Trang 1 THẨM ĐỊNH TẠP CHẤT Trang 2 Đới với tạp chất cần thẩm định: + Định tính + Định lượng tạp chất Trang 3 Các chỉ tiêu cần xem xét: Tùy từng qui trình phân tích mà phải xem xét cá
THẨM ĐỊNH TẠP CHẤT TS PHAN THANH DŨNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HCM Đới với tạp chất cần thẩm định: + Định tính + Định lượng tạp chất + Phép thử giới hạn tạp chất Các tiêu cần xem xét: Tùy qui trình phân tích mà phải xem xét tiêu theo qui định bảng sau: Loại qui trình phân tích Các tiêu - Độ - Độ xác + Độ lặp lại + Độ xác trung gian - Tính đặc hiệu (2) - Giới hạn phát (LOD) - Giới hạn định lượng (LOQ) - Tính tuyến tính - Khoảng xác định Xác định tạp chất Định lượng Thử giới hạn + - + +(1) + - (3) + + + + + - Dấu (-) đánh giá Dấu (+) cần phải đánh giá (1) Nếu đánh giá độ tái lặp khơng cần đánh giá tiêu (2) Qui trình đặc hiệu bổ trợ qui trình hỗ trợ khác (3) Có thể cần số trường hợp TÍNH ĐẶC HIỆU + Trường hợp có sẵn tạp chất: Đối với phép định lượng: Thêm lượng thích hợp tạp chất và/ tá dược vào mẫu ban đầu cần định lượng chứng minh kết định lượng không bị ảnh hưởng có mặt tạp chất và/hoặc tá dược cách so sánh với kết định lượng mẫu không thêm tạp chất và/hoặc tá dược Đối với phép thử tạp chất: Thêm vào nguyên liệu thành phẩm lượng thích hợp tạp chất chứng minh tạp chất riêng biệt tách riêng rẽ khỏi và/ khỏi thành phần có mẫu TÍNH ĐẶC HIỆU + Trường hợp khơng có sẵn tạp chất: Tính đặc hiệu chứng minh cách so sánh kết phân tích mẫu thử có chứa tạp chất sản phẩm phân hủy phương pháp phân tích xây dựng với kết phân tích mẫu thử có chứa tạp chất sản phẩm phân hủy phương pháp phân tích thống khác ví dụ phương pháp dược điển phương pháp phân tích khác thẩm định Nếu cần, bao gồm so sánh mẫu lưu trữ điều kiện khắc nghiệt có liên quan như: ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm, thủy phân acid/ kiềm oxy hóa + Đối với qui trình sắc ký: Cần đưa sắc ký đồ đại diện để chứng minh tính đặc hiệu thành phần riêng biệt phải ghi lại (chú thích) rõ ràng Độ tinh khiết pic cần xác định detector DAD hay detector khối phổ Tính đặc hiệu chứng minh độ phân giải hai thành phần rửa giải gần Phải đệ trình sắc ký đồ mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử Các thơng số đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký như: số đĩa lý thuyết, độ phân giải, hệ số đối xứng pic v.v TÍNH TUYẾN TÍNH Cần đánh giá mối tương quan tuyến tính khoảng xác định (là khoảng nồng độ đảm bảo phụ thuộc tuyến tính đại lượng đo (y) nồng độ chất cần phân tích (x) Thực trực tiếp mẫu chuẩn (bằng cách pha loãng dung dịch chuẩn gốc) và/ cân riêng biệt hỗn hợp tự tạo chứa thành phần dược chất dựa quy trình đặt Cần tiến hành với nồng độ Trong trường hợp khác cần nêu rõ lý Kết thử phải đánh giá phương pháp thống kê thích hợp, ví dụ cách tính đường hồi qui dựa vào phương pháp bình phương tối thiểu theo phương trình Y= ax + b Thơng thường, hệ số tương quan r phải nằm khoảng 0,9981,002, giá trị thu nằm khoảng cần phải có thuyết minh phù hợp việc chấp nhận giá trị KHOẢNG XÁC ĐỊNH - Khoảng xác định thường lấy từ nghiên cứu tính tuyến tính phụ thuộc vào việc ứng dụng dự định quy trình, thiết lập việc khẳng định quy trình xây dựng có tính tuyến tính, độ độ xác chấp nhận áp dụng định lượng chất phân tích Khoảng xác định tối thiểu cần cân nhắc - Khoảng xác định phải từ 100% đến 120% giới hạn cho phép; tạp chất biết có độc tính bất thường sinh độc tính có tác dụng dược lý khơng mong muốn giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) tạp chất phải tương ứng với giới hạn cho phép tạp chất Nếu định lượng phép thử tinh khiết thực đồng thời phép thử sử dụng chuẩn 100% tính tuyến tính cần phải phủ tồn khoảng xác định từ giới hạn cho phép tạp chất đến 120% giới hạn định lượng ĐỘ ĐÚNG - Độ cần thiết lập khoảng xác định phương pháp phân tích - Độ tiến hành mẫu thử (nguyên liệu thành phẩm) thêm lượng tạp chất biết phần phương pháp thêm chuẩn: ĐỘ ĐÚNG - Phương pháp thêm chuẩn: Thêm vào mẫu thử lượng tạp chất chuẩn lượng tạp chất biết hàm lượng (khoảng 10, 20, 30% so với lượng tạp chất có sẵn cho tổng lượng tạp chất có mẫu nằm khoảng tuyển tính) tiến hành định lượng theo phương pháp phân tích cần đánh giá Độ phải tính dựa tối thiểu lần định lượng mức nồng độ khác khoảng xác định phương pháp phân tích (ví dụ nồng độ, nồng độ tiến hành lần) Độ tỷ lệ phần trăm lượng tạp chất chuẩn (hoặc tạp chất) tìm so với lượng tạp chất chuẩn (hoặc tạp chất) thêm vào độ lệch giá trị trung bình đo giá trị thực với khoảng tin cậy Tỉ lệ % thu hồi nằm khoảng 98,0-102,0% với RSD ≤ 2% khơng có quy định khác - Trong trường hợp khơng có tạp và/hoặc sản phẩm phân hủy chuẩn chấp nhận so sánh kết thu với quy trình thống ĐỘ CHÍNH XÁC Độ lặp lại: đánh giá kết của: - Tối thiểu nồng độ, nồng độ lần khoảng nồng độ xác định quy trình - Tối thiểu lần định lượng nồng độ thử 100% Yêu cầu RSD ≤ 2% quy định riêng