(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm và khả năng mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn escherichia coli và salmonella trên thịt lợn bán tại hà nội và bắc ninh

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THÀNH HIẾU NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ KHẢ NĂNG MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA TRÊN THỊT LỢN BÁN TẠI HÀ NỘI VÀ BẮC NINH Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học : TS Đặng Thị Thanh Sơn PGS.TS Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Thành Hiếu i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới tập thể giáo viên hướng dẫn khoa học TS Đặng Thị Thanh Sơn, Bộ môn Vệ sinh Thú y, Viện Thú y PGS.TS Phạm Hồng Ngân, Bộ môn Thú y cộng đồng- Học viện Nơng nghiệp Việt Nam ln tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y cộng đồng, Khoa Thú y - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện thú y, tập thể cán nhân viên công tác Bộ môn Vệ sinh thú y- Viện thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Thành Hiếu ii MỤC LỤC Lời cam đoan I Lời cảm ơn .II Mục lục III Danh mục chữ viết tẳt .VI Danh mục bảng VII Danh mục hình VIII Trích yếu luận văn .IX Thesis abstract XI Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.3 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu .4 2.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm .4 2.1.1 Ngộ độc thực phẩm bệnh truyền qua thực phẩm 2.1.2 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm 2.1.3 Tình hình ngộ độc thực phẩm vi sinh vật gây giới Việt Nam 2.1.4 Một số nghiên cứu ô nhiễm thực phẩm vi khuẩn E coli Salmonella gây giới Việt Nam 2.2 Nguyên nhân nhiễm khuẩn vào thịt 10 2.2.1 Đường xâm nhập vi khuẩn vào thịt 10 2.2.2 Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt .10 2.3 Hiểu biết chung vi khuẩn Escherichia coli 11 2.3.1 Đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hóa sức đề kháng 11 2.3.2 Cấu trúc kháng nguyên 12 2.3.3 Đặc tính gây bệnh .14 2.3.4 Ý nghĩa việc xác định tổng số E coli thịt 15 2.4 Hiểu biết chung vi khuẩn Samonella 15 2.4.1 Đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hóa sức đề kháng .15 2.4.2 Cấu trúc kháng nguyên 17 iii 2.4.3 Yếu tố bám dính 18 2.4.4 Khả sản sinh độc tố 19 2.4.5 Ý nghĩa việc xác định có mặt Salmonella thịt 20 2.5 Khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella 20 2.5.1 Tính kháng thuốc vi khuẩn 20 2.5.2 Cơ chế gây tượng kháng thuốc vi khuẩn 21 2.5.3 Sự kháng thuốc vi khuẩn E coli 22 2.5.4 Sự kháng thuốc vi khuẩn Salmonella 24 2.5.5 Phương pháp xác định độ mẫn cảm vi khuẩn gây bệnh số 25 thuốc kháng sinh Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 27 3.1 Địa điểm nghiên cứu 27 3.2 Thời gian nghiên cứu 27 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 27 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 27 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 27 3.4 Nội dung nghiên cứu 28 3.5 Phương pháp nghiên cứu 29 3.5.1 Phương pháp thu thập mẫu 29 3.5.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli theo TCVN 7924-2 : 2008 (ISO 29 16649-2 : 2001) 3.5.3 Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella theo TCVN 4829 : 2005 (ISO 6579 : 2002) 3.5.4 30 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng E coli Salmonella phân lập 31 3.5.5 Phương pháp xử lý số liệu 33 4.1 Phần Kết thảo luận 34 Kết quaxac đinḥ ty lê ̣nhiêm̃ E coli va Salmonella thiṭlơṇ taịhà ̉ƒ ́ ̉ƒ ̉… nội bắc ninh 34 4.1.1 Thực trạng ô nhiễm vi khuẩn E coli thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 34 4.1.2 Kết phát vi khuẩn Salmonella ô nhiễm thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh iv 37 4.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E.coli, Salmonella phân lập 4.2.1 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập 4.2.2 41 41 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập 46 Phần Kết luận kiến nghị 51 5.1 Kết luận 51 5.1.1 Kết kiểm tra trạng ô nhiễm E coli Salmonella 51 5.1.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella phân lập 5.2 51 Kiến nghị 51 Tài liệu tham khảo 52 Phụ lục 58 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẲT Chữ viết tắt BGA BHI DANMAP E coli EHEC EIEC EMB EPEC ETEC FAO FDA Gr (-) Gr (+) IMViC LT MKTTn MPN MR PBW RV SS ST TCVS TCVN TSI VP WHO XLD XLT4 Nghĩa tiếng Việt Brilliant Green Agar Brain Heart Infusion The Danish Integrated Antimicrobial Resistance Monitoring and Research Programme Escherichia coli Enterohaemorrhagic E coli Enteroinvasive E coli Eosin - Methylene Blue Enteropathogenic E coli Enterotoxigenic E coli Food and Agriculture Organization Food & Drug Administration Gram âm Gram dương Indole, Methyl Red, Voges Proskauer Citrat Heat labile enterotoxin Muller Kauffman Tetrathionate Most Probable Number Methyl red Pepton Buffer Water Rappaport - Vassiliadis Soya Pepton Salmonella- Shigella Heat stable enterotoxin Tiêu chuẩn vệ sinh Tiêu chuẩn Việt Nam Triple sugar iron Voges proskauer World Health Organization Xylolysin deoxychocolat Xyloze - Lyzine - Tergitol vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng đánh giá đường kính vịng vơ khuẩn số kháng sinh dùng nghiên cứu 32 Bảng 4.1 Kết phát đếm số vi khuẩn E coli mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ Hà Nội Bắc Ninh 34 Bảng 4.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh hố số chủng E coli phân lập 36 Bảng 4.3 Kết phát vi khuẩn Salmonella mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ Hà Nội Bắc Ninh 38 Bảng 4.4 Kết kiểm tra số đặc tính sinh học chủng Salmonella phân lập 41 Bảng 4.5 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập từ thịt lợn lấy Hà Nội Bắc Ninh 42 Bảng 4.6 Kết kiểm tra khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập từ thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 48 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Tỷ lệ % số mẫu nhiễm với vi khuẩn E coli số mẫu không đạt theo TCVN 7046:2009 Hà Nội Bắc Ninh 35 Hình 4.2 Khuẩn lạc vi khuẩn E coli có màu xanh tím đặc trưng đĩa thạch Brilliance E.coli/Coliform Selective medium 37 Hình 4.3 Phản ứng Indol vi khuẩn E.coli 37 Hình 4.4 Tỷ lệ mẫu thịt lợn nhiễm Salmonella 39 Hình 4.5 So sánh kết phân lập vi khuẩn E coli Salmonella từ thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 40 Hình 4.6 Vi khuẩn Salmonella spp phát triển mơi trường MSRV XLT4 40 Hình 4.7 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập Hà Nội Bắc Ninh 43 Hình 4.8 Kết thử kháng sinh đồ vi khuẩn E coli đĩa thạch Muller Hilton 45 Hình 4.9 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 49 Hình 4.10 Thực đo đường kính vịng vơ khuẩn đĩa thạch Muller Hilton phịng thí nghiệm viii 50 TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Thành Hiếu Tên luận văn:“Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli Salmonella thịt lợn bán Hà Nội Bắc Ninh’’ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 8640101 Cơ sở đào tạo: Học Viện Nơng Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Xác định trạng ô nhiễm vi khuẩn E coli Salmonella từ mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ địa bàn tỉnh Bắc Ninh Hà Nội Cập nhật số liệu tỷ lệ kháng kháng sinh hai lồi vi khuẩn Góp phần xây dựng liệu kiểm soát vi khuẩn kháng thuốc Việt Nam Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thu thập mâũ theo TCVN 4833 - 1:2002, TCVN 4833 - 2:2002 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli theo ISO 16649-2 : 2001 Salmonella theo ISO 6579 :2002 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng E coli Salmonellatheo phương pháp Kirby - Bauer Số liệu thu thập xử lý phần mềm Excel 2007 Kết nghiên cứu Kết kiểm tra tình trạng nhiễm E coli Salmonella Kiểm tra 80 mẫu thịt lợn lấy địa bàn Hà Nội Bắc Ninh có 97,5% số mẫu thịt lợn lấy Hà Nội Bắc Ninh phân lập vi khuẩn E coli 95% số mẫu thịt lợn khơng đạt tiêu chuẩn vệ sinh theo TCVN 7046:2002 (≤10 CFU/g) Có 57,5% (23/40) số mẫu thịt lợn lấy Bắc Ninh 75% (30/40) Hà Nội phân lập vi khuẩn Salmonella lập Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella phân Các chủng E coli phân lập từ mẫu thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh mẫn cảm với loại kháng sinh Cefotaxime, Ceftazidime Colistin Vi khuẩn E coli phân lập kháng với loại kháng sinh cao Tetracyclinesau Sulfornamide Ampicillin,Trimethoprim ix