ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
ĐỐI TƯỢNG, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
- Chế phẩm probiotic Neoavi GroMax: chế phẩm bào tử Bacillus do công ty
Công nghệ sinh học Mùa Xuân cung cấp Neoavi GrowMax chứa bào tử Bacillus spp với số lượng 1x10 12 CFU/kg như sau
Bào tử Bacillus subtilis HU58… ≥ 4x10 11 CFU/kg Bào tử Bacillus licheniformis……… ≥ 2x10 11 CFU/kg Bào tử Bacillus coagulans…… … ≥ 1x10 11 CFU/kg Bào tử Bacillus indicus.……… ≥ 3x10 11 CFU/kg (Bào tử Bacillus do Đại học Hoàng Gia Anh cung cấp) Chất mang đặc biệt vừa đủ 1kg
- Gà con thí nghiệm: gà Ross 308 một ngày tuổi do Công ty Cổ phần Chăn nuôi C.P Việt Nam cung cấp
- Thời gian: Từ tháng 01/07/2016 đến 01/03/2017
- Trang trại chăn nuôi thực nghiệm Khoa Chăn nuôi – Học viện Nông nghiệp Việt Nam
- Phòng thí nghiệm Bộ môn Giải Phẩu – Tổ Chức, Khoa Thú Y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam
- Phòng thí nghiệm Vi sinh, Bộ môn Vi sinh – Truyền nhiễm, Khoa Thú Y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam.
NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
- Xác định tác dụng của chế phẩm Neoavi GroMax đến sinh trưởng trên gà Ross 308 qua đánh giá các chỉ tiêu:
+ Khối lượng cơ thể gà
+ Tăng trọng trung bình/ngày
- Đánh giá ảnh hưởng của Neoavi GroMax đến khả năng tiêu hóa của gà Ross 308 qua các chỉ tiêu:
+ Lượng thức ăn thu nhận;
+ Tỷ lệ chuyển hóa thức ăn
- Xác định số lượng một số vi khuẩn đường ruột gà Ross 308
+ Tổng số vi khuẩn hiếu khí;
- Ảnh hưởng của bổ sung chế phẩm đến cấu trúc vi thể biểu mô niêm mạc ruột non gà Ross 308
+ Chiều cao và chiều rộng lông nhung biểu mô.
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp phân lô so sánh với mô hình bố trí thí nghiệm một nhân tố Gà thí nghiệm được nuôi theo phương thức trên nền có đệm lót không thay đổi với kiểu chuồng hở Trong chuồng có quạt chống nóng và hệ thống phun nước trên mái
Quy trình nuôi dưỡng, chăm sóc vệ sinh phòng dịch theo hướng dẫn chăn nuôi gà thịt Ross 308
Gà thí nghiệm: Tổng số 180 gà Ross 308 một ngày tuổi khỏe mạnh, được chia làm 3 đợt thí nghiệm (60 con/ đợt) (bảng 3.1)
Lô đối chứng (ĐC) được nuôi bằng khẩu phần cơ sở của trang trại
Lô thí nghiệm được nuôi với khẩu phần cơ sở có bổ sung Neoavi GroMax với 300g/tấn thức ăn
Chuẩn bị chuồng trại: trước khi nhập gà 1 tuần tiến hành vệ sinh chuồng trại, máng ăn, máng uống Phun thuốc sát trùng nền, tường chuồng và khu vực xung quanh chuồng trại
Tất cả gà của 2 lô thí nghiệm đều được phòng bệnh bằng chương trình vacxin của gà thịt
Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm
Nhóm đối Nhóm bổ sung Đợt thí nghiệm chứng Neoavi GroMax Tổng
3.3.2 Phương pháp đánh giá sinh trưởng của gà Khối lượng cơ thể
Cân gà sau khi nở và cân theo từng đợt từ 1 - 45 ngày vào một thời điểm nhất định, cân toàn bộ số gà thí nghiệm
Gà sau nở được cân bằng cân kỹ thuật có độ chính xác 0,05g , từ sau ngày tuổi 14 cân bằng cân đồng hồ loại 1kg có độ chính xác ±
2,5g, từ 28 – 45 ngày tuổi cân bằng cân đồng hồ loại 5kg có độ chính xác ± 10g Tiến hành cân từng con vào thời gian 7giờ – 7giờ30 sáng, cân trước khi cho ăn và cân cố định một ngày trong tuần
Sinh trưởng tuyệt đối (g/con/ngày): ADG – Avarage Daily Gain
Công thức xác định khối lượng tăng trọng gam/con/ngày như sau:
Trong đó: ADG: Khối lượng tăng trọng/ngày (gam);
W 1 : Khối lượng gà tại thời điểm t 1 ;
W 0 : Khối lượng gà tại thời điểm t 0 Sinh trưởng tương đối
Sinh trưởng tương đối: là tỷ lệ phần trăm (%) tăng lên của khối lượng cơ thể lúc kết thúc khảo sát so với lúc đầu khảo sát
W 2 : Khối lượng gà tại thời điểm trước
W 1 : Khối lượng gà tại thời điểm sau 3.3.3 Phương pháp đánh giá khả năng chuyển hóa thức ăn
Hàng ngày cân lượng thức ăn đổ vào máng ăn vào giờ nhất định; cân thức ăn thừa vào ngày tiếp theo Lượng thức ăn thu nhận được tính theo công thức.
LTATN Thức ăn cho vào (g) - Thức ăn thừa (g)
Số gà trong nhóm (con)
Lượng thức ăn cho ăn và lượng thức ăn thừa tính theo phần trăm vật chất khô
Tỷ lệ chuyển hóa thức ăn (FCR)
- Tỷ lệ chuyển hóa thức ăn được tính bằng tỷ lệ giữa thức ăn thu nhận và khối lượng cơ thể tăng lên tại các thời điểm từ 1 đến 45 ngày tuổi được tính theo công thức
Các chỉ tiêu tăng trọng (ADG), lượng thức ăn thu nhận (LTATN), hệ số chuyển hóa thức ăn (FCR) đánh giá cuối mỗi giai đoạn nuôi
Khối lượng cơ thể tăng lên (kg)
3.3.4 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn trong chất chứa ruột
Kết thúc thí nghiệm, lúc gà 45 ngày tuổi lấy ngẫu nhiên 6 ruột gà từ mỗi lô, mổ lấy chất chứa đường ruột vào ngày kết thúc thí nghiệm (manh tràng, kết tràng, trực tràng) để kiểm tra định lượng một số vi khuẩn đường ruột: Tổng vi khuẩn hiếu khí, E.coli, Clostridium perfringens, Lactobacillus spp:
Xác định số lượng E.coli theo tiêu chuẩn TCVN7924-2:2008 (ISO 16649-2:2001)
Cấy mẫu trên môi trường thạch TBX
Dùng micropipet vô trùng chuyển 1 ml mẫu thử pha loãng ban đầu (10 -1 ) vào đĩa Petri vô trùng Cấy vào 2 đĩa petri ở mỗi độ pha loãng Lặp lại quy trình trên cho các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo, sử dụng một pipet mới vô trùng cho mỗi độ pha loãng Rót vào mỗi đĩa Petri khoảng 15 ml môi trường TBX mà trước đó đã được làm nguội đến khoảng từ 44 o C đến 47 o C trên nồi cách thủy Trộn cẩn thận dịch cấy với môi trường và để yên cho hỗn hợp đông lại, để các đĩa Petri trên mặt phẳng mát nằm ngang Thời gian tính từ khi phân phối dịch cấy vào đĩa đến khi rót môi trường không được quá 15 phút.
Nuôi cấy trong tủ ấm và đọc kết quả: Lật ngược các đĩa và để vào tủ ấm để ở 44 o C trong khoảng từ 18 giờ đến 24 giờ Tổng thời gian ủ không được quá 24 giờ Sau giai đoạn ủ ấm quy định, đếm các CFU điển hình của Escherichia coli dương tính β- glucuronidaza trên mỗi đĩa thạch chứa ít hơn 150 CFU điển hình và ít hơn 300 CFU tổng số (điển hình và không điển hình). Ở nhiệt độ 44 o C, vi khuẩn hình thành các khuẩn lạc màu xanh điển hình trên môi trường TBX, dương tính β-glucuronidaza (β-glucuronidase-positive
Xác định Clostridium perfringen theo tiêu chuẩn TCVN 4991:2005 (ISO 7937/2004)
Cấy mẫu trên môi trường thạch SC: Dùng micropipette vô trùng cho vào mỗi đĩa 1 ml mẫu đã pha loãng cho vào chính giữa hai đĩa Petri vô trùng Rót vào mỗi đĩa 10 ml đến 15 ml thạch SC, được duy trì ở 44 °C đến 47 °C trong nồi cách thủy và trộn đều chất cấy bằng cách xoay nhẹ từng đĩa Khi môi trường đã đông đặc lại thì phủ kín thêm một lớp dày 10 ml của cùng loại thạch SC.
Nuôi cấy tủ ấm và đọc kết quả: Để cho đông đặc lại Đặt các đĩa vào các bình môi trường cải biến hoặc các vật đựng thích hợp khác và ủ trong các điều kiện kỵ khí ở 37 °C trong 20 giờ ± 2 giờ
Sau giai đoạn ủ qui định, chọn tất cả các đĩa chứa ít hơn 150 khuẩn lạc Từ các đĩa này, chọn các đĩa đại diện cho các độ pha loãng liên tiếp, nếu có thể Đếm các khuẩn lạc điển hình của C.perfringens trên mỗi đĩa
Vi khuẩn C.perfringens trên môi trường thạch SC, hình thành các khuẩn lạc điển hình có màu đen, do vi khuẩn có khả năng khử sunfit tạo sunfua nên khuẩn lạc có màu đen
Xác định Lactobacillus spp theo tiêu chuẩn TCVN 8737:2011
Cấy mẫu trên môi trường thạch MRS: Đối với một mẫu kiểm nghiệm phải nuôi cấy ít nhất 3 đậm độ pha loãng, mỗi đậm độ dùng 2 đĩa petri vô trùng Lấy
1 ml mẫu hoặc dung dịch pha loãng ở các đậm độ khác nhau cho vào giữa từng đĩa petri Môi trường MRS thạch đã tan chảy, để nguội đến 45 0 C ± 1 0 C Rót vào từng đĩa 12 ml đến 15 ml môi trường thạch, đảo đều dung dịch mẫu với môi trường bằng cách lắc 3 lần sang phải và 3 lần sang trái Để các đĩa thạch đông tự nhiên trên mặt phẳng mát, nằm ngang Thời gian bắt đầu pha loãng đến khi rót môi trường vào đĩa không được quá 30 phút.
Nuôi cấy tủ ấm và đọc kết quả: Khi thạch đã đông, lật úp đĩa và cho vào tủ ấm
5 % CO 2 , ở 37 0 C trong thời gian từ 24 giờ đến 72 giờ Sau 48 giờ, đọc kết quả sơ bộ Sau 72 giờ, đọc kết quả, đếm tổng số các khuẩn lạc mọc trên các đĩa.
