Nghiên cứu xác định thành phần hóa học trong tinh dầu trầm hương của một số loài cây trầm ở việt nam

LỜI CÁM ƠN Trong suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp, em học hỏi tích lũy đƣợc nhiều kinh nghiệm quý báu mặt kiến thức nhƣ kinh nghiệm sống Đề hoàn thành đề tài nghiên cứu này, nỗ lực thân, em nhận đƣợc nhiều hỗ trợ giúp đỡ tận tình thầy cơ, gia đình bạn bè Em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: GS.TS Nguyễn Thế Nhã thầy Bùi Văn Năng đồng ý làm giáo viên hƣớng dẫn Khóa luận Tốt nghiệp, định hƣớng cho em chọn đề tài thầy tạo điều kiện thuận lợi cho em phát huy tính tự giác nghiên cứu, theo sát em trình thực đề tài Cảm ơn Trung tâm phân tích mơi trƣờng – Khoa Quản lý Tài nguyên rừng Môi trƣờng hỗ trợ dụng cụ thí nghiệm, thiết bị phân tích hóa chất suốt q trình thực đề tài Một lần em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Phan Trung Đức i MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP vii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Thực trạng phát triển loài trầm hƣơng Việt Nam 1.1.1 Tầm quan trọng, ý nghĩa kinh tế - xã hội trầm hƣơng 1.1.2 Các loài Trầm hƣơng phân bố Việt Nam 1.2 Những kết nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng 1.2.1 Nghiên cứu nƣớc 1.2.2 Những kết nghiên cứu nƣớc 1.3 Các phƣơng pháp tách chiết ứng dụng tiến khoa học kỹ thuật đại nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu 18 1.3.1 Phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc 18 1.3.2 Công nghệ SBSE (Stir Bar Sorptive Extraction) 23 CHƢƠNG MỤC TIÊU, ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 26 2.1.1 Mục tiêu chung 26 2.1.2 Mục tiêu riêng 26 2.2 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 26 2.3 Nội dung nghiên cứu 28 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 2.4.1 Phƣơng pháp thu thập kế thừa tài liệu 28 ii 2.4.2 Phƣơng pháp thực nghiệm 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Thực trạng phát triển loài trầm hƣơng Việt Nam 34 3.1.1 Đánh giá thực trạng trồng rừng khả tạo trầm gió trầm số vùng sinh thái chủ yếu 34 3.1.2 Chất lƣợng tinh dầu trầm thị trƣờng tiêu thụ 35 3.2 Kết phƣơng pháp tách chiết tinh dầu trầm trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam 36 3.3 Thành phần hóa học tinh dầu trầm mẫu nghiên cứu 43 3.3.1 Kết nghiên cứu mẫu lấy từ mộc rừng tự nhiên Phú Quốc, Kiên Giang (mẫu M02) 43 3.3.2 Kết nghiên cứu mẫu lấy Phúc Trạch, Hƣơng Khê (mẫu M03) 48 3.3.3 Kết nghiên cứu mẫu trầm kiến lấy Quảng Nam (mẫu M04) 52 3.4 So sánh mẫu tinh dầu 57 3.4.1 Đánh giá trực quan 57 3.4.2 So sánh kết thu đƣợc sau phân tích GC/FID 58 3.5 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng số khu vực 61 3.5.1.Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng số khu vực Hà tĩnh 61 3.5.2 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực Quảng Nam 67 3.5.3 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực mộc rừng tự nhiên Phú Quốc …………………………………………………………………… 70 3.5.4 So sánh thành phần hóa học tinh dầu trầm khu vực 73 3.6 Đề xuất quy trình tách chiết phân tích tinh dầu trầm hƣơng 74 CHƢƠNG KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 75 4.1 Kết luận 75 4.2 Tồn 76 4.3 Khuyến nghị 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT SDE SBSE IUCN CITES Simultaneous Distillation Phƣơng pháp chƣng cất and Extraction Method lôi nƣớc Stir Bar Sorptive Tách chiết hấp phụ lên Extraction khuấy từ The International Union Liên minh bảo tồn thiên for the Conservation nhiên quốc tế Convention on Công ƣớc buôn bán International Trade in quốc tế loài động, Endangered Species of thực vật hoang dã Wild Fauna and Flora GC/MS GC/FID Gas chromatography Máy sắc ký khí ghép nối mass spectrometry phổ Gas Chromatography Máy sắc ký khí Flame Ionization Detector Phân đoạn Pd iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần chất mẫu nghiên cứu Malaysia Bảng 1.2 Thành phần hóa học tinh dầu mẫu nghiên cứu Trung Quốc 10 Bảng 1.3 Thành phần chất mẫu nghiên cứu Thái Lan 15 1.3.2 Phƣơng pháp SDE (Simultaneous Distillation and Extraction Method)……………………………………………………………………… 21 Bảng 3.1 Khảo sát hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc môi trƣờng chƣng cất 30h 40 Bảng 3.2 Số liệu mẫu M02 - PĐ1 45 Bảng 3.3 Số liệu mẫu M02 - PĐ2 47 Bảng 3.4 Số liệu mẫu M03 – PĐ1 49 Bảng 3.5 Số liệu mẫu M03 - PĐ2,3,4 51 Bảng 3.6 Số liệu mẫu M04 - PĐ1 54 Bảng 3.7 Số liệu mẫu M04 - PĐ2 56 Bảng 3.8 So sánh số liệu diện tích Pic mẫu sau phân tích máy GC/FID 58 Bảng 3.9 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực thị trấn Hƣơng Khê, Hà Tĩnh 61 Bảng 3.10 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực xã Phúc Trạch Hƣơng Khê, Hà Tĩnh 64 Bảng 3.11 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực Quảng Nam 67 Bảng 3.12 Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng khu vực mộc rừng tự nhiên Phú Quốc 70 Bảng 3.13 Sự xuất số hóa chất mẫu trầm hƣơng 73 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ hệ thống chƣng cất tinh dầu phƣơng pháp lôi nƣớc 19 Hình 1.2 Mơ hình chƣng cất tinh dầu phƣơng lơi nƣớc phịng thí nghiệm trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam 20 Hình 1.3 Chi tiết thành phần phƣơng pháp SDE 21 Hình 1.4 Mơ hình chƣng cất theo phƣơng pháp SDE trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam 23 Hình 1.5 Thanh khuấy từ đặt dung dịch ngâm chiết 24 Hình 1.6 Thanh khuấy từ có tẩm chất hấp phụ 24 Hình 1.7 Bộ phận giải hấp phụ nhiệt 24 Hình 1.8 Hệ thống đầy đủ thiết bị SBSE-GC/MS 25 Hình 2.1 Mẫu trầm thu đƣợc khu vực Phú Quốc 26 Hình 2.2 Mẫu trầm thu đƣợc khu vực Phúc trạch, Hƣơng Khê, Hà tĩnh 27 Hình 2.3 Mẫu trầm thu đƣợc khu vực Quảng Nam 27 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình chung sử dụng nghiên cứu phân tích thành phần hóa học tinh dầu trầm 29 Hình 2.5 Sơ đồ phƣơng pháp chiết 30 Hình 2.7 Máy sắc ký 33 Hình 2.8 Máy sắc ký khối phổ GC/MS 33 Hình 3.1 Mơ hình chƣng cất phịng thí nghiệm Lâm Nghiệp 36 Hình 3.2 Mẫu tinh dầu môi trƣờng sử dụng phƣơng pháp 37 Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu M01 ngâm mơi trƣờng trung tính phân tích GC/FID 39 Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu M01 ngâm kiềm 39 Hình 3.6 Tinh dầu thu đƣợc từ mẫu M02 mơi trƣờng axit 44 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu M02 ngâm axit phân tích GC/FID 44 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu M03 axit phân tích GC/FID 48 Hình 3.10 Tinh dầu thu đƣợc từ mẫu M04 môi trƣờng axit 53 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu M04 axit phân tích GC/FID 53 vi TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆT NAM KHOA QUẢN LÝ TÀI NGUN RỪNG VÀ MƠI TRƢỜNG TĨM TẮT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên khóa luận “Nghiên cứu xác định thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng số loài trầm Việt Nam” Sinh viên thực hiện: Phan Trung Đức Giáo viên hƣớng dẫn: GS.TS Nguyễn Thế Nhã Th.S Bùi Văn Năng Mục tiêu nghiên cứu: 4.1 Mục tiêu chung  Phát triển phƣơng pháp chƣng cất, tách chiết, phân tích thành phần hóa học tinh dầu trầm 4.2 Mục tiêu cụ thể  Tách chiết, phân tích đƣợc thành phần có trầm hƣơng  Đề xuất đƣợc quy trình tách phân tích đƣợc thành phần hóa học tinh dầu trầm trƣờng đại học Việt Nam Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng: Mẫu trầm hƣơng trầm lấy khu vực Hà Tĩnh, Quảng Nam, Phú Quốc Việt Nam Phạm vi nghiên cứu:Nghiên cứu số mẫu trầm tại:  Khu vực Hà tĩnh: mẫu lấy có trầm tự nhiên xã Phúc Trạch, huyện Hƣơng Khê, tuổi cây: 12 năm; thu mẫu gỗ có trầm thân  Khu vực Quảng Nam: mẫu trầm kiến (trầm hình thành có tác động kiến), thu thập xã Tiên Cảnh, huyện Tiên Phƣớc; tuổi cây: 15 năm,  Khu vực Phú Quốc: mẫu lấy mọc tự nhiên, tuổi (không rõ) đặc điểm vị trí lấy trầm thân vii Nội dung nghiên cứu Để thực mục tiêu trên, khóa luận lựa chọn số nội dung nghiên cứu sau:  Nghiên cứu thực trạng phát triển loài trầm hƣơng Việt Nam  Nghiên cứu phƣơng pháp tách chiết chƣng cất tinh dầu trầm tinh dầu trầm  Đánh giá thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng trồng số khu vực Việt Nam  Đề xuất quy trình chiết phân tích thành phần hóa học trầm hƣơng trƣờng đại học Việt Nam Phƣơng pháp nghiên cứu  Phƣơng pháp kế thừa tài liệu  Phƣơng pháp thực nghiệm  Phƣơng pháp phân tích GC/FID  Phƣơng pháp phân tích GC/MS Những kết đạt đƣợc Từ q trình nghiên cứu, khóa luận đạt đƣợc kết sau: - Qua trình chƣng cất phân tích số liệu thu đƣợc từ việc phân tích mẫu thiết bị GC/FID GC/MS khảo sát mẫu cho thấy mẫu đƣợc ngâm chƣng cất môi trƣờng axit với pH=2 cho lƣợng tinh dầu lớn mơi trƣờng trung tính môi trƣờng kiềm - Mỗi mẫu trầm khác cho lƣợng tinh dầu khác đƣợc ngâm chƣng cất khoảng thời gian định Trong môi trƣờng axit thời gian chƣng cất 60h, cịn mơi trƣờng trung tính mơi trƣờng kiềm có thời gian chƣng cất 40h - Lƣợng tinh dầu thu đƣợc từ mẫu trầm khác - Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng có khác nhiều yếu tố: viii  Do khác loài;  Do khác cách thức tạo trầm lồi;  Do phƣơng pháp phân tích (tách chiết, phân tích) - Tại trƣờng ĐH Lâm nghiệp Việt Nam áp dụng công nghệ SDE cách thuận lợi có độ xác cao, phân tích với lƣợng mẫu nhỏ khoảng vài gam - Đã xác định đƣợc thành phần hóa học số mẫu trầm thu thập số tỉnh Hà Tĩnh, Quang Nam, Phú Quốc Kết cho thấy thành phần tinh dầu tƣơng đối giống Tất mẫu thiếu vài chất đặc trƣng cho tinh dầu trầm Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Sinh viên Phan Trung Đức ix ĐẶT VẤN ĐỀ Tinh dầu trầm hỗn hợp nhiều hợp chất có phận Trầm Trầm hƣơng hay cịn gọi Dó Bầu (hữu thơm dễ bay khơng hịa tan nƣớc điều kiện thƣờng, loại tinh dầu Aquilaria) Thành phần hóa học tinh dầu định đến chất lƣợng tinh dầu, mang lại giá trị riêng Trong q trình sinh trƣởng, tác động mà gây tổn thƣởng, nhiễm bệnh lâu ngày tích tụ chất dạng nhựa tan dần làm biến đổi phần tử gỗ với nhiều mầu sắc, tính chất, hình dáng, hƣơng thơm khác nhiều vị trí (thân, cành, rễ) Đó trầm hƣơng có tên giao dịch thƣơng mại Quốc tế Agarwood hay Eaglewood Hiện việc phân tích thành phần hỗn hợp tinh dầu trầm hƣơng Việt Nam cịn gặp nhiều khó khăn hàm lƣợng tinh dầu trầm nhỏ khiến việc chƣng cất chƣng cất phịng thí nghiệm cịn gặp nhiều khó khăn Ngồi việc phân tích thành phần hóa học tinh dầu trầm địi hỏi cần thiết bị phân tích đại (GC/MS) với thƣ viện phổ phải cập nhập liên tục nhiều nghiên cứu cịn chuyển sang hƣớng khác Sự hình thành trần hƣơng tự nhiên thân gỗ Dó Bầu q trình lâu dài phải thời gian từ vài chục năm trở lên cho trầm Chính vậy, đề tài “Nghiên cứu xác định thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng số loài trầm Việt Nam” sở để nghiên cứu mối quan hệ lồi Dó với thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng, sở cho việc nghiên cứu tạo trầm ni cấy trầm Dó Ngồi ra, kết nghiên cứu cịn góp phần nâng cao vị thế, giá trị tinh dầu trầm hƣơng nhƣ giá trị Dó để từ đề xuất giải pháp hợp lý vấn đề bảo vệ loài đƣợc liệt kê sách đỏ IUCN (The International Union for the Conservation) có nguy bị tuyệt chủng 59 HUMULEN, ALPHAM/Z: 105 147 91 161 119 23372 PHENOL, 4-PRENYLAGAROFURAN, BARISTOLOCHEN, 4,5-DI-EPI3820 CURCUMEN ALPHA 17130 SELINEN, 10-EPI-GAMMA7815 SELINEN, ALPHAM/Z: 95 109 189 107 93 M/Z: 81 147 93 107 91 3823 AGAROFURAN, BETA-DIHYDRO55 GUAJEN, DELTANOOTKATEN M/Z: 205 91 105 109 220 17733 KESSAN M/Z: 202 145 131 91 187 M/Z: 207 149 55 164 189 3250 LAURINSAEURE 0,5000 0,1701 0,0000 2,2554 0,2489 0,2379 0,1366 0,2895 0,2024 0,2733 0,1447 1,0193 0,0972 0,2844 0,3492 0,5132 0,2480 0,3249 5404,9288 1838,1134 0,0000 24378,3190 2690,0894 2571,9498 1476,2761 3129,1693 2188,2303 2954,1109 1564,5846 11017,7394 1050,3505 3074,4635 3774,6972 5547,1637 2680,5821 3512,1096 1450 1460 1462 1464 1466 1469 1469 1490 1490 1493 1494 1499 1503 1505 1519 1537 1540 1543 OXATRICYCLO[7.2.1.0(1,6)]DODECA4,6-DIEN, 8-, 9-ISOPROPYL-20,3189 M/Z: 109 93 41 135 81 0,3563 M/Z: 93 107 91 41 122 1,6094 M/Z: 82 109 67 94 95 0,3816 M/Z: 111 126 162 91 109 1,0881 3446,4627 3851,2853 17396,4306 4124,8140 11761,7377 1551 1556 1563 1566 1575 5711,2810 3501,1684 776,8217 5470,5757 11291,2682 13884,3210 7658,8059 6499,0439 5470,5757 1587 1589 1592 1597 1601 1605 1608 1613 1615 OXATRICYCLO]7.2.1.0(1,6)]DODEC6-EN, 8-, 9-ISOPROPYL-2-METHYLM/Z: 177 107 91 105 131 14410 HUMULEN, 1,2-EPOXYM/Z: 43 109 123 81 173 M/Z: 59 121 119 91 105 311 EUDESMOL, 10-EPI-GAMMAM/Z: 109 41 55 81 107 M/Z: 161 135 59 189 107 M/Z: 105 189 161 91 133 71 0,5284 0,3239 0,0719 0,5061 1,0446 1,2845 0,7086 0,6013 0,5061 1568 EUDESMOL, GAMMA995 HINESOL M/Z: 161 137 119 152 108 59 M/Z: 105 107 91 81 93 39408 JINKHOEREMOL 75 EUDESMOL, BETAM/Z: 111 55 109 126 204 3831 VALERIANOL 3885 EUDESMOL, ALPHA3848 BISABOLOLOXID B M/Z: 93 164 108 149 43 M/Z: 59 109 166 95 151 M/Z: 110 109 122 180 222 PROPAN-2-OL, 2-(1,2,6,7,8,8AHEXAHYDRO-8,8A-DIMETHYL-2NAPHT M/Z: 218 108 91 82 109 M/Z: 147 190 175 41 109 M/Z: 176 123 220 17754 OPPOSITADIEN-12-AL, 4(15),10M/Z: 178 122 135 121 107 5741 MYRISTINSAEURE M/Z: 218 91 187 203 159 4753 FUKINON, DEHYDROKARANONE 4874 PENTADECANSAEURE M/Z: 122 107 234 91 93 DIHYDROCOLUMELLARIN 5810 PALMITINSAEURE PENTANON, 3-, 1,5-DIPHENYLM/Z: 91 121 92 131 107 2,8079 30350,7538 1616 1,4161 15306,6707 1621 2,0032 21652,5385 1624 0,2024 2188,2303 1628 4,5206 48863,1818 1630 1,1226 12133,7368 1633 3,0367 32823,4539 1634 2,5670 27746,7597 1636 1,2102 13080,7007 1638 0,6695 7237,0173 1640 1,0578 11433,5031 1642 2,9152 31510,5158 1645 10,2868 111189,5140 1651 CHROMON, 2-(2-PHENYLETHYL)13089 DIISOOCTYLPHTHALAT 0,1721 1859,9957 0,4525 4890,6946 72 2,4815 0,4332 1,2218 0,6883 0,6883 1,9253 0,2470 0,9110 1,4161 0,3887 0,5547 1,3695 2,1034 1,8423 1,8048 0,4950 26822,1687 4682,8128 13205,9696 7439,9829 7439,9829 20810,0698 2669,6409 9847,0362 15306,6707 4201,4021 5995,7509 14803,3777 22735,7124 19912,8954 19508,0728 5350,2230 1653 1660 1669 1674 1674 1702 1740 1741 1775 1792 1840 1846 1917 1941 1972 2010 2269 2505 3.5.4 So sánh thành phần hóa học tinh dầu trầm khu vực Bảng 3.13 Sự xuất số hóa chất mẫu trầm hƣơng TT Hà Tĩnh Hóa chất Hexahydro-8,8a-dimethyl- Quảng Phú Nam Quốc x x x 2-naphtyl)-propan-2-ol Valerianol (Kusunol) x x x Jinkoh-Eremol x x x Agarospirol (Hinesol) x x x Naphtho [2,3-b] furan-(ol) Jinkohol I Pogostol x x Dihydrocolumellarin x x x β - Agarofuran x x X 10 Jinkohol II 11 Acorenone 12 Rotundone 13 Spathulenol 14 Dehydrofukinon 15 BAIMUXINAL x x Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng Dó bầu (A crassna) khu vực giống Các chất thấy mẫu (ký hiệu „x“ bảng 05) giống Riêng Pogostol thấy khu vực Hà Tĩnh Quảng Nam! Một số hợp chất không thấy mẫu loại Jinkohol, Acorenone, Rotundone, Spathulenol, Dehydrofukinon BAIMUXINAL, loại hợp chất đƣợc cho đặc trƣng lồi Dó trung quốc (A sinensis) thấy hầu hết mẫu, trừ khu vực Phú Quốc.[2] 73 3.6 Đề xuất quy trình tách chiết phân tích tinh dầu trầm hƣơng Qua q trình nghiên cứu tơi xin đề xuất quy trình tách chiết phân tích tinh dầu trầm hƣơng phịng thí nghiệm tối ƣu gồm bƣớc sau: Bước 1:Chuẩn bị mẫu Nghiền nhỏ mẫu trầm thành dạng bột mịn có kích thƣớc nhỏ 0.5 mm nghiền chuyên dụng Bước 2: Ngâm mẫu Cân 5g mẫu trầm đƣợc nghiền mịn ngâm 100ml dung dịch axit (H2SO4 loãng, pH=2) sau lắc 15 phút Sau ngâm mẫu ngày kể từ lúc mẫu ổn định Bước 3: Chưng cất mẫu phương pháp chưng cất lôi nước SDE Lấy hai bình cầu, bình chứa mẫu đƣợc ngâm mơi trƣờng axit (H2SO4 lỗng, pH=2), bình chứa dung mơi dichloromethane khoảng 1ml Gia nhiệt cho bình cầu bếp nhiệt Sau tính thời gian chƣng cất Chƣng cất mẫu 60h chia làm phân đoạn chƣng cất Thời gian chƣng cất PĐ 30h, PĐ 30h Sau chƣng cất ta đem lƣợng dung môi chƣa tinh dầu cô cạn (bằng thiết bị cô quay chân khơng) xuống cịn ml Bước 4: Phân tích mẫu Đƣa mẫu phân tích thiết bị GC/FID GC/MS Ưu nhược điểm phương pháp Ưu điểm:  Cần lƣợng mẫu nghiên cứu nhỏ (vài gam)  Sử dụng lƣợng dung môi nhỏ (vài ml)  Phù hợp với quy mơ phịng thí nghiệm Nhược điểm:  Thiết bị chƣng cất không phổ biến, đắt tiền khó mua thị trƣờng  Nếu hàm lƣợng chất thấp, phải làm giầu mẫu từ dung mơi  Khơng tính đƣợc khối lƣợng tinh dầu 74 CHƢƠNG KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ q trình nghiên cứu, khóa luận đạt đƣợc kết sau: - Qua trình chƣng cất phân tích số liệu thu đƣợc từ việc phân tích mẫu thiết bị GC/FID GC/MS khảo sát mẫu cho thấy mẫu đƣợc ngâm chƣng cất mơi trƣờng axit (H2SO4 lỗng, pH=2) cho lƣợng tinh dầu lớn môi trƣờng trung tính(nƣớc cất, pH=7) mơi trƣờng kiềm (NaOH, pH=10) - Mỗi mẫu trầm khác cho lƣợng tinh dầu khác đƣợc ngâm chƣng cất khoảng thời gian định Trong môi trƣờng axit thời gian chƣng cất 60h, cịn mơi trƣờng trung tính mơi trƣờng kiềm có thời gian chƣng cất 40h - Lƣợng tinh dầu thu đƣợc từ mẫu trầm khác - Thành phần hóa học tinh dầu trầm hƣơng có khác nhiều yếu tố:  Do khác loài;  Do khác cách thức tạo trầm loài;  Do phƣơng pháp phân tích (tách chiết, phân tích) - Tại trƣờng ĐH Lâm nghiệp Việt Nam áp dụng công nghệ SDE cách thuận lợi có độ xác cao, phân tích với lƣợng mẫu nhỏ khoảng vài gam - Đã xác định đƣợc thành phần hóa học số mẫu trầm thu thập số tỉnh Hà Tĩnh, Quang Nam, Phú Quốc Kết cho thấy thành phần tinh dầu tƣơng đối giống Tất mẫu thiếu vài chất đặc trƣng cho tinh dầu trầm 75 4.2 Tồn - Do thời gian thực khóa luận cịn hạn chế, việc tiến hành chƣng cất mẫu trầm đòi hỏi nhiều thời gian - Trong trình chƣng cất cịn xảy số cố khơng mong nhƣ cạn dung môi, nhiệt độ chƣng cất chƣa phù hợp, thời gian chƣng cất khơng liên tục chƣa có kinh nghiệm từ trƣớc - Số lƣợng mẫu có hạn nên chƣa hồn tồn tìm hết thành phần tinh dầu trầm hƣơng 4.3 Khuyến nghị - Đề tài cần nghiên cứu thêm số mẫu trầm từ khu vực khác để hồn thiện thành phần hóa học tinh dầu trầm - Tìm hiểu thêm trình làm tinh dầu tinh chế tinh dầu - Sử dụng số liệu đề tài để phát triển thêm nhiều hƣớng 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO Hội trầm hƣơng Việt Nam, (2010) Các loài sinh trầm hương Đoàn Ngọc Dũng (2016) Đồ án tốt nghiệp nghiên cứu chiết xuất tinh dầu từ bạch đàn phương pháp chưng cất lôi nước Bùi Văn Năng (2017), Báo cáo tham luận.”Thành phần hóa học tinh dầu trầm – số kỹ thuật tách chiết phân tích” Nguyễn Thế Nhã (2017) Tổng quan trầm hương Nguyển Huy Sơn, Lê Văn Thành, (2009) thực trạng phát triển dó trầm nước ta Tạp chí Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Nguyễn Thế Nhã (2017) Tổng quan trầm hương Ma nor azah* et all (2013) classification of agarwood (gaharu) by resin content, journal of tropical forest science 25(2): 213–219 (2013) Ma nor azah et all (2014) chemometric study of selected agarwood oils by gas chromatography–mass spectrometry, journal of tropical forest science 25(2): 213–219 (2013) Nuttawan yoswathana, m.n eshiaghi, k jaturapornpanich (vol:6, no:5, 2012)enhancement of essential oil from agarwood by subcritical water extraction and a pretreatments on hydrodistillation 10 Zheng zhang et all (2014) braz chem soc., vol 25, no 1, 20-26, 2014 PHỤ LỤC Một số hình ảnh thực phịng phân tích mơi trƣờng Trƣờng Đại Học Lâm Nghiệp Hình a Sắc ký đồ mẫu M01-Pd1 axit Hình b Sắc ký đồ mẫu M01-Pd1 kiềm Hình c Sắc ký đồ mẫu M04-Pd2-l2 Hình d Sắc ký đồ mẫu M02-Pd2-l1 Hình e Sắc ký đồ mẫu M03-Pd234-l1 Một số bảng số liệu phấn tích mẫu Bảng số liệu mẫu M01 mơi trƣờng kiềm: 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Bảng 01 Số liệu mẫu M01 môi trƣờng kiềm Reten Time Area Height Area Height [min] [mV.s] [mV] [%] [%] 3,933 381,318 241,836 6,3 4,413 34,034 16,911 0,3 0,4 4,607 26,03 12,312 0,2 0,3 4,853 45,215 18,902 0,4 0,5 5,05 428,408 257,039 3,4 6,7 5,717 40,305 17,13 0,3 0,4 5,817 59,357 26,068 0,5 0,7 6,047 99,471 56,185 0,8 1,5 6,24 26,769 11,403 0,2 0,3 6,503 32,174 11,773 0,3 0,3 6,867 24,006 14,807 0,2 0,4 7,503 32,898 16,552 0,3 0,4 7,907 1706,512 781,643 13,3 20,3 8,04 120,477 32,734 0,9 0,9 8,703 31,874 14,41 0,2 0,4 9,013 29,475 13,383 0,2 0,3 9,313 27,367 13,026 0,2 0,3 10,72 49,546 17,208 0,4 0,4 11,113 237,329 82,928 1,9 2,2 11,36 243,263 89,576 1,9 2,3 11,833 32,915 12,579 0,3 0,3 12,203 38,307 11,277 0,3 0,3 12,5 126,562 46,75 1,2 12,777 134,327 42,701 1,1 1,1 12,987 74,076 20,209 0,6 0,5 13,527 135,518 41,557 1,1 1,1 13,673 164,543 51,36 1,3 1,3 13,757 42,047 19,407 0,3 0,5 13,923 117,97 39,662 0,9 W05 [min] 0,02 0,03 0,03 0,03 0,02 0,04 0,04 0,02 0,03 0,04 0,03 0,03 0,04 0,04 0,04 0,03 0,03 0,05 0,04 0,04 0,04 0,06 0,05 0,05 0,06 0,05 0,05 0,04 0,05 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 14,067 14,413 14,52 14,77 14,9 15,607 15,947 16,33 16,507 16,833 17,383 18,137 19,087 19,367 19,93 20,353 20,593 21,683 22,267 22,38 23,13 23,39 24,74 25,037 25,877 26,633 28,3 29,33 30,317 32,81 35,977 Total 665,064 377,504 96,205 71,443 615,5 134,33 42,293 112,954 309,358 121,155 578,47 166,803 59,415 375,864 230,8 129,628 241,779 173,329 92,357 268,463 981,762 184,195 57,539 176,519 76,974 300,933 299,531 298,472 261,259 342,547 400,115 12784,66 146,76 102,633 26,34 22,539 162,075 40,371 16,868 35,96 63,165 22,6 168,426 43,671 19,048 67,891 55,104 28,238 51,908 48,373 15,782 35,56 232,151 47,252 15,183 47,509 18,959 57,576 56,862 46,704 43,802 39,638 33,638 3843,912 5,2 0,8 0,6 4,8 1,1 0,3 0,9 2,4 0,9 4,5 1,3 0,5 2,9 1,8 1,9 1,4 0,7 2,1 7,7 1,4 0,5 1,4 0,6 2,4 2,3 2,3 2,7 3,1 100 3,8 2,7 0,7 0,6 4,2 1,1 0,4 0,9 1,6 0,6 4,4 1,1 0,5 1,8 1,4 0,7 1,4 1,3 0,4 0,9 1,2 0,4 1,2 0,5 1,5 1,5 1,2 1,1 0,9 100 0,07 0,05 0,06 0,05 0,05 0,05 0,04 0,05 0,08 0,09 0,06 0,06 0,05 0,1 0,06 0,07 0,08 0,06 0,11 0,09 0,06 0,06 0,07 0,06 0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0,13 0,17 Bảng số liệu mẫu M01 môi trƣờng axit: 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Bảng 02 Số liệu mẫu M01 môi trƣờng axit Reten Time Area Height Area Height [min] [mV.s] [mV] [%] [%] 3,957 1533,466 950,236 7,8 21 4,223 62,313 39,04 0,3 0,9 4,423 23,995 14,114 0,1 0,3 4,617 24,369 11,698 0,1 0,3 4,86 47,067 18,724 0,2 0,4 5,057 393,982 212,69 4,7 5,723 30,292 14,442 0,2 0,3 5,973 61,605 20,055 0,3 0,4 6,057 48,295 26,913 0,2 0,6 6,873 16,013 8,145 0,1 0,2 7,5 19,822 8,124 0,1 0,2 7,893 398,61 204,095 4,5 8,04 77,217 20,573 0,4 0,5 8,713 16,141 7,527 0,1 0,2 9,017 10,931 5,426 0,1 0,1 9,32 12,386 5,937 0,1 0,1 11,123 173,371 71,621 0,9 1,6 11,363 102,355 24,879 0,5 0,5 12,52 491,517 171,943 2,5 3,8 12,787 75,134 22,381 0,4 0,5 12,94 51,737 15,999 0,3 0,4 13,533 116,187 36,76 0,6 0,8 13,693 339,658 95,735 1,7 2,1 13,94 166,793 51,773 0,8 1,1 14,077 288,383 81,214 1,5 1,8 14,427 235,077 80,093 1,2 1,8 14,79 62,363 19,523 0,3 0,4 14,91 354,953 89,26 1,8 15,627 167,602 41,085 0,8 0,9 W05 [min] 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,03 0,03 0,04 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,06 0,05 0,05 0,06 0,06 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 16,1 16,343 16,513 16,867 17,193 17,51 18,15 19,123 19,377 19,57 19,943 20,37 20,637 21,69 22,27 22,397 23,157 23,393 24,76 25,047 25,873 26,64 27,077 27,953 28,307 29,423 29,713 30,317 32,81 33,267 35,973 Total 98,865 221,351 238,696 91,329 158,483 244,972 89,033 1165,522 1381,868 730,718 212,358 107,095 255,626 172,761 409,506 141,419 1280,332 118,411 510,446 125,065 311,383 248,25 828,249 428,988 215,683 2342,736 750,672 147,422 172,494 913,397 235,743 19750,51 32,873 38,058 39,222 30,511 46,004 33,005 22,831 119,284 137,857 73,625 33,862 25,258 50,983 28,799 81,312 31,71 269,613 29,372 108,059 31,862 55,997 39,309 126,389 31,826 35,29 365,833 97,681 25,804 22,599 79,431 20,762 4535,026 0,5 1,1 1,2 0,5 0,8 1,2 0,5 5,9 3,7 1,1 0,5 1,3 0,9 2,1 0,7 6,5 0,6 2,6 0,6 1,6 1,3 4,2 2,2 1,1 11,9 3,8 0,7 0,9 4,6 1,2 100 0,7 0,8 0,9 0,7 0,7 0,5 2,6 1,6 0,7 0,6 1,1 0,6 1,8 0,7 5,9 0,6 2,4 0,7 1,2 0,9 2,8 0,7 0,8 8,1 2,2 0,6 0,5 1,8 0,5 100 0,05 0,08 0,11 0,05 0,06 0,07 0,06 0,18 0,2 0,16 0,1 0,06 0,08 0,07 0,08 0,08 0,08 0,06 0,08 0,06 0,08 0,07 0,09 0,2 0,08 0,1 0,12 0,09 0,12 0,18 0,17 Bảng số liệu mẫu M01 mơi trƣờng trung tính: 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Bảng 03 Số liệu mẫu M01 mơi trƣờng trung tính Reten Time Area Height Area Height [min] [mV.s] [mV] [%] [%] 3,94 624,523 333,729 5,2 9,9 4,217 28,364 17,276 0,2 0,5 4,417 19,347 10,445 0,2 0,3 4,607 39,774 13,64 0,3 0,4 4,853 60,042 21,898 0,5 0,6 5,047 405,946 234,682 3,4 6,9 5,713 28,533 11,896 0,2 0,4 5,813 53,816 18,995 0,4 0,6 6,043 110,242 47,312 0,9 1,4 6,497 35,653 13,005 0,3 0,4 6,86 19,911 12,666 0,2 0,4 7,897 1538,427 712,082 12,8 21,1 8,027 118,748 31,623 0,9 26,712 12,919 0,2 0,4 9,3 22,898 11,259 0,2 0,3 11,103 198,258 73,339 1,7 2,2 11,347 245,312 94,576 2,8 12,763 90,203 27,718 0,8 0,8 12,963 43,414 11,033 0,4 0,3 13,517 93,312 28,043 0,8 0,8 13,657 102,238 33,151 0,9 13,737 27,871 12,844 0,2 0,4 13,907 78,8 26,568 0,7 0,8 14,043 424,045 93,38 3,5 2,8 14,393 134,086 49,37 1,1 1,5 14,753 61,289 18,408 0,5 0,5 14,88 427,176 114,558 3,6 3,4 15,933 48,751 17,92 0,4 0,5 16,207 46,181 13,566 0,4 0,4 W05 [min] 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,03 0,04 0,03 0,03 0,04 0,03 0,04 0,04 0,04 0,05 0,07 0,05 0,05 0,04 0,05 0,07 0,05 0,05 0,06 0,05 0,06 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 16,313 16,487 16,82 17,37 17,487 17,673 18,123 19,073 19,323 19,38 19,53 19,917 20,33 20,607 21,663 22,36 22,447 23,113 23,367 25,017 25,283 25,86 26,61 27,02 28,273 29,313 30,273 30,783 32,76 35,897 36,703 Total 71,25 206,908 92,082 668,93 62,274 80,182 88,756 45,233 152,034 182,653 175,274 154,614 82,255 323,781 94,454 98,029 89,219 1060,605 105,134 120,173 304,272 160,45 128,902 138,64 185,262 508,489 132,132 451,348 160,53 230,977 483,141 11991,86 20,245 36,508 13,184 193,872 14,186 15,7 21,553 14,28 44,414 47,699 21,69 29,486 18,426 70,035 26,123 24,274 19,476 237,169 25,915 28,14 22,155 42,048 30,434 18,506 32,191 84,697 22,995 23,203 19,964 18,397 24,734 3379,599 0,6 1,7 0,8 5,6 0,5 0,7 0,7 0,4 1,3 1,5 1,5 1,3 0,7 2,7 0,8 0,8 0,7 8,8 0,9 2,5 1,3 1,1 1,2 1,5 4,2 1,1 3,8 1,3 1,9 100 0,6 1,1 0,4 5,7 0,4 0,5 0,6 0,4 1,3 1,4 0,6 0,9 0,5 2,1 0,8 0,7 0,6 0,8 0,8 0,7 1,2 0,9 0,5 2,5 0,7 0,7 0,6 0,5 0,7 100 0,06 0,1 0,12 0,06 0,07 0,08 0,06 0,05 0,06 0,06 0,13 0,07 0,06 0,07 0,06 0,08 0,07 0,07 0,07 0,07 0,22 0,06 0,07 0,09 0,08 0,09 0,09 0,29 0,12 0,18 0,42