Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÝ THỊ LIỄU a lu n n va NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH p ie gh tn to Tên đề tài: TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH CHỒI CÂY BÌNH VƠI TÍM (Stephania rotunda Lour) d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC f an nv a lu Hệ đào tạo ul : Chính quy : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP oi lm Chuyên ngành : 2011-2015 at nh Khóa học z z om l.c gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2015 n va ac th si Thái Nguyên, 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÝ THỊ LIỄU a lu Tên đề tài: n va NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH n TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH CHỒI CÂY tn to BÌNH VƠI TÍM (Stephania rotunda Lour) p ie gh d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Lớp Khóa học Giảng viên hƣớng dẫn f an nv a lu : Chính quy : Công nghệ Sinh học : CNSH-CNTP : 43-CNSH : 2011-2015 : PGS.TS Ngơ Xn Bình Bộ Khoa học Cơng nghệ ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH-CNTP - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2015 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Phịng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ Sinh họcCơng nghệ Thực phẩm, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Để đạt kết ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học-Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực tập Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo Ngơ Xn Bình, giáo a lu Nguyễn Thị Tình kĩ sư Lã Văn Hiền tận tình bảo, giúp đỡ hướng dẫn n em thời gian thực đề tài va n Cuối cùng, em xin cám ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt tn to chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập; cảm ơn bạn bè giúp p ie gh đỡ em thời gian vừa qua Mặc dù thân cố gắng thời gian thực đề tài có hạn oa nl w nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp chân thành từ thầy bạn để đề tài hoàn thiện d Em xin chân thành cảm ơn! a lu Thái Nguyên, tháng năm 2015 nv f an Sinh viên oi lm ul at nh Lý Thị Liễu z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si ii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1: Phân loại khoa học Chi Bình vơi (Stephania spp) .4 Bảng 3.1: Thiết bị, dụng cụ hóa chất 26 Bảng 3.2: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian chất khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro sau ngày .29 Bảng 3.3: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím sau 20 ngày ni cấy 30 Bảng 3.4: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng GA3 đến khả tái sinh chồi a lu Bình vơi tím sau 20 ngày ni cấy 30 n Bảng 3.5: Nghiên cứu ảnh hưởng BA+GA3 đến khả nhân nhanh chồi va n Bình vơi tím sau 30 ngày ni cấy .31 tn to Bảng 3.6: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA+NAA đến khả nhân nhanh p ie gh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy 31 Bảng 3.7: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA+ IBA đến khả nhân nhanh oa nl w chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy 31 Bảng 3.8: Nghiên cứu ảnh hưởng IBA than hoạt tính (0,5 g/l) đến khả d rễ Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy 32 a lu nv Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả f an tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro (sau ngày) 33 oi lm ul Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ chồi ngủ sau 20 ngày nuôi cấy 35 at nh Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh z chồi Bình vơi tím từ chồi ngủ sau 20 ngày ni cấy 37 z @ Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA GA3 đến khả gm nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 30 ngày ni cấy .39 om l.c Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy .41 an Lu n va ac th si iii Bảng 4.6: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy 43 Bảng 4.7: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy .45 a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 iv DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1: Cây Bình vơi tím (Stephania rotunda Lour) .5 Hình 2.2: Một số hình ảnh Bình vơi tím Hình 3.1: Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ Bình vơi tím 27 Hình 4.1: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung nồng độ BA khác sau 20 ngày nuôi cấy 36 Hình 4.2: Ảnh kết nghiên cứu ảnh hưởng GA3 đến khả tái sinh chồi a lu Bình vơi tím sau 20 ngày nuôi cấy .38 n Hình 4.3: Chồi Bình vơi tím MT MS bổ sung nồng độ BA + GA3 khác n va sau 30 ngày nuôi cấy 40 tn to Hình 4.4: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung tổ hợp BA + NAA với nồng p ie gh độ khác sau 40 ngày nuôi cấy .42 Hình 4.5: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung BA + IBA nồng độ khác oa nl w sau 40 ngày nuôi cấy 44 Hình 4.6: Rễ Bình vơi tím MT MS bổ sung than hoạt tính (0,5 g/l) IBA d nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy 46 f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 v DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT : 6-Benzylaminopurine GA3 : Gibberellic Acid IBA : Indole butyric acid MS : Murashige & Skoog (1962) CS : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/c : Đối chứng LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trường NAA : α-Naphthalene acetic acid WHO : World Health Organization a lu BA n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vi MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU a lu 2.1 Giới thiệu chung chi Bình vơi n 2.1.1 Nguồn gốc va n 2.1.2 Phân loại Chi 2.1.4 Giới thiệu Bình vơi tím (Stephania rotunda Lour) p ie gh tn to 2.1.3 Đặc điểm hình thái phân bố 2.2 Vai trị Bình vơi tím .7 oa nl w 2.2.1 Giá trị kinh tế .7 2.2.2 Giá trị dược liệu d 2.3 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật a lu nv 2.3.1 Khái niệm f an 2.3.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật .9 oi lm ul 2.3.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 10 2.4 Các giai đoạn nhân giống vơ tính in vitro 10 at nh 2.4.1 Giai đoạn chuẩn bị 10 z 2.4.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 10 z @ 2.4.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi .11 gm 2.4.4 Tạo hoàn chỉnh .11 om l.c 2.4.5 Thích ứng in vitro ngồi điều kiện tự nhiên 12 2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật .12 an Lu 2.5.1 Vật liệu nuôi cấy 12 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vii 2.5.2 Điều kiện nuôi cấy 13 2.5.3 Môi trường dinh dưỡng 13 2.5.4 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.6 Tình hình nhân giống sử dụng củ Bình vơi tím 20 2.6.1 Nhân giống phương pháp hữu tính 21 2.6.2 Phương pháp nhân giống vơ tính 21 2.6.3 Phương pháp nhân giống in vitro 21 2.6.4 Phương pháp chế biến sử dụng .22 2.7 Tình hình nghiên cứu nước giới 22 a lu 2.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 22 n n va 2.7.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 23 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .26 p ie gh tn to PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu .26 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 26 oa nl w 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 26 3.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 26 d a lu 3.4 Nội dung nghiên cứu 27 f an nv 3.5 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy invitro 27 ul oi lm 3.5.2 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm .28 nh at 3.6 Xử lí số liệu .32 z PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .33 z gm @ 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro 33 om l.c 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số auxin cytokinin đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím 35 an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 viii 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ 35 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ 37 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ số auxin, gibberellin cytokinin đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím 39 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA GA3 đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím………………………………………….39 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả a lu nhân nhanh chồi Bình vơi tím 41 n n va 4.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ số auxin đến khả p ie gh tn to nhân nhanh chồi Bình vơi tím 43 rễ Bình vơi tím 44 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47 oa nl w 5.1 Kết luận .47 5.2 Kiến nghị 47 d a lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 f an nv I Tài liệu Tiếng Việt 48 II Tài liệu Tiếng Anh .50 ul oi lm III Tài liệu internet 51 at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Bộ Giáo dục Đào tạo, Bộ Y tế, Viện Dược liệu (2005), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược - Giáo trình Sau đại học, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín việt nam, Nxb Nơng nghiệp Hà Nội Nguyễn Quốc Bình (1994), Tạp chí Sinh học, 16(4), 143-145 Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội a lu Bùi Thị Bằng (2006), Các phương pháp hóa lí ứng dụng phân tích n kiểm nghiệm dược liệu, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội n va Nguyễn thị Mỹ Duyên (2014), “Sự ảnh hưởng auxin cytokinin đến khả học, Quyển 2(1), 48 – 54 p ie gh tn to tạo nhân chồi Bình vơi (Stephania rotunda Lour.)”, Tạp chí khoa Trịnh Đình Đạt (2007), Cơng nghệ Sinh học - T4, Nxb Giáo dục oa nl w Trầ n Hùng Ngô Vân Thu, “Khảo sát mang tên Bình Vơi ”, Tạp chí Dược học, Tâ ̣p 26, số 1, 1986, 6-8 d Trầ n Hùng và Ngô Vân Thu , “Bước đầ u nghiên cứu Bin ̀ h Vôi Biể n” , Thông a lu nv tin Dược học, Số 5, 1988, 65 - 67 f an 10 Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình chất điều hịa oi lm ul sinh trưởng thực vật, Nxb Giáo dục Việt Nam 11 Phan Thanh Kỳ, Nguyễn Thị Tâm, Trần Văn Thanh (1997), Bài giảng dược at nh liệu, tập 2, Trường Đại học Dược Hà Nội 12 Đỗ Tất Lợi (1991), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học z z Kỹ Thuật @ gm 13 Đỗ Tất Lợi (2009), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Hà Nội, Nxb Y học om l.c 14 Nguyễn Thị Liễu, Nguyễn Trung Thành, Nguyễn Văn Kết (2011), “Nghiên cứu khả tạo rễ bất đinh sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Công nghệ 27: 30 - 36 an Lu nuôi cấy in vitro”, tạp chí khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 49 15 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 16 Trịnh Ngọc Nam, Nguyễn Văn Vinh (2010), “Nghiên cứu nhân giống in vitro khảo sát hợp chất Alkaloit Rotudine từ Bình vơi (Stephania rotunda Lour)”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, tập 49, số 4, năm 2011, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 17 Ngơ Đại Quang (1999), Tạp chí cơng nghiệp hóa chất, Nxb Vinachem 18 Ngơ Đại Quang (1999), “ Sản xuất thuốc giảm đau từ củ Bình vơi”, Viện Hóa học cơng nghiệp Hà Nội a lu 19 Sách đỏ Việt Nam (2007), Nxb Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội n 20 Nguyễn Thị Huyền Trang, Lê Thị Thủy Tiên (2012), “Tăng hệ số nhân nhanh n va chồi hoa Salem tím (Limonium sinuatum L Mill) cách sử dụng kết hợp chí sinh học, 34, 219-226 p ie gh tn to chất điều hòa sinh trưởng thực vật adenine nuôi cấy in vitro”, Tạp 21 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình sinh lý học thực oa nl w vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội 22 Trần Trung Thành, Lê Thị Thu Hiền (2013), “ Xây dựng phát sinh chủng d loại số loài thuộc chi Bình vơi (Stephania) vườn Quốc gia Cúc Phương a lu nv dựa trình tự nucleotide vùng ITS, trnL matK”, Tạp chí Cơng nghệ f an sinh học, T 11, S.3 (2013) oi lm ul 23 Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở Công nghệ sinh học-tập 3, Nxb Giáo dục 24 Nguyễn Viết Thân - Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp hiển vi- NXB at nh khoa học kỹ thuật- 2003 Tr.57-59 25 Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội z z 26 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ Sinh học gm @ - T2, Nxb Giáo dục Nxb Giáo dục om l.c 27 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (1998), Sinh lý học thực vật, thuật Hà Nội an Lu 28 Viện dược liệu, Tài nguyên thuốc Việt Nam (1993), Nxb Khoa học Kỹ n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 50 29 Viện dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, Nxb Khoa học kỹ thuật 30 Dược điển Việt Nam, tập III Tr 321-322 31 Quyết định số 56/2007/QĐ-BNN năm 2007 “Về việc bổ sung 12 loài trồng vào danh mục loài trồng bảo hộ phân công đơn vị thực khảo nghiệm DUS” 32 Thủ tướng phủ Về việc phê duyệt "Chương trình nghiên cứu khoa học cơng nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hố dược đến năm 2020", số 61/2007/QĐ-TTg a lu II Tài liệu Tiếng Anh n n va 33 Behera K K., Pani D and Shahoo S (2010), “Effect of plant growth (Curcumar longa L.cv.Ranga)”, International Journal of Biological Technology, 1(1): 16 - 23 p ie gh tn to regulator on in vitro multiplucation of turmeric 34 Mutsuo Kozuka, Kryoe Miyaji, Tokunosuke Sawada Masao Tomita (1984), A major alkaloid of the leaves and stems of Stephania Rotunda, Kyoto oa nl w pharmaceutical University, Misasagy, yamasbina- ku, Kyoto 607, Japan 35 Nayak S., Parida R and Mohanty S (2011), “Evaluation of genetic fidelity d a lu of in vitro propagated greater Galangal (Alpinia galanga L.) using DNA f an nv based markers”, International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences, 1(3): 124 - 133 ul oi lm 36 Duong Tan Nhut, Nguyen Phuc Huy, Vu Quoc Luan, Nguyen Van Binh, Nguyen Ba Nam, Le Nu Minh Thuy, Dang Thi Ngoc Ha, Hoang Xuan Chien, nh at Trinh Thi Huong, Hoang Van Cuong, Le Kim Cuong and Vu Thi Hien z (2011), “Shoot regeneration and micropropagation of Panax vietnamensis Ha z Biotechnology, 10(84):19499 - 19504 gm @ et Grushv from ex vitro leaf-derived callus”, African Journal of om l.c 37 Sen A., Goyal A.K., Ganguly K and Mishra T (2010), “In vitro multiplication of Curcuma Longa Linn.- an important medicinal zingiber”, Journal of Plant an Lu Science, 4: 21 - 24 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 51 38 Shahinozzaman M., Faruq M O., Azad M A K and Amin M N (2013), “Studies on in vitro propagation of an important medicinal plant - Curcuma zedoaria Roscoe using rhizome explants”, Persian Gulf Crop Protection Available online, 2( 4): 1- 39 Sharma G.J., Sinha S.K and Chirangini P (2005), “In vitro propagation and microrhizome induction in Kaempferia galanga Linn and Kaempferia rotunda Linn.”, Indian Journal of Biotechnology, 4: 404 - 408 40 Fakhrutdinov Sf (1992), On the pharmacology of the alkaloid Roemerin and it derivatives, Med Zh Uzb a lu 41 Jala A and Patchpoonporn W (2012), “Effect of BA, NAA and 2,4-D on n n va micropropagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum makino)”, Sciences & Technologies, 3(4): 363 - 370 p ie gh tn to International Transaction Journal of Enginneering, Management, Applied 42.Jeffrey W Pollard and Jonh M Walker (1990), Method in Molecular Biology, Plant Cell and Tissue Culture oa nl w 43 Vaisht K and Kumar V (2002), “Trade production of herbal medicinal and natural health products”, United Nations Industrial Development Organization d III Tài liệu internet 44 WWW.duoclieu.org f an nv a lu and the International Centre for Science and High Technology ul oi lm 40 http://thaoduocminhtam.com/cay-thuoc-vi-thuoc/binh-voi-stephania-sinicadiels.html nh at 41 http://www.duoclieu.org/2012/03/binh-voi-stephania-spp-ho-tiet-de.html z 42 www.cayduoclieu.com z gm @ 43 http://123doc.org/doc-search-title/1341795-nghien-cuu-dac-diem-sinh-vat-hocva-nhan-giong-loai-cay-binh-voi-stehania-rotunda-lour-bang-phuong-phap- om l.c giam-hom.htm an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 PHỤ LỤC 1: MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY Table 1: Preparation of modified Murashige and Skoog’s (MS medium) Amount to Bottle Component Stock take Solution (g/l preparation Final concentratic (mg/l) (ml) NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 I a lu II n n va p ie gh tn to III d oa nl w IV FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 f an nv a lu V Pyridocine HCl 22,3 10 10,6 10 0,83 10 6,2 0,25 27,85 10 37,25 100 0,5 0,5 100 2,0 2,0 100 0,1 0,1 0,5 0,5 nh Thiamine acid 370,0 at Glycine oi lm Vitamin 1.900,0 mg/100ml ul Nicotinic acid 1.650,0 20 100 z @ om l.c 5,6-5,8 5.000,0 gm Agar pH 20.0000,0 z Sucrose an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE IRRISTAT 21/ 5/** 18:18 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NL -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 56.620 279.85 24 0.20 0.820 TLMN 8.8889 510.37 24 0.02 0.984 TLMC 48.472 112.63 24 0.43 0.660 a lu ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NDO$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 270.37 262.04 24 1.03 0.373 TLMN 1911.1 351.85 24 5.43 0.011 TLMC 477.78 76.852 24 6.22 0.007 n n va p ie gh tn to ANOVA FOR SINGLE EFFECT - TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 2359.3 87.963 24 26.82 0.000 TLMN 1377.8 396.30 24 3.48 0.046 TLMC 477.78 76.852 24 6.22 0.007 d oa nl w ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NDO$*TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 787.04 29.630 18 26.56 0.000 TLMN 1050.0 214.81 18 4.89 0.003 TLMC 283.33 29.630 18 9.56 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 21/ 5/** 18:18 PAGE MEANS FOR EFFECT NL TLMS 61.1111 63.7500 66.0000 TLMN 21.1111 22.5000 23.0000 f an oi lm ul NOS 10 nv a lu NL TLMC 17.7778 13.7500 18.0000 at nh SE(N= 9) 5.57623 7.53046 3.53753 5%LSD 24DF 16.2755 21.9793 10.3251 - z MEANS FOR EFFECT NDO$ - z TLMN 35.5556 24.4444 6.66667 TLMC 10.0000 15.5556 24.4444 om l.c TLMS 61.1111 60.0000 70.0000 gm NOS 9 @ NDO$ 0.1 0.15 0.2 SE(N= 9) 5.39585 6.25257 2.92217 5%LSD 24DF 15.7490 18.2495 8.52900 - an Lu MEANS FOR EFFECT TIME$ - n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 TIME$ NOS 9 10 12 15 TLMS 46.6667 78.8889 65.5556 TLMN 35.5556 20.0000 11.1111 TLMC 15.5556 10.0000 24.4444 SE(N= 9) 3.12629 6.63573 2.92217 5%LSD 24DF 9.12476 19.3678 8.52900 MEANS FOR EFFECT NDO$*TIME$ NDO$ a lu 0.1 0.1 0.1 0.1 0.15 0.15 0.15 0.2 0.2 0.2 TIME$ NOS n 10 12 15 10 12 15 10 12 15 TLMS 0.00 33.3333 83.3333 66.6667 43.3333 73.3333 63.3333 63.3333 80.0000 66.6667 3 3 3 3 TLMN 100 63.3333 10.0 20.0 40.0 16.6667 13.3333 10.0000 3.33333 6.66667 TLMC 0.00 3.33333 6.66667 13.3333 16.6666 10.0000 23.3333 26.6667 16.6666 26.6667 n va p ie gh tn to SE(N= 3) 3.14270 8.46197 3.14270 5%LSD 18DF 9.33741 25.1418 9.33741 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 21/ 5/** 18:18 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN oa nl w VARIATE |NDO$*TIM| (N= |E$ | | | | | 27) NO STANDARD DEVIATION C OF V |NL |NDO$ |TIME$ | | | | | | | | SD/MEAN | BASED ON % TOTAL SS RESID SS 16.207 5.4433 8.5 0.8199 0.3732 21.721 14.657 66.0 0.9835 0.0113 5.4433 32.7 0.6602 0.0067 d BASED ON 63.704 f an nv 22.222 10.377 oi lm 16.667 ul TLMS 27 0.0000 0.0000 TLMN 27 0.0463 0.0026 TLMC 27 0.0067 0.0000 a lu OBS at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 2: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ a lu n n va p ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSTS FILE 25/ 5/** 0:50 PAGE Anh huong cua BA den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim VARIATE V003 HSTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.17733 294333 24.53 0.000 * RESIDUAL 10 120000 120000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.29733 926667E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 0:50 PAGE Anh huong cua BA den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSTS 1.06667 1.63333 3 1.83333 1.50000 1.20000 d oa nl w SE(N= 3) 0.632456E-01 5%LSD 10DF 0.199289 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 0:50 PAGE Anh huong cua BA den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSTS 15 1.4467 0.30441 0.10954 7.6 0.0001 f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 3: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ a lu BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSTS FILE 22/ 5/** 16:37 PAGE Anh huong cua GA3 den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim VARIATE V003 HSTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 729333 182333 18.23 0.000 * RESIDUAL 10 100000 100000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 829333 592381E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 5/** 16:37 PAGE Anh huong cua GA3 den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ - n va CT$ n p ie gh tn to NOS 3 3 HSTS 1.10000 1.36667 1.73333 1.46667 1.20000 oa nl w SE(N= 3) 0.577350E-01 5%LSD 10DF 0.181925 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 5/** 16:37 PAGE Anh huong cua GA3 den kha nang tai sinh choi cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - d GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.3733 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.24339 0.10000 7.3 0.0002 f an nv | | | | oi lm ul HSTS a lu VARIATE at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 4: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA GA3 đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 30 ngày nuôi cấy a lu n n va p ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 25/ 5/** 13:57 PAGE Anh huong cua BA + GA3 den kha nang nhan nhanh cay Binh Voi Tim VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.47067 867667 52.06 0.000 * RESIDUAL 10 166667 166667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.63733 259810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 13:57 PAGE Anh huong cua BA + GA3 den kha nang nhan nhanh cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.80000 2.23333 3 2.56667 2.96667 1.66667 d oa nl w SE(N= 3) 0.745356E-01 5%LSD 10DF 0.234864 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 13:57 PAGE Anh huong cua BA + GA3 den kha nang nhan nhanh cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 15 2.2467 0.50972 0.12910 5.7 0.0000 f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 5: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy a lu n n va p ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 5/** 23:54 PAGE Anh huong cua BA+NAA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.22000 1.55500 59.81 0.000 * RESIDUAL 10 260000 260000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.48000 462857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 5/** 23:54 PAGE Anh huong cua BA+NAA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.70000 2.26667 3 3.50000 3.16667 2.86667 d oa nl w SE(N= 3) 0.930950E-01 5%LSD 10DF 0.293346 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 5/** 23:54 PAGE Anh huong cua BA+NAA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 15 2.7000 0.68034 0.16125 6.0 0.0000 f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 6: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA IBA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy a lu n n va p ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 25/ 5/** 3:26 PAGE Anh huong cua BA+IBA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.26267 315667 16.91 0.000 * RESIDUAL 10 186667 186667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.44933 103524 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 3:26 PAGE Anh huong cua BA+IBA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.80000 2.03333 3 2.63333 2.23333 1.93333 VARIATE d oa nl w SE(N= 3) 0.788811E-01 5%LSD 10DF 0.248557 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 3:26 PAGE Anh huong cua BA+IBA den kha nang nhan nhanh choi cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.32175 0.13663 6.4 0.0002 | | | | f an HSN nv a lu GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.1267 oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Thí nghiệm 7: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ IBA đến khả rễ Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy a lu n n va p ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE 25/ 5/** 12:20 PAGE Anh huong cua IBA den kha nangra re cay Binh Voi Tim VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 56.4293 14.1073 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 999960E-01 999960E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 56.5293 4.03781 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 12:20 PAGE Anh huong cua IBA den kha nangra re cay Binh Voi Tim MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLRR 0.000000 1.66667 3 3.03333 4.00000 5.66667 d oa nl w SE(N= 3) 0.577339E-01 5%LSD 10DF 0.181921 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 12:20 PAGE Anh huong cua IBA den kha nangra re cay Binh Voi Tim F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLRR 15 2.8733 2.0094 0.99998E-01 3.5 0.0000 f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CNSH-CNTP Độc lập- Tự do- Hạnh phúc PHIẾU NHẬN XÉT KHÓA LUẬN (Dành cho giảng viên hướng dẫn) Họ tên người nhận xét: ThS Nguyễn Thị Tình Đơn vị cơng tác: Khoa CNSH – CNTP – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Tên sinh viên: Lý Thị Liễu lớp: 43 CNSH a lu Tên đề tài khóa luận: “Nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh n trưởng đến khả tái sinh nhân nhanh chồi Bình vơi tím (Stephania n va rotunda Lour)” tn to Thuộc chuyên ngành: Công nghệ sinh học p ie gh Ý kiến nhận xét Về ý thức sinh viên thời gian TTTN oa nl w Trong thời gian nghiên cứu sinh viên Lý Thị Liễu ln chấp hành nội quy phịng thí nghiệm, tự giác, sáng tạo, chủ động khắc phục khó khăn nghiên cứu, d trung thực với số liệu thí nghiệm a lu nv Bố cục, hình thức khóa luận f an - Bố cục hợp lý, hình ảnh rõ ràng, lỗi tả, tài liệu tham khảo sinh oi lm ul viên sử dụng cập nhật, xác Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu at nh 3.1 Nội dung z Để đạt mục đích nghiên cứu đề tài sinh viên bố trí 04 nội dung z @ với nhiều thí nghiệm nghiên cứu om l.c trùng cho nuôi cấy in vitro gm - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô - Nghiên cứu ảnh hưởng số auxin cytokinin đến khả tái sinh chồi an Lu Bình vơi tím n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99
Ngày đăng: 25/09/2023, 18:54
Xem thêm:
