Trang 1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH HIỆN TR
NTTU-NCKH-04 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH HIỆN TRẠNG KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN GÂY BỆNH TRÊN CÁ RÔ ĐỒNG Anasbas testudineus Số hợp đồng: 2021.01.110 Chủ nhiệm đề tài: TRẦN KIÊN CƯỜNG Đơn vị công tác: Viện Kỹ thuật Công nghệ cao NTT Thời gian thực hiện: tháng TP Hồ Chí Minh, ngày tháng 10 năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH VÀ XÁC ĐỊNH HIỆN TRẠNG KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN GÂY BỆNH TRÊN CÁ RÔ ĐỒNG Anasbas testudineus Số hợp đồng :2021.01.110 Chủ nhiệm đề tài: TRẦN KIÊN CƯỜNG Đơn vị công tác: Viện Kỹ thuật Công nghệ cao NTT Thời gian thực hiện: tháng Các thành viên phối hợp cộng tác: STT Họ tên Chuyên ngành ii Cơ quan công tác Ký tên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNHTĨM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan cá rô đồng 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điểm sinh thái 1.1.4 Đặc điểm sinh trưởng 1.1.5 Đặc điểm sinh sản 1.1.6 Tình hình khai thác 1.2 Thực trạng kháng kháng sinh nuôi trồng thủy sản 1.2.1 Tình trạng lạm dụng kháng sinh ngành nuôi trồng thủy sản giới 1.2.2 Hiện trạng lạm dụng kháng sinh nuôi trồng thủy sản Việt Nam CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu nhận phân lập chủng vi khuẩn từ mẫu cá bệnh/có dấu hiệu lạ 2.2 Các phản ứng sinh hóa 2.3 Tách chiết DNA 11 2.4 Giải trình tự 11 2.5 Phương pháp khảo sát loại kháng sinh, nhạy cảm vi khuẩn 12 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 12 3.1 Kết tình trạng nhiễm khuẩn nội tạng cá bệnh 13 3.2 Kết đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn chiếm ưu phân lập làm 15 3.3 Kết định danh sinh hóa chủng khuẩn phân lập 20 3.4 Kết độ nhạy cảm/tính kháng vi khuẩn với kháng sinh 22 3.5 Kết tỷ lệ khuẩn kháng kháng sinh 24 3.6 Kết định danh chủng vi khuẩn đa kháng 26 iii CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC 3: MINH CHỨNG ĐI KÈM 33 PHỤ LỤC 4: (thuyết minh đề cương) 44 iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSA Trypsin soy agar TSB Trypsin soy broth NA Nutrient agar TCBS Thiosulfate citrate bile salts sucrose BA Blood agar KIA Kliger’s ion agar MHA Mueller Hinton agar MR Methyl red BHIB Brain heart infusion broth CL Cell lysis buffer PBS Phosphate-buffered saline WB1 Washing buffer WB2 Washing buffer EB Elution buffer CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cá rơ đồng (Anabas testidineus) Hình 2.1 Sơ đồ thực phản ứng sinh hóa 10 Hình 3.1 Hình ảnh ngoại thể cá rơ đồng có dấu hiệu bệnh 14 Hình 3.2 Hình ảnh giải phẫu nội tạng cá rô đồng bệnh 14 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc phân lập ban đầu mẫu bệnh phẩm thu nhận từ nội tạng cá rô bệnh 14 vi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Số chủng vi khuẩn phân lập từ cá rô đồng bệnh thu nhận từ trang trại cá giống 20 Bảng 3.2 Các khuẩn lạc phân lập làm môi trường NA 15-19 Bảng 3.3 Danh sách chủng vi sinh dự kiến từ sinh hóa 24 Bảng 3.4 Tính kháng kháng sinh chủng vi sinh phân lập từ cá rô với 10 loại kháng sinh 26 vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH TĨM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU STT Kết quà đạt Công việc thực Nôi dung 1: Thu mẫu phân lập 110 mẫu cá có dấu hiệu lạ từ trại mẫu bệnh phẩm cá có dấu hiệu ni, thu nhận 65 khuẩn lạc bệnh/biểu lạ trang trại cấy đĩa môi trường nuôi cấy nuôi TP.HCM Nội dung 2: Quan sát hình thái, Từ 65 khuẩn lạc ban đầu, cấy làm nhuộm Gram, thực test chọn lọc 14 khuẩn lạc sinh lý sinh hóa gồm :KIA, blood đặc trưng thực phản ứng ager, MacConkey, oxidase, sinh hóa, định danh dựa vào hình thái catalase, TCBS, Simmon citrate 11 chủng vi sinh Nội dung 3: Xác định tính nhạy 13 chủng vi sinh (trừ chủng XI) cảm với kháng sinh kiểm tra tính kháng kháng sinh, chủng vi sinh kháng lạ nhóm chủng vi khuẩn phân lập beta-lactam, chủng đa kháng mạnh IV (7/10) VIII (6/10) Nội dung 4: Giải trình tự 16S Đã định danh ba chủng vi khuẩn rRNA số chủng vi khuẩn IV, VIII, XIV có mức độ tương đồng phân lập so sánh trình tự gen 16S rRNA là: Pseudomonas aeruginosa (99,77 %), Aeromonas caviae (99,93%) Edwardsiella ictaluri (99,44%) STT Sản phẩm đăng ký Sản phẩm đạt viii 1 Bài báo nước báo cáo tổng kết đề tài Thời gian thực hiện: tháng từ tháng 4/2021-10/2021 Thời gian nộp báo cáo : 10/2021 ix