Nghiên cứu định lượng một số kháng sinh β lactambằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (ce c4d)

MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan kháng sinh 1.2 Tổng quan kháng sinh nhóm β-lactam 1.2.1 Phân loại, cấu trúc kháng sinh nhóm β-lactam 1.2.2 Tính chất, chế, độc tính phạm vi điều trị kháng sinh β-lactam 1.3 Giới thiệu kháng sinh nghiên cứu 1.4 Các phƣơng pháp phân tích riêng rẽ, đồng thời hoạt chất kháng sinh 12 1.4.1 Các phƣơng pháp phân tích riêng rẽ hoạt chất kháng sinh 12 1.4.1.1 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis) 12 1.4.1.2 Phƣơng pháp điện hoá 13 1.4.2 Các phƣơng pháp phân tích đồng thời hoạt chất kháng sinh 14 1.4.2.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 14 1.4.2.2 Phƣơng pháp điện di mao quản (CE) 17 1.4.2.2.1 Tổng quan số nghiên cứu xác định hàm lƣợng hoạt chất số dạng mẫu dƣợc phẩm 17 1.4.2.2.2 Nguyên tắc chung phƣơng pháp điện di mao quản CE-C4D 19 1.4.2.2.3 Cấu tạo hệ CE 19 1.4.2.2.4 Các kỹ thuật bơm mẫu CE 21 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 23 2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.2 Trang thiết bị, dụng cụ hoá chất 24 2.2.1 Trang thiết bị, dụng cụ 24 2.2.1.1 Thiết bị 24 2.2.1.2 Dụng cụ: 24 2.2.2 Hoá chất: 25 2.2.2.1 Chất chuẩn: 25 2.2.2.2 Hóa chất dung môi: 25 2.2.2.3 Chuẩn bị dung dịch hóa chất 25 2.3 Thông tin mẫu phƣơng pháp xử lý mẫu thuốc 26 2.3.1 Thông tin mẫu thuốc 26 2.3.2 Phƣơng pháp xử lí mẫu 27 2.4 Các thông số đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 28 2.4.1 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp phân tích 28 2.4.2 Độ chụm (độ lặp lại) phƣơng pháp 28 2.4.3 Độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 28 CHƢƠNG 3: K T QUẢ VÀ THẢO LU N 31 3.1 Nghiên cứu khảo sát phân tích đồng thời bốn hoạt chất kháng sinh nhóm b ng phƣơng pháp điện di mao quản CE-C4D 31 3.1.1 Tối ƣu hoá điều kiện phân tích 31 3.1.1.1 Khảo sát loại đệm pH dung dịch đệm điện di 31 3.1.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ hệ đệm điện di 33 3.1.1.3 Khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 34 3.1.1.4 Khảo sát thời gian bơm mẫu 36 3.1.1.5 Khảo sát chiều cao bơm mẫu 37 3.1.2 Xây dựng đƣờng chuẩn đánh giá phƣơng pháp phân tích 38 3.1.2.1 Đƣờng chuẩn xác định bốn hoạt chất kháng sinh Cefalexin, Cefotaxime Natri, Sulbactam Cefixime 38 3.1.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 40 3.1.2.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) 41 3.2 Nghiên cứu khảo sát phân tích đồng thời bốn hoạt chất kháng sinh nhóm b ng phƣơng pháp điện di mao quản CE-C4D 41 3.2.1 Tối ƣu hoá điều kiện phân tích 41 3.2.1.1 Khảo sát loại đệm pH dung dịch đệm 41 3.2.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ đệm điện di 43 3.2.1.3 Khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 44 3.2.1.4 Khảo sát thời gian bơm mẫu chiều cao bơm mẫu 45 3.2.2 Xây dựng đƣờng chuẩn đánh giá phƣơng pháp phân tích 46 3.2.2.1 Đƣờng chuẩn xác định bốn hoạt chất kháng sinh Amoxcillin, Ampicillin, Cefoperazone Sulbactam 46 3.2.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 48 3.2.2.3 Đánh giá độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 48 3.3 Phân tích mẫu thực tế 49 3.3.1 Các mẫu dƣợc phẩm chứa hoạt chất nhóm 49 3.3.2 Các mẫu dƣợc phẩm chứa hoạt chất nhóm 51 3.4 Phân tích đối chứng phƣơng pháp CE-C4D với phƣơng pháp LC-MS/MS 54 K T LU N 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 63 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo kháng sinh penicillin Hình 1.2 Công thức cấu tạo kháng sinh cephalosporin Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo hệ thiết bị phân tích điện di mao quản 19 Hình 1.4 Mặt cắt ngang bề mặt mao quản 20 Hình 1.5 Lớp điện tích kép bề mặt mao quản 20 Hình 1.6 Các phƣơng pháp bơm mẫu phƣơng pháp điện di mao quản 22 Hình 2.1 Ảnh chụp hệ thiết bị CE-C4D 24 Hình 3.1 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ascobic pH khác 32 Hình 3.2 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ace pH khác 32 Hình 3.3 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ace pH khác 32 Hình 3.4 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Tris hệ đệm điện di 34 Hình 3.5 Kết khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 35 Hình 3.6 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 36 Hình 3.7 Kết khảo sát ảnh hƣởng chiều cao bơm mẫu 38 Hình 3.8 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ascobic pH khác 42 Hình 3.9 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ace pH khác 42 Hình 3.10 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ascobic pH khác 43 Hình 3.11 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ace pH khác 43 Hình 3.12 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Tris hệ đệm điện di 44 Hình 3.13 Kết khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 45 Hình 3.14 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 45 Hình 3.15 Kết khảo sát ảnh hƣởng chiều cao bơm mẫu 46 Hình 3.16 Điện di đồ phân tích mẫu CFX1 50 Hình 3.17 Điện di đồ phân tích mẫu CFL4 50 Hình 3.18 Điện di đồ phân tích mẫu CFT2 ống tiêm 50 Hình 3.19 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AM1 52 Hình 3.20 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AP1 52 Hình 3.21 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc APvSB1 ống tiêm 53 Hình 3.22 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AMvSB1 53 Hình 3.23 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AMvSB3 53 Hình 3.24 Đồ thị tƣơng quan kết phân tích số mẫu dƣợc phẩm b ng phƣơng pháp CE-C4D LC-MS/MS 55 Hình PL.1 Đƣờng chuẩn Cefalexine theo diện tích pic 70 Hình PL.2 Đƣờng chuẩn Cefotaxime Natri theo diện tích pic 70 Hình PL.3 Đƣờng chuẩn Sulbactam theo diện tích pic 71 Hình PL.4 Đƣờng chuẩn Cefixime theo diện tích pic 71 Hình PL.5 Đƣờng chuẩn Amoxcillin theo diện tích pic 73 Hình PL.6 Đƣờng chuẩn Ampicillin theo diện tích pic 73 Hình PL.7 Đƣờng chuẩn Cefoperazone theo diện tích pic 74 Hình PL.8 Đƣờng chuẩn Sulbactam theo diện tích pic 74 Hình PL.9 Điện di đồ phân tích mẫu CFX2 75 Hình PL.10 Điện di đồ phân tích mẫu CFX3 76 Hình PL.11 Điện di đồ phân tích mẫu CFL5 76 Hình PL.12 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-CH1 76 Hình PL.13 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-QT1 77 Hình PL.14 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QT1 77 Hình PL.15 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QD1 77 Hình PL.16 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-KD1 78 Hình PL.17 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-KD1 78 Hình PL.18 Điện di đồ phân tích mẫu AM2 78 Hình PL.19 Điện di đồ phân tích mẫu AM3 79 Hình PL.20 Điện di đồ phân tích mẫu AM4 79 Hình PL.21 Điện di đồ phân tích mẫu AP2 79 Hình PL.22 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH1 80 Hình PL.23 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH2 80 Hình PL.24 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QT1 80 Hình PL.25 Điện di đồ phân tích mẫu AM-QD1 81 Hình PL.26 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QD1 81 Hình PL.27 Điện di đồ phân tích mẫu AM-KD1 81 Hình PL.28 Điện di đồ phân tích mẫu AP-KD1 82 Hình PL.29 Điện di đồ phân tích mẫu CPvSB ống tiêm 82 Hình PL.30 Điện di đồ phân tích mẫu AMvSB2 ống tiêm 82 Hình PL.31 Điện di đồ phân tích mẫu APvSB2 ống tiêm 83 Hình PL.32 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM2 AM3 b ng pp LC-MS/MS 83 Hình PL.33 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM4 Amoxcillin (AMvSB1, AMvSB2) b ng pp LC-MS/MS 84 Hình PL.34 Sắc kí đồ phân tích mẫu AP1, AP2 Ampicillin (APvSB1) b ng pp 84 Hình PL.35 Sắc kí đồ phân tích mẫu CPvSB (Cefoperazone) b ng pp LC-MS 85 Hình PL.36 Sắc kí đồ phân tích hoạt chất Sulbactam (ABvSB1, CPvSB, 85 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại, cấu trúc số penicillin Bảng 1.2 Công thức, đặc điểm tác dụng kháng sinh nghiên cứu Bảng 1.3 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng 12 Bảng 1.4 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng 13 Bảng 1.5 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 15 Bảng 1.6 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng pháp điện di mao quản 17 Bảng 2.1 Thơng tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 26 Bảng 2.2 Thơng tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 26 Bảng 3.1 Kết phụ thuộc diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) 33 Bảng 3.2 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc bốn chất vào chiều 35 Bảng 3.3 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc chất vào thời 36 Bảng 3.4 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc chất vào chiều 37 Bảng 3.5 Điều kiện tối ƣu cho phân tích bốn chất b ng phƣơng pháp CE-C4D 38 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ chất 39 Bảng 3.7 Phƣơng trình đƣờng chuẩn, hệ số tƣơng quan chất nhóm 39 Bảng 3.8 Kết so sánh giá trị a với giá trị đƣờng chuẩn nhóm 40 Bảng 3.9 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng bốn chất 40 Bảng 3.10 Sự phụ thuộc Spic tdc bốn chất vào nồng độ đệm điện di 43 Bảng 3.11 Sự phụ thuộc Spic tdc chất vào chiều dài hiệu dụng mao quản 44 Bảng 3.12 Điều kiện tối ƣu cho phân tích nhóm (Amoxcillin, Ampicillin, Cefoperazone Sulbactam) b ng phƣơng pháp CE-C4D 46 Bảng 3.13 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ chất 47 Bảng 3.14 Phƣơng trình đƣờng chuẩn, hệ số tƣơng quan chất nhóm 47 Bảng 3.15 Kết so sánh giá trị a với giá trị đƣờng chuẩn nhóm 48 Bảng 3.16 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng chất 48 Bảng 3.17 Hàm lƣợng hoạt chất Cefalexine, Cefotaxime, Sulbactam Cefixime 49 Bảng 3.18 Hàm lƣợng hoạt chất Amoxcillin, Ampicillin, Cefaperazone Sulbactam mẫu dƣợc phẩm 51 Bảng 3.19 Kết phân tích hàm lƣợng số mẫu thuốc b ng phƣơng 54 Bảng PL.1 Thông tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 63 Bảng PL.2 Thông tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 65 Bảng PL.3 Kết xác định độ lặp lại phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng bốn chất thuộc nhóm 72 Bảng PL.4 Độ thu hồi nhóm (Cefalexine, Cefotaxime Natri, Cefixime Sulbactam) 72 Bảng PL.5 Độ thu hồi nhóm (Amoxcillin; Ampicillin; Cefoperazone Sulbactam) 75 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên đầy đủ Ace Acetic AMO Amoxcillin AMP Ampicillin AOAC Hiệp hội nhà Hóa học phân tích Arg L - arginin Asc Ascobic C4D Detector độ dẫn không tiếp xúc CE Phƣơng pháp điện di mao quản CFL Cefalexin CFP Cefoperazone CFT Cefotaxime CFX Cefixime CRM Vật liệu chuẩn đối chứng EOF Dòng điện di thẩm thấu His Histidin HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao ID Đƣờng kính (của mao quản) LC-MS/MS Sắc kí lỏng khối phổ hai lần LOD Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lƣợng MEKC Điện di mao quản điện động học Mixen RSD Độ lệch chuẩn tƣơng đối SBT Sulbactam SD Độ lệch chuẩn Tris – Amino – - (hydroxymethyl) propan – 1,3 – diol UV-Vis Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử MỞ ĐẦU Kháng sinh chất kháng khuẩn đƣợc chiết xuất từ chủng vi sinh vật, nấm, đƣợc tổng hợp bán tổng hợp, có khả ức chế vi khuẩn hay kìm hãm phát triển vi khuẩn khác cách đặc hiệu Nhờ có thuốc kháng sinh giúp kiểm sốt đƣợc nhiều dịch bệnh nguy hiểm vi khuẩn gây Kháng sinh nhóm thuốc thiết yếu y học, quan trọng nhóm β-lactam gồm kháng sinh có cấu trúc hóa học chứa vịng β-lactam Sự liên kết vòng với cấu trúc khác hình thành phân nhóm khác nhƣ: penicilin, cephalosporin β-lactam khác Lƣợng kháng sinh β-lactam sử dụng y học lớn phổ biến với nhiều chế phẩm khác thị trƣờng Trên giới, nhu cầu sử dụng thuốc kháng sinh ngày tăng, đặc biệt nƣớc phát triển, nhiễm khuẩn n m số bệnh lý hàng đầu tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong Theo tổ chức y tế Thế giới (WHO), Việt Nam đƣợc xếp vào nhóm nƣớc có tỷ lệ kháng kháng sinh cao thuộc nhóm sử dụng nhiều kháng sinh [3,8,20] Yếu tố định đến chất lƣợng thuốc kháng sinh hàm lƣợng hoạt chất có thuốc Nếu hàm lƣợng vƣợt mức cho phép gây tình trạng nhờn thuốc, kháng thuốc làm tác dụng thuốc Nếu hàm lƣợng hoạt chất bị thiếu so với quy định không đủ hiệu lực để kháng lại vi khuẩn gây bệnh làm giảm tác dụng thuốc Do đó, việc kiểm nghiệm hàm lƣợng hoạt chất mẫu thuốc đóng vai trị quan trọng Một số phƣơng pháp đƣợc dùng để phân tích riêng rẽ đồng thời hoạt chất kháng sinh mẫu thuốc nhƣ: Phƣơng pháp phân tích quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis), phƣơng pháp điện hóa, phƣơng pháp sắc ký (HPLC), phƣơng pháp điện di mao quản (CE) Để giảm chi phí tiết kiệm thời gian phân tích việc xây dựng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời nhiều kháng sinh nhóm β-lactam cần thiết Nhận thấy phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn khơng tiếp xúc (CE-C4D) có tiềm việc kiểm nghiệm thuốc, nguyên liệu bán thành phẩm thuốc, nhƣ hoạt chất kháng sinh thuốc Do có nhiều ƣu điểm nhƣ thời gian phân tích nhanh, xác, xử lý mẫu đơn giản, thiết bị nhỏ gọn phù hợp để phân tích trƣờng Vì vậy, đề tài “Nghiên cứu định lượng số kháng sinh β-lactam phương pháp diện di mao quản sử dụng detector (CE-C4D)” đƣợc lựa chọn, với hi vọng góp phần nhỏ vào việc xây dựng quy trình kiểm nghiệm hoạt chất kháng sinh số mẫu thuốc lƣu hành thị trƣờng Đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng bốn chất thuộc nhóm Bảng PL.22 Kết xác định độ lặp lại phương pháp CE-C4D định lượng bốn chất thuộc nhóm Lần đo/ngày Cefalexin Cefotaxim Sulbactam Cefixime Nồng độ (ppm) 20 50 80 20 50 80 20 50 80 20 50 80 3,4 8,1 13,6 2,1 5,9 9,8 2,7 6,9 11,6 1,8 3,8 5,7 3,5 7,9 13,3 2,0 6,1 9,7 2,8 7,0 11,4 1,9 4,0 5,9 3,3 8,3 13,4 2,1 5,9 10,0 2,7 7,1 11,3 1,7 3,9 6,0 3,4 8,2 13,1 2,0 6,2 9,6 2,6 6,8 11,5 1,8 3,8 5,6 Spic tb 3,3 8,0 13,5 2,1 6,3 9,8 2,7 6,7 11,2 1,7 3,7 5,8 (mV.s) 3,4 8,1 13,4 2,1 6,1 9,8 2,7 6,9 11,4 1,8 3,8 5,8 RSD (%) 2,5 2,0 1,4 2,8 2,9 1,5 2,8 2,3 1,4 2,8 2,6 2,7 Đánh giá độ thu hồi phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng bốn hoạt chất nhóm Bảng PL.23 Độ thu hồi nhóm (Cefalexine, Cefotaxime Natri, Cefixime Sulbactam) Chất phân tích Cefalexine Cefotaxime Natri Cefixime Mức (ppm) Nồng độ thêm chuẩn (ppm) Nồng độ thu hồi (ppm) 60 80 100 60 80 100 60 80 100 40,0 60,0 80,0 40,0 60,0 80,0 40,0 60,0 80,0 39,5 60,5 79,7 40,3 59,7 80,3 40,4 59,6 80,6 72 RSD (%) (n = 3) Độ thu hồi (%) 0,90 0,58 0,27 0,53 0,36 0,26 0,70 0,47 0,53 98,8 101 99,6 101 99,5 100 101 99,3 100,8 Độ thu hồi trung bình (%) 99,7 ± 1,0 100,2 ± 0,6 100,4 ± 0,9 60 80 100 Sulbactam 40,0 60,0 80,0 0,90 0,47 0,18 39,5 60,4 79,8 98,8 100,7 99,8 99,7 ± 1,0 Đƣờng chuẩn Amoxcillin; Ampicillin; Cefoperazone Sulbactam nhóm Amoxcillin 09 Diện tích pic (mV) 08 07 06 05 04 03 y = (0.1129±0.0010)x + (0.6429±0.0452) R² = 0.9996 02 01 00 10 20 30 40 50 60 70 80 Nồng độ (ppm) Hình PL.29 Đường chuẩn Amoxcillin theo diện tích pic Diện tích pic (mV) Ampicillin 10 09 08 07 06 05 04 03 02 01 00 y = (0.1143±0.0013)x + (0.6571±0.0571) R² = 0.99938 10 20 30 40 50 60 70 Nồng độ (ppm) Hình PL.30 Đường chuẩn Ampicillin theo diện tích pic 73 80 Cefoperazone 08 Diện tích pic (mV) 07 06 05 04 y = (0.0971±0.0009)x + (0.3857±0.0404) R² = 0.99957 03 02 01 00 10 20 30 40 50 60 70 80 Nồng độ (ppm) Hình PL.31 Đường chuẩn Cefoperazone theo diện tích pic Sulbactam 12 Diện tích pic (mV) 10 08 06 04 y = (0.1411±0.0020)x + (0.1143±0.0878) R² = 0.99903 02 00 10 20 30 40 50 60 70 Nồng độ (ppm) Hình PL.32 Đường chuẩn Sulbactam theo diện tích pic 74 80 Đánh giá độ thu hồi phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng bốn hoạt chất thuộc nhóm Bảng PL.24 Độ thu hồi nhóm (Amoxcillin; Ampicillin; Cefoperazone Sulbactam) Chất phân tích Amoxcillin Ampicillin Cefoperazone Sulbactam Mức (ppm) Nồng độ thêm chuẩn (ppm) Nồng độ thu hồi (ppm) 50 60 70 50 60 70 50 60 70 50 60 70 30,0 40,0 50,0 30,0 40,0 50,0 30,0 40,0 50,0 30,0 40,0 50,0 29,5 40,4 49,6 RSD (%) (n = 3) Độ thu hồi (%) 1,20 0,70 0,57 0,93 0,87 0,28 1,16 0,53 0,70 0,71 0,36 0,84 98,3 101,0 99,2 101,3 101,3 99,6 101,7 99,3 101,0 99,0 99,5 101,2 30,4 40,5 49,8 30,5 39,7 50,5 29,7 39,8 50,6 Độ thu hồi trung bình (%) 99,5± 1,4 107,7 ± 1,0 100,6 ± 1,2 99,9 ± 1,2 Điện di đồ số mẫu nhóm (a) mV (b) 200 300 400 500 600 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.33 Điện di đồ phân tích mẫu CFX2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 75 700 (a) mV (b) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.34 Điện di đồ phân tích mẫu CFX3 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (a) (b) 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.35 Điện di đồ phân tích mẫu CFL5 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (a) mV (b) 200 300 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.36 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-CH1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 76 500 (b) mV (a) 200 400 600 800 1000 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.37 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.38 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 200 300 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.39 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 77 500 (b) mV (a) 200 400 600 800 1000 1200 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.40 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (b) (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.41 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn Điện di đồ số mẫu nhóm (a) mV (b) 120 140 160 180 200 220 240 260 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.42 Điện di đồ phân tích mẫu AM2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 78 280 (a) mV (b) 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.43 Điện di đồ phân tích mẫu AM3 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (a) mV (b) 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.44 Điện di đồ phân tích mẫu AM4 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (a) (b) 140 160 180 200 220 240 260 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.45 Điện di đồ phân tích mẫu AP2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 79 280 300 (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.46 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.47 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.48 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 80 450 (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.49 Điện di đồ phân tích mẫu AM-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.50 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.51 Điện di đồ phân tích mẫu AM-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 81 500 (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.52 Điện di đồ phân tích mẫu AP-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (SBT) mV (a) (CFP) (b) 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.53 Điện di đồ phân tích mẫu CPvSB ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (SBT) (AMO) (a) mV (b) 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.54 Điện di đồ phân tích mẫu AMvSB2 ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 82 (SBT) (a) (AMP) (b) mV 200 300 400 500 600 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.55 Điện di đồ phân tích mẫu APvSB2 ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn Sắc í đồ đƣờng chuẩn phân tích mẫu dƣợc phẩm phƣơng pháp LCMS/MS Hình PL.56 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM2 AM3 pp LC-MS/MS 83 Hình PL.57 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM4 Amoxcillin (AMvSB1, AMvSB2) pp LC-MS/MS Hình PL.58 Sắc kí đồ phân tích mẫu AP1, AP2 Ampicillin (APvSB1) pp LC-MS/MS 84 Hình PL.59 Sắc kí đồ phân tích mẫu CPvSB (Cefoperazone) pp LC-MS Hình PL.60 Sắc kí đồ phân tích hoạt chất Sulbactam (ABvSB1, CPvSB, AMvSB1, AMvSB2) pp LC-MS/MS 85 10 Đánh giá độ phù hợp giữ phƣơng pháp CE-C4D phƣơng pháp LC-MS/MS Paired T-Test and CI: PP LC-MS/MS PP CE-C4D Paired T for PP LC-MS/MS - PP CE-C4D N PP LC-MS/MS 12 PP CE-C4D 12 Difference 12 Mean 634,7 605,8 28,8 StDev 275,9 252,0 45,8 SE Mean 79,6 72,8 13,2 95% CI for mean difference: (-0,3 58,0) T-Test of mean difference = (vs ≠ 0): T-Value = 2,18 P-Value = 0,052 86