Tình hình nghiên c u Lan hài trên thế giới .... 46 Trang 7 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ Nghĩa tiếng Việt B5: Gamborg, 1976 BAP : 6 - benzyl amino purine CS: Cộng s
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌCKHOA HỌC NGUYỄN THỊ MAI UYÊN NG N C U NU CẤY IN VITRO À ƢƠNG LAN (PAPHIOPEDILUM EMERSONII KOOP & P.J CRIBB) LUẬN VĂN T ẠC SĨ S N ỌC NG DỤNG Thái Nguyên - 2023 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌCKHOA HỌC NGUYỄN THỊ MAI UYÊN NG N C U NU CẤY IN VITRO À ƢƠNG LAN (PAPHIOPEDILUM EMERSONII KOOP & P.J CRIBB) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 8 42 02 01 LUẬN VĂN T ẠC SĨ S N ỌC NG DỤNG NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS VŨ THỊ LAN Cơ quan: Trƣờng Đại học Khoa học – Đ Thái Nguyên Thái Nguyên - 2023 i LỜ CAM ĐOAN T x y tr u tt ệ ƣớ s Mọ trí uậ vă ều rõ uồ ƣớ TS Vũ T ị L tr tru t v ƣ từ u tr uậ vă ố Cá số ệu, kết quả k á bố tr ột tr Thái Nguyên, ngày tháng năm 2023 Tác giả Nguyễn Thị Mai Uyên ii LỜI CẢM ƠN Lờ ầu t t x ƣợc bày tỏ lòng biết ơ s u sắc tới TS Vũ T ị Lan, Khoa Công nghệ sinh họ , Trƣờ Đại học Khoa học T á N uy ã tận tình hƣớng d n, chỉ bảo v úp ỡ tôi trong suốt thời gian th c hiện và hoàn thành luậ vă y Tôi xin chân thành cả ơ B á ệu Trƣờ Đại họ K ọ - Đại học Thái Nguyên, Ban ch nhiệm Khoa Công nghệ sinh họ v á t ầy giáo, cán bộ trong Khoa Công nghệ sinh họ , ặc biệt là s qu t , úp ỡ c á ị k t uật v p t í ệ K ã tạ ều kiệ úp ỡ tôi trong quá trình làm luận vă t ạ sĩ Tôi xin cảm ơ ình và bạn bè luôn bên cạnh ng hộ, khuyến khích, ộng viên tạ ộng l ể tôi hoàn thành luậ vă y Trong quá trình làm luậ vă k trá k ỏi những sai sót, tôi mong nhậ ƣợc s ó óp quý báu từ phía thầy cô và bạ bè ể tôi hoàn thành bản luậ vă Thái Nguyên, ngày tháng năm 2023 Tác giả Nguyễn Thị Mai Uyên iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 1 Đặt vấ ề 1 2 Mục tiêu nghiênc u 2 3 Nội dung nghiên c u 2 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Tổng quan về L v H Hƣơ 3 1.1.1 Tổng quan về Lan hài 3 1.1.2 Tổng quan về H Hƣơ 4 1.1.3 H ệ trạ á L ở V ệt N 7 1.1.4 Cá ều kiệ ơ bả ể nuôi trồ H Hƣơ 11 1.2 P ƣơ p áp ống in vitro 11 1.2.1 Ƣu v ƣợ ểm c p ƣơ p áp ống in vitro 12 1.2.2 Một số yếu tố ả ƣở ế quá tr ống in vitro 12 1.3 Tình hình nghiên c u Lan hài trên thế giớ v tr ƣớc 17 1.3.1 Tình hình nghiên c u Lan hài trên thế giới 17 1.3.2 Tình hình nghiên c u L tr ƣớc 18 CHƢƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đố tƣợng và vật liệu nghiên c u 21 2.2 Đị ểm và thời gian nghiên c u 21 2.3 Hóa chất và thiết bị nghiên c u 22 2.3.1 Hóa chất 22 2.3.2 Dụng cụ 22 2.3.3 Thiết bị 22 2.4 P ƣơ p áp u 23 2.4.1 P ƣơ p áp k ử trùng chồ H Hƣơ 23 2.4.2 P ƣơ p áp k ử trùng quả H Hƣơ 24 2.4.3 Nghiên c u ả ƣởng c a tuổi quả v trƣờng tới khả ă ảy mầm c a hạt 25 2.4.4 Nghiên c u ả ƣởng BAP và kinetin khả ă s trƣởng và tái sinh chồi 25 2.4.5 P ƣơ p áp u ả ƣởng c NAA ến khả ă r rễ c a chồi 26 2.4.6 P ƣơ p áp u ả ƣởng c a giá thể và chế ộ dinh ƣỡ ế s trƣở H Hƣơ tạ ƣới 27 2.4.7 Đ ều kiện nuôi cấy v p ƣơ p áp xử lí số liệu 28 iv CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Nghiên c u ả ƣởng c a chế ộ khử trùng và vật liệu nuôi cấy ến khả ă tạo m u vô trùng 29 3.1.1 Hiệu quả khử trùng c a chồ H Hƣơ ở á ộ tuổi khác nhau29 3.1.2 Hiệu quả khử trù ối với m u quả H Hƣơ 34 3.2 Ả ƣởng c a tuổi quả v trƣờ ến khả ă nảy mầm c a hạt Hài Hƣơ 36 3.2.1 Ả ƣởng c a tuổi quả ến khả ă ảy mầm c a hạt H ƣơ lan 36 3.2.2 Ả ƣởng c trƣờ ến khả ă ảy mầm c a hạt Hài ƣơ 38 3.3 Ả ƣở BAP v k t ế k ả ă s trƣở v tá s ồ H Hƣơ 40 3.3.1 Ả ƣởng c BAP ến khả ă s trƣởng và tái sinh chồi 40 3.3.2 Ả ƣở BAP kết ợp vớ K t ế k ả ă chồi 43 3.4 N u ả ƣở ồ ộ NAA kết ợp vớ t ạt tí ế k ả ă r rễ ồ H Hƣơ 44 3.5 Nghiên c u ả ƣởng c a giá thể và chế ộ ƣỡ ế s trƣởng H Hƣơ tạ ƣới 46 3.5.1 Nghiên c u ảnh ƣởng c a giá thể ế s trƣởng và phát triển c a H Hƣơ 46 3.5.2 Nghiên c u chế ộ ă só ế s trƣởng và phát triển c a Hài Hƣơ lan ở ƣới 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 1 Kết luận 50 2 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 57 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ Nghĩa tiếng Việt B5: BAP : Gamborg, 1976 CS: CT: 6 - benzyl amino purine DAP ĐC: Cộng s KC: MAP Công th c MS : Day After pollination Ngày sau thụ phấn NAA : Đối ch ng PLB Knudson C M trƣờng KC SH: Month after pollination Tháng sau thụ phấn THT: VW: Murashighe và Skoog, M trƣờng MS WPM : 1962 Naphthalene acetic acid Protocorm like body Thể chồi Schenk and Hildebrandt, M trƣờng SH 1972 Than hoạt tính Vacin and Went M trƣờng VW Woody Plant Medium – M trƣờng WPM Lioyd vi DANH MỤC BẢNG Bả 1.1 Một số ó H V ệt N t t ạ bả tồ Tổ Bả tồ T Quố tế IUCN 9 Bảng 2.1 Hóa chất nghiên c u 22 Bảng 2.2: Thiết bị nghiên c u 22 Bả 2.3 Cá t t k ử trù ồ H Hƣơ 23 Bả 2.4 M trƣờng bổ sung BAP và kinetin ến khả ă tá s ồi 26 Bả 3.1 H ệu quả k ử trù ố vớ ồ H Hƣơ ở á ộ tuổ k á u 30 Bả 3.2 Ả ƣở ế ộ k ử trù ố vớ quả H Hƣơ 35 Bả 3.3 Ả ƣở tuổ quả ế k ả ă ảy ầ ạt 36 Bả 3.4 Ả ƣở trƣờ ế k ả ă ảy ầ ạt 38 Bả 3.5 Ả ƣở BAP v k t ế k ả ă s trƣở v ồ H Hƣơ L s u 9 y 41 Bả 3.6 Ả ƣở ồ ộ NAA kết ợp vớ t ạt tí ,5 ế k ả ă r rễ H Hƣơ s u 8 tuầ u ấy 45 Bả 3.7 Ả ƣở á t ể ế tỷ ệ số v s trƣở H Hƣơ lan 47 Bả 3.8 Ả ƣở ế ộ ă só ế á ỉ t u s trƣở H Hƣơ tạ ƣớ 48 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây và hoa H Hƣơ P rs trồng tạ vƣờn 5 Hình 2.1 C y H Hƣơ quả sử dụng trong nghiên c u 21 Hình 3.1 Kết quả khử trù H Hƣơ bằng các chế ộ khử trùng khác nhau 32 Hình 3.2 Kết quả khử trùng chồ H Hƣơ t í ệm 3 bằng dung dịch HgCl2 0,2% trong 20 + 10 phút 33 Hình 3.3 Gieo hạt H Hƣơ tr trƣờng ½ MS 40 Hình 3.4 Kết quả nghiên c u ả ƣở BAP ế k ả ă tá s v s trƣởng chồ H Hƣơ 42 Hình 3.5 Kết quả nghiên c u ả ƣở BAP ến hợp K t ế k ả ă tá s v ồ H Hƣơ L 43 Hình 3.6 Ả ƣở NAA kết ợp vớ THT ế k ả ă r rễ tạ y hoàn chỉ H Hƣơ s u 8 tuầ u ấy 46 Hình 3.7 H Hƣơ ƣợc trồ v ă só ở ƣới 49 1 MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Tr ớ t vật, hoa L ƣợ ệt v “Vƣơ ả ” Nó ỉ p bố ở ữ ơ ó ều k ệ k í ậu át, sạ , t á v ấu trú y k quá ặ b ệt, ù vớ ấu trú ít á , có u sắ ƣơ t ơ ẹ , ƣ ộ v ạ ã tạ ét t ầ bí, quý p á , s trọ v quyế rũ Lan Hiện nay trên thế giới, họ Lan (Orchidaceae) chiếm vị trí th hai sau họ Cúc (Asteraceae) trong ngành th c vật hạt kín với khoảng 800 chi và 25.000 – 30.000 loài Việt Nam là ƣớc có khí hậu nhiệt ới gió mùa và là một trong số các quốc gia có số ƣợng loài lan nhiều nhất, ộ ạng về trƣờng sống ũ ƣặ ể t á , ặc biệt có nhiều ặc hữu Việt Nam có 137-140 chi gồm trên 800 loài lan rừng, t ƣờ p bố ở á vù rừ ú ƣ C Bằ , Bắ Cạ , T á N uy , Tuy Qu , Sa Pa, Lào Cai, Huế, Hả Vân, Quy N ơ , Kontum, Pleiku, B M T uật, P R , Đ Lạt, D L , v.v Lan hài (Paphiopedilum vớ k ả 9 ột t uộ ọ L (Or xƣ v y ều rất ƣợ ƣ uộ bở vẻ ẹp v ấu trú ặ b ệt Cá t uộ Lan hài (Paphiopedilum t ƣờ ữ bả ị , ều ặ ữu, ó ều ở k u v H N , Ấ Độ, Đ N Á v á ả tr T á B Dƣơ Với vẻ ẹp dịu dàng, tao nhã, tinh khiết c a mình, H Hƣơ (Paphiopedilum emersonii Koop & P.J Cribb) ã trở thành một trong những loài cây cảnh quý có giá trị kinh tế cao Tuy nhiên loài này ỏi ngặt nghèo về ều kiện sống nên phân bố khá hẹp, số ƣợng cá thể ít, sống trên các vách núi d ng cao Ở Việt Nam, H Hƣơ có mặt ở vùng núi một số tỉ ƣ Thái Nguyên, Cao Bằng, Tuyên Quang, Bắc Cạn, Vĩ P ú H Hƣơ ã ƣợc liệt kê vào Phụ lục 1 c ƣớc CITES và Danh mục Th c vật rừng, Động vật rừng nguy cấp, quý hiếm (nhóm 1) c a Nghị ịnh số 32 2 6 NĐ-CP