dịch natri hydrocarbonat 4,2% (TT). Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan 25 mg ampicilin trihydrat chuẩn trong 10 ml dung dịch natri hydrocarbonat 4,2% (TT). Dung dịch đối chiếu (2): Hoà tan 25 mg ampicilin trihydrat chuẩn và 25 mg amoxicilin trihydrat chuẩn trong 10 ml dung dịch natri hydrocarbonat 4,2% (TT). Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 2 l mỗi dung dịch trên. Triển khai sắc ký trong bình bão hoà hơi dung môi đến khi dung môi đi được khoảng 15 cm. Lấy bản mỏng để khô ngoài không khí, đặt bản mỏng vào bình có hơi iod đến khi xuất hiện các vết, quan sát dưới ánh sáng ban ngày. Trên sắc ký đồ thu được, vết chính của dung dịch thử và dung dịch đối chiếu (1) phải giống nhau về hình dạng, màu sắc và giá trị R f . Phép thử chỉ có giá trị khi dung dịch đối chiếu (2) cho 2 vết tách rõ ràng. Độ trong và màu sắc của dung dịch Hoà tan 1,0 g chế phẩm trong 10 ml dung dịch acid hydrocloric 1 M (TT), lắc kỹ (dung dịch A). Hòa tan 1,0 g chế phẩm trong nước vừa đủ 10 ml (dung dịch B). Cả hai dung dịch đều phải trong. Nếu dung dịch đục thì không được đục hơn dung dịch chuẩn đối chiếu II (Phụ lục 9.2). Độ hấp thụ ánh sáng của dung dịch B ở bước sóng 430 nm không quá 0,15. Giới hạn acid – kiềm Dung dịch chế phẩm 10% trong nước không có carbon dioxyd (TT) có pH từ 8,0 đến 10,0. Đo trong vòng 10 phút sau khi pha dung dịch (Phụ lục 6.2). Nước Không quá 2% ( Phụ lục 10.3). Dùng 0,3 g chế phẩm. Chất hấp thụ iod Hoà tan khoảng 0,100 g chế phẩm trong 20 ml nước, thêm 0,5 ml dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) và 25,0 ml dung dịch iod 0,02 N (CĐ). Định lượng ngay bằng dung dịch natri thiosulfat 0,02 N (CĐ), dùng dung dịch hồ tinh bột (TT) làm chỉ thị. Song song làm mẫu trắng trong cùng điều kiện. Hiệu số giữa hai lần chuẩn độ biểu thị lượng chất hấp thụ iod có mặt. 1 ml dung dịch natri thiosulfat 0,02 N (CĐ) tương ứng với 0,7392 mg chất hấp thụ iod. Tính tỷ lệ phần trăm chất hấp thụ iod trong mẫu thử. Tổng tỷ lệ phần trăm chất hấp thụ iod và tỷ lệ phần trăm ampicilin natri (cả hai loại đều tính theo chất khan) không được ít hơn 97,5%. 1 mg C 16 H 19 N 3 O 4 S được xác định ở mục định lượng tương đương với 1,063 mg ampicilin natri, C 16 H 18 N 3 NaO 4 S. Nội độc tố vi khuẩn Tiến hành thử theo chuyên luận “ Phép thử nội độc tố vi khuẩn” ( Phụ lục 13.2). Hoà tan một lượng chế phẩm trong nước BET(TT) để thu được dung dịch có nồng độ ampicilin 9,5 mg/ml (dung dịch A). Nồng độ giới hạn nội độc tố của dung dịch A là 1,5 IU/ml. Giá trị độ pha loãng tối đa của dung dịch A được tính từ độ nhạy của thuốc thử Lysat dùng trong phép thử . Định lượng Tiến hành bằng phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3). Pha động: Nước- acetonitril- dung dịch kali dihydrophosphat 1 M- dung dịch acid acetic 1 M (909 : 80 : 10 : 1). Dung dịch thử: cân chính xác một lượng chế phẩm tương ứng với khoảng 50 mg ampicilin vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml pha động, lắc cho tan, pha loãng bằng pha động đến vạch, lắc đều và lọc. Hút 10,0 ml dịch lọc, pha loãng thành 50,0 ml với pha động, lọc. Dung dịch chuẩn: cân chính xác khoảng 50 mg ampicilin chuẩn vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml pha động, lắc cho tan, pha loãng bằng pha động đến vạch, lắc đều và lọc. Hút 10,0 ml dịch lọc, pha loãng thành 50,0 ml với pha động, lọc. Dung dịch phân giải: Dung dịch có nồng độ ampicilin chuẩn 200 g/ ml và cephradin chuẩn 20 g/ ml pha trong pha động. Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh C (5 m) (cột Hypersil ODS là thích hợp). Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút. Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 254 nm. Thể tích tiêm: 20 l. Cách tiến hành: Kiểm tra khả năng thích hợp của hệ thống sắc ký: Tiêm dung dịch phân giải và điều chỉnh độ nhạy sao cho chiều cao của các pic ít nhất cũng bằng nửa thang đo. Thử nghiệm chỉ có giá trị khi hệ số phân giải giữa 2 pic ampicilin và cephadrin không nhỏ hơn 3,0. (Nếu cần), có thể điều chỉnh thành phần pha động để đạt điều kiện trên). Thử nghiệm chỉ có giá trị khi độ lệch chuẩn tương đối của diện tích pic của 6 lần tiêm dung dịch chuẩn nhỏ hơn 2,0%. Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tính hàm lượng ampicilin, C 16 H 19 N 3 O 4 S , trong một đơn vị chế phẩm theo khối lượng trung bình từ diện tích pic trên sắc ký đồ của dung dịch chuẩn, dung dịch thử, và hàm lượng C 16 H 19 N 3 O 4 S trong ampicilin chuẩn. Bảo quản Để nơi khô mát, nhiệt độ không quá 25 o C. Loại thuốc Kháng sinh nhóm beta - lactam Hàm lượng thường dùng 500 mg, 1000 mg. . AMPICILIN DÙNG ĐỂ PHA THUỐC TIÊM Ampicillini pro injectione Ampicilin để pha thuốc tiêm là bột kết tinh vô khuẩn của ampicilin natri đóng trong lọ thuỷ tinh nút kín. Chỉ pha với. khuẩn để tiêm ngay trước khi dùng. Chế phẩm phải đạt các yêu cầu quy định trong chuyên luận chung về Thuốc tiêm, thuốc tiêm truyền” (Phụ lục 1.19) và các yêu cầu sau đây: Hàm lượng ampicilin, . khoảng 50 mg ampicilin vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml pha động, lắc cho tan, pha loãng bằng pha động đến vạch, lắc đều và lọc. Hút 10,0 ml dịch lọc, pha loãng thành 50,0 ml với pha động,