(Tiểu luận) ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocybin và psilocin trong nấm thần

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÀI BÁO CÁO SEMINAR ĐỘC CHẤT HỌC ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC PSILOCYBIN VÀ PSILOCIN TRONG “NẤM THẦN” Hướng dẫn: PGs.Ts Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Thực hiện: Nhóm – Dược K45 Cần Thơ – 8/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT BÀI BÁO CÁO SEMINAR ĐỘC CHẤT HỌC ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC PSILOCYBIN VÀ PSILOCIN TRONG “NẤM THẦN” STT Họ tên MSSV Huỳnh Thanh Huynh 1953030019 Lâm Quang Khải 1953030020 Huỳnh Kim Lân 1953030027 Mai Trọng Hoàng Long 1953030031 Nguyễn Hồ Trung Nhân 1953030042 Trần Dũng Tâm 1953030058 Trương Phú Vinh 1953030096 Trần Hữu Lộc 1953030097 Nguyễn Minh Tuấn Anh 1953030101 i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Nguồn gốc, thành phần hóa học, tính chất lý hóa .3 1.1 Nguồn gốc 1.2 Thành phần hóa học “nấm thần” 1.2.1 Psilocybin 1.2.2 Psilocin 1.3 Điều chế tổng hợp .7 Độc tính, chế gây độc xử trí ngộ độc “Nấm thần” 2.1 Độc tính .8 2.2 Cơ chế gây độc 2.3 Xử trí ngộ độc “ Nấm thần” .10 Phân tích, so sánh phương pháp định tính, định lượng psilocybin psilocin “nấm thần” 11 3.1 Phương pháp miễn dịch 11 3.1.1 Chuẩn bị mẫu 11 3.1.2 Tiến hành 14 3.2 Phương pháp GC-MS 14 3.2.1 Giới thiệu phương pháp 14 3.2.2 Định tính định lượng phương pháp GC-MS 15 3.3 Phương pháp LC-MS 19 3.3.1 Giới thiệu phương pháp 19 3.3.2 Tiến hành 20 3.4 Phân tích, so sánh, bàn luận: 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Stt Chữ viết tắt 5-HT Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt CE Collision Energy DMT N-dimethyltrytamine DP Decoding Potential Tiềm giải mã ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Phản ứng miễn dịch enzyme GC-MS Gas Chromatography– Mass Spectrometry hệ thống sắc ký quang khối phổ HAT Hypoxanthine-AminopterinThymidine HPLC High-Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IS 5-hydroxytryptamine Internal Standard Tiêu chuẩn nội 10 LC-MS Liquid Chromatography– Mass Spectrometry Sắc ký lỏng - khối phổ 11 LC-MS/MS Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry Sắc ký lỏng khối phổ song song 12 LLOQ Lower Limit Of Quantification Giới hạn Định lượng thấp 13 LOD Limit of Detection Giới hạn phát 14 MSTFA N-Methyl-Ntrimethylsilyltrifluoroacetamide 15 PCG Psilocin Glucuronide 16 Psi Psilocin 17 Pyb Psilocybin 18 QC Quality Control Kiểm tra chất lượng iii Stt Chữ viết tắt 19 RT Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt Retention Time Thời gian lưu 20 SIM Selected Ion Monitoring 21 TMS Trimethylsilyl Kĩ thuật phân tích dấu vết 22 UGTs Uridine 5'-diphosphoglucuronosyltransferase iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tiến trình rửa giải gradient cho hiệu suất cực cao sắc ký lỏng – khối phổ song song (UHPLC – MS/MS) 22 Bảng Quá trình chuyển đổi theo dõi nhiều phản ứng (MRM) thời gian lưu chất phân tích chất chuẩn nội (IS) cho UHPLC–MS/MS 22 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Nấm vàng Cuba Hình Nấm phiến đốm xanh .4 Hình Cấu trúc psilocybin Hình Con đường sinh tổng hợp psilocybin “nấm thần” Hình Cấu trúc psilocin Hình Sự chuyển hóa psilocybin thể Hình Đặc điểm hình thái loại nấm sử dụng nghiên cứu 11 Hình Tóm tắt tổng hợp dẫn xuất haptenic liên hợp chúng với protein mang để tạo mAbs chống lại Pyb (tuyến A) Psi (tuyến B) 12 Hình 3 ELISA để xác định hàm lượng Pyb Psi nấm 13 Hình Phản ứng nhóm Hydroxyl (Silyl hóa) với MSTFA 15 Hình So sánh khối phổ dẫn xuất psilocybin-TMS hợp chất từ dịch chiết nước tiểu 18 Hình Sắc ký đồ ion dịch chiết huyết 18 Hình Các sắc ký đồ theo dõi ion chọn psilocin (a) psilocybin (b) nấm gây ảo giác phân tích cơng nghệ sắc ký khí - khối phổ 25 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Trong “trào lưu” sử dụng số ma túy bánh lười, khát… “nấm thần” lên thú vui sành điệu phận giới trẻ Điều nguy hiểm có nhiều trang mạng giới thiệu cách trồng, nơi mua, chí cam kết sẵn sàng vận chuyển cho đặt từ gam nấm trở lên, đồng thời có nhiều video chia sẻ cách chuẩn bị, cách sử dụng báo trước “trải nghiệm” sử dụng loại nấm [15] Được trồng làm chất gây nghiện ứng dụng điều trị cho số bệnh lý thần kinh trung ương nên “ngộ độc nấm” việc tránh khỏi thường gặp nước châu Âu “Nấm thần” loại ma túy nguy hiểm hay gọi nhiều tên như: “Nấm ảo giác”, “Nấm ma thuật”, “Nấm thức thần”… mọc tự nhiên nhiều nơi giới Bắc mỹ, Mexico, Nam Mỹ, bán đảo Scandinavia vài vùng Châu Á, người dân Châu Mỹ sử dụng nấm thần lâu trước người Châu Âu đặt chân đến vùng đất [43] Có nhiều trường hợp tử vong sử dụng liều “nấm thần”, psilocin psilocybin hai hoạt chất có nấm bị đưa vào Công ước Liên Hiệp Quốc từ năm 1971 bị cấm hầu hết quốc gia giới Ở Việt Nam, psilocybin psilocin có danh mục cấm từ năm 1995 [44] Với phát triển không ngừng khoa học kỹ thuật, người biết ứng dụng phương pháp kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocin psilocybin có “nấm thần” Năm 1981, Michael Wiliam Beug Jeremy Bigwood sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sắc ký lớp mỏng để phân tích định lượng psilocybin psilocin có lồi Psilocybe baeocystis [5] Năm 1999, Thomas Keller cộng phân tích psilocybin psilocin Psilocybe subcubensis phép đo phổ di động ion sắc ký khí - khối phổ [21] Năm 2021, Liying Zhou cộng ứng dụng ưu kỹ thuật sắc ký việc phân tích định lượng chất độc psilocin psilocybin có tóc người sử dụng “nấm thần” [42] Đặc biệt tìm thấy nhiều tự nhiên Việt Nam [44] Tuy nhiên chưa có cơng bố nước việc sử dụng phương pháp sắc ký phân tích chất độc “nấm thần” Vì định tiến hành bàn luận việc “Ứng dụng kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocybin psilocin “nấm thần”” để làm tiền đề cho nghiên cứu sau Nguồn gốc, thành phần hóa học, tính chất lý hóa “Nấm thần” gọi với nhiều tên “Nấm Psilocybe”, “Nấm ảo giác”, “Nấm ma thuật” hay “Nấm thức thần” mọc tự nhiên nhiều nơi giới Bắc mỹ, Mexico, Nam Mỹ, bán đảo Scandinavia vài vùng Châu Á, đặc biệt tìm thấy tự nhiên Việt Nam Trong tự nhiên “nấm thần” có nhiều loại, Việt Nam có loại phổ biến: – Nấm vàng Cuba (Psilocybe cubensis): có màu nâu đỏ phớt nâu phớt vàng Mũ nấm rộng từ 1,5 – 10 cm, hình nón hình oval Khi khơ màu sắc biến đổi sang trắng nâu trắng vàng, vàng hồn tồn nâu vàng Thịt nấm có màu trắng, đổi màu xanh dương bị dập Bào tử có màu nâu tím thẫm đen Thường mọc phân gia xúc trâu, bò, ngựa chất xác thực vật, xơ dừa… Hình 1 Nấm vàng Cuba – Nấm phiến đốm xanh (Panaeolus cyanescens): mũ nấm có đường kính từ 1,5 – cm, khơng dẻo, có màu nâu ẩm, màu xám trắng khơ Bào tử có màu thẫm đen, bầm dập có màu xanh dương, mặt mũ màu xám đen, mặt có vết chấm Thường mọc gần bãi phân gia xúc Phân bổ vùng khí hậu nhiệt đới cận nhiệt bán cầu Bắc Nam