Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại

Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.Xây dựng bộ chủng nấm bào ngư có tiềm năng thương mại.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ PHẠM VĂN LỘC XÂY DỰNG BỘ CHỦNG NẤM BÀO NGƯ CÓ TIỀM NĂNG THƯƠNG MẠI LUẬN ÁN TIẾN SĨ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TP HỒ CHÍ MINH – 2023 MỤC LỤC Trang Lờicamđoan i Lờicảmơn ii Mụclục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt vàthuậtngữ vii Danhmụcbảng .viii Danh mục hình vẽ,đồthị .x MỞĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUANNGHIÊNCỨU 1.1 Ngànhtrồngnấm .3 1.1.1 Lịch sử, tiềm vàthựctrạng 1.1.2 Các vấn đề cần giải ngành trồng nấmViệt Nam 1.2 Giới thiệu nấmbàongư 1.2.1 Giớithiệuchung 1.2.2 Vịng đời đặc điểm di truyềngiớitính 1.3 Thu thập giữgiốngnấm 1.3.1 Thuthập 1.3.2 Giữgiống 1.4 Địnhdanhnấm 10 1.4.1 Định danhdựa đặc điểmhìnhthái 11 1.4.2 Định danhdựa tươnghợploài 13 1.4.3 Định danhdựa trình tự bảotồn .15 1.5 Phân tích đa dạng di truyền kỹthuậtAFLP .17 1.6 Đánh giá chấtlượnggiống .19 1.6.1 Đánh giá dựa DNA biểuhiệngen 19 1.6.2 Đánh giá dựa enzyme phản ứngsinhhóa 19 1.6.3 Đánh giá sinh trưởng giống nấm môitrường dinhdưỡng 20 1.6.4 Đánh giá tốc độ lan tơ hiệu suất sinh học giá thểsảnxuất 21 1.7 Các phương pháp cải tiếngiốngnấm .22 1.7.1 Phươngpháplai 22 1.7.2 Phương pháp chuyển gen chỉnh sửa gen 26 1.7.3 Phương pháp xử lý đột biến dòng song nhân/đabàotử 26 1.8 Các cơng trình nghiên cứu có liên quan đến nội dungluậnán 26 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU 29 2.1 Nội dung Thu thập, định danh phân tích đa dạng di truyền cácchủng nấm bào ngư nuôi trồngphổbiến 29 2.1.1 Thuthậpmẫu 29 2.1.2 Xử lý mẫu tươi, phânlậpmẫu 29 2.1.3 Phương pháp định danh đặc điểmhìnhthái 29 2.1.4 Phương pháp định danh đặc điểm sinh họcphântử 30 2.1.5 Phương pháp phân tích đa dạng di truyền kỹthuậtAFLP 31 2.2 Nội dung Khảo sát số đặc điểm sinh học chủngnấm bào ngư thuthậpđược .35 2.2.1 Khảo sát khả phát triển hệ sợi cácchủng nấm môi trường thạch đĩa môitrườnglỏng 35 2.2.1.1 Khảo sát tốc độ lan tơ môi trườngthạch đĩa 35 2.2.1.2 Khảo sát sinh khối nuôi cấy môitrườnglỏng 36 2.2.2 Khảo sát tốc độ lan tơ mạt cưacaosu 36 2.2.2.1 Khảo sát tốc độ lan tơ trên đĩa Petrimạtcưa 36 2.2.2.2 Khảo sát tốc độ lan tơ ống nghiệmmạtcưa 37 2.2.3 Khảo sát tỉ lệchuyểnhóa 37 2.2.4 Khảo sát hiệu suất sinh học chủng nấm bào ngư phân tích mối tương quan tốc độ lan tơ mạt cưa hiệu suất sinh học37 2.2.4.1 Khảo sát hiệu suấtsinhhọc 37 2.2.4.2 Phân tích mối tương quan tốc độ lan tơ mạt cưa với hiệu suấtsinhhọc .38 2.3 Nội dung Thu thập khảo sát số đặc điểm sinh học dòngđơn bội chủng nấmbàongư 38 2.3.1 Thu thập giữ giống dòngđơnbội 38 2.3.2 Khảo sát sinh trưởng dòng đơn bội môitrường dinh dưỡng 39 2.3.3 Khảo sát tỉ lệ chuyển hóa dịngđơn bội .39 2.3.4 Xác định kiểu bắt cặp dòngđơn bội 40 2.4 Nội dung Thử nghiệm phân nhóm kiểu di truyền bắt cặp dòngđơn bội số marker sinh họcphântử 40 2.4.1 Phân tích đa dạng di truyền dòng dơn bội kỹthuậtAFLP 40 2.4.2 Thử nghiệm phân nhóm kiểu di truyền bắt cặp dịng đơnbội số cặp mồi chuyên biệt nấmđùigà 40 2.5 Bố trí thí nghiệm xử lýsốliệu 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀTHẢOLUẬN 42 3.1 Thu thập, định danh phân tích đa dạng di truyền chủng nấm bào ngư nuôi trồngphổbiến 42 3.1.1 Thu thập nuôi cấy giữ giống chủng nấmbào ngư 42 3.1.2 Định danh chủng nấm đặc điểmhìnhthái 42 3.1.2.1 Các chủng bào ngưxám 43 3.1.2.2 Các chủng bào ngưtrắng 54 3.1.2.3 Chủng nấm bào ngư tiểuyếnABI-F000201 58 3.1.3 Định danh chủng nấm đặc điểm sinh họcphântử 62 3.1.3.1 So sánh vùng trìnhtự ITS .62 3.1.3.2 Xây dựng phát sinh lồi vùng trìnhtự ITS .63 3.1.4 Phân tích đa dạng di truyền kỹthuật AFLP 66 3.2 Khảo sát số đặc điểm sinh học chủng nấm bào ngưthu thậpđược 69 3.2.1 Khảo sát khả phát triển hệ sợi chủng giốngnấm môi trường thạch đĩa môitrườnglỏng .69 3.2.2 Khảo sát tốc độ lan tơ mạt cưacaosu 72 3.2.3 Khảo sát tỉ lệchuyểnhóa 74 3.2.4 Khảo sát hiệu suất sinh học mối tương quan tốc độ lantơ mạt cưa với hiệu suất sinh học cácchủngnấm 76 3.3 Thu thập khảo sát số đặc điểm sinh học dòngđơnbội .78 3.3.1 Thu thập giữ giống dòngđơnbội 78 3.3.1.1 Thu thập dòngđơnbội .78 3.3.1.2 Giữ giống dòngđơn bội 80 3.3.2 Khảo sát sinh trưởng dòng đơn bội môitrường dinhdưỡng 80 3.3.2.1 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000241 80 3.3.2.2 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000252 82 3.3.2.3 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000253 83 3.3.2.4 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000224 85 3.3.3 Khảo sát tỉ lệ chuyển hóa dịngđơnbội .87 3.3.3.1 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000241 87 3.3.3.2 Khảo sát dòng chủngnấmABI-F000252 88 3.3.3.3 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000253 89 3.3.3.4 Khảo sát dòng chủngnấm ABI-F000224 90 3.3.4 Xác định kiểu di truyền bắt cặp dòngđơn bội .92 3.3.4.1 Xác định kiểu bắt cặp riêng cácchủng nấm 92 3.3.4.2 Lai chéo dòng đơn bội chủng nấm bàongư xám .96 3.4 Thử nghiệm phân nhóm kiểu di truyền bắt cặp dòng đơn bộibằng số marker sinh họcphântử .98 3.4.1 Phân tích đa đạng di truyền dòng dơn bội kỹthuậtAFLP 98 3.4.2 Thử nghiệm phân nhóm kiểu di truyền bắt cặp dòng đơnbội số cặp mồi chuyên biệt nấmđùigà 101 3.4.2.1 Tái kiểm tra độ đặc hiệu cặp mồi nấmđùigà 101 3.4.2.2 Đánh giá khả áp dụng cặp mồi với chủng nấm bào ngư xámP pulmonariustrên liệu sinhtinhọc 102 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀKIẾN NGHỊ 107 4.1 Kếtluận 107 4.2 Kiếnnghị 107 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾNLUẬNÁN 108 DANH MỤC TÀI LIỆUTHAMKHẢO .109 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ Ký hiệu/viết tắt/thuật ngữ AFLP Amyloid Basidia Basidioles BE Cheilocystidia Cs Cystidia Dimitic ITS Inamyloid Hymenium Tiếng Anh Amplified Fragment Length Polymorphism Diễn giải Đa hình độ dài nhân chọn lọc Bắt màu với thuốc thử có iod Đảm Tiền đảm Biological efficiency Hiệu suất sinh học Liệt bào đỉnh Cộng Liệt bào Cấu trúc hệ sợi bao gồm hai loại: sợi nguyên thủy sợi cứng Internal transcribed spacer Vùng mã bên Không bắt màu với thuốc thử có iod Vùng bào tầng Monokaryon Monomitic PCR Polymerase chain reaction PDA Potato dextrose agar PDB Potato dextrose broth Đơn bội Cấu trúc hệ sợi có loại sợi nguyên thủy Phản ứng chuỗi polymerase Môi trường thạch khoai tâydextrose Môi trường khoai tây dextrose Pileipellis Pleurocystidia Hệ sợi mặt mũ nấm Liệt bào bên Pseudodimitic Cấu trúc hệ sợi gần giống dimitic LSU Large subunit SSU Small subunit Subhymenium Trama YBLB Yeast bromothymol blue lactose broth Vùng gen quy định tiểu phần lớn ribosome Vùng gen quy định tiểu phần nhỏ ribosome Vùng cận bào tầng Thể Môi trường chứa cao nấm men, bromothymol blue lactose DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các nhóm khơng tương hợp củachiPleurotus 15 Bảng 1.2.Một số trình tự gen sử dụng để định danh nấm bào ngư sốcôngbố 17 Bảng 1.3.Một số nghiên cứu sử dụng thị DNA phân tích đa dạng di truyền nấmbàongư 18 Bảng 1.4.Tốc độ lan tơ số giống bào ngư xám, trắng phổ biến môitrường PDA .21 Bảng 1.5.Hiệu suất sinh học số giống bào ngư trênmạtcưa .22 Bảng 1.6.Một số kết lai tạo giống nấmbàongư 24 Bảng 2.1.Trình tự đoạn mồi sử dụng phảnứngPCR 30 Bảng 2.2.Thành phần phảnứngPCR .31 Bảng 2.3.Thơng tin trình tự tham chiếu để xây dựng phátsinhloài .32 Bảng 2.4.Thành phần phảnứngcắt 33 Bảng 2.5.Thành phần phản ứngnốiDNA 33 Bảng 2.6.Thành phần phản ứng PCR khôngchuyênbiệt 34 Bảng 2.7.Thành phần phản ứng PCRchuyên biệt 34 Bảng 3.1.Danh sách chủng nấm bào ngư thuthậpđược .42 Bảng 3.2.Kích thước cấu trúc đại thể vi thể cácchủngnấm 60 Bảng3.3.KếtquảsosánhtrìnhtựITScủacácchủngnấmbàongưvớiGenBank.62 Bảng 3.4.Hệ số tương quan di truyền chủng nấmbàongư 69 Bảng 3.5.Tốc độ lan tơ trung bình mơi trường PDA sinh khối khô môi trường PDB chủng nấm sau ngàynuôicấy .70 Bảng 3.6.Tốc độ lan tơ chủng nấm bào ngư Petri ống nghiệm mạtcưa 73 Bảng 3.7.Tỉ lệ chuyển hóa mơi trường YBLB chủng nấmbàongư 75 Bảng 3.8.Hiệu suất sinh học tốc độ thể tích sinh khối tơ mạt cưa chủng thuộc loàiP.ostreatus 76