Bước đầu nghiên cứu cơ chế hóa sinh và tác dụng của rau đắng biển ( bacopa monnieri (l ) wettst) trên mô hình tự kỷ thực nghiệm gây bowiri muối valproat

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - PHẠM ANH TÙNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ HÓA SINH VÀ TÁC DỤNG CỦA RAU ĐẮNG BIỂN (Bacopa monnieri (L.) Wettst) TRÊN MƠ HÌNH TỰ KỶ THỰC NGHIỆM GÂY BỞI MUỐI VALPROAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - PHẠM ANH TÙNG MÃ SINH VIÊN: 1601856 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ HÓA SINH VÀ TÁC DỤNG CỦA RAU ĐẮNG BIỂN (Bacopa monnieri (L.) Wettst) TRÊN MƠ HÌNH TỰ KỶ THỰC NGHIỆM GÂY BỞI MUỐI VALPROAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng PGS.TS Nguyễn Thị Lập Nơi thực hiện: Khoa Dược lý-Sinh hóa Viện Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, Trưởng Khoa Dược lý-Sinh hóa, Viện Dược liệu, người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Lập, Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Dược Hà Nội, nhận hướng dẫn tơi tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành khóa luận Kế đến, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến anh chị làm việc Khoa Dược lý-Sinh hóa, Viện Dược liệu, hướng dẫn tận tình tạo điều kiện tốt cho khoảng thời gian làm thực nghiệm Khoa Nhân đây, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu toàn thể thầy cô trường giảng dạy tận tình tạo điều kiện khoảng thời gian tơi học tập trường để tơi có tảng kiến thức để hồn thành khóa luận hành nghề sau Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè tơi động viên, chia sẻ, ủng hộ chỗ dựa tinh thần vững đường nghiên cứu khoa học Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân cịn hạn chế, nên khóa luận khơng tránh khỏi nhiều thiếu sót Tơi mong nhận góp ý thầy cơ, bạn bè để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Phạm Anh Tùng i MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỐ DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan rối loạn phổ tự kỷ 1.1.1 Sơ lược rối loạn phổ tự kỷ 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Nguyên nhân yếu tố nguy 1.1.4 Vai trò PTEN ASD .5 1.1.5 Dấu hiệu, triệu chứng chẩn đoán 1.1.6 Điều trị 1.1.7 Các mô hình gây tự kỷ đánh giá hành vi động vật 12 1.2 Tổng quan Rau đắng biển Bacopa monnieri (L.) Wettst 13 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố .13 1.2.2 Thành phần hóa học Rau đắng biển .14 1.2.3 Công dụng Rau đắng biển 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu .18 2.1.1 Nguồn gốc 18 2.1.2 Cao khô Rau đắng biển .18 2.2 Nguyên vật liệu, trang thiết bị, hóa chất 19 2.2.1 Động vật thí nghiệm 19 2.2.2 Hóa chất trang thiết bị thí nghiệm 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Phương pháp gây mơ hình chuột tự kỷ thực nghiệm muối natri valproat .23 ii C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng cải thiện ASD cao khô Rau đắng biển (BME) 23 2.3.3 Phương pháp đánh giá thay đổi biểu protein PTEN vùng hồi hải mã kỹ thuật Western blot 24 2.3.4 Xử lý số liệu 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ 29 3.1 Đánh giá tác dụng cải thiện suy giảm tương tác xã hội chuột ASD 30 ngày tuổi đánh giá tăng tương tác xã hội qua thử nghiệm ba buồng .29 3.2 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi lặp lại qua thử nghiệm tự chải chuốt 30 3.3 Đánh giá mức độ biểu protein PTEN 31 CHƯƠNG BÀN LUẬN 33 4.1 Về mơ hình nghiên cứu 33 4.1.1 Về lựa chọn mơ hình chuột tự kỷ thực nghiệm muối natri valproat 33 4.1.2 Về để lựa chọn mức liều 50 mg/kg cao khô Rau đắng biển .34 4.1.3 Về lựa chọn mơ hình đánh giá hành vi 34 4.1.4 Về lựa chọn protein PTEN để tìm hiểu chế hóa sinh cao khơ Rau đắng biển 34 4.2 Về kết nghiên cứu 35 4.2.1 Về tác dụng cải thiện khả tương tác xã hội qua thử nghiệm ba buồng cao khô Rau đắng biển 35 4.2.2 Về tác dụng cải thiện hành vi lặp lại qua thử nghiệm tự chải chuốt cao khô Rau đắng biển 35 4.2.3 Về tác dụng phục hồi mức độ biểu protein PTEN cao khô Rau đắng biển 36 4.3 Điểm nghiên cứu 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt 4EBP1 ABA ADHD Viết đầy đủ theo tiếng Anh Viết đầy đủ theo tiếng Việt Eukaryotic translation initiation Protein gắn yếu tố khởi đầu phiên factor 4E binding protein mã 4E sinh vật nhân chuẩn Applied Behavior Analysis Phân tích hành vi ứng dụng Attention Deficit Hyperactivity Disorder Rối loạn tăng động giảm ý AKT Protein kinase B Enzym protein kinase B APS Ammonium persulfate Ammonium persulfat ASD Autism Spectrum Disorder Rối loạn phổ tự kỷ BME Bacopa monnieri extract Cao khô Rau đắng biển BTBR Black and Tan BRachyury CARS-2 Dịng chuột có protein brachyury có màu lơng đen nâu Childhood Autism Rating ScaleSecond edition Thang đánh giá mức độ tự kỷ CT Computed tomography Chụp cắt lớp vi tính DBS Deep Brain Stimulation Kích thích não sâu Developmental individual- Liệu pháp ngồi sàn dựa mơ difference, relationship- hình quan hệ phát triển cá nhân based/floortime khác biệt DTT 1,4-Dithiothreitol 1,4-Dithiothreitol ECL Enhanced chemiluminescent Phát quang hóa học tăng cường ERK Extracellular Regulated Kinase FDA Food and Drug Administration FOX Forkhead box Yếu tố phiên mã Forkhead Group-based social skills Các can thiệp kỹ xã hội dựa interventions nhóm Guanosine triphosphate Guanosin triphosphate DIR/FT GSSIs GTP iv Kinase điều hịa tín hiệu ngoại bào Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography IRS Insulin Receptor Substrate Cơ chất thụ thể Insulin kDa kilo Dalton kilo Dalton Mitogen-activated Kinase điều hịa protein kích thích protein/Extracellular signal- ngun phân/kinase điều regulated kinase Kinase hịa tín hiệu ngoại bào Measles, Mumps & Rubella Sởi, quai bị Rubella mammalian Target Of Phức hợp đích Rapamycin Rapamycin Complex động vật có vú 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide diphenyl tetrazolium bromid National Institutes of Health Viện Sức khỏe Quốc gia Hoa Kỳ N-methyl-D-aspartate Receptor Thụ thể N-methyl-D-aspartat NPCs Neural Progenitor Cells Nguyên bào thần kinh PBD PIP2 binding domain Miền gắn PIP2 PBS Phosphate Buffered Saline Đệm muối phosphat Post synaptic density protein Miền chung protein post (PSD95), Drosophila disc large synaptic density protein (PSD95), tumor suppressor (Dlg1), and Drosophila disc large tumor Zonula occludens-1 protein (zo- suppressor (Dlg1), zonula 1) occludens-1 protein (zo-1) Proline, glutamic acid, serine, Miền giàu prolin, acid glutamic, threonine serin, threonin MEK MMR mTORC1 MTT NIH NMDAR PDZ PEST Enzym phosphatidylinositol PI3K Phosphatidylinositol kinase PKC Protein Kinase C Enzym protein kinase C PMSF Phenylmethylsulfonyl fluoride Phenylmethylsulfonyl fluorid PSD-95 Postsynaptic density protein 95 Protein mật độ sau synap 95 Phosphatase and tensin homolog Phosphatase tensin tương đồng deleted on chromosome ten bị xóa nhiễm sắc thể 10 PTEN v kinase Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an RAF Rapidly Accelerated Protein xuất ung thư Fibrosarcoma mô liên kết tiến triển nhanh Protein xuất ung thư RAS Rat sarcoma Rheb Ras homolog enriched in brain sarcoma chuột Protein tương đồng Ras làm giàu não RadioImmunoPrecipitation Phân tích kết tủa phóng xạ miễn Assay dịch RNA Ribonucleic acid Acid ribonucleic RTK Receptor Tyrosine Kinase Thụ thể Tyrosine kinase RIPA Sodium Dodecyl SulfateĐiện di gel SDS-PAGE SDS-PAGE PolyAcrylamide Gel Electrophoresis SEM SHANK Standard Error of Mean Sai số chuẩn SH3 and multiple ankyrin repeat Protein chứa miền SH3 nhiều domains miền ankyrin lặp lại Thắt tạm thời động mạch cảnh T2VO Transient Vessel Occlusion TBS-T Tris-Buffered Saline - Tween TSC Tuberous Sclerosis Complex Phức hợp Tuberous Sclerosis USV UltraSonic Vocalization Phát âm siêu âm VPA Valproic acid Acid valproic vi chung Đệm Tris-Buffered Saline Tween Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc protein PTEN [93] .6 Hình 1.2 Con đường truyền tín hiệu PI3K/AKT/mTOR vai trị PTEN [82] Hình 1.3 Cây Rau đắng biển Bacopa monnieri (L.) Wettst 14 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo hỗn hợp bacoside A [81] 15 Hình 1.5 Công thức cấu tạo hỗn hợp bacoside B [81] 15 Hình 2.1 Quy trình chuẩn bị cao khô Rau đắng biển [48] 18 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 22 Hình 2.3 Sơ đồ mơ tả q trình thực nghiệm 22 Hình 3.1 Tác dụng tăng tương tác xã hội BME 29 Hình 3.2 Tác dụng cải thiện hành vi lặp lại cao khô Rau đắng biển 30 Hình 3.3 Sự biểu protein PTEN theo cường độ tín hiệu hóa phát quang thu 31 Hình 3.4 Tỷ lệ tín hiệu PTEN/β-actin lơ chuột 32 vii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng cho nghiên cứu 19 Bảng 2.2 Trang thiết bị, dụng cụ phần mềm sử dụng cho nghiên cứu .20 Bảng 2.3 Bố trí định lượng protein tổng số .25 Bảng 3.1 Kết thử nghiệm ba buồng 29 Bảng 3.2 Kết thử nghiệm tự chải chuốt 30 Bảng 3.3 Kết mức độ biểu protein PTEN 31 viii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an giá biểu PTEN não chuột nhắt trắng để tìm hiểu chế hóa sinh cao khô Rau đắng biển theo hướng cải thiện biểu PTEN 4.2 Về kết nghiên cứu 4.2.1 Về tác dụng cải thiện khả tương tác xã hội qua thử nghiệm ba buồng cao khô Rau đắng biển Khiếm khuyết khả tương tác xã hội triệu chứng cốt lõi ASD Khiếm khuyết gánh nặng bệnh nhân dễ dàng quan sát bệnh nhân nơi có người lạ Khả tương tác xã hội có liên quan chặt chẽ với mức độ tiếp xúc với người lạ Ở chuột bình thường, chuột có xu hướng tiếp xúc với hộp có chuột đồng giới hộp khơng có chuột, đó, thời gian chuột tiếp xúc với hộp có chuột đồng giới cao [61] Chỉ cần so sánh khác biệt thời gian tiếp xúc hộp có chuột đồng giới với thời gian tiếp xúc với hộp khơng có chuột, ta đánh giá khả tương tác cộng đồng Kết hình 3.1 cho thấy chuột sinh lý có thời gian tiếp xúc với hộp có chuột đồng giới lớn đáng kể so với hộp khơng có chuột Trong đó, lơ bệnh lý lại có thời gian tiếp xúc với hộp có chuột đồng giới lớn khơng đáng kể so với hộp khơng có chuột, cho thấy khiếm khuyết tương tác xã hội Kết cho thấy mơ hình chuột tự kỷ gây thành cơng Bên cạnh đó, thời gian tiếp xúc với hộp có chuột đồng giới lơ dùng cao khơ Rau đắng biển liều 50 mg/kg thể trọng cao đáng kể so với thời gian tiếp xúc với hộp khơng có chuột Điều cho thấy cao khơ Rau đắng biển có tác dụng tăng khả tương tác xã hội mơ hình chuột tự kỷ gây VPA Kết phù hợp với kết thử nghiệm ba buồng nhóm nghiên cứu trước, mơ hình chuột tự kỷ gây muối natri valproat điều trị với cao khô Rau đắng biển mức liều 54 mg/kg [2] 4.2.2 Về tác dụng cải thiện hành vi lặp lại qua thử nghiệm tự chải chuốt cao khô Rau đắng biển Hành vi lặp lại triệu chứng cốt lõi dễ dàng quan sát, nhận biết bệnh nhân tự kỷ Tần suất lặp lại hành vi có liên quan đến mức độ bệnh Kết nghiên cứu hình 3.2 cho thấy chuột bệnh lý có tổng thời gian tự chải chuốt 10 phút cao đáng kể so với chuột sinh lý, cho thấy chuột tự kỷ có mức độ lặp lại hành vi cao chuột bình thường Kết phù hợp với nghiên cứu trước [35], [54], [77], [92] Kết chứng tỏ mơ hình gây thành công Bên cạnh 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an đó, lơ chuột uống cao khơ Rau đắng biển liều 50 mg/kg thể trọng có tổng thời gian tự chải chuốt đáng kể so với lơ bệnh lý Điều cho ta thấy, cao khô Rau đắng biển với mức liều 50 mg/kg có tác dụng cải thiện hành vi lặp lại chuột tự kỷ gây VPA 4.2.3 Về tác dụng phục hồi mức độ biểu protein PTEN cao khơ Rau đắng biển Như trình bày trên, mức độ biểu PTEN giảm trường hợp bệnh nhân mắc tự kỷ [45], [46], [53], [75], [82], [94] Do đó, cải thiện mức độ biểu PTEN, triệu chứng tự kỷ cải thiện Với việc áp dụng kỹ thuật Western blot, ta thu kết mức độ biểu PTEN hình 3.3 3.4 Mặc dù mức độ biểu β-actin hình 3.3 chưa thực nhau, cơng tác tra mẫu Nhưng gen mã hóa β-actin chứng minh gen giữ nhà (mức độ biểu liên tục không đổi tế bào mô), nên ta cần so sánh tỷ lệ tín hiệu hóa phát quang PTEN/βactin đánh không cần biểu β-actin phải đồng mẫu Bên cạnh đó, ta thấy rằng, mức độ biểu PTEN, thông qua tỷ lệ tín hiệu hóa phát quang PTEN/β-actin, lô bệnh lý thấp đáng kể so với lô sinh lý Kết phù hợp với nghiên cứu trước [45], [46], [53], [75], [82], [94] Kết chứng tỏ mơ hình gây thành cơng Ngồi ra, mức độ biểu PTEN lô chuột dùng cao khô Rau đắng biển liều 50 mg/kg thể trọng cao so với lô bệnh lý Kết bước đầu cho thấy chế hóa sinh cao khơ Rau đắng biển thơng qua cải thiện biểu PTEN Việc cải thiện mức độ biểu PTEN có liên quan đến cải thiện triệu chứng cốt lõi ASD theo kết đánh giá hành vi Tuy nhiên, mức độ cải thiện biểu protein chưa thực cao, có đường khác có liên quan đến chế hóa sinh cao khơ Rau đắng biển tác động lên protein FOX, protein SHANK 4.3 Điểm nghiên cứu Rau đắng biển dược liệu sử dụng từ hàng nghìn năm trước dân gian Gần đây, nhiều nghiên cứu tiến hành Rau đắng biển để tìm hiểu thêm tác dụng loài này, bao gồm hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư bạch cầu cổ trướng Dalton [44]; hoạt tính chống oxy hóa, chống viêm, chống apoptosis, tác dụng tăng cường hoạt động thần kinh học tập 36 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ghi nhớ [81]; hoạt tính chống căng thẳng thơng qua việc điều hịa biển Hsp70, điều hịa hoạt tính superoxide dismutase cytochrome P450 vùng hồi hải mã não chuột [16]; tác dụng cải thiện suy giảm nhận thức hoạt tính bảo vệ tế bào thần kinh liên quan đến đường PKC PI3K/AKT [48]; cải thiện khả nhận thức không gian thông qua thay đổi biểu phân tử đường tín hiệu điều hịa tính sinh thần kinh nhận thức [68] Hợp chất saponin Rau đắng biển chứng minh có khả cải thiện bệnh Alzheimer chế tác dụng phần làm sáng tỏ [5] Nghiên cứu Rau đắng biển mơ hình chuột tự kỷ tiến hành cho thấy hiệu việc cải thiện hành vi, dấu ấn stress oxy hóa não phục hồi cấu trúc mơ học não [72] Nhóm nghiên cứu Viện Dược liệu tiến hành nghiên cứu cho thấy tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ lo âu, trầm cảm tương tác xã hội hiệu chuột dùng liên tục hàng ngày dược liệu từ 21-45 ngày tuổi [2] Từ đó, ta thấy điểm nghiên cứu này, thay cho chuột tự kỷ dùng thuốc từ 21 ngày tuổi, nghiên cứu thay đổi thời điểm bắt đầu điều trị sang cho chuột uống thuốc điều trị từ sinh Điều tương đồng với chứng tự kỷ người, thời gian phát bệnh chủ yếu rơi vào năm đầu đời Do đó, từ kết nghiên cứu mơ hình chuột đề tài rút tiến tới sử dụng người: trẻ dùng thuốc sớm thơng qua sữa mẹ hiệu điều trị nâng cao Một điểm kể đến nghiên cứu này, nghiên cứu chứng minh cao khô Rau đắng biển có cải thiện mức độ biểu protein PTEN mơ hình chuột nhắt trắng gây tự kỷ thực nghiệm muối valproat Hiện giới, có vài nghiên cứu sử dụng PTEN đích phân tử để đánh giá chế tác dụng cao khô Rau đắng biển Tại Việt Nam, nghiên cứu tiến hành để tìm hiểu chế hóa sinh BME sử dụng PTEN làm tiêu chí đánh giá Theo hiểu biết chúng tơi, cịn có đích phân tử khác protein FOX SHANK Tuy nhiên, thời gian điều kiện hạn chế đề tài, hy vọng nghiên cứu sử dụng đích phân tử khác liên quan đến ASD để làm sáng tỏ chế cải thiện khiếm khuyết hành vi thần kinh cao khô Rau đắng biển 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Từ kết nghiên cứu đề tài, rút kết luận sau: - Cao khô Rau đắng biển mức liều 50 mg/kg có tác dụng cải thiện số hành vi thần kinh cốt lõi rối loạn phổ tự kỷ mơ hình chuột tự kỷ thực nghiệm gây muối natri valproat Cụ thể: • Cao khơ Rau đắng biển có tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác xã hội chuột 30 ngày tuổi, thơng qua tiêu chí tăng thời gian khám phá hộp có chuột đồng giới gấp 2,39 lần so với hộp khơng có chuột (p < 0,01) thử nghiệm ba buồng • Cao khơ Rau đắng biển làm giảm thời gian chuột tự chải chuốt 1,97 lần so với lô chuột bệnh lý (p < 0,05) thử nghiệm tự chải chuốt - Cao khô Rau đắng biển mức liều 50 mg/kg có tác dụng cải thiện số hành vi rối loạn tự kỷ mơ hình chuột tự kỷ thực nghiệm gây muối natri valproat phần thông qua chế tăng cường mức độ biểu protein PTEN não chuột lên gấp 1,49 lần so với lô chuột bệnh lý Kiến nghị: - Tiếp tục đánh giá thêm tác dụng cải thiện hành vi thần kinh Rau đắng biển mơ hình hành vi khác - Tiếp tục tiến hành đánh giá chế cải thiện hành vi thần kinh Rau đắng biển chuột tự kỷ thơng qua đường tín hiệu liên quan đến khả bảo vệ tế bào thần kinh protein AKT p-AKT, theo giả thuyết khác protein khác liên quan đến ASD SHANK FOX để làm sáng tỏ chế hóa sinh cao khơ Rau đắng biển rối loạn phổ tự kỷ - Nghiên cứu hợp chất từ Rau đắng biển có tác dụng điều trị tự kỷ mơ hình thực nghiệm 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2008), Phục hồi chức trẻ tự kỷ, NXB Y học, Hà Nội, pp Phạm Thị Nguyệt Hằng, Lê Thị Xoan, et al (2015), "Tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ cao chiết rau đắng biển mơ hình chuột nhắt tự kỷ thực nghiệm gây muối valproat", Tạp chí Dược liệu, 2015(4), pp 241-246 Lợi Đỗ Tất (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, pp 761762 Quách Thúy Minh, Hoạt động khoa Tâm bệnh 2011 Tiếng Anh Abdul Manap Aimi Syamima, Vijayabalan Shantini, et al (2019), "Bacopa monnieri, a Neuroprotective Lead in Alzheimer Disease: A Review on Its Properties, Mechanisms of Action, and Preclinical and Clinical Studies", Drug target insights, 13, pp 1177392819866412-1177392819866412 Ali Iqbal Unnisa, Schriml Lynn M., et al (1999), "Mutational Spectra of PTEN/MMAC1 Gene: a Tumor Suppressor With Lipid Phosphatase Activity", JNCI: Journal of the National Cancer Institute, 91(22), pp 1922-1932 American Psychiatric Association (2013), Diagnostic and statistical manual of mental disorders, American Psychiatric Association, Arlington, VA, USA, pp 31-86 Autism and Developmental Disabilities Monitoring Network Surveillance Year 2006 Principal Investigators, Centers for Disease Control and Prevention (CDC) (2009), "Prevalence of autism spectrum disorders - Autism and Developmental Disabilities Monitoring Network, United States, 2006", MMWR Surveill Summ, 58(10), pp 1-20 Bambini-Junior Victorio, Rodrigues Leticia, et al (2011), "Animal model of autism induced by prenatal exposure to valproate: Behavioral changes and liver parameters", Brain Research, 1408, pp 8-16 10 Bang Miran, Lee Sun Haeng, et al (2017), "Herbal Medicine Treatment for Children with Autism Spectrum Disorder: A Systematic Review", Evidencebased complementary and alternative medicine : eCAM, 2017, pp 86146808614680 11 Bertrand Jacquelyn, Mars Audrey, et al (2001), "Prevalence of Autism in a United States Population: The Brick Township, New Jersey, Investigation", Pediatrics, 108(5), pp 1155 12 Bleuler E., White William A (1912), "THE THEORY OF SCHIZOPHRENIC NEGATIVISM", The Journal of Nervous and Mental Disease, 39(1), pp 13 Burd Larry, Severud Robin, et al (1999), "Prenatal and perinatal risk factors for autism", 27(6), pp 441-450 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Chakrabarti Suniti, Fombonne Eric (2005), "Pervasive Developmental Disorders in Preschool Children: Confirmation of High Prevalence", American Journal of Psychiatry, 162(6), pp 1133-1141 Chang Jonathan, Gilman Sarah R., et al (2015), "Genotype to phenotype relationships in autism spectrum disorders", Nature Neuroscience, 18(2), pp 191-198 Chowdhuri D Kar, Parmar D., et al (2002), "Antistress effects of bacosides of Bacopa monnieri: modulation of Hsp70 expression, superoxide dismutase and cytochrome P450 activity in rat brain", Phytotherapy Research, 16(7), pp 639645 Dawson Gerard R., Tricklebank Mark D (1995), "Use of the elevated plus maze in the search for novel anxiolytic agents", Trends in Pharmacological Sciences, 16(2), pp 33-36 Edfawy Mohamed, Guedes Joana R., et al (2019), "Abnormal mGluR-mediated synaptic plasticity and autism-like behaviours in Gprasp2 mutant mice", Nature communications, 10(1), pp 1431-1431 Eskenazi Brenda, Marks Amy R., et al (2007), "Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Mexican-American children", Environmental health perspectives, 115(5), pp 792-798 Fatemi S H., Pearce D A., et al (2005), "Prenatal viral infection in mouse causes differential expression of genes in brains of mouse progeny: A potential animal model for schizophrenia and autism", Synapse, 57(2), pp 91-99 Fatemi S Hossein, Earle Julie, et al (2002), "Prenatal Viral Infection Leads to Pyramidal Cell Atrophy and Macrocephaly in Adulthood: Implications for Genesis of Autism and Schizophrenia", Cellular and Molecular Neurobiology, 22(1), pp 25-33 Fombonne Eric (2009), "Epidemiology of Pervasive Developmental Disorders", Pediatric Research, 65(6), pp 591-598 Gates Jacquelyn A., Kang Erin, et al (2017), "Efficacy of group social skills interventions for youth with autism spectrum disorder: A systematic review and meta-analysis", Clinical psychology review, 52, pp 164-181 Gonzales Edson Luck T., Jang Jong-Hwa, et al (2016), "Supplementation of Korean Red Ginseng improves behavior deviations in animal models of autism", Food & nutrition research, 60, pp 29245-29245 Hampton L H., Kaiser A P (2016), "Intervention effects on spoken-language outcomes for children with autism: a systematic review and meta-analysis", Journal of Intellectual Disability Research, 60(5), pp 444-463 Handen Benjamin L., Aman Michael G., et al (2015), "Atomoxetine, Parent Training, and Their Combination in Children With Autism Spectrum Disorder and Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder", Journal of the American Academy of Child and Adolescent Psychiatry, 54(11), pp 905-915 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Handley S L., McBlane J W (1993), "An assessment of the elevated X-maze for studying anxiety and anxiety-modulating drugs", Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 29(3), pp 129-138 Harvey Lodish (2016), Molecular Cell Biology, W.H Freeman, pp Hendouei Fatemeh, Sanjari Moghaddam Hossein, et al (2020), "Resveratrol as adjunctive therapy in treatment of irritability in children with autism: A doubleblind and placebo-controlled randomized trial", Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics, 45(2), pp 324-334 Herman Gail E., Henninger Nathan, et al (2007), "Genetic testing in autism: how much is enough?", Genetics in Medicine, 9(5), pp 268-274 Hoang Van Minh, Le Thi Vui, et al (2019), "Prevalence of autism spectrum disorders and their relation to selected socio-demographic factors among children aged 18-30 months in northern Vietnam, 2017", International journal of mental health systems, 13, pp 29-29 Hutchins Tiffany L., Prelock Patricia A (2013), "The social validity of Social Stories™ for supporting the behavioural and communicative functioning of children with autism spectrum disorder", International Journal of SpeechLanguage Pathology, 15(4), pp 383-395 Ingram Jennifer L., Peckham Stacey M., et al (2000), "Prenatal exposure of rats to valproic acid reproduces the cerebellar anomalies associated with autism", Neurotoxicology and Teratology, 22(3), pp 319-324 Jiang Yong-Hui, Ehlers Michael D (2013), "Modeling autism by SHANK gene mutations in mice", Neuron, 78(1), pp 8-27 Kalueff Allan V., Stewart Adam Michael, et al (2016), "Neurobiology of rodent self-grooming and its value for translational neuroscience", Nature reviews Neuroscience, 17(1), pp 45-59 Kent Justine M., Kushner Stuart, et al (2013), "Risperidone Dosing in Children and Adolescents with Autistic Disorder: A Double-Blind, Placebo-Controlled Study", Journal of Autism and Developmental Disorders, 43(8), pp 1773-1783 Kern Janet K., Jones Anne M (2006), "Evidence of Toxicity, Oxidative Stress, and Neuronal Insult in Autism", Journal of Toxicology and Environmental Health, Part B, 9(6), pp 485-499 Kim Young Shin, Leventhal Bennett L (2015), "Genetic Epidemiology and Insights into Interactive Genetic and Environmental Effects in Autism Spectrum Disorders", Biological Psychiatry, 77(1), pp 66-74 Kim Young Shin, Leventhal Bennett L., et al (2011), "Prevalence of Autism Spectrum Disorders in a Total Population Sample", American Journal of Psychiatry, 168(9), pp 904-912 Kinney Dennis K., Munir Kerim M., et al (2008), "Prenatal stress and risk for autism", Neuroscience and biobehavioral reviews, 32(8), pp 1519-1532 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 Kogan Michael D., Blumberg Stephen J., et al (2009), "Prevalence of ParentReported Diagnosis of Autism Spectrum Disorder Among Children in the US, 2007", Pediatrics, 124(5), pp 1395 Kogan Michael D., Vladutiu Catherine J., et al (2018), "The Prevalence of Parent-Reported Autism Spectrum Disorder Among US Children", Pediatrics, 142(6), pp e20174161 Krakowiak Paula, Walker Cheryl K., et al (2012), "Maternal metabolic conditions and risk for autism and other neurodevelopmental disorders", Pediatrics, 129(5), pp e1121-e1128 Kumar E P., Elshurafa A A., et al (1998), "Cytotoxic and anti -tumour properties of ethanolic extract of bacopa monnieri (L) penn", Ancient science of life, 17(3), pp 228-234 Kwon Chang-Hyuk, Luikart Bryan W., et al (2006), "Pten regulates neuronal arborization and social interaction in mice", Neuron, 50(3), pp 377-388 Kwon Chang-Hyuk, Zhu Xiaoyan, et al (2003), "mTor is required for hypertrophy of Pten-deficient neuronal soma in vivo", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 100(22), pp 12923-12928 Larsson Heidi Jeanet, Eaton William W., et al (2005), "Risk Factors for Autism: Perinatal Factors, Parental Psychiatric History, and Socioeconomic Status", American Journal of Epidemiology, 161(10), pp 916-925 Le Xoan Thi, Nguyet Pham Hang Thi, et al (2015), "Protective effects of Bacopa monnieri on ischemia-induced cognitive deficits in mice: The possible contribution of bacopaside I and underlying mechanism", Journal of Ethnopharmacology, 164, pp 37-45 Leger Marianne, Quiedeville Anne, et al (2013), "Object recognition test in mice", Nature Protocols, 8(12), pp 2531-2537 Libbey Jane E., Sweeten Thayne L., et al (2005), "Autistic disorder and viral infections", Journal of NeuroVirology, 11(1), pp 1-10 Lord Catherine, Elsabbagh Mayada, et al (2018), "Autism spectrum disorder", Lancet (London, England), 392(10146), pp 508-520 Madsen Kreesten Meldgaard, Hviid Anders, et al (2002), "A Population-Based Study of Measles, Mumps, and Rubella Vaccination and Autism", New England Journal of Medicine, 347(19), pp 1477-1482 Mahmood Usman, Ahn Sangzin, et al (2018), "Dendritic spine anomalies and PTEN alterations in a mouse model of VPA-induced autism spectrum disorder", Pharmacological Research, 128, pp 110-121 McFarlane H G., Kusek G K., et al (2008), "Autism-like behavioral phenotypes in BTBR T+tf/J mice", Genes, Brain and Behavior, 7(2), pp 152-163 Melke J., Goubran Botros H., et al (2008), "Abnormal melatonin synthesis in autism spectrum disorders", Molecular psychiatry, 13(1), pp 90-98 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 Miles Judith H (2011), "Autism spectrum disorders—A genetics review", Genetics in Medicine, 13(4), pp 278-294 Miyazaki Kaoru, Narita Naoko, et al (2005), "Maternal administration of thalidomide or valproic acid causes abnormal serotonergic neurons in the offspring: implication for pathogenesis of autism", International Journal of Developmental Neuroscience, 23(2-3), pp 287-297 Morris R G M., Hagan J J., et al (1986), "Allocentric Spatial Learning by Hippocampectomised Rats: A Further Test of the “Spatial Mapping” and “Working Memory” Theories of Hippocampal Function", The Quarterly Journal of Experimental Psychology Section B, 38(4b), pp 365-395 Morris Richard G M (1981), "Spatial localization does not require the presence of local cues", Learning and Motivation, 12(2), pp 239-260 Moy Sheryl S., Nadler Jessica J., et al (2008), "Social approach and repetitive behavior in eleven inbred mouse strains", Behavioural brain research, 191(1), pp 118-129 Nadler J J., Moy S S., et al (2004), "Automated apparatus for quantitation of social approach behaviors in mice", Genes, Brain and Behavior, 3(5), pp 303314 Nguyen Thanh Liem, Nguyen Hoang-Phuong, et al (2021), "Outcomes of bone marrow mononuclear cell transplantation combined with interventional education for autism spectrum disorder", STEM CELLS Translational Medicine, 10(1), pp 14-26 Oono I P., Honey E J., et al (2013), "Parent‐mediated early intervention for young children with autism spectrum disorders (ASD)", Cochrane Database of Systematic Reviews, (4), pp Owen Randall, Sikich Linmarie, et al (2009), "Aripiprazole in the Treatment of Irritability in Children and Adolescents With Autistic Disorder", Pediatrics, 124(6), pp 1533 Park Hye Ran, Lee Jae Meen, et al (2016), "A Short Review on the Current Understanding of Autism Spectrum Disorders", Experimental neurobiology, 25(1), pp 1-13 Pickles Andrew, Le Couteur Ann, et al (2016), "Parent-mediated social communication therapy for young children with autism (PACT): long-term follow-up of a randomised controlled trial", The Lancet, 388(10059), pp 25012509 Politte Laura C., McDougle Christopher J (2014), "Atypical antipsychotics in the treatment of children and adolescents with pervasive developmental disorders", Psychopharmacology, 231(6), pp 1023-1036 Pham Hang Thi Nguyet, Tran Hong Nguyen, et al (2020), "Bacopa monnieri (L.) Wettst Extract Improves Memory Performance via Promotion of Neurogenesis Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 in the Hippocampal Dentate Gyrus of Adolescent Mice", International journal of molecular sciences, 21(9), pp 3365 Ramaswami Gokul, Geschwind Daniel H (2018), "Chapter 21 - Genetics of autism spectrum disorder", Handbook of Clinical Neurology, Geschwind Daniel H., Paulson Henry L.,Klein Christine, Elsevier, 147, pp 321-329 Rodier Patricia M., Ingram Jennifer L., et al (1997), "Linking etiologies in humans and animal models: Studies of autism", Reproductive Toxicology, 11(2), pp 417-422 Rossignol Daniel A., Frye Richard E (2011), "Melatonin in autism spectrum disorders: a systematic review and meta-analysis", Developmental Medicine & Child Neurology, 53(9), pp 783-792 Sandhya T., Sowjanya J., et al (2012), "Bacopa monniera (L.) Wettst Ameliorates Behavioral Alterations and Oxidative Markers in Sodium Valproate Induced Autism in Rats", Neurochemical Research, 37(5), pp 1121-1131 Scahill Lawrence, McCracken James T., et al (2015), "Extended-Release Guanfacine for Hyperactivity in Children With Autism Spectrum Disorder", American Journal of Psychiatry, 172(12), pp 1197-1206 Schaaf Roseann C., Benevides Teal, et al (2014), "An intervention for sensory difficulties in children with autism: a randomized trial", Journal of autism and developmental disorders, 44(7), pp 1493-1506 Sealy Julie, Glovinsky Ira P (2016), "Strengthening the reflective functioning capacities of parents who have a child with a neurodevelopmental disability through a brief, relationship-focused intervention", Infant Mental Health Journal, 37(2), pp 115-124 Seibenhener Michael L., Wooten Michael C (2015), "Use of the Open Field Maze to measure locomotor and anxiety-like behavior in mice", Journal of visualized experiments : JoVE, (96), pp e52434-e52434 Silverman Jill L., Tolu Seda S., et al (2010), "Repetitive Self-Grooming Behavior in the BTBR Mouse Model of Autism is Blocked by the mGluR5 Antagonist MPEP", Neuropsychopharmacology, 35(4), pp 976-989 Stocco Amber, Baizabal-Carvallo José Fidel (2014), "Deep brain stimulation for severe secondary stereotypies", Parkinsonism & Related Disorders, 20(9), pp 1035-1036 Sturm Volker, Fricke Oliver, et al (2013), "DBS in the basolateral amygdala improves symptoms of autism and related self-injurious behavior: a case report and hypothesis on the pathogenesis of the disorder", Frontiers in human neuroscience, 6, pp 341-341 Sturman Nancy, Deckx Laura, et al (2017), "Methylphenidate for children and adolescents with autism spectrum disorder", The Cochrane database of systematic reviews, 11(11), pp CD011144-CD011144 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 Sukumaran Nimisha Pulikkal, Amalraj Augustine, et al (2019), "Neuropharmacological and cognitive effects of Bacopa monnieri (L.) Wettst – A review on its mechanistic aspects", Complementary Therapies in Medicine, 44, pp 68-82 Tilot Amanda K., Frazier Thomas W., 2nd, et al (2015), "Balancing Proliferation and Connectivity in PTEN-associated Autism Spectrum Disorder", Neurotherapeutics : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics, 12(3), pp 609-619 Urdaneta Kendy Eduardo, Castillo María Andrea, et al (2018), "Autism Spectrum Disorders: Potential Neuro-Psychopharmacotherapeutic Plant-Based Drugs", ASSAY and Drug Development Technologies, 16(8), pp 433-444 Vietze Peter, Lax Leah (2020), "Early Intervention ABA for Toddlers with ASD: Effect of Age and Amount", Current Psychology, 39, pp Voineagu Irina, Wang Xinchen, et al (2011), "Transcriptomic analysis of autistic brain reveals convergent molecular pathology", Nature, 474(7351), pp 380-384 Wagner George C., Reuhl Kenneth R., et al (2006), "A New Neurobehavioral Model of Autism in Mice: Pre- and Postnatal Exposure to Sodium Valproate", Journal of Autism and Developmental Disorders, 36(6), pp 779-793 Weitlauf A S., McPheeters M L., et al., Therapies for Children With Autism Spectrum Disorder: Behavioral Interventions Update 2014, Agency for Healthcare Research and Quality (US) Rockville (MD) WHO (2021), "Autism spectrum disorders", Retrieved, from https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/autism-spectrum-disorders WHO, Autism spectrum disorders and other developmental disorders: From raising awareness to building capacity 2013: Geneva, Switzerland Wöhr Markus (2014), "Ultrasonic vocalizations in Shank mouse models for autism spectrum disorders: Detailed spectrographic analyses and developmental profiles", Neuroscience & Biobehavioral Reviews, 43, pp 199-212 World Health Organization (2016), International statistical classifcation of diseases and related health problems, WHO, pp 336 Yang Mu, Zhodzishsky Vladimir, et al (2007), "Social deficits in BTBR T+tf/J mice are unchanged by cross-fostering with C57BL/6J mothers", International journal of developmental neuroscience : the official journal of the International Society for Developmental Neuroscience, 25(8), pp 515-521 Zhang Siyuan (2010), "PI(3)king apart PTEN’s role in cancer", Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research, 16, pp 4325-30 Zhou Jing, Blundell Jacqueline, et al (2009), "Pharmacological Inhibition of mTORC1 Suppresses Anatomical, Cellular, and Behavioral Abnormalities in Neural-Specific Pten Knock-Out Mice", The Journal of Neuroscience, 29(6), pp 1773 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC Bảng PL- Thành phần dung dịch đệm ly giải RIPA STT Nồng độ cuối Tên hóa chất V (μL) Ghi Nước cất Tris-HCl 2M (pH = 7,5) 0,05 M 250 NaCl 5M 0,15 M 300 Sodium deoxycholate 10% 0,5% 500 Sodium dodecyl sulfate 10% 0,1% 100 NaF 0,5M 0,15 M 3000 Aprotinin 1,4 mg/mL 0,00112 mg/mL 8 Sodium orthovanadate 1M 0,02 M 200 Leupeptin 10 mg/mL 0,01 mg/mL 10 10 PMSF 50 mM 0,25 mM 50 11 Triton X-100 100% 1% 100 Cho sau tạo bọt 10 mL Bảo quản 4°C 5482 Tổng cộng Bảng PL- Thành phần dung dịch đệm PBS 10x pH 7,4 STT Hóa chất Nồng độ cuối (M) Khối lượng (g) NaCl 1,37 80,1 KCl 0,027 2,0 Na2HPO4 0,1 14,4 KH2PO4 0,02 2,4 Nước cất Ghi Vừa đủ Tổng cộng 1L Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Hấp khử trùng, bảo quản 4°C C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng PL- Thành phần dung dịch đệm PBS 1x pH 7,4 STT Hóa chất Thể tích (mL) Dung dịch PBS 10x pH 7,4 Nước cất 27 Tổng cộng 30 Ghi Bảo quản 4°C Bảng PL- Các dung dịch thành phần dùng cho đổ gel polyacrylamide STT Dung dịch Thành phần Bis – mix protein Ghi 29,2% acrylamide, 0,8% bis- 4°C, tránh ánh sáng acrylamide/50 mL APS 10% g ammonium persulfate/10 mL Ngăn đá tủ lạnh Tris-HCl 1M pH 6,8 12,11 g/100 mL 4°C Tris-HCl 1M pH 8,8 12,11 g/100 mL 4°C Bảng PL- Thành phần dung dịch gel polyacrylamide STT Hóa chất Gel tách (12%) Gel cô (4,0%) 4,89 3,035 Nước cất (mL) Tris-HCl pH 6,8 (mL) - 1,25 Tris-HCl pH 8,8 (mL) 2,5 - Bis-mix (mL) 2,5 0,66 APS 10% (μL) 100 50 TEMED (μL) 10 10 Tổng cộng (mL) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng PL- Thành phần đệm chuyển màng (bảo quản nhiệt độ phịng) STT Hóa chất Nồng độ cuối Khối lượng (g), thể tích (mL) Tris-HCl 25 mM 6,0550 g Glycine 192 mM 28,826 g Methanol 20% (theo thể tích) 400 mL Nước cất Vừa đủ Tổng cộng 2L Bảng PL- Thành phần dung dịch TBS-T 0,1% pH 7,5 (bảo quản nhiệt độ phịng) STT Hóa chất Nồng độ cuối Khối lượng (g), thể tích (mL) NaCl 0,150 M 8,8 g Tris-HCl 0,02 M 2,422 g Tween 20 0,10% mL Nước cất Vừa đủ Tổng cộng 1L Bảng PL- Thành phần dung dịch Skim milk 5% (bảo quản ngăn đá) STT Hóa chất Skim milk Dung dịch TBS-T 0,1% Nồng độ cuối Khối lượng (g), thể tích (mL) 5% 0,75 g Vừa đủ Tổng cộng 15 mL Bảng PL- Thành phần dung dịch Skim milk 1% (bảo quản 4°C) STT Hóa chất Dung dịch Skim milk 5% Dung dịch TBS-T 0,1% Nồng độ cuối Thể tích (mL) 1% Tổng cộng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 10 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn