Hình thái và cấu trúc hạt vi rút
Vi rút viêm gan C được phát hiện lần đầu tiên vào năm 1989 bởi nhóm nghiên cứu của M Houghto tại Chiron, California, kết hợp với D.W Bradley từ CDC Đây là lần đầu tiên trong lịch sử vi sinh học, một tác nhân gây bệnh mới được phát hiện thông qua kỹ thuật sinh học phân tử, trước khi có những hiểu biết về hình thái, cấu trúc protein và tính kháng nguyên của vi rút, cũng như trước khi nó được nuôi cấy và phân lập thành công.
Vi rút viêm gan C thuộc họ Flaviviridae, có hình cầu với đường kính từ 55-65 nm Bề mặt của vi rút được bao phủ bởi các gai nhú nhỏ khoảng 6 nm, xung quanh là cấu trúc nucleocapsid có kích thước 30-35 nm với cấu trúc đối xứng 20 mặt.
Hình 1:Mô hình cấu trúc của HCV [58]
Hệ gen của virus viêm gan C (HCV) có kích thước khoảng 9,6 kb, hoạt động như mRNA để tổng hợp protein HCV được phân lập từ bệnh nhân trên toàn thế giới, với sự khác biệt về kích thước hệ gen Cấu trúc RNA của HCV bao gồm hai đầu 5’ và 3’ không mã hóa, cùng với vùng mã hóa cho protein cấu trúc (C, E1, E2) và protein không thuộc nhóm cấu trúc (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A và NS5B) Vùng 5’-NC có tính ổn định cao, chứa khoảng 341-344 nucleotide, và độ tương đồng về trình tự 5’-NC giữa các kiểu phụ và kiểu gen HCV đạt tối thiểu 90%, thường được sử dụng để xác định nhiễm HCV qua kỹ thuật PCR Ngược lại, trình tự của NS5B, vùng core hoặc E1 có sự biến đổi lớn hơn, nhưng được coi là tiêu chuẩn vàng trong việc xác định và phân biệt các kiểu gen HCV.
Giống như tất cả các loại virus khác, virus viêm gan C (HCV) không thể tự tái bản do thiếu các nguyên liệu cần thiết Để thực hiện quá trình tái bản, HCV cần phải xâm nhập vào tế bào của vật chủ và tận dụng hệ thống sao chép của tế bào, bao gồm các enzyme và protein Sau khi xâm nhập, các bước tái bản của HCV diễn ra trong tế bào chất.
Hệ gen của HCV mã hoá cho tối thiểu 10 protein vi rút khác nhau, bao gồm các
Protein cấu trúc Protein không cấu trúc
Các co-factors protein cấu trúc giúp hình thành vỏ capsid và các protein không thuộc nhóm cấu trúc như NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A và NS5B liên quan đến quá trình tái bản của virus Nghiên cứu gần đây đã làm sáng tỏ chức năng của nhiều protein này, nhưng vai trò của một số protein và các khía cạnh của quá trình tái bản virus vẫn chưa được hiểu đầy đủ HCV không thể gây nhiễm nhân tạo trên các dòng tế bào hiện có, tạo ra một trở ngại lớn trong việc nghiên cứu virus Hơn nữa, HCV có khả năng biến thể nhanh và tạo ra nhiều kiểu gen kháng thuốc, dẫn đến việc hiện tại chưa có vắc xin hiệu quả nào đối với HCV.
Chu trình tái bản của HCV
Hình 3: Chu trình sống của HCV
HCV gắn vào tế bào vật chủ thông qua các tương tác giữa protein E1 và E2 của vi rút với các thụ thể bề mặt trên màng ngoài của tế bào đích.
Virus HCV xâm nhập vào tế bào chủ bằng cách cởi bỏ lớp vỏ bọc và giải phóng RNA vi rút thông qua cơ chế ẩm bào nhờ thụ thể Khi HCV gắn lên bề mặt thụ thể, các tế bào đồng hóa thụ thể tạo thành một túi màng mỏng chứa HCV Sau khi vào bên trong tế bào, HCV giải phóng hệ gen vào tế bào chất và bắt đầu quá trình tái bản.
HCV sử dụng RNA của nó làm khuôn để tổng hợp protein vi rút thông qua quá trình dịch mã, trong đó tận dụng các ribosome và thành phần của tế bào chủ Quá trình này chỉ cần một số yếu tố trong bộ máy dịch mã của tế bào, cho phép HCV khởi động hiệu quả ngay cả trong điều kiện không thuận lợi Sản phẩm đầu tiên là một polyprotein dài khoảng 3000 axit amin, chứa tất cả 10 protein vi rút cần thiết cho quá trình tái bản của HCV Đây là bước quan trọng, vì không có các protein này, HCV sẽ không thể tạo ra các vi rút mới.
Tái bản hệ gen HCV diễn ra nhờ enzyme polymerase NS5B, một protein không thuộc nhóm cấu trúc, thông qua quá trình tổng hợp RNA trên sợi khuôn RNA với hai bước chính: đầu tiên, hệ gen virus được sử dụng để tổng hợp sợi RNA âm, sau đó sợi RNA âm này làm khuôn cho việc tổng hợp sợi RNA dương mới của HCV Hai sợi RNA mới có thể kết hợp tạo thành RNA sợi đôi, mà tế bào nhận diện như một tín hiệu nhiễm virus, dẫn đến việc kích hoạt hàng rào phòng thủ nhằm ngăn chặn tái bản và tiêu diệt RNA virus Đáng chú ý, polymerase HCV không thể hoạt động trên RNA ở dạng sợi đôi, vì vậy để tránh bị phát hiện và duy trì quá trình tái bản, HCV cần giữ cho các sợi RNA âm và dương tách biệt, với sự hỗ trợ của enzyme helicase nằm trong vùng mã hóa cho protein không thuộc nhóm cấu trúc.
NS3, thực hiện nhiệm vụ bằng cách bám vào và tách các sợi RNA ra trong suốt quá trình tái bản hệ gen
Việc kết hợp tạo ra vi rút mới và giải phóng chúng khỏi tế bào chủ là quá trình quan trọng trong sự lây nhiễm của virus HCV Các hạt vi rút HCV mới bao gồm ba thành phần chính: sợi đơn RNA hệ gen HCV, vỏ capsid và lớp vỏ bọc của vi rút Sau khi hình thành, các vi rút mới được chuyển đến màng ngoài của tế bào vật chủ, sau đó được giải phóng ra ngoài để lây nhiễm cho các tế bào khác.
Viêm gan vi rút C
Khái niệm
Viêm gan vi rút C là bệnh do virus HCV gây ra, có thể dẫn đến tình trạng viêm gan cấp tính và mạn tính.
Đường lây nhiễm
HCV lây chủ yếu qua tiếp xúc trực tiếp với máu người bệnh, với các đường lây nhiễm chính như sử dụng chung kim tiêm ở người nghiện ma túy, dùng chung dao cạo, bàn chải răng, dụng cụ cắt móng tay với người nhiễm virus viêm gan C, và kim chích xăm mình hoặc xỏ lỗ tai không đảm bảo vô trùng Ngoài ra, người nhận máu hoặc các chế phẩm từ người cho nhiễm HCV cũng có nguy cơ lây nhiễm Nhân viên y tế có thể bị phơi nhiễm với tỷ lệ 1 - 3%, trong khi nguy cơ lây qua quan hệ tình dục thấp hơn so với viêm gan B (5 - 10%) Mẹ có HCV RNA (+) có thể truyền virus cho con trong quá trình sinh, với tỷ lệ khoảng 6% Khoảng 30 - 40% trường hợp không xác định được đường lây nhiễm.
Một người nhiễm HCV, có thể nhiễm đồng thời vi rút viêm gan A, B.
Diễn biến tự nhiên
Sau khi bị nhiễm HCV, thời gian ủ bệnh thường kéo dài từ 2 đến 26 tuần, trung bình từ 6 đến 10 tuần
Giai đoạn cấp tính của bệnh nhiễm HCV thường không có biểu hiện rõ ràng, với 60-70% bệnh nhân không triệu chứng Khoảng 20-30% có thể xuất hiện vàng da, trong khi 10% có các triệu chứng không đặc hiệu như biếng ăn, mệt mỏi và đau bụng Các triệu chứng lâm sàng ở giai đoạn này tương tự như các bệnh nhân nhiễm vi rút viêm gan khác, do đó việc xét nghiệm miễn dịch là cần thiết để xác định loại vi rút viêm gan Các thử nghiệm miễn dịch cho kết quả dương tính 80% sau 15 tuần từ khi có triệu chứng, và tỷ lệ này tăng dần, đạt gần 100% sau 9 tháng.
Mặc dù các kỹ thuật miễn dịch không hiệu quả trong việc phát hiện sớm virus do nhược điểm về thời gian, chúng vẫn được sử dụng phổ biến hiện nay Nguyên nhân là do chi phí cao của các phương pháp phát hiện HCV bằng sinh học phân tử.
Giai đoạn mạn tính của nhiễm HCV xảy ra sau giai đoạn nhiễm cấp tính, với khoảng 15 - 25% bệnh nhân tự hồi phục nhờ vào khả năng loại thải vi rút Tuy nhiên, hơn 75% bệnh nhân sẽ tiến triển sang giai đoạn mạn tính, dẫn đến những biến chứng nghiêm trọng hơn.
Hình 4: Sơ đồ tiến triển bệnh nhân nhiễm HCV [59]
Trong giai đoạn nhiễm mãn tính virus HCV, bệnh nhân thường không có triệu chứng rõ ràng và giai đoạn này có thể kéo dài từ 20 đến 30 năm hoặc lâu hơn trước khi phát triển thành ung thư gan Tỷ lệ nhiễm HCV dẫn đến xơ gan là 15-20% sau 20 năm, và tỷ lệ này tăng lên 71% ở những bệnh nhân đã nhiễm virus hơn 60 năm Đối với nhóm bệnh nhân xơ gan do HCV, tỷ lệ chuyển sang ung thư gan hàng năm là từ 1,4% đến 3,3%, trong khi tỷ lệ tử vong là từ 2,6% đến 4%.
Chẩn đoán phòng thí nghiệm
Chẩn đoán viêm gan C không chỉ dựa vào các xét nghiệm đánh giá chức năng gan, siêu âm gan và sinh thiết gan, mà còn cần thực hiện các xét nghiệm tìm HCV, vì chúng đóng vai trò rất quan trọng trong quá trình chẩn đoán.
1.2.4.1 Phương pháp gián tiếp - tìm kháng thể anti-HCV
Có thể tìm thấy kháng thể anti-HCV ở 70% trường hợp khi bắt đầu có triệu chứng và khoảng 90% trong vòng 3 tháng sau Tuy nhiên, nhiều người bị viêm gan
C là một loại virus có thể gây nhiễm mà không có triệu chứng rõ ràng Việc xét nghiệm Anti-HCV không thể xác định được liệu người bệnh đang trong giai đoạn nhiễm cấp tính, đã hồi phục hoàn toàn (đào thải virus) hay đã chuyển sang giai đoạn mạn tính.
Tìm kháng thể anti-HCV có thể sử dụng các kỹ thuật như miễn dịch điện hoá phát quang hoặc kỹ thuật miễn dịch ELISA
1.2.4.2 Phương pháp trực tiếp - tìm HCV RNA
Phát hiện HCV-RNA trong máu là bằng chứng cho thấy nhiễm virus HCV và virus đang gia tăng Thời gian phát hiện HCV-RNA có thể diễn ra trong khoảng 1 đến 2 tuần sau khi nhiễm virus.
1.2.4.3 Các phương pháp xác định kiểu gen a RT-PCR: Kỹ thuật PCR phiên mã ngược được phát triển và ứng dụng đối với các vi rút có vật liệu di truyền là RNA từ những năm 1990 Đây là kỹ thuật chẩn đoán nhanh, nhạy, đặc hiệu cho từng type huyết thanh, tuy nhiên do độ nhạy cao nên rất dễ xảy ra dương tính giả nếu không kiểm soát được tạp nhiễm của các tác nhân ngoại lai b Realtime RT-PCR: Đây là kỹ thuật sử dụng cặp mồi và đầu dò đặc hiệu cho từng kiểu gen, sử dụng tín hiệu huỳnh quang để phát hiện các sản phẩm phản ứng theo thời gian thực mà không cần điện di Nhiều thử nghiệm realtime RT-PCR đã được phát triển sử dụng kỹ thuật TaqMan và SYBR Green [37] c Kỹ thuật LiPA: Là kỹ thuật lai trên vạch dò đặc hiệu, sản phẩm PCR được khuếch đại với cặp mồi trong đó có một mồi gắn biotin Lai sản phẩm PCR gắn biotin trên các vạch đoạn dò kiểu gen đặc hiệu, sau đó tiến hành lai sản phẩm PCR đã có với các que (strip) của bộ thuốc thử LiPA Trên mỗi strip có gắn sẵn các vạch dò (probe) chuyên biệt cho từng kiểu gen của HCV Tuy nhiên, vì LiPA phải thực hiện trên sản phẩm PCR là kết quả của phản ứng nested PCR nên khả năng bị ngoại nhiễm là khá cao và đây chính là lí do giải thích được tại sao có khá nhiều trường hợp LiPA có kết quả không thể xác định được kiểu gen [4] d Kỹ thuật giải trình tự gen: Đây là kỹ thuật chuẩn xác nhất, kiểm soát được các sai sót, đảm bảo độ chính xác cao, khắc phục được các nhược điểm của các kỹ thuật trên trong xác định kiểu gen Dựa vào trình tự đã giãi mã, tiến hành so sánh độ tương đồng với các trình tự kiểu gen chuẩn có trong Gene Bank để xác định kiểu gen của HCV Thêm vào đó từ trình tự gen thu được ta có thể có nhiều ứng dụng tiếp theo như phát hiện, theo dõi các đột biến; tạo cây để tìm hiểu mối liên quan, con đường lây nhiễm của các kiểu gen HCV khác nhau trên thế giới…
Điều trị viêm gan vi rút C
Không phải tất cả các trường hợp nhiễm HCV đều cần điều trị đặc hiệu Mục tiêu của việc điều trị viêm gan virus C là giảm thiểu lượng HCV trong cơ thể, đặc biệt là ở gan, và hạn chế tình trạng viêm gan để ngăn ngừa biến chứng xơ gan và ung thư gan Có 6 kiểu gen HCV, mỗi kiểu gen có thể có phản ứng điều trị khác nhau Thời gian điều trị có thể thay đổi tùy thuộc vào kiểu gen và nồng độ HCV RNA tại các thời điểm khác nhau, chẳng hạn như tuần thứ 4.
12, 24, 48 và 6 tháng sau khi ngưng thuốc, giảm tác dụng phụ và giá thành điều trị.
Các đặc trưng của kiểu gen HCV
Kiểu gen HCV phân bố theo địa dư
Nghiên cứu về trình tự và kiểu gen cho thấy các kiểu phụ có mối liên hệ chặt chẽ và phân bố theo địa lý Cụ thể, kiểu 1a thường xuất hiện ở các khu vực phía Bắc và phía Nam.
Mỹ và Australia là những quốc gia tiêu biểu cho kiểu 1b, trong khi kiểu 2a thường thấy ở Nhật Bản và Trung Quốc Kiểu 2b phổ biến ở Mỹ và Bắc Âu, còn kiểu 2c lại xuất hiện nhiều ở Tây và Nam Âu Kiểu 3a thường gặp ở Australia và Nam Á, trong khi kiểu 4a cũng có sự hiện diện đáng kể tại nhiều khu vực khác.
Ai cập; Kiểu 4c thường gặp ở miền trung Châu Phi; Kiểu 5a thường gặp ở Nam Phi; Kiểu 6 thường gặp ở Châu Á (hình 5, hình 6, hình 7)
Hình 5: Tỷ lệ kiểu gen HCV ở các khu vực trên thế giới [60]
Hình 6: Tỷ lệ kiểu gen HCV tạicác nước Châu Á [60]
Hình 7: Tỷ lệ kiểu gen HCV tại Việt Nam [60]
Kiểu gen HCV với nguy cơ lây nhiễm
Kiểu gen 1b của virus HCV thường gặp ở bệnh nhân truyền máu, trong khi kiểu gen 3a phổ biến hơn ở những người tiêm chích ma túy Hiện nay, số ca nhiễm virus C kiểu gen 3a đang gia tăng do sự gia tăng số lượng người tiêm chích ma túy, ngược lại, tỷ lệ nhiễm HCV kiểu gen 1b đang giảm nhờ vào những tiến bộ trong kỹ thuật truyền máu.
Kiểu gen HCV với mô bệnh học
Người mắc kiểu gen 1b có nguy cơ cao hơn mắc ung thư gan (HCC) so với các kiểu gen khác, vì họ thường bị nhiễm bệnh sớm hơn từ vài thập kỷ so với những người nhiễm kiểu gen 2 và 3 Tình trạng này cũng tương tự đối với kiểu gen 4 ở khu vực Trung Đông.
Kiểu gen HCV với đáp ứng và dự đoán đáp ứng với điều trị
Thông tin về kiểu gen rất quan trọng trong việc dự đoán kết quả điều trị Tỉ lệ đáp ứng kéo dài khi sử dụng Peginterferon kết hợp với Ribavirin thường cao hơn ở kiểu gen 2 và 3 so với kiểu gen 1.
Kiểu gen 1 được coi là khó điều trị nhất, nhưng tỉ lệ đáp ứng với peginterferon kết hợp ribavirin đã tăng lên rõ rệt, đạt hơn 50% với đáp ứng kéo dài Trong khi đó, kiểu gen 2 và 3 có tỉ lệ đáp ứng tốt hơn, lên tới 70% - 90% Một số bằng chứng cho thấy bệnh nhân có kiểu gen này cũng có khả năng đáp ứng tốt với các liệu pháp điều trị hiện tại.
Nghiên cứu cho thấy bệnh nhân có kiểu gen 2 và 3 có khả năng đáp ứng điều trị tốt hơn, tuy nhiên cần thực hiện thêm các nghiên cứu ngẫu nhiên lớn hơn để xác minh Mối liên hệ giữa các kiểu gen và hiệu quả điều trị vẫn cần được làm rõ qua nhiều nghiên cứu bổ sung Đặc biệt, vi rút thuộc các kiểu gen khác nhau có thời gian sống khác nhau; kiểu gen 2 và 3 có thời gian tồn tại ngắn hơn kiểu gen 1, điều này khiến cho việc thải loại kiểu gen 2 và 3 trở nên dễ dàng hơn.
Kiểu gen HCV với thời gian điều trị
Kiểu gen đóng vai trò quan trọng trong việc xác định thời gian điều trị Thông thường, bệnh nhân có kiểu gen 1 cần khoảng 48 tuần điều trị, trong khi kiểu gen 2 và 3 chỉ cần 24 tuần Tuy nhiên, một số nghiên cứu hiện đang được tiến hành để xác định thời gian điều trị tối ưu dựa trên các yếu tố cụ thể Một số nghiên cứu cho thấy bệnh nhân kiểu gen 1 với nồng độ virus cao nên điều trị 72 tuần để đạt tỷ lệ đáp ứng tốt nhất Đối với kiểu gen 2, thời gian điều trị được đánh giá là 12 tuần, trong khi kiểu gen 3 cần khoảng 48 tuần.
1.3.6 Kiểu gen HCV với liều lƣợng thuốc điều trị [15]
Genotype là yếu tố quyết định liều lượng ribavirin cần thiết Đối với những bệnh nhân có kiểu gen 2 và 3, liều ribavirin được khuyến cáo là 800mg mỗi ngày Trong khi đó, đối với bệnh nhân có kiểu gen 1, liều lượng thường dao động từ 1000mg đến 1200mg mỗi ngày, tùy thuộc vào trọng lượng cơ thể.
1.3.7 Kiểu gen hỗn hợp của HCV [15]
Một người có thể nhiễm nhiều loại kiểu gen viêm gan vi rút C Mặc dù số liệu về kiểu gen hỗn hợp vẫn còn hạn chế trong nghiên cứu, nhưng một số nghiên cứu cho thấy rằng kiểu gen này có thể ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị và diễn tiến của bệnh.
Kiểu gen hỗn hợp của HCV
Một người có thể nhiễm nhiều kiểu gen khác nhau Mặc dù số liệu về kiểu gen hỗn hợp vẫn chưa được nghiên cứu nhiều, nhưng một số nghiên cứu cho thấy nó có thể ảnh hưởng đến đáp ứng điều trị và diễn tiến của bệnh viêm gan virus C.
Gan nhiễm mỡ và mối liên quan đến kiểu gen của HCV
Gan nhiễm mỡ thường gặp ở bệnh nhân viêm gan virus C, ảnh hưởng đến tiến triển bệnh và làm giảm hiệu quả điều trị, mặc dù cơ chế vẫn chưa được làm rõ Những người nhiễm HCV kiểu gen 3 có nguy cơ cao hơn mắc gan nhiễm mỡ, và kiểu gen này được xem là yếu tố nguy cơ độc lập, đóng vai trò trực tiếp trong sự phát triển của tình trạng gan nhiễm mỡ.
Kiểu gen và diễn tiến bệnh viêm gan C mạn tính
Nghiên cứu cho thấy kiểu gen 1b có mối liên hệ với mức độ diễn tiến bệnh nặng hơn so với kiểu gen 2 và 3 Tuy nhiên, cần thực hiện thêm nhiều nghiên cứu để xác nhận mối quan hệ này.
Kiểu gen và ghép gan trong nhiễm HCV
Kiểu gen 1 (đặc biệt là kiểu gen 1b) liên quan đến quá trình xơ hóa nhanh hơn ở những bệnh nhân đã ghép gan.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Quy trình nghiên cứu
Bệnh án Mẫu máu xét nghiệm SH,
Thu thập thông tin (phụ lục 2) Âm tính (Loại khỏi nghiên cứu)
Phân tích số liệu Đo tải lƣợng vi rút
C.O Làm lại nếu C.O -10% < OD mẫu ≤ C.O
2.4.3 Quy trình xác định tải lƣợng vi rút: Sử dụng bộ kít COBAS AmpliPrep/COBAS
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV là phương pháp khuếch đại axít nucleic nhằm định lượng RNA virus viêm gan C trong huyết thanh Thiết bị COBAS AmpliPrep thực hiện tự động quá trình xử lý mẫu, trong khi COBAS TaqMan tự động khuếch đại và phát hiện virus.
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV gồm 3 quá trình chính:
(1) Chuẩn bị mẫu để tinh chiết được RNA của HCV;
(2) Sao mã ngược RNA đích để tạo ra DNA bổ trợ (cDNA), và
(3) Đồng thời khuếch đại cDNA đích và phát hiện quá trình bị cắt của mẫu dò gắn 2 màu huỳnh quang đặc hiệu với tác nhân đích
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV cho phép tự động chuẩn bị mẫu và phát hiện HCV RNA cùng HCV RNA chuẩn định lượng (QS) thông qua quá trình sao mã ngược và khuếch đại PCR Thuốc thử Master Mix chứa đoạn mồi và các mẫu dò đặc hiệu cho cả HCV RNA và HCV RNA QS, được phát triển để định lượng tất cả các kiểu gen HCV từ 1 đến 6 Phương pháp này sử dụng các mẫu dò đánh dấu đặc hiệu, cho phép phát hiện độc lập sản phẩm khuếch đại của HCV từ mẫu và từ HCV QS.
Xét nghiệm HCV QS được sử dụng để định lượng RNA virus HCV, giúp bù trừ ảnh hưởng của các ức chế trong phản ứng PCR và kiểm soát quá trình chuẩn bị cũng như khuếch đại, từ đó nâng cao độ chính xác trong việc xác định lượng HCV RNA trong mỗi mẫu HCV QS là một cấu trúc RNA không lây nhiễm, chứa các chuỗi HCV có vị trí gắn mồi tương tự như RNA đích HCV, cùng với một vùng gắn mẫu dò độc nhất, cho phép phân biệt sản phẩm khuếch đại của HCV QS và RNA đích Trong quá trình xét nghiệm, HCV QS được thêm vào mỗi mẫu với số lượng xác định và trải qua toàn bộ quy trình chuẩn bị, sao mã ngược, khuếch đại PCR và phát hiện mẫu dò đánh dấu Thiết bị phân tích COBAS TaqMan tính toán nồng độ HCV RNA trong mẫu xét nghiệm bằng cách so sánh tín hiệu HCV với tín hiệu HCV QS cho từng mẫu thử và mẫu chứng.
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV sử dụng thiết bị COBAS AmpliPrep để tự động chuẩn bị mẫu bằng kỹ thuật tách chiết mẫu từ hạt silica, với quy trình sử dụng 850 µL huyết thanh Mỗi mẫu được bổ sung protease và HCV QS RNA có nồng độ xác định cùng với thuốc thử ly giải và hạt từ tính Sau khi ủ, HCV RNA và HCV QS RNA sẽ gắn kết lên bề mặt hạt từ tính, trong khi các tạp chất như muối và protein sẽ bị loại bỏ qua quá trình rửa Sau khi tách riêng, axit nucleic bám trên hạt từ tính được giải phóng ra ngoài dung dịch nhờ nhiệt độ cao Mẫu đã qua xử lý, chứa hạt từ tính, HCV RNA và HCV QS RNA, được đưa vào Master mix và chuyển vào thiết bị phân tích COBAS TaqMan, nơi máy thực hiện sao mã ngược, khuếch đại và phát hiện HCV RNA cùng HCV QS RNA thông qua việc phân cắt mẫu dò đánh dấu kép.
C/ Phát hiện sản phẩm PCR trong xét nghiệm COBAS TaqMan
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV sử dụng kỹ thuật PCR theo thời gian thực, cho phép phát hiện nhanh chóng sự tích lũy sản phẩm PCR thông qua việc đo cường độ phát huỳnh quang từ các mẫu dò đánh dấu kép Các mẫu dò bao gồm mẫu dò đặc hiệu HCV và HCV QS, giúp tăng cường độ phát quang khi chất phát huỳnh quang và chất hấp thu huỳnh quang tách ra Quá trình khuếch đại HCV RNA và HCV QS RNA được đo độc lập ở các bước sóng khác nhau, với độ đặc hiệu cao lên tới 99,6% và khoảng động rộng, cho phép phát hiện và định lượng HCV RNA với ngưỡng phát hiện từ 38 đến 172.500.000 bản sao/mL.
2.4.4 Tách chiết RNA từ mẫu huyết thanh: Sử dụng bộ kít tách chiết RNA của hãng QIAGEN
Chuẩn bị đệm AVL-carrier RNA bằng cách cho 310 µl đệm AVE vào ống chứa 310 µg lyophilized carrier RNA (dạng đụng khụ) để thu được dung dịch 1 µg/µl Sau đó, chia dung dịch thành các ống nhỏ và lưu trữ ở -20 °C, tránh làm rã đông quá 3 lần nếu lượng mẫu tách chiết ít hơn.
50 mẫu) Pha đệm AVL và carrier RNA-AVE theo tỷ lệ 100:1 (560 àl AVL và 5,6 àl carrier RNA-AVE)
+ Pha đệm AW1: thêm 25ml ethanol (96-100%) vào 19ml AW1 ban đầu + Pha đệm AW2: thêm 30ml ethanol (96-100%) vào 13ml AW2 ban đầu
- Tiến hành Bước 1: Cho 560 àl dung dịch AVL-carrier RNA vào ống eppendorf 1,5ml Bước 2: Thờm 140 àl huyết thanh vào ống eppendorf trờn Trộn đều (vortex) trong 15 giây
Bước 3: Ủ ở nhiệt độ phòng 18-25 o C trong 10 phút trên giá để mẫu
Bước 5: Thờm 560 àl ethanol (96-100%), trộn đều (vortex) 15 giõy Ly tõm nhanh Bước 6: Chuyển 630 àl dung dịch trờn vào cột QIAamp, đúng nắp và ly tõm
8000 vòng/phút trong 1 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới
Bước 8: Thờm 500 àl dung dịch AW1, đúng nắp và ly tõm 8000 vũng/phỳt trong
1 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới
Bước 9: Thờm 500 àl dung dịch AW2, đúng nắp và ly tõm 14000 vũng/phỳt trong 3 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới
Bước 10: Ly tâm 14000 vòng/phút trong 1 phút giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới
Bước 11: Chuyển cột QIAamp sang ống eppendorf 1,5ml sạch Thờm 60 àl đệm AVE, đóng nắp và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 phút rồi ly tâm 8000 vòng/ phút trong
1 phút Bỏ cột, giữ ống dịch ở phía dưới và lưu ở -20ºC hoặc -70ºC
2.4.5 Xác định kiểu gen HCV bằng kỹ thuật giải trình tự gen
A/ Tổng hợp cDNA: theo quy trình MonsterScrip 1 st -Strand cDNA bộ kít của hãng Epicentre
Mẫu bệnh phẩm đó tỏch chiết 5 àl Bước 2: Ủ mix 65 0 C trong 1 phút
Bước 3: Ủ 4 0 C trong 1 phút Bước 4: Thao tác tại 4 0 C
- Thờm 4 àl MonsterScript 5X cDNA PreMix
- Thờm 1 àl MonsterScript Reverse Transcriptase Bước 5: Ly tâm nhẹ, đưa vào máy PCR chạy theo chương trình
4 0 C 1 phút Bước 6: Lưu sản phẩm ở tủ -20 0 C đến khi tiến hành làm xét nghiệm xác định kiểu gen
B/ Phản ứng khuếch đại gen Sc2-Ac2 STT Thành phần Thể tớch (20àl) Chu trỡnh nhiệt
C/ Nested PCR STT Thành phần Thể tớch (20àl) Chu trỡnh nhiệt
D/ Điện di kiểm tra sản phẩm
Các mẫu sau khi nested PCR được kiểm tra sản phẩm bằng điện di trên Agarose sử dụng thuốc nhuộm GelGreen
- Chuẩn bị Agarose 1% + bổ sung GelGreen 1%
- Đun nóng chảy Agarose bằng lò vi sóng (2-3 phút), để nguội đến 55-60 0 C, đổ bản điện di
- Sau khoảng 20 phút, bản điện di đã khô, có thể tiến hành điện di
- Thành phần 1 giếng điện di như sau:
5 àl sản phẩm PCR (hoặc thang Maker);
Mix đều và tra lần lượt mẫu vào các giếng
- Điện di với dòng điện 100V trong 30 phút
- Soi kết quả điện di trên máy
E/ Quy trình tinh sạch: theo bộ kít tinh sạch của hãng QIAGEN
Bước 1: Cho 5 lượng đệm PB vào 1 lượng sản phẩm PCR (75 àl đệm PB vào 15 àl sản phẩm PCR)
Bước 2: Trộn đều, chuyển sang cột QIAquick, ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút Bước 3: Bỏ dịch, giữ lại ống chứa
Bước 4: Thờm 750 àl đệm PE (đó bổ sung ethanol), ly tõm 13000 vũng/phỳt trong 1 phỳt Bước 5: Bỏ dịch, giữ lại ống chứa, ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút
Bước 6: Chuyển cột QIAquick sang ống eppendorf 1,5ml sạch
Bước 7: Thờm 20 àl đệm EB, đúng nắp và ủ ở nhiệt độ phũng trong 2 phỳt rồi ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút
Bước 8: Bỏ cột, giữ ống dịch ở phía dưới và lưu ở -20ºC hoặc -70ºC
Các mẫu được giải trình tự bằng bộ kit Bigdye 3.1 (ABI), máy 3100
STT Thành phần Thể tớch (10àl) Chu trỡnh nhiệt
125mM EDTA 1 àl 99% EtOH 25 àl Mẫu 10 àl
- Trộn đều, để nhiệt độ phòng 15 phút;
- Thờm 35àl 70% EtOH, trộn nhẹ;
- Ly tâm 180* 1 phút, để khô;
- Thờm 15 àl Hidi-Formamide, trộn đều;
- Cho vào máy đọc trình tự
2.4.6 Thu thập thông tin từ hồ sơ bệnh án
- Tuổi bệnh nhân được chia thành 2 nhóm ≤ 40 và >40 [1]
- Giới tính: nam và nữ
- Tiền sử phơi nhiễm HCV: Tiêm chích ma tuý, quan hệ tình dục không an toàn, truyền máu và các chế phẩm máu
Theo "Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị HIV/AIDS" được ban hành kèm theo Quyết định số 3003/QĐ-BYT ngày 19 tháng 8 năm 2009 của Bộ Y tế, một người được xác định là nhiễm HIV khi có mẫu huyết thanh dương tính trong ba lần xét nghiệm kháng thể HIV, sử dụng ba loại sinh phẩm khác nhau với nguyên lý phản ứng và phương pháp chuẩn bị kháng nguyên khác nhau.
Đồng nhiễm HCV/HIV xảy ra khi bệnh nhân đáp ứng đủ hai tiêu chí: được chẩn đoán nhiễm HIV xác định và có kết quả xét nghiệm Anti HCV dương tính trong máu.
- Các thông số men gan ALT, AST và Bilirubin toàn phần:
Các chỉ số bình thường: ALT: ≤ 40 UI/l -37 0 C; AST: ≤ 37 UI/L -37 0 C;
- Giới hạn phát hiện có HCV trên máy COBAS: ≥ 38 copies/mL
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Đặc điểm chung của mẫu nghiên cứu
Bảng 3.1: Phân bố bệnh nhân theo tuổi
Nhóm tuổi Số bệnh nhân %
Trong nghiên cứu của chúng tôi, tuổi trung bình của bệnh nhân là 40,67 ± 9,94, với độ tuổi thấp nhất là 22 và cao nhất là 64 So với nghiên cứu của Hồ Tấn Đạt và cộng sự, tuổi trung bình của bệnh nhân nhiễm viêm gan C tại Việt Nam là 47,90 ± 10,58 Nghiên cứu của Võ Minh Quang và cộng sự cho thấy tuổi trung bình là 51,7 ± 12, với độ tuổi nhỏ nhất là 19 và lớn nhất là 81.
Bệnh viêm gan vi rút C là một căn bệnh mạn tính thường diễn biến âm thầm với ít triệu chứng lâm sàng trong thời gian dài Trong nghiên cứu của chúng tôi, tuổi trung bình của bệnh nhân thấp hơn so với các nghiên cứu khác, điều này do đối tượng nghiên cứu chủ yếu là những bệnh nhân tham gia khám sức khỏe định kỳ và vô tình phát hiện nhiễm vi rút viêm gan.
C hoặc những bệnh nhân vào viện do bệnh khác và được xét nghiệm vi rút viêm gan
C Điều này cũng phù hợp với mức độ suy gan của các bệnh nhân trong nghiên cứu của chúng tôi ở mức độ nhẹ (xem Bảng 3.8; 3.9; 3.10) Trong khi đó, đối tượng nghiên cứu của tác giả Võ Minh Quang là các bệnh nhân được điều trị viêm gan do vi rút C tại Bệnh viện Bệnh nhiệt đới TP HCM, có biểu hiện các triệu chứng lâm sàng của bệnh viêm gan, vì vậy độ tuổi trung bình có cao hơn trong nghiên cứu của chúng tôi [12]
Chúng tôi cũng nhận thấy, nhóm tuổi từ 31 đến 40 chiếm tỷ lệ cao nhất, 43,52% (Bảng 3.1) Tương tự với kết quả nghiên cứu của chúng tôi, tác giả Miriam
J Alter cho biết tỷ lệ nhiễm viêm gan vi rút C ở Mỹ cao nhất trong nhóm tuổi từ 30 đến 49 [34]
Biểu đồ 3.1: Phân bố về giới
Trong nghiên cứu của chúng tôi, tỷ lệ nam giới chiếm 79,63%, trong khi nữ giới chỉ chiếm 20,37% (Biểu đồ 3.1), cho thấy sự khác biệt trong hành vi nguy cơ và yếu tố phơi nhiễm giữa hai giới Nguy cơ lây nhiễm vi rút viêm gan C ở nam giới chủ yếu liên quan đến nghiện chích ma túy và việc sử dụng chung bơm kim tiêm, đặc biệt ở những bệnh nhân có đồng nhiễm HCV và HIV Kết quả này cũng được xác nhận khi tỷ lệ lây nhiễm viêm gan C do tiêm chích ma túy trong nghiên cứu của chúng tôi là cao nhất (Bảng 3.2) Các nghiên cứu khác cũng chỉ ra rằng nam giới chiếm tỷ lệ đa số trong nhóm bệnh nhân này [2] [4].
3.1.3 Tiền sử nhiễm vi rút viêm gan C
Bảng 3.2 Đặc điểm tiền sử phơi nhiễm viêm gan C
Tiền sử Số bệnh nhân %
Quan hệ tình dục không an toàn 8 10,26
TCMT + QHTD không an toàn 20 25,64
Truyền máu và các chế phẩm máu 12 15,38
*Nhổ răng, xăm mình, phẫu thuật, tai nạn giao thông, không rõ nguyên nhân
Lây nhiễm HCV chủ yếu qua tiếp xúc với máu của người nhiễm, với các yếu tố nguy cơ chính tại Mỹ trong giai đoạn 1991-1995 bao gồm tiêm chích (60%) và quan hệ tình dục không an toàn (20%) Các phương thức lây truyền khác như nghề nghiệp, chạy thận, sống chung với người nhiễm HCV và từ mẹ sang con chỉ chiếm khoảng 10% Khoảng 90% người nhiễm HCV có thể xác định được nguồn lây, trong khi 10% còn lại có nguồn lây không rõ ràng, chủ yếu là những người có thu nhập xã hội thấp Hiện nay, nhiễm HCV qua chế phẩm máu đã được kiểm soát nhờ vào các phương pháp sàng lọc tiên tiến.
1 trong 500.000 đến 2.000.000 lần truyền máu [20] [45]
Trong số 78 bệnh nhân chúng tôi khai thác được tiền sử lây nhiễm viêm gan
C, có 24 bệnh nhân có tiêm chích ma túy, chiếm tỷ lệ cao nhất (30,77%) Tỷ lệ bệnh nhân vừa tiêm chích ma túy, vừa có quan hệ tình dục không an toàn chiếm 25,64%,
Có 12 bệnh nhân có tiền sử truyền máu và các chế phẩm máu chiếm 15,38%, còn lại 17,95% số bệnh nhân có phẫu thuật, nhổ răng, châm cứu, tai nạn giao thông, xăm mình hoặc không rõ đường lây nhiễm (Bảng 3.2)
Theo nghiên cứu của Trần Hữu Bích tại Hà Nội và Bắc Giang, ba hành vi nguy cơ chính liên quan đến nhiễm vi rút viêm gan C bao gồm: dùng chung bơm kim tiêm (26,1%), sử dụng chung kim châm cứu (46,8% trong số những người từng châm cứu) và dùng chung bàn chải đánh răng (32,86%) Đặc biệt, những người có tiền sử phẫu thuật có nguy cơ nhiễm viêm gan C cao gấp 13,4 lần so với những người không phẫu thuật.
3.1.4 Tỷ lệ đồng nhiễm HIV và HCV
Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ đồng nhiễm HCV và HIV
Trong nghiên cứu của chúng tôi, tỷ lệ đồng nhiễm HCV và HIV đạt 29%, cho thấy mối liên hệ chặt chẽ giữa hai loại virus này Đồng nhiễm viêm gan C với HIV là yếu tố nguy cơ cao dẫn đến xơ gan, với HIV dương tính và số lượng CD4 thấp làm tăng tốc độ xơ hóa gan trong nhiễm HCV Ngược lại, HCV cũng thúc đẩy tiến triển từ nhiễm HIV đến hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS) Nghiên cứu của Nguyễn Thị Tuyết Vân chỉ ra rằng trong 369 trường hợp nhiễm viêm gan virus C, tỷ lệ đồng nhiễm HIV với HCV là 20,9%.
Nghiên cứu tại Tây Âu và Mỹ cho thấy tỷ lệ đồng nhiễm HCV/HIV dao động từ 25 đến 30% Tuy nhiên, tỷ lệ này có thể thay đổi tùy thuộc vào nhóm đối tượng và thời điểm nghiên cứu Đặc biệt, tỷ lệ đồng nhiễm HCV/HIV thường cao hơn trong nhóm người tiêm chích ma túy.
3.1.5 Tải lƣợng vi rút HCV
Bảng 3.3 Đặc điểm về tải lƣợng vi rút của mẫu nghiên cứu
Tải lƣợng vi rút (bản sao/mL)
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã áp dụng kỹ thuật Cobas AmpliPrep/COBAS TaqMan để khuếch đại axít nucleic trong huyết thanh, sử dụng thiết bị COBAS AmpliPrep cho xử lý mẫu tự động và COBAS TaqMan để tự động khuếch đại và phát hiện HCV RNA Kỹ thuật PCR theo thời gian thực này có độ đặc hiệu cao lên tới 99,6% và khả năng phát hiện HCV RNA với ngưỡng từ 38 đến 172.500.000 bản sao/mL.
Trong nghiên cứu của chúng tôi, mẫu máu của các bệnh nhân đã được xác định kiểu gen HCV thành công cho thấy tải lượng vi rút viêm gan C trong máu dao động từ
10 3 đến 10 7 bản sao/mL, trong đó có 32 mẫu có tải lượng vi rút là 10 6 bản sao/mL, chiếm 29% (Bảng 3.3.)
Phân bố kiểu gen của HCV ở bệnh nhân đến khám và điều trị tại BVBNĐTƯ
3.2.1 Lý do lựa chọn kỹ thuật sequencing tại khu vực core để xác định kiểu gen và kiểu gen phụ của HCV
Xác định chính xác tác nhân HCV là ưu tiên hàng đầu của bác sĩ để điều trị, theo dõi diễn tiến và biến chứng của bệnh, cũng như phòng ngừa lây truyền virus viêm gan C Tại Việt Nam, ba kỹ thuật phổ biến để xác định kiểu gen của virus viêm gan C bao gồm real time PCR, LiPA và sequencing.
Kỹ thuật LiPA được sử dụng rộng rãi trong việc xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C tại nhiều phòng thí nghiệm PCR nhờ vào tính dễ thực hiện và không yêu cầu thiết bị phức tạp Tuy nhiên, phương pháp này có hạn chế trong việc phân biệt các kiểu gen như 1b và 1a, 2a và 2c, cũng như giữa 4a, 4c và 4d do chỉ sử dụng đoạn 5’-UTR Gần đây, LiPA đã được cải tiến với việc khuếch đại đồng thời khu vực core, giúp nâng cao hiệu suất và giảm thiểu những nhược điểm trước đây.
Kỹ thuật Real time PCR có chi phí thấp hơn 9 lần so với kỹ thuật LiPA, nhưng chỉ sử dụng đoạn trình tự ngắn cho mồi và mẫu dò, dẫn đến khả năng nhầm lẫn trong xác định kiểu gen 1 và một số kiểu gen phụ của kiểu gen 6 Nghiên cứu của Stephane Chevaliez và cộng sự cho thấy có tới 10% trường hợp xác định sai genopype 1 khi áp dụng kỹ thuật Real time PCR.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi áp dụng kỹ thuật sequencing để xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C Mặc dù kỹ thuật này yêu cầu trang thiết bị hiện đại và điều kiện kỹ thuật cao, nhưng nó cho phép xác định kiểu gen cụ thể, điều này rất quan trọng trong việc nghiên cứu sự biến đổi vùng gen mà kỹ thuật LiPA không thể thực hiện Ưu điểm nổi bật của kỹ thuật sequencing là độ chính xác cao trong việc xác định kiểu gen.
Một số cơ sở y tế hiện nay sử dụng kỹ thuật sequencing dựa vào vùng 5’UTR để xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C, nhưng mức độ bảo tồn cao giữa các phân nhóm khiến việc phân biệt các kiểu gen liên quan trở nên khó khăn Nghiên cứu của Stephane Chevaliez cho thấy khi giải trình tự gen vùng 5’UTR, có khoảng 22,8% - 29,5% trường hợp không xác định chính xác kiểu gen phụ 1a, trong khi tỷ lệ này đối với kiểu gen phụ 1b là 9,5% - 8,7%.
Nghiên cứu chỉ ra rằng trình tự của các vùng mã hóa như 5B, core và E1 là tiêu chuẩn vàng để xác định các loại vi rút viêm gan C và phân nhóm Do đó, trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chọn giải trình tự gen tại khu vực core - khu vực bảo tồn dài nhất, sử dụng cặp mồi Sc2, Ac2, S7, A5 Mặc dù kỹ thuật này tốn thời gian và yêu cầu xử lý mẫu trước khi tiến hành, nhưng nó mang lại kết quả chính xác và đáng tin cậy Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp là mỗi cặp mồi chỉ cho kết quả một kiểu gen duy nhất, không xác định được đồng nhiễm kiểu gen Để xác định đồng nhiễm, cần giải trình tự gen ở các khu vực khác như NS3 hoặc NS5B Do hạn chế kinh phí, nghiên cứu này chỉ sử dụng một cặp mồi, vì vậy không thể xác định đồng nhiễm kiểu gen HCV ở bệnh nhân, đây là một hạn chế của nghiên cứu.
3.2.2 Phân bố kiểu gen của HCV
Trong nghiên cứu của chúng tôi, kiểu gen HCV 1 chiếm ưu thế với tỷ lệ 57,41%, tiếp theo là kiểu gen HCV 6 với 39,81%, và kiểu gen HCV 3 chỉ chiếm 2,78% Tác giả Nguyễn Nghiêm Luật và cộng sự đã xác định tỷ lệ kiểu gen HCV 1 là 68,57%, HCV 2 là 5,88% và HCV 6 là 25,71% tại Hà Nội So với nghiên cứu năm 2007 của Học viện Quân Y 108, kiểu gen HCV 1 vẫn chiếm ưu thế với 65,33%, HCV 6 là 18,67% và HCV 2 là 6,67% Nghiên cứu này cũng đã phát hiện thêm kiểu gen HCV 7 (8%) và HCV 8 (1,33%) Theo phân loại kiểu gen mới, kiểu gen HCV 7 đến 11 được xem là biến thể của HCV 3 và HCV 6, được phân loại là kiểu gen phụ của HCV 3 và HCV 6.
Nghiên cứu tại miền Nam của công ty Nam Khoa cho thấy kiểu gen HCV 1 chiếm ưu thế với 71,02%, tiếp theo là kiểu gen HCV 6 với 18,62% và HCV 2 với 10,31% Tỷ lệ kiểu gen HCV 3 và HCV 4 đều là 0,05% [9] Nghiên cứu của tác giả Hồ Tấn Đạt và cộng sự cũng xác định ba kiểu gen chính là 1, 6 và 2, trong đó HCV 1 chiếm 58,4%, HCV 6 chiếm 23,9% và HCV 2 chiếm 13,1% Chỉ có một trường hợp kiểu gen HCV 3 (0,3%) và 4,3% trường hợp không xác định được kiểu gen [4].
Biểu đồ 3.3 Đặc điểm phân bố kiểu gen HCV
Trong nghiên cứu của chúng tôi, không ghi nhận trường hợp nào có kiểu gen HCV 2 và HCV 4, nhưng đã xác định được 3 bệnh nhân mắc kiểu gen HCV 3 (chiếm 2,78%) Kiểu gen HCV 3 đang trở thành phổ biến trong nhóm tiêm chích ma túy và có xu hướng gia tăng trên toàn cầu Nhiễm HCV kiểu gen 3 mạn tính thường dẫn đến tình trạng nhiễm mỡ ở tế bào gan do sự ức chế tiết lipoprotein trong quá trình virus nhân lên.
Theo nghiên cứu của Ming-Lung Yu và các nhà thống kê tại Việt Nam, Hồng Kông và Ma Cao, tỷ lệ kiểu gen HCV 1 chiếm 50%, tiếp theo là HCV 6 với 30%, HCV 2 chiếm 8% và HCV 3 chiếm 7% Sự khác biệt nhỏ về tỷ lệ kiểu gen giữa các vùng có thể do yếu tố địa lý, thời điểm nghiên cứu và số lượng bệnh nhân khác nhau Kiểu gen HCV 1 khó đáp ứng với điều trị đặc hiệu và có tỷ lệ tái phát cao Trong khi đó, HCV 6 phổ biến ở Đông Nam Á và thường đáp ứng tốt hơn với điều trị bằng Interferon, nhưng không có sự khác biệt về đặc điểm lâm sàng và tác dụng phụ so với các kiểu gen khác.
3.2.3 Phân bố kiểu gen phụ của HCV
Việc xác định kiểu gen phụ của vi rút viêm gan C rất quan trọng trong việc đánh giá hiệu quả điều trị và tiên lượng nguy cơ xơ gan cũng như ung thư tế bào gan Nghiên cứu cho thấy kiểu gen 1a chiếm 31,5%, kiểu gen 1b chiếm 25,9%, trong khi kiểu gen 3b có tỷ lệ 2,78% Ngoài ra, kiểu gen 6a chiếm 19,4%, kiểu gen 6e 10,2%, kiểu gen 6h 6,5%, kiểu gen 6k 2,78% và kiểu gen 6l chiếm 0,94%.
Biểu đồ 3.4 Phân bố các kiểu gen phụ của HCV
Một nghiên cứu tại Hải Phòng cho thấy kiểu gen HCV 1a phổ biến hơn 1b với tỷ lệ lần lượt là 23,7% và 20,6% Nghiên cứu này cũng chỉ ra rằng các chủng gen liên quan chủ yếu xuất phát từ Hà Nội, thành phố Hồ Chí Minh và Mỹ Tác giả Phạm Song đã thực hiện một nghiên cứu trên 93 người cho máu, cho thấy tỷ lệ kiểu gen 1a là 29% và 1b là 23% Tuy nhiên, một số nghiên cứu khác, như của Nguyễn Thanh Hảo và cộng sự trên 123 đối tượng, cho thấy kiểu gen 1b chiếm ưu thế với 48,8%, trong khi kiểu gen 1a chỉ chiếm 15,4%.
Nghiên cứu tại Bệnh viện MEDLATEC cho thấy kiểu gen 1b chiếm ưu thế với tỷ lệ 44,44%, trong khi kiểu gen 1a chỉ đạt 25% Sự khác biệt này có thể được giải thích bởi các yếu tố như vùng địa lý, thời điểm nghiên cứu, và đặc điểm của đối tượng cũng như số lượng bệnh nhân trong mỗi nghiên cứu.
Các kiểu gen 1a và 1b là những kiểu gen phổ biến nhất ở Hoa Kỳ và chiếm ưu thế tại Châu Âu Tại Nhật Bản, kiểu gen 1b chiếm 73% trong các trường hợp nhiễm vi rút viêm gan C Ở Pháp, kiểu gen 1b và 3a thường gặp ở bệnh nhân viêm gan vi rút C mạn tính, đặc biệt kiểu gen 1b thường xuất hiện ở bệnh nhân lớn tuổi và những người bị nhiễm do chạy thận nhân tạo Nghiên cứu của Trịnh Thị Ngọc cho thấy, trong số các bệnh nhân có tiền sử tiêm chích ma túy, kiểu gen 1a chiếm 32% và kiểu gen 1b chiếm 12,8% Bệnh nhân viêm gan vi rút C mạn tính có kiểu gen 1b thường diễn biến nặng và ít đáp ứng với Interferon alpha trong điều trị.
Kiểu gen 3a phổ biến trong nhóm người tiêm chích ma túy ở Châu Âu và Mỹ
Tại Việt Nam, tỷ lệ kiểu gen 3 rất thấp, với chỉ 2,78% trường hợp có kiểu gen 3b và không có trường hợp nào có kiểu gen 3a trong nghiên cứu của chúng tôi Nghiên cứu của Tomoaki và cộng sự cũng ghi nhận 1,5% trường hợp kiểu gen 3a và 4,1% kiểu gen 3b Một nghiên cứu khác tại Thành phố Hồ Chí Minh năm 2006 chỉ phát hiện một trường hợp kiểu gen 3b (0,3%) Các nghiên cứu trước đó tại Bệnh viện Trung Ương Quân đội 108 năm 2004 và Bệnh viện MEDLATEC năm 2011 không tìm thấy trường hợp nào có kiểu gen 3.