nghiên cứu thành phần hóa học loài sao biển astropecten polyacanthus m t ở việt nam và ứng dụng làm bột sao biển

Ở VIỆT NAM VÀ ỨNG DỤNG LÀM BỘT SAO BIỂN Ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã ngành: 8540101 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao

Trang 1

BỘ CÔNG THƯƠNG

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

LÊ THỊ CẨM THƠ

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC LOÀI

SAO BIỂN (Astropecten polyacanthus M & T.) Ở

VIỆT NAM VÀ ỨNG DỤNG LÀM BỘT SAO BIỂN

Ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã ngành: 8540101

LUẬN VĂN THẠC SĨ

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022

luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop

luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop

Trang 2

Công trình được hoàn thành tại Trường Đại học Công nghiệp TP Hồ Chí Minh.Người hướng dẫn khoa học: GS TS Trần Đình Thắng

Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại Hội đồng chấm ảo vệ Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ngày 29 tháng 04 năm 2021

Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm:

1 GS TS Lê Văn Tán - Chủ tịch Hội đồng 2 TS Nguyễn Bá Thanh - Phản biện 1

3 PGS TS Phạm Văn Hùng - Phản biện 2 4 PGS TS Lại Quốc Đạt - Ủy viên 5 TS Nguyễn Đức Vượng - Thư ký

CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG VIỆN TRƯỞNG VIỆN CNSH&TP

Trang 3

NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ

Họ tên học viên: Lê Thị Cẩm Thơ MSHV: 19000371 Ngày, tháng, năm sinh: 30/05/1995 Nơi sinh: Thanh Hóa

Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã chuyên ngành: 8540101

I TÊN ĐỀ TÀI:

Nghiên cứu thành phần hóa học loài sao iển Astropecten polyacanthus M & T ở

Việt Nam và ứng dụng làm ột sao iển

NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG:

- Phân tích thành phần dinh dưỡng của loài sao iển Astropecten polyacanthus

M & T

- Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất chuyển hóa ậc hai của loài sao iển

Astropecten polyacanthus M & T

- Xây dựng quy trình tạo ột từ loài sao iển Astropecten polyacanthus M &

T

II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 20/10/2021

III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 20/04/2022

IV NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS TS Trần Đình Thắng

Tp Hồ Chí Minh, ngày … tháng … năm 20 …

Trang 4

LỜI CẢM ƠN

Trong suốt khoảng thời gian học tập quý áu tại trường, em đã nhận được rất nhiều sự quan tâm, giúp đỡ và hướng dẫn tận tình từ quý thầy cô và ạn è Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong Viện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm, đã luôn hỗ trợ nhiệt tình cho chúng em suốt quá trình học tập và nghiên cứu luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc đến Ban Giám Hiệu trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học đã tạo điều kiện cơ sở vật chất - kỹ thuật tốt nhất cho chúng em trong suốt quá trình học tập, rèn luyện tại trường và có thể thuận lợi hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến ộ môn Công nghệ Thực Phẩm trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, quý thầy cô, tập thể cán ộ quản lý phòng thí nghiệm của ộ môn đã tạo điều kiện thuận lợi, tận tình hướng dẫn giúp em tiếp cận đầy đủ kiến thức cho đến những trang thiết ị thí nghiệm hiện đại để có thể hoàn thành luận văn tốt nhất

Đặc iệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Trần Đình Thắng đã luôn sát cánh, tận tâm hướng dẫn và truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý giá cũng như những lời khuyên kịp thời giúp em hoàn thành đề tài như mục tiêu đã đề ra Ngoài ra, thầy còn là người đã giúp em có thái độ nghiên cứu khoa học đúng đắn và hiệu quả

Trong ài luận văn, tuy đã có nhiều cố gắng nhưng cũng không thể tránh khỏi những hạn chế và thiếu sót cũng như thiếu kinh nghiệm thực tế Em mong muốn sẽ nhận được nhiều đóng góp quý áu đến từ các quý thầy cô để đề tài được hoàn thiện hơn nữa và có ý nghĩa thiết thực áp dụng trong thực tiễn cuộc sống Em xin chân thành cảm ơn!

Trang 5

ABSTRACT

The thesis focus on the secondary metabolism and nutritional composition of the

starfish Astropecten polyacanthus collected in Nha Trang From crude methanol by

chromatographic methods and modern spectroscopy methods, four compounds were isolated and determined, namely astaxanthin, 5-ergost-7-en-3-ol, thymine, and uracil The study also analyzed the nutritional composition, including high protein content with 17 amino acids; The fat content was low, but unsaturated fat made up 54.276% compared to total fatty acids; 4 types of vitamins B1, B3, B5, B12 and 7 kinds of minerals (Ca, Mg, Fe, Zn, Cu, Mn, Na, K, Se, P) Protein content accounted for 16.6%, of which essential amino acids have high content such as glycine (49.31 mg/g), arginine (31.86), alanine (18.48 mg/g), glutamine (13.43 mg/g) These essential amino acids perform many functions such as antioxidant, providing energy, and enhancing immunity Analysis of the content of vitamins and minerals showed that the vitamin B1 content was the highest (1.92 mg/100g) and the outstandingly high mineral content such as phosphorus (178 mg/g), potassium (130 mg) /g), copper (129.8 mg/g), calcium (116.8 mg/g)

A laboratory-scale starfish powder production process has been identified, in which the extraction process has been optimized In order to obtain the highest extractive content without affecting the value of the natural compounds obtained, an aqueous solvent was used with a ratio of raw material and solvent of 1/20 at 80°C for 8 hours After obtaining the extract, spray drying was carried out on the machine with the following parameters: Maltodextrin carrier content 14%, drying chamber temperature 160oC, outlet temperature 80oC, feeding flow 15ml/min, drying pressure 2,5 atm

123docz.net - File bi loi xin lienhe: lethikim34079@hotmail.com

Trang 6

TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ

Đề tài đã nghiên cứu các thành phần chuyển hóa ậc hai, thành phần dinh dưỡng

của sao iển Astropecten polyacanthus được thu ắt tại Nha Trang Từ cao chiết

methanol ằng các phương pháp sắc ký ( sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột…) và các phương pháp phổ hiện đại ( phổ khối lượng, phổ hồng ngoại, phổ tử ngoại, phổ cộng hưởng từ hạt nhân…) đã phân lập và xác định cấu trúc của 4 hợp chất là astaxanthin, 5-ergost-7-en-3-ol, thymine, uracil Nghiên cứu cũng đã phân tích thành phần dinh dưỡng, ao gồm hàm lượng cao protein với 17 loại acid amin; hàm lượng chất éo tuy thấp nhưng có thành phần chất éo không ão hòa chiếm 54,276% so với acid éo tổng; 4 loại vitamin B1, B3, B5, B12 và 7 loại khoáng chất (Ca, Mg, Fe, Zn, Cu, Mn, Na, K, Se, P) Hàm lượng protein chiếm 16,6% trong đó các acid amin có hàm lượng cao như glycine (49,31 mg/g), arginine (31,86), alanine (18,48 mg/g), glutamine (13,43 mg/g) Các loại acid amin thiết yếu này thực hiện nhiều chức năng như chống oxy hóa, cung cấp năng lượng, nâng cao miễn dịch Qua phân tích hàm lượng các loại vitamin và khoáng chất cho thấy hàm lượng vitamin B1 là cao nhất (1,92 mg/100g) và hàm lượng các chất khoáng cao nổi ật như photpho (178 mg/g), kali (130 mg/g), đồng (129,8 mg/g), canxi (116,8 mg/g) Quy trình tạo ột sao iển quy mô phòng thí nghiệm đã được xác định, trong đó công đoạn chiết đã được thực hiện tối ưu hóa Để thu được hàm lượng chất chiết cao nhất nhưng không làm ảnh hưởng tới giá trị của các hợp chất thiên nhiên thu được, dung môi nước đã được sử dụng với tỉ lệ nguyên liệu và dung môi là 1/20 ở nhiệt độ 80oC trong 8 giờ Sau khi thu được cao chiết, tiến hành sấy phun trên máy với các thông số: Hàm lượng chất mang maltodextrin 14%, nhiệt độ uồng sấy 160oC, nhiệt độ ra 80oC, lưu lượng nạp liệu 15ml/phút, áp suất sấy 2,5 atm

123docz.net - File bi loi xin lienhe: lethikim34079@hotmail.com

Trang 7

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan rằng ài áo cáo tốt nghiệp đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học

loài sao iển Astropecten polyacanthus M & T ở Việt Nam và ứng dụng làm ột

sao iển là công trình nghiên cứu của tôi dưới sự hướng dẫn của thầy Trần Đình Thắng Những phần có sử dụng tài liệu tham khảo có trong áo cáo đã được liệt kê và nêu rõ ra tại phần tài liệu tham khảo Đồng thời những số liệu hay kết quả trình ày trong luận văn đều mang tính chất trung thực, không sao chép, đạo nhái

Nếu như sai chúng tôi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm và chịu tất cả các kỷ luật của bộ môn cũng như nhà trường đề ra

Học viên

Lê Thị Cẩm Thơ

Trang 8

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN i

ABSTRACT ii

TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ iii

LỜI CAM ĐOAN iv

3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2

4 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài 2

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3

1.1 Giới thiệu chung về sao biển 3

1.2 Thành phần dinh dưỡng 5

1.3 Thành phần hóa học của sao biển 6

Trang 9

1.5.2 Thức ăn cho gia súc và gia cầm 12

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

2.4.3 Phương pháp phân tích thành phần dinh dưỡng 18

Trang 10

2.4.4 Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất chuyển hóa ậc hai của loài sao

biển Astropecten polyacanthus M & T 30

2.4.5 Phương pháp sấy phun và thiết bị 33

2.4.6 Phương pháp nghiên cứu an toàn nguyên liệu và chế phẩm 34

2.5 Quy trình công nghệ tạo bột sao biển 47

2.5.1 Sơ đồ quy trình công nghệ 47

2.5.2 Thuyết minh quy trình 48

2.5.3 Tối ưu hóa quá trình 51

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 54

3.1 Xác định thành phần nguyên liệu 54

3.2 Hàm lượng protein sao biển A.polyacanthus 54

3.3 Hàm lượng acid éo của sao biển A.polyacanthus 56

3.4 Thành phần khoáng chất, vitamin và kim loại của sao biển A.polyacanthus

58

3.4.1 Thành phần khoáng chất 58

3.4.2 Thành phần vitamin 58

3.5 Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất 59

3.6 Kết quả tối ưu hóa quá trình tạo bột sao biển: 65

3.7 Kết quả kiểm tra bột sao biển: 70

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 71

1 Kết luận 71

Trang 11

2 Đề xuất 72

TÀI LIỆU THAM KHẢO 73

PHỤ LỤC 83

LÝ LỊCH TRÍCH NGANG CỦA HỌC VIÊN 100

Trang 12

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Hình ảnh về sao biển Astropecten polyacanthus 3

Hình 2.1 Hình ảnh mặt trước và mặt sau của sao biển A polyacanthus M & T 14Hình 2.2 Phân lập các hợp chất từ sao biển A.polyacanthus 32

Hình 2.3 Thiết bị sấy phun 33

Hình 2.4 Quy trình công nghệ tạo bột sao biển 47

Hình 2.5 Thiết bị chiết 49

Hình 2.6 Sơ đồ thiết bị chiết 49

Hình 2.7 Máy sấy đông khô 50

Hình 3.1 Công thức cấu tạo của hợp chất Astaxanthin 59

Hình 3.2 Phổ UV của hợp chất Astaxanthin 60

Hình 3.3 Công thức cấu tạo của hợp chất 5-ergost-7-en-3-ol 61

Hình 3.4 Công thức cấu tạo của hợp chất Thymine 63

Hình 3.5 Công thức cấu tạo của hợp chất Uracil 64

Trang 13

DANH MỤC BẢNG BIẾU

Bảng 2.1 Thiết bị phân tích 15

Bảng 2.2 Các thông số thiết bị đối với kỹ thuật đo AAS 19

Bảng 2.3 Chương trình vận hành thiết bị vô cơ hóa mẫu 42

Bảng 2.4 Điều kiện tiến hành phân tích thiết bị AAS xác định hàm lượng chì 43

Bảng 2.5 Điều kiện tiến hành phân tích thiết bị AAS xác định hàm lượng cadmi 44

Bảng 2.6 Bảng ma trận thí nghiệm tối ưu hóa 52

Bảng 3.1 Thông số kích thước, chiều dài, hàm lượng ẩm và tro của sao biển A.polyacanthus 54

Bảng 3.2 Hàm lượng protein, acid amin của sao biển A polyacanthus 56

Bảng 3.3 Hàm lượng acid éo sao iển A.polyacanthus 57

Bảng 3.4 Thành phần khoáng chất của sao biển A.polyacanthus 58

Bảng 3.5 Thành phần vitamin của sao biển A.polyacanthus 59

Bảng 3.6 Thông số phổ 13C-NMR và Phổ 1H-NMR của hợp chất Astaxanthin 60

Bảng 3.7 Kết quả khảo sát dung môi chiết 65

Bảng 3.8 Kết quả khảo sát nhiệt độ chiết 66

Bảng 3.9 Kết quả khảo sát thời gian chiết 67

Bảng 3.10 Kết quả khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 68

Bảng 3.11 Kết quả kiểm tra bột sao biển 70

Trang 14

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

A.polyacanthus Astropecten polyacanthus A Rubens Asterias Rubens

13C-NMR Cacbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy

ESI-MS Electron spray ionization mass spectra

EC50 Half maximal effective concentration

FAME Fatty acid methyl esters

GC-MS Gas Chromatography-Mass spectrometry

1H-NMR Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy

HPLC High Performance Liquid Chromatography

IR Infrared ray

IC50 Half maximal inhibitory concentration

LC-MS Liquid Chromatography-Mass spectrometry

LPS Lipopolysaccharide

NMR Nuclear magnetic resonance

NO Nitric Oxide

RSM Response Surface Methodology

ROS Reactive Oxygen Species

QCVN Quy chuẩn Việt Nam

TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam

Trang 15

MỞ ĐẦU

1 Đặt vấn đề

Sao iển là động vật không xương sống, thuộc lớp Sao Biển (Asteroidea), ngành Da Gai (Echinodermata), sống ở đáy iển Có hơn 1500 loài sao iển đã được tìm thấy, chúng sinh sống chủ yếu ở khắp các đại dương trên thế giới từ vùng đới đến vùng iển cận cực, trong khi một số ít khác sống ở vùng nước lợ Sao iển là chủ đề nghiên cứu gần đây do hoạt tính sinh học đa dạng, đặc tính dược lý tuyệt vời và các chất chuyển hóa thứ cấp phức tạp ao gồm steroid, glycoside steroid, anthraquinones, alkaloids, phospholipid, peptide và acid éo Các thành phần hóa học này thể hiện các hoạt động gây độc tế ào, tán huyết, kháng virus, kháng nấm và kháng khuẩn và do đó có ý nghĩa quan trọng đối với lợi ích sức khỏe con người Trong giai đoạn 1977 – 2007, theo các nhà khoa học đã công ố thì sao iển có hơn 90 loài đã được nghiên cứu thành phần hóa học gồm 196 steroid, 376 glycoside, 92 dẫn xuất ceramide, và 26 hợp chất từ sao iển, trong đó có 690 hợp chất đã được trình ày cùng với hoạt tính sinh học và nguồn gốc của chúng Chính đặc điểm thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các hợp chất chuyển hóa ậc hai có nhiều mặt tích cực cho con người nên sao iển ngày càng được ứng dụng trong thực phẩm, dược phẩm Do vậy, chúng tôi chọn đề tài: ―Nghiên cứu thành phần hoá học

loài sao iển Astropecten polyacanthus M & T ở Việt Nam và ứng dụng làm ột

sao iển‖

2 Mục tiêu của đề tài 2.1 Mục tiêu chung

Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của loài sao iển Astropecten

polyacanthus M & T Và ứng dụng làm ột sao biển

Trang 16

2.2 Mục tiêu cụ thể

 Phân tích thành phần dinh dưỡng của loài sao iển Astropecten polyacanthus

M & T

 Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất chuyển hóa ậc hai của loài sao iển

Astropecten polyacanthus M & T

 Xây dựng quy trình tạo bột từ loài sao iển Astropecten polyacanthus M &

T

3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu: Mẫu sao biển Astropecten polyacanthus M & T

được thu bắt tại Nha Trang, Khánh Hòa, Việt Nam và được giám định loài ởi GS TS Đỗ Công Thung, Viện TN&MT Biển Mẫu tiêu ản số AsP-06-2012_01 lưu tại Viện TN&MT Biển

- Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học

của loài sao iển Astropecten polyacanthus M & T Và ứng dụng làm ột sao biển

4 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài

- Giúp xác định các thành phần dinh dưỡng, các thành phần chuyển hóa ậc hai có giá trị sinh học cao, từ đó ứng dụng vào các cuộc sống

- Giúp tận dùng và nâng cao giá trị từ nguồn sao biển tại Việt Nam

Trang 17

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 Giới thiệu chung về sao biển

Sao iển là động vật không xương sống, thuộc lớp Sao biển (Asteroidea), ngành Da gai (Echinodermata), có hơn 1500 loài sao iển đã được tìm thấy, sinh sống chủ yếu ở khắp các đại dương trên thế giới từ vùng nhiệt đới đến vùng iển cận cực, một số ít khác sống ở vùng nước lợ [1][2][3]

Hình 1.1 Hình ảnh về sao biển Astropecten polyacanthus

Sao iển có cơ thể dẹt hình sao, thường có một đĩa trung tâm và năm cánh tay thon dần, một số loài có số lượng cánh tay lớn hơn Sao iển trưởng thành có kích thước đường kính từ dưới 1 cm đến hơn 1 m, kích thước trung ình từ 12 đến 24 cm Mặt dưới hoặc mặt trên có thể nhẵn, dạng hạt hoặc có gai, và được ao phủ ởi các mảng chồng lên nhau Nhiều loài có màu sắc rực rỡ với nhiều sắc thái khác nhau như đỏ hoặc cam, trong khi những loài khác có màu xanh lam, xám hoặc nâu Sao iển có chân ống hoạt động ằng hệ thống thủy lực và miệng ở tâm của ề mặt miệng hoặc dưới Chúng là loài kiếm ăn cơ hội và chủ yếu là động vật ăn thịt động vật không xương sống đáy, ăn xác động vật và thực vật đã phân hủy, hoặc các màng hữu cơ dính vào chất nền Hầu hết sao iển ăn mồi di chuyển chậm, ao gồm động vật chân ụng, thân mềm hai mảnh vỏ, hà iển, giun nhiều tơ và các động vật không xương sống khác Những loài khác có thể tiêu thụ polyp san hô, ọt iển, hoặc thậm chí các hạt lơ lửng và sinh vật phù du Chúng có chu kỳ sống phức tạp và có thể sinh sản cả hữu tính và vô tính Hầu hết có thể tái tạo các ộ phận ị hư hại hoặc

Trang 18

cánh tay ị mất và chúng có thể rụng cánh tay như một phương tiện phòng vệ [1][3]

Theo Blake (1987) lớp sao iển (Asteroidea) gồm ảy ộ: Brisingida, Forcipulatida, Notomyotida, Paxillosida, Spinulosida, Valvatida và Velatida [4] Ngoài ra, có hai ộ đã tuyệt chủng là Calliasterellidae và Trichasteropsida Theo Raman (2018) tổng hợp tài liệu, lớp Asteroidea có 1890 loài, trong đó ộ lớn Valvatacea (Valvatida và Paxillosida) ao gồm số lượng loài lớn nhất với 1224 loài, tiếp theo là Forcipulatacea 393 loài, Velatida 145 loài và cuối cùng là Spinulosida ao gồm 135 loài [3]

Gần đây, sao iển được tập trung nghiên cứu do chúng chứa các chất chuyển hóa thứ cấp phức tạp ao gồm steroid, glycoside steroid, anthraquinones, alkaloids, phospholipid, peptide và acid éo… có hoạt tính sinh học đa dạng, đặc tính dược lý thú vị Các thành phần hóa học này thể hiện các hoạt tính gây độc tế ào, tán huyết, kháng virus, kháng nấm và kháng khuẩn… có ý nghĩa quan trọng đối với lợi ích sức khỏe con người [3][4]

Theo Guang Dong và cộng sự (2011), có hơn 90 loài sao iển được khảo sát thành phần hóa học Các hợp chất thứ cấp chủ yếu ao gồm 196 steroid, 376 glycoside, 92 dẫn xuất ceramide, và 26 hợp chất từ sao iển Trong giai đoạn 1977 – 2007, 690 hợp chất đã được công ố đã được đánh giá về hoạt tính sinh học [2] Theo Stonik và cộng sự (2008) có hơn 180 steroid phân cực mới ao gồm polyhydroxysteroid, steroidal sulfat và các loại glycoside khác được phân lập từ sao iển từ năm 2001 đến năm 2007 [5] Theo JinmeiXia và cộng sự (2020) cập nhập, trong giai đoạn từ tháng 1 năm 2007 đến tháng 12 năm 2018, 216 hợp chất mới đã được thu được từ 36 loài ao gồm 30 steroid, 148 glycoside steroid, 24 ganglioside, 4 carotenoid và 10 oligoglycoside Những thành phần này đã được phát hiện có khả năng hoạt động sinh học khác nhau, ao gồm chống ung thư, kháng viêm…[1]

Trang 19

1.2 Thành phần dinh dưỡng

Sao biển có các thành phần dinh dưỡng chủ yếu là protein, khoáng, lipid Những thành phần này sẽ thay đổi tùy vào thời điểm, độ tuổi, kích thước, độ tươi, môi

trường [6] Nghiên cứu Asterias Rubens ở Đan Mạch cho thấy thời điểm tháng 2

đến tháng 5 có protein thô cao nhất và tro thấp nhất, sao biển nhỏ (<7,5 cm) có thành phần dinh dưỡng kém nhất so với cỡ vừa (7,5- 15 cm) hay cỡ lớn (>15 cm) Tuy nhiên, hàm lượng chất éo không có sự thay đổi rõ ràng theo mùa hay vị trí địa

lý không ảnh hưởng đáng kể đến thành phần dinh dưỡng [7] Độ ẩm của sao biển

được phát hiện dao động từ 67,7 đến 69,1% trọng lượng ở loài sao iển

Ascanthaster planci và hàm lượng tro của sao biển đạt 20,5 đến 23,3% trọng lượng,

có thể là do có nhiều mảnh vụn hoặc gai trong hoặc trên cơ thể của chúng [8]  Protein và acid amin

Sao biển có nguồn protein cao, chứa nhiều loại acid amin thiết yếu và acid amin không thiết yếu có hoạt tính sinh học cao Mức protein thô từ khoảng 270-450 và

lên đến 700g/kg trong chất khô và hàm lượng acid amin chất lượng cao

[6][7][9][10] Có khoảng 17- 18 loại acid amin được tìm thấy trong các loài sao

biển như Asterias Rubens, Ascanthaster planci, đặc biệt là các loại acid amin chiếm tỉ lệ cao như acid glutamic, glycine, acid aspartic, arginine, …[7][8] [9]

 Lipid

Sao biển tươi có hàm lượng chất éo thấp (1-3%), Bột sao biển khô có hàm lượng

chất éo cao hơn không đáng kể (4-8%) [6] Cụ thể hơn, loài sao iển Ascanthaster

planci có hàm lượng lipid thấp (< 1%), chủ yếu là thành phần các acid éo không

ão hòa đạt 59,84 đến 68,36% tổng số acid éo và acid éo không ão hòa đa chiếm một nửa số acid éo không no Các acid éo không ão hòa đa chứa acid timnodonic (EPA) (C20: 5 ω-6, 1,31 đến 2,73%) và acid docosahexaenoic (DHA) (C22: 6 ω-3, 0,89-1,71%), có chức năng sinh lý quan trọng đối với con người và động vật [8] Ngoài ra chất éo cũng được tìm thấy trong loài sao iển khác như

Asterias rubens [9][10]

 Chất khoáng

Trang 20

Sao biển chứa nhiều loại chất khoáng gồm calcium (Ca), phosphorus (P), sodium (Na), magnesium (Mg), potassium (K), manganese (Mn), iron (Fe), copper (đồng), zinc (kẽm), selenium (Se) [7] Canxi và photpho là các nguyên tố vô cơ chính tạo nên cấu trúc khung xương của sao biển Hàm lượng canxi dao động từ 102 đến 167 g/kg trọng lượng khô và photpho là 2,93 đến 6,45 g/kg trọng lượng khô ở loài sao

biển Asterias Rubens, trong khi hàm lượng canxi từ 22,3 đến 26,7% trọng lượng

khô và hàm lượng photpho khoảng 1,7% trọng lượng khô ở loài sao iển

Ascanthaster planci [7][8]

 Vitamin

Theo nguồn dữ liệu, trong sao biển chứa nhiều loại vitamin như vitamin E, thiamin (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2), acid pantothenic (vitamin B5), niacin (vitamin B3), pyridoxine (vitamin B6), cyanocobalamin (vitamin B12), choline Hiện nay, hàm lượng vitamin trong sao biển vẫn chưa có công ố chi tiết nào

1.3 Thành phần hóa học của sao biển

1.3.1 Các hợp chất steroid

Các thành phần steroid là các chất chuyển hóa chủ yếu, bao gồm các polyhydroxyl steroid tự do và polyhydroxyl steroid sulfonyl hóa Ngoại trừ bọt biển, sao biển được coi là nguồn polyhydroxy steroid dồi dào nhất, có những cấu trúc tương tự nhau được tìm thấy ở hầu hết các loài sao iển Phần lớn các steroid có khung 3β,6α (hoặc β),8,15 α (hoặc β),16β - pentahydroxycholestan, đôi khi có thêm nhóm OH ở vị trí 4β, 5α, 7α (hoặc β) hoặc vị trí 14α Chuỗi ên (25S)-26-hydroxy thì phổ biến trong khi chuỗi ên được hydroxyl hóa tại C(24) với cấu hình (S)- thì ít hơn Trong một vài chuỗi ên, nhóm chức 26-cacboxylic acid được tìm thấy dưới dạng các dẫn xuất amide của taurine Polyhydroxy sterol thường xuất hiện ở dạng sulfonyl hóa, và trong một trường hợp hiếm hoi, ở dạng phosphoryl hóa Có 4 loại hợp chất sterol

chính trong các loài sao iển là: 3α –Sterols, 3β-O-sulfonylated sterols, OH-sterols và 3β-OH,6β-OH-sterols [2]

3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop 3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop 3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop 3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop 3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hop 3β-OH,6α-luan van tot nghiep, 3β-OH,6α-luan van thac si, 3β-OH,6α-luan van cao hoc, 3β-OH,6α-luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop

Trang 21

Các hợp chất steroid được phân lập từ các loài sao iển được trích dẫn trong bảng PL1

1.3.2 Hợp chất glycoside steroid

Glycoside là hợp chất được nghiên cứu đầu tiên và thường xuyên nhất trong nghiên cứu các thành phần hóa học và hoạt động của sao biển Glycoside chỉ tồn tại ở động vật Echinodermata Ngoại trừ Holothuroidea, sao biển là nguồn cung cấp glycoside chính ở các động vật không xương sống ở biển Hầu hết glycoside trong sao biển là glycoside steroid, được tìm thấy trong tất cả các loài sao iển và là các chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học như gây độc tế ào, tan máu, kháng nấm, kháng vi-rút, chống viêm và gây độc cho da, mức độ cao nhất được tìm thấy trong dạ dày sau đó là cánh tay, tuyến sinh dục và manh tràng (tuyến tiêu hóa) Hàm lượng thay đổi theo mùa và sinh sản của sao biển Hầu hết các glycosid liên kết với glycosidoprotein hoặc lipoprotein, chỉ 3% tồn tại ở trạng thái tự do Có các glycoside khác nhau trong các mô khác nhau của sao biển; glycosidoprotein chính là xylose trong manh tràng môn vị, và quinovose trong các ộ phận khác Các glycine của glycoside từ sao biển chứa hexose và pentose

Sự thay đổi của hoạt động có thể kể đến số lượng, bản chất và vị trí của các gốc đường Theo các đặc điểm cấu trúc có liên quan nhất của chúng, glycoside từ sao biển được chia thành a nhóm chính: glycoside của polyhydroxy steroid, asterosaponin và cyclic glycoside steroid [2]

Các hợp chất glycoside steroid được phân lập từ các loài sao iển được trích dẫn trong bảng PL2

1.3.3 Dẫn xuất ceramide

Hơn 90 dẫn xuất ceramide liên quan đã được thu nhận và xác định đặc điểm từ 16

loài sao iển như là Acanthaster planci, Allostichaster inaequalis, Anasterias

minuta…Các đặc điểm cấu trúc của ceramides và sphingolipids là thành phần

car ohydrate độc nhất của chúng Các dẫn xuất của ceramide gồm ceramides, cere rosides và gangliosides được chú ý nhiều do chức năng sinh học của chúng

Trang 22

Ganglioside đã được phát hiện để hỗ trợ sự tồn tại của các tế ào thần kinh được nuôi cấy, và cho thấy các hoạt động ức chế tăng trưởng và sinh tân sinh đối với dòng tế ào u nguyên ào thần kinh chuột [2]

Các dẫn xuất ceramide được phân lập từ các loài sao iển được trích dẫn trong bảng PL3

1.3.4 Các hợp chất khác

Phần lớn các chất chuyển hóa thứ cấp được áo cáo từ sao biển là saponin hoặc polyhydroxyl hóa sterol, ngoài ra còn có một số hợp chất khác như dẫn xuất mycosporine, tetrodotoxin, alkaloid, isoquinoline alkaloid, glycolipid, icosanoids, taurine, dipeptit dimeric, anthraquinon, xanthosine, dẫn xuất pyrrole, và dẫn xuất triterpene cũng được tìm thấy từ sao biển [2]

Các hợp chất khác được phân lập từ các loài sao iển được trích dẫn trong bảng PL4

1.4 Hoạt tính sinh học

1.4.1 Hoạt tính chống ung thư

Các hợp chất có nguồn gốc từ sao biển là chất chống ung thư đầy hứa hẹn Do đó, nghiên cứu nhiều nhất là tác dụng gây độc tế ào in vitro của chúng chống lại các dòng tế ào ung thư khác nhau

Từ sao biển Archaster typicus, hợp chất Sodium

(25R)-5α-cholestane-3β,6α,8,14α,15β,26-hexaol 15-sulfate đã được thử nghiệm cho các hoạt động ức chế chống lại các tế ào khối u MDA-MB-435 và Colo205 Kết quả cho thấy tác dụng thấp với giá trị IC50 lần lượt là 58,3 và 47,1 μg/mL [12]

Từ sao biển Culcita novaeguineae, các hợp chất Novaeguinoside A,

Novaeguinoside C, Novaeguinoside C, Novaeguinoside D có khả năng thúc đẩy quá trình trùng hợp tu ulin và chúng cũng cho thấy độc tính tế ào chống lại các tế ào K-562 của bệnh bạch cầu ở người và các tế ào BEL-7402 của khối u gan ở người

Trang 23

Từ sao biển Diplasterias brucei, hợp chất Diplasterioside A và Diplasterioside B đã

được thử nghiệm về đặc tính gây độc tế ào của chúng chống lại ba tế ào ung thư ở người, tế ào ung thư ruột kết ở người (HCT-116), tế ào ung thư vú ở người (T-47D) và tế ào ung thư hắc tố ở người (RPMI-7951) Chúng độc nhất đối với tế ào RPMI-7951 và hai hợp chất có độc tính tương tự nhau đối với tết ào này với giá trị IC50 lần lượt là 67 và 60 μM [14]

Từ sao biển Archaster typicus, hợp chất Archasteroside B cho thấy tác dụng gây

độc tế ào đối với tế ào HeLa ung thư ở người và tế ào JB6 P + Cl41 iểu ì của chuột với IC50 tương ứng là 14 mM và 18 μM, trong khi đối với hợp chất

Archasteroside A, giá trị IC50 tương ứng là 24 và 37 μM [15]

Từ sao biển Leptasterias ochotensis, các hợp chất Leptasterioside A,

Leptasterioside B và Leptasterioside C gây độc tế ào chống lại dòng tế ào T-47D với các giá trị IC50 tương ứng là 10, 2 và 23 μM [16]

So với các hợp chất đã đề cập ở trên, các hợp chất Astrosterioside A,

Astrosterioside D từ sao biển Astropecten monacanthus, và Anthenoside A từ sao biển Anthenea chinensis cho thấy khả năng gây độc tế ào tốt ở nồng độ tương đối

thấp Hợp chất Astrosterioside D thể hiện tác dụng ức chế mạnh đối với việc sản xuất IL-12 p40, IL-6 và TNF-α với các giá trị IC50 tương ứng là 0,6, 3,5 và 1,2 μM Ngoài ra, hợp chất Astrosterioside D cho thấy tác dụng ức chế đáng kể đối với sản xuất IL-6 với giá trị IC50 là 3,2 μM [17], hợp chất Anthenoside A thể hiện độc tính tế ào đáng kể đối với các tế ào K-562, BEL-7402 và U87MG khối u ở người với các giá trị IC50 tương ứng là 1,1, 2,1 và 1,9 μg / mL [18]

1.4.2 Hoạt tính kháng viêm

Hoạt tính chống viêm thường được đánh giá ằng cách theo dõi những thay đổi của ROS trong tế ào RAW 264.7 của đại thực ào chuột, là hoạt động được nghiên cứu nhiều thứ hai đối với các hợp chất từ sao biển Các hợp chất Lysaketodiol và Lysaketotriol đã được áo cáo là có thể làm tăng sự hình thành ROS trong các đại

thực ào của chuột [19] Lipopolysaccharide (LPS) từ E coli là một chất điều hòa

Trang 24

miễn dịch và nó có thể được sử dụng để điều trị các loại tế ào miễn dịch khác nhau Trong một số trường hợp, LPS được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực Các hợp chất Regulusosides A và Regulusosides B từ sao biển

Pentaceraster regulus có thể gây ra sự hình thành ROS nội ào trong các tế ào

RAW 264,7 [20] Ở liều không gây độc 10 μM, các hợp chất Regulusosides A và Regulusosides B làm tăng sự hình thành ROS trong tế ào RAW 264,7 lần lượt lên 35% và 28% Tác dụng của chúng tương đương với 1 μg / mL LPS Tác dụng của nó ở nồng độ 0,1 μM hiệu quả hơn trong việc kích thích hoạt động của lysosome so với LPS ở liều 1 μg / mL và tương tự như LPS trong việc kích thích tổng hợp nitric oxide (NO)

Trong một số trường hợp khác, các hợp chất được sử dụng để xử lý các đại thực ào của loài chuột RAW 264.7 được ủ trong sự hiện diện của LPS Khi LPS gây ra tác dụng chống viêm, các hợp chất này có chức năng như chất chống viêm Các hợp chất Pentareguloside C, Pentareguloside D và Pentareguloside E cho thấy tác dụng chống viêm tiềm năng ở nồng độ 5 μM, làm giảm sự hình thành ROS trong tế ào RAW 264,7 lần lượt là 40%, 28% và 55% [21] Hợp chất Protolinckioside A, Protolinckioside B, Protolinckioside C và Protolinckioside D từ sao biển

Protoreaster linckii làm giảm đáng kể hàm lượng ROS nội ào trong các đại thực

ào ở chuột RAW 264,7 khi cảm ứng bằng LPS từ E coli [22] Hợp chất Anthenoside O từ sao biển Anthenea aspera ở liều 10 μM thể hiện tác dụng điều

hòa miễn dịch tiềm năng, làm giảm 24% hàm lượng ROS nội ào trong macro thực khuẩn thể RAW 264,7 [23] Các hợp chất Plancipyrroside A và Plancipyrroside B

từ sao biển Acanthaster planci thể hiện tác dụng ức chế mạnh đối với việc sản xuất

NO do LPS gây ra trong các tế ào RAW264,7 với giá trị IC50 tương ứng là 5,9 μM và 16,6 μM [24] Các hợp chất Aste atherioside B, Aste atherioside C và

Astebatherioside D từ sao biển Asterina batheri ức chế vừa phải sản xuất IL-12 p40

trong tế ào đuôi gai có nguồn gốc từ tủy xương (BMDC) được kích thích LPS với giá trị IC50 tương ứng là 31.6 μM, 36.4 μM và 22.8 μM [25]

Trang 25

1.4.3 Các hoạt tính sinh học khác

Một số hoạt tính sinh học quan trọng khác đối với các hợp chất của sao biển là khả năng gây độc tế ào của chúng đối với các dòng tế ào khác nhau ngoài tế ào ung thư Tinh trùng của nhím iển thường được sử dụng để nghiên cứu Từ loài sao iển

Archaster typicus, hai hợp chất cho thấy tác dụng độc vừa phải trong các thử

nghiệm tinh trùng và 8 phôi ào trên sự phát triển phôi của nhím iển

Strongylocentrotus intermedius [26] Từ loài sao iển Hippasteria kurilensis, bốn

hợp chất đều được thử nghiệm để ức chế sự thụ tinh của trứng bởi tinh trùng của

nhím iển Strongylocentrotus nudus được ủ trước với nó Hợp chất Sodium

(20R,24S)-3β,4β,7α,8,15β,24-hexahydroxy-5α-cholestan-22-ene-6α-yl sulfate không hoạt động trong xét nghiệm tinh trùng dưới 50 μM và cho thấy các hoạt động yếu hơn, với giá trị EC100 là 110 μM Hợp chất (24S)-5α-cholestane-3β,4β,6β,8β,15α,24-hexol thể hiện sự ức chế 100% ở 13 μM Hợp chất Kurilensoside D thể hiện sự ức chế 100% ở 67 μM Cả hai hợp chất Kurilensoside B và Kurilensoside C đều thể hiện sự ức chế 100% ở 55 μM [27]

Một số hợp chất đã được đánh giá về các hoạt động của chúng trong việc thúc đẩy

tăng sinh nguyên ào xương Từ sao biển Asterias amurensis Lutken, hợp chất (E)

cholest-3β,6α-ol (0,01 –100 μM) thúc đẩy đáng kể sự tăng sinh nguyên ào xương

25-O-β-D-xylopyranosyl-26,27-dinor-24(S)-methyl-22-ene-15α-O-sulfated-5α-trên các tế ào UMR106 [28] Từ sao biển Asterias amurensis Lutken , hợp chất

O-{β-D-quinovopyranosyl-(12)-β-D-fucopyranosyl-(14)-{β-D-fucopyranosyl(12)}β-Dquinovopyranosyl}- utanol cũng có thể thúc đẩy sự tăng sinh nguyên ào xương của các tế ào UMR106 trong khoảng 0,01 - 100 μM [29]

Một số hợp chất cho thấy tác động đến hoạt động của các enzym khác nhau Từ sao

biển Lysastrosoma anthosticta, hợp chất Lysaketotriol tạo ra sự kích thích vừa phải

hoạt động của lysosome trong tế ào lách của chuột [19] Hợp chất cholestan- 3β,6α,8,15α,24,26-hexaol từ sao biển cho thấy tác dụng ức chế vừa phải chống lại esterase không đặc hiệu, một loại enzym tế ào chất từ tế ào ung thư iểu mô Ehrlich của chuột với EC50 là 25 μg / mL [30] Hợp chất Asterolloside từ sao

(20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop (20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop (20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop (20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop(20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop (20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop(20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hop (20R)-5α-luan van tot nghiep, (20R)-5α-luan van thac si, (20R)-5α-luan van cao hoc, (20R)-5α-luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hopluan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop luan van tot nghiep, luan van thac si, luan van cao hoc, luan van tong hop

Trang 26

biển Asterias rollestoni BELL cho thấy hoạt động ức chế μ-glucosidase yếu với tỷ

lệ ức chế là 37,9% ở nồng độ 0,12 mg / mL [31]

1.5 Ứng dụng của bột sao biển

1.5.1 Thực phẩm chức năng

Ở Việt Nam, TS Nguyễn Huy Nam đã tiến hành nghiên cứu một số hoạt chất sinh

học trong sao biển Astropecten polyacanthus để tạo thực phẩm chức năng cho vận động viên điền kinh- viên nang Bionamine Từ sao biển Astropecten polyacanthus,

tác giả thủy phân các acid amin bằng enzyme papain, sau đó sử dụng phương pháp sấy phun tạo bột sao biển và làm thành sản phẩm viên nang Bionamine Qua nghiên

cứu cho thấy, sao biển Astropecten polyacanthus có hàm lượng cao các acid amin

thiết yếu cho cơ thể, các nguyên tố vi khoáng (Cu, Fe, Zn, Mn, Se), hormone steroid (testosteron, cortisol, progesterone, oestradiol)- thực hiện nhiều chức năng sinh lý quan trọng khác nhau Đặc biệt, sau quá trình thủy phân thì hàm lượng acid amin, nguyên tố vi khoáng và hormone steroid tăng cao Viên nang Bionamine thử nghiệm trên chuột cho thấy chúng hoạt động linh hoạt hơn, thử nghiệm trên thỏ cho thấy chất lượng tinh dịch được cải thiện, thử nghiệm trên các vận động viên cho thấy: tác dụng hồi phục và nâng cao hàm lượng testosterone trong máu, ổ sung ù đắp nâng cao hàm lượng cortisol trong máu tác động vào quá trình nâng cao thể lực, tác dụng bổ trợ chức năng gan trong cơ thể, kích hoạt enzym Lactat Dehydrogenaza (LDH), tác dụng trong quá trình phân giải acid lactic trong cơ, tác dụng hồi phục và tăng hồng cầu và cải thiện các chỉ tiêu huyết học của vận động viên, kích thích thần kinh trung ương làm tăng nhanh phản xạ thần kinh giúp cho vận động viên xử lý nhanh tình huống trong các ài tập…

1.5.2 Thức ăn cho gia súc và gia cầm

Sao biển Asterias Rubens được sử dụng làm thành phần thức ăn ( ột sao biển) trong

khẩu phần ăn cho lợn và gia cầm với nguồn protein dồi dào, hàm lượng acid amin thiết yếu và không thiết yếu và khoáng chất đa dạng [8][9] [10] Ngoài ra trong sao

Trang 27

biển còn có hàm lƣợng nhỏ lipid, đặc biệt là acid éo không ão hòa chiếm hơn 60% [8]

Trang 28

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu

Mẫu sao biển (Astropecten polyacanthus) được thu mua từ ãi iển thành phố Nha

Trang, Khánh Hòa (Việt Nam) Sao biển được thu hoạch vào quý III (từ đầu tháng 7 đến cuối tháng 9), ảo quản theo các điều kiện tiêu chuẩn để thực hiện nghiên cứu

Hình 2.1 Hình ảnh mặt trước và mặt sau của sao biển A polyacanthus M & T

2.2 Hóa chất

Nước cất 2 lần; hexan, K3[Fe(CN)6] 1%; FeCl3 0,1%; dung dịch đệm phosphat 0,2M (pH=6,6) (Na2HPO4.7H2O, NaH2PO4 0,2M, Na2HPO4.12H2O); TCA10% (Tricloacetic acid 10% ); Vitamin C (100µg/ml); Tris-HCl 0,05M (pH=7,0)

Trang 29

- Bình định mức - Bình tia

- Cuvet - Erlen

Tên thiết bị Thương hiệu Xuất xứ

Bộ chiết SPE 12-Port Visiprep™ Vacuum SPE Manifolds Mỹ

Máy đo pH cầm tay Smartsensor AS218 (0,00~14,00 pH; ±0,05) Trung Quốc

Trang 30

- Đũa thủy tinh - Giá đỡ ống nghiệm - Nhiệt kế

- Ống đong - Ống nghiệm - Micro pipet

- Pipet thẳng

- Nhiệt độ nóng chảy đo trên máy Yanaco MP-S3;

- Độ quay cực được đo trên máy phân cực kế Jasco DIP -370;

- Phổ tử ngoại UV được ghi trên máy quang phổ Hitachi UV-3210, phổ hồng ngoại IR đo trên máy quang phổ Shimadzu FTIR-8501 và Bruker, viên nén KBr;

- Phổ khối lượng (ESI-MS, HR-ESI-MS) được đo trên máy Bruker Dailtonics APEX II 30eV spectrometer Trường Đại học Y Trung Quốc (Đài Loan) và máy micrOTOF-QII 10187 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh;

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR được đo trên máy Bruker 500MHz, phổ 13

C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC, COSY và NOESY được đo trên máy Bruker 125 MHz (Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) và máy Brucker AVANCE III-400 (khoa Hoá học, Đại học Quốc gia Cheng Kung, Đài Loan) với chất chuẩn là TMS;

- Sắc ký cột sử dụng silicagen cỡ hạt 60,70-230 Kieselgel và 230-240 (Merck) - Bản mỏng được tráng kieselgel 60 và các chất hiển thị bằng dung dịch H2SO4

10% ở 1100 C trong thời gian 10 phút, ằng đèn tử ngoại ở hai ước sóng 254 nm và 368 nm; dùng hơi Iot (I2) hiện màuPhương pháp phân tích

Trang 31

- Cách tiến hành: Cân 5g mẫu thử cho vào chén cân, dùng đũa thủy tinh trộn đều mẫu thử, dàn thành lớp mỏng Cho tất cả vào tủ sấy và sấy ở 80O

C trong 2 giờ, sau đó nâng nhiệt độ lên 150OC và sấy đến khối lượng không đổi

- Công thức tính độ ẩm của ( ):

Trong đó:

- Khối lượng chén cân+ nắp chén+ đũa thủy tinh (g);

- Khối lượng chén cân+ nắp chén+ đũa thủy tinh+ mẫu thử trước khi sấy mẫu (g); - Khối lượng chén cân+ nắp chén+ đũa thủy tinh+ mẫu thử sau khi sấy mẫu (g);

2.4.2 Xác định hàm lượng tro bằng phương pháp xác định hàm lượng tro tổng số theo TCVN 5105: 2009

- Nguyên tắc: Mẫu được nung ở nhiệt độ 550oC để đốt cháy hết các hợp chất hữu cơ rồi cân phần tro còn lại

- Cách tiến hành: Cân 15g mẫu cho vào chén nung đã iết trước khối lượng Mẫu thử được đốt từ từ trên ếp điện có lót lưới amiăng cho đến khi cháy hoàn toàn thành than đen Cho chén chứa mẫu thử vào lò nung, nâng nhiệt độ từ từ đến 550O

C và giữ ở nhiệt độ đó trong khoảng 6 giờ đến khi mẫu thử thành tro trắng Tắt điện lò nung, khi nhiệt độ hạ bớt thì lấy chén tro ra, cho vào ình hút ẩm, để nguội 30 phút rồi cân Tiếp tục nung ở nhiệt độ như trên trong 30 phút, để nguội và cân Tiến hành nung và cân cho đến khi thu được khối lượng không đổi

- Hàm lượng tro tổng số, , được biểu thị bằng phần trăm khối lượng, được tính theo công thức:

Trong đó:

là khối lượng của chén nung, tính ằng gam (g);

Trang 32

là khối lượng của chén nung và tro tổng số, tính ằng gam (g); m là khối lượng mẫu thử, tính ằng gam (g)

2.4.3 Phương pháp phân tích thành phần dinh dưỡng

2.4.1.1 Xác định hàm lượng kim loại, khoáng bằng phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử (AAS)

 Nguyên tắc: mẫu được làm khô, tiến hành hóa tro ở 450°C với nhiệt độ tăng dần (≤50°C/h) Cho acid clohydric vào sau đó cô cạn dung dịch Sử dụng dung dịch acid nitric hòa tan phần cặn được trong và chất phân tích được xác định bằng đo phổ hấp thụ nguyên tử ngọn lửa dùng lò graphit

 Cách tiến hành:

o Cân 20g mẫu thử cho vào chén nung Khi tiến hành tro hóa, nên sấy trong tủ, trên nồi cách thủy hoặc bếp điện ở 100°C trong trường hợp sôi mạnh Tro hóa trong lò nung cài đặt chương trình Đưa chén vào lò ở nhiệt độ an đầu không cao hơn 100°C và nhiệt độ được tăng với tốc độ tối đa 50°C/ giờ đến 450°C (kim loại) và 525°C (khoáng) Chén nung cần để ít nhất 8 giờ hoặc qua đêm

o Chén nung sau khi lấy ra khỏi lò được để nguội, sau đó làm ướt tro bằng 1ml đến 3ml nước và cô cạn bằng nồi cách thủy hoặc bếp điện Đặt chén nung trở lại lò ở nhiệt độ không quá 200°C và tăng đến 450°C (kim loại) và 525°C (khoáng) với tốc độ tăng nhiệt từ 50- 100°C/ giờ Quá trình tro hóa tiếp tục được thực hiện trong 1 giờ đến 2 giờ hoặc lâu hơn Quy trình được lặp lại cho đến khi sản phẩm được tro hóa hoàn toàn, tức là tro có màu trắng/xám hoặc sáng màu

 Với mẫu đo kim loại Cho thêm 5ml dung dịch acid clohydric 6M vào chén nung, xoay tròn để tất cả tro đều tiếp xúc với acid Tiếp theo cho acid ay hơi ằng nồi cách thủy hoặc bếp điện Sau đó tro được hòa tan trong 30 ml dung dịch acid nitric 0,1M, chính xác đến 0,1ml

 Với mẫu đo khoáng, hòa tan tro trong 5ml HNO3 1M, hỗ trợ dung dịch bằng cách làm ấm trên nồi hơi hoặc bếp trong 2 phút - 3 phút để Cho dung dịch vào ình định mức 50ml rồi định mức bằng HNO31M Dung dịch LaCl3 được thêm vào độ

Trang 33

pha loãng cuối cùng của từng dung dịch chuẩn và mẫu thử để tạo ra 0,1% (w/v) La để xác định Mg

o Đảm bảo tro tiếp xúc đều với acid bằng cách xoay chén nung Đậy mặt kính đồng hồ và để yên trong khoảng 1 giờ Dung dịch được khuấy kỹ trong chén nung và chuyển vào chai nhựa Mẫu trắng được xử lý tương tự mẫu thử Thực hiện hai phép thử mẫu trắng cho mỗi mẻ phân tích

o Đo phổ hấp thu nguyên tử: Chiều dài ước sóng, hỗn hợp khí và các thông số kỹ thuật khác thích hợp nhất với từng kim loại được nêu trong sách hướng dẫn do các nhà sản xuất thiết bị cung cấp Các thông số khuyến cáo được nêu trong ảng 2.1

Bảng 2.2 Các thông số thiết bị đối với kỹ thuật đo AAS

 Công thức tính: Tính hàm lượng kim loại trong mẫu thử, X, biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), theo công thức:

Trong đó:

a là nồng độ kim loại trong dung dịch thử, tính ằng miligam trên lít (mg/l);

Nguyên tố Ngọn lửa Bước sóng (nm)

Fe Dinitơ monoxit-axetylen, oxy hóa 248,30

Trang 34

b là nồng độ trung ình của kim loại trong dung dịch thử trắng, tính ằng miligam trên lít (mg/l);

V là thể tích của dung dịch thử, tính ằng mililit (ml); m là khối lượng của phần mẫu thử, tính ằng gam (g);

2.4.1.2 Xác định hàm lượng canxi, photpho bằng phương pháp quang phổ nguồn plasma cảm ứng cao tần kết nối khối phổ (ICP-MS)

 Nguyên tắc: Tro hóa mẫu thử nghiệm, xử lý ằng HNO3 và hòa tan trong HCl; các yếu tố được xác định bằng quang phổ phát xạ ICP

 Cách tiến hành: Cân 1g mẫu thử, sấy khô và nghiền cho vào chén sứ Tro hóa trong 2 giờ ở 500°C và để nguội Tro ướt với 10 giọt H2O và thêm 3-4 ml HNO3(1:1) Sử dụng tấm nóng 100-120°C để làm ay hơi HNO3 dư Cho lại vào lò và tro hóa thêm trong 1 giờ ở 500°C Sau đó làm nguội chén, hòa tan tro trong 10ml HCl (1:1) và chuyển định lượng sang ình định mức 50 ml Pha loãng đến thể tích ằng H2O

 Nguyên tố được xác định bằng phương pháp quang phổ phát xạ plasma kết hợp tự cảm Hiệu chuẩn của thiết bị thông qua việc sử dụng các tiêu chuẩn hiệu chuẩn đã iết Sau khi hiệu chuẩn xong, các mẫu thử có thể được phân tích

 Công thức tính: Tính nồng độ cho từng phần tử của từng dung dịch thử đã pha loãng theo µg/ml

Trang 35

 Tính kết quả: Sử dụng đường chuẩn, tính khối lượng vitamin B1, biểu thị theo thiamin clorua hydroclorua, bằng mg/100g mẫu

Vts: là thể tích dung dịch mẫu thử, tính ằng mililit (ml);

ρ: là nồng độ khối lượng của thiamin clorua hydroclorua trong dung dịch chuẩn (µg/ml);

ms: là khối lượng mẫu, tính ằng gam (g);

Trang 36

 Cách tiến hành: Mẫu được đồng hóa và thủy phân ằng acid Cân 5g, cho vào ình nón Thêm 50 ml dung dịch acid clohydric Để ình nón trong nồi cách thủy đun sôi trong 1 giờ Sau khi nguội, thêm dung dịch natri axetat để pH đạt được 4,5 Sau đó chuyển sang ình định mức Pha loãng ằng nước đến 100 ml Lắc dung dịch và lọc qua giấy lọc Lọc lại qua bộ lọc màng trước khi ơm Bơm các thể tích bằng nhau của các dung dịch chuẩn và các dung dịch mẫu thử vào hệ thống HPLC Nhận biết chất phân tích ằng cách so sánh thời gian lưu của các pick đơn lẻ trong sắc kí đồ thu được từ dung dịch mẫu thử và dung dịch chuẩn Có thể nhận biết pick bằng việc thêm chất chuẩn vào dung dịch mẫu thử

 Tính phần khối lượng của acid nicotinic, w, bằng mg/100 g mẫu, theo công thức sau đây:

Trang 37

là nồng độ khối lượng của acid nicotinic trong dung dịch chuẩn, tính ằng microgram trên mililít (μg/ml);

là thể tích dung dịch mẫu thử, tính ằng mililít (ml);

là diện tích pick hoặc chiều cao pick của dẫn xuất thu được bằng dung dịch chuẩn, tính ằng đơn vị diện tích hoặc đơn vị chiều cao;

là khối lượng mẫu, tính ằng gam (g);

 Tính phần khối lượng của nicotinamid, w', bằng mg/100g mẫu, theo công thức sau đây:

là thể tích dung dịch mẫu thử, tính ằng mililít (ml);

là diện tích pick hoặc chiều cao pick của dẫn xuất thu được bằng dung dịch chuẩn, tính ằng đơn vị diện tích hoặc đơn vị chiều cao;

là khối lượng mẫu, tính ằng gam (g);

 Báo cáo kết quả đối với niacin bằng (w ± 1,008 w') biểu thị theo acid nicotinic, tính ằng mg/100g

2.4.1.5 Xác định hàm lượng vitamin B5 bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo TCVN 11669 :2016

 Nguyên tắc: Chiết acid pantothenic bằng dung dịch đệm amoni axetat 0,4 mol/l Sau khi lọc, dung dịch cuối cùng được dùng để phân tích sắc ký lỏng siêu hiệu năng-phổ khối lượng hai lần (HPLC-MS/MS)

 Cách tiến hành: Trộn 25g mẫu dạng bột khô với 200g nước ở 40°C cho đến khi thu được huyền phù đồng nhất Cân 15g huyền phù mẫu đã đồng nhất cho vào

Trang 38

ình định mức 50 ml Tính khối lượng mẫu thử (ms là khối lượng mẫu dạng bột tương ứng), sử dụng công thức:

Trong đó

là khối lượng mẫu đã cân, tính ằng gam (g);

là khối lượng nước đã thêm vào trước khi trộn, tính ằng gam (g);

là khối lượng huyền phù mẫu đã đồng nhất, tính ằng gam (g)

Thêm 25ml dung dịch amoni axetat 0,4 mol/l, pH = 3,8 vào mẫu đã chuẩn bị Pha loãng dịch chiết mẫu bằng nước đến vạch Cho que khuấy vào và khuấy trong 10 phút Lọc 20 ml phần mẫu thử qua giấy lọc sau đó tiến hành phân tích sắc ký

Chuyển 1,0 ml dịch lọc thu được vào ống polypropylen 15ml có chứa 500μl dung dịch gốc nội chuẩn (IS) Điều quan trọng là sử dụng cùng một dung dịch nội chuẩn giống như dung dịch đã được sử dụng để dựng đường chuẩn Pha loãng dung dịch đến 10 ml bằng nước, đậy nắp và trộn Lọc qua bộ lọc xyranh cỡ lỗ 0,22 μm Bơm lên hệ thống UHPLC-MS/MS Nhận biết khối phổ trong phương thức kiểm tra một phản ứng bao gồm việc phát hiện đồng thời các ion phân tử tương ứng với PA và PA đã được ghi nhãn đồng vị Việc chuyển khối khối lượng được lựa chọn tương ứng là từ 220,2 m/z → 90,1 m/z và từ 224,2 m/z → 94,1 m/z

 Tính tỷ lệ diện tích giữa PA và IS đối với từng chất chuẩn Dựng đường chuẩn năm điểm (trong dải từ 0,16 ng đến 2,4 ng trên cột) theo tỷ lệ diện tích pic (trục y) so với nồng độ PA (trục x) Tính hồi quy tuyến tính Nên sử dụng đường chuẩn hồi quy tuyến tính đã cân (1/x)

 Tính độ dốc (S) và giao điểm (I) của đường chuẩn

 Tính phần khối lượng PA, w, biểu thị bằng miligam/100g (mg/100 g), sử dụng công thức:

Trong đó:

là tỷ lệ diện tích pic PA/IS trong dung dịch thử;

Trang 39

là giao điểm của đường chuẩn; là độ dốc của đường chuẩn;

là thể tích của dịch chiết mẫu, tính ằng mililit (Ở đây = 50 ml);

là thể tích của dịch lọc, tính ằng mililit (Ở đây = 1 ml);

là thể tích cuối cùng của dung dịch thử, tính ằng mililit (Ở đây = 10 ml); m là khối lượng phần mẫu thử, tính ằng gam (g);

100 là hệ số chuyển đổi thành 100 g;

1000 là hệ số chuyển đổi từ microgam (μg) thành miligam (mg)

2.4.1.6 Xác định hàm lượng vitamin B12 bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo TCVN9514: 2012

 Nguyên tắc: Chiết vitamin B12 ra khỏi mẫu thử bằng dung dịch đệm natri acetate (pH=4,5) và kali xyanua ở 105oC Sau đó tinh sạch dịch chiết và cô đặc bằng cột chiết pha rắn (SPE) C8 hoặc C18, phân tích ằng sắc kí rây phân tử và sắc kí pha đảo Vitamin B12 được xác định bằng sắc kí lỏng với detector khả kiến ở ước sóng 550nm

 Cách tiến hành: Chuẩn bị mẫu trong điều kiện tối Bảo quản mẫu ở nhiệt độ từ 2oC đến 8oC và sử dụng trong vòng 14 ngày Đồng hóa mẫu, cho thêm 30ml dung dịch đệm natri acetat 0,1M và 1ml dung dịch kali xyanua 1% Đun nóng mẫu với nhiệt độ 105oC trong 60 phút Tiếp theo, lấy mẫu ra và làm nguội trong bể nước đá Cô đặc và làm sạch mẫu bằng cột SPE C18 loại 600mg Rửa giải vitamin B12 với 44 ml axetonitril 25% vào các cột SPE 600mg Sau đó dịch cô đặc được hòa tan trong nước và ơm vào máy HPLC với pha động D: Dung dịch axetonitril 2,5%, tốc độ dòng: 1,2 ml/phút; điều chỉnh dịch rửa giải vitamin B12 chảy từ cột rây phân tử trong thời gian từ 10,5 phút đến 14,5 phút

 Tính kết quả: Tính phần khối lượng của vitamin B12 trong mẫu thử, X (µg/kg), theo công thức sau:

Trang 40

Ci: là nồng độ vitamin B12 trong dung dịch mẫu thử được ơm vào thiết bị HPLC, được xác định từ đường chuẩn, tính ằng microgram trên lít (µg/l);

D1: là thể tích dung dịch pha loãng thứ nhất, tính ằng mililit (D1=100ml); D2: là thể tích dung dịch pha loãng cuối cùng, tính bằng mililit (ml);

V: là thể tích dịch lọc được đưa lên cột SPE, tính ằng mililit (ml); m: là khối lượng mẫu, tính ằng gam (g)

2.4.1.7 Xác định hàm lượng acid béo bằng phương pháp sắc ký khí (GC-MS)

 Nguyên tắc: Sử dụng phương pháp thủy phân để chiết xuất chất éo và acid éo từ thực phẩm Chất éo được chiết xuất thành ether, sau đó được methyl hóa thành este methyl acid éo (FAME) sử dụng BF3 trong metanol Acid pyrogallic được bổ sung nhằm giảm sự oxy hóa của acid éo trong quá trình phân tích Triglyceride, triundecanoin (C11:0), được thêm vào như là chất nội chuẩn FAME được đo định lượng bằng sắc ký khí (GC) so với chất nội chuẩn C11:0 Tổng chất éo được tính ằng tổng số các acid éo được biểu thị dưới dạng tương đương triglyceride Chất éo ão hòa và không ão hòa đơn được tính ằng tổng số acid éo tương ứng Chất éo không ão hòa đơn chỉ bao gồm dạng cis [31]

 Cách tiến hành:

Cân 100mg mẫu đã đồng nhất vào ình mojonnier Bổ sung 100mg acid pyrogallic và 2ml dung dịch chuẩn nội triglyceride, 2,0ml ethanol sau đó trộn đều cho đến khi toàn ộ phần mẫu thử đồng nhất trong dung dịch Cho thêm 10ml HCl 8,3M và trộn đều Đặt ình vào rổ trong bể siêu âm ở 70-80o

C với tốc độ khuấy trộn vừa phải trong thời gian 40 phút Tiếp theo thêm 25ml dietyl ete vào ình mojonnier Bình được đậy nắp và đặt trong máy ly tâm và ly tâm 5 phút Bỏ lớp ether (trên cùng) dư lượng còn lại trong cốc chứa chất éo chiết xuất Tiến hành methyl hóa

Dư lượng chất éo chiết xuất được hòa tan trong 2-3ml chloroform và 2-3ml dietyl ete, cho ay hơi đến khô trong ể nước 40oC Thêm 2ml thuốc thử BF3 7% và 1ml