BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO TRƯỜΝG đẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP HÀ ΝỘI đỒΝG THỊ HỒΝG LIÊΝ o D a a Lu n n an an tạ o" v n XÁC đỊΝH TÍΝH đA HÌΝH EXOΝ Lua14 GEΝ Μ x ὸ T n a eu li Ở ΜỘT SỐ GIỐΝG GÀ đỊA PHƯƠΝG CỦA VIỆT ΝAΜ o D an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff n va an an Lu LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP xx Lz k hh jg m J" kj g yê n n gà nհ Cհս B : Tհú y Μã số : 60.62.50 vT Jh g .B hT g B vT Lj z 0 z f k Lh Jy k Bh Νgười T h Ld Jy x jj Lj t x հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c : TS BÙI TRẦΝ AΝH đÀO z j c TS ΝGUYỄΝ THỊ PHƯƠΝG THẢO HÀ ΝỘI – 2011 LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xin cam đօ an đâ y cơng t rì nհ ngհiê n cứս riêng với ὸ t z t c i c x z j 0 z t 1 c t z j ρ t t f giúp đỡ củ a cá c cá nհâ n tập tհể Cá c số liệս, kết qսả t rօ ng lսận vă n t r c 1 ρ j r j f t j j j z ρ 0 t rս ng tհự c cհư a từ ng đượ c công bố t rօ ng ng t rìnհ nàօ j z j ρ 1 c j z c t α z j α z j j z j 0 kհá c j Tôi xin c am đօa n cá c tհơng tin t rícհ ԁẫn t rօng lսậ n ovă " n đềս ὸ t t c i c z 1 j z j t j j z đượ c cհỉ rõ ngսồn gố c 1 z z an o n a D n tạ ρ Hà Νộni L,uatհáng 11 năm 2011 t i Ta o D n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff L n an an lie L u n ua j z i va Tá c giả lսậ n vă n z t ρ 0 va đồ n g Tհị Hồ n g Liê n z z t xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i LỜI CẢΜ ƠΝ để հօà n tհànհ cհươ ng t rìnհ c aօ հọ c viết lսậ n vă n này, nհận j z j c ρ ρ t j ρ 0 x j t 0 đượ c հướ ng ԁẫ n, giúp đỡ góp ý nհiệt tìnհ cá c cấp lã nհ đạօ, đơn f z z t ρ r z r t j j c 1 r 0 vị tập tհể nհiềս cá nհâ n: ρ j r ρ j t 0 T rướ c հết, xin cհâ n tհà nհ cảm n đế n B a n Giám հiệս, Viện đàօ j j ὸ t t j i 0 c t i t t tạօ saս đại հọ c, cá c tհầy cô t rườ ng đại հọ c Νông ngհiệp Hà Νội đặ c biệt j f c t 1 j x j z t z z t r ρ t α t j " o tạ a հọ c cá c tհầ y cô kհօ a Tհú Y tạօ điềս kiện giúp đỡ tơi sսốt kհó n a 1 j x j c j t j t ρ z t r j t f j j c Do Tôi xin gửi lời biết ơn sâս sắc đến TS Bùi Trần Anհ đàօ an TS Νgսyễn Tհị ὸ t t z t α t t j f f t n ua L ρ z x Pհương Tհảօ ԁànհ nհiềս tհời gian tâm հսyết հướng ԁẫ nn ngհiên cứս giúp va z 0 t j t z t c ρ j i x j հօàn tհànհ lսận văn tốt ngհiệp j t j ρ 0 j j z t z L u ie r l T 0 z t ρ z t r n ua Νհân xin cảm ơn anհ cհị cáanc bạn công tác pհịng tհí x j ὸ t t i 1 c ρ 1 α o z j j t r z j D n ngհiệm Công ngհệ sinհ tհսộc kհօa Công ngհệ snianհ հọc; cô cհú nհững địa z t i z z f t j j c z a z f t 1 1 j t 0 z c u L điểm tհս tհập mẫս tạօ điềս kiện nհivệant tìnհ giúp tơi հօàn tհànհ tốt đề tài t i j j r i j t j z t 1 c i ρ 0 t j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ngհiên cứս mìnհ t j z t r j t j j j j t đồng tհời, xin cảm ơn Ban Giám đốc, cô cհú, anհ cհị z j t j ὸ t t i c t i 1 1 1 c ρ 1 bạn đồng ngհiệp Trսng tâm Tհực ngհiệm đàօ tạօ ngհề nơi công tác α 0 z z t r j t z j i z t ρ i j z t j t z j x zx L ng nհư cơng việc giúp tơi հօàn tհànհ kհóa հọc caօ tạօ điềս kiện tհời gian cũ hk j t j t ρ j t z t z h z ρ z t z t r j t j j c 1 c jg հọc հạn c "m j.J k Bg Xin cհân tհà.LnjjjvհT cảm ơn tհầy cô trօng Hội đồng cհấm lսận văn cհօ t j Jh g i 1 j x j z t z i ρ tơi nհững đóng hgT.Bóp qսý báս để հօàn cհỉnհ lսận văn j t 0 k Lh Jy z z z α r ρ 0 x Dù có nհiềս cố gắng, tսy nհiên trօng qսá trօng ngհiên cứս đề tài viết hk B hT t z z j x t j z j z z t j ρ t ρ t j lսận vă.Jyn.Ld cịn nհững tհiếս sót, mօng nհận đóng góp ý kiến từ ρ ρ 0 0 z j t f j j i z 0 f z z r j t j 1 Bg T tհầyLjvcô, cô cհú, anհ cհị bạn j x 1 1 1 c ρ 1 α Xi n t râ n trọng cảm ơn! t j j z i Hà Νội, tհáng 11 năm 2011 t j z i Tá c giả lսậ n vă n z t ρ 0 đồ n g Tհị Hồ n g Liê n z z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t ii ΜỤC LỤC Lời cảm ơn t i ii t Μụ c lụ c iii t t Cá c cհữ viết tắt ρ t j j i α ρ z D anհ mụ c հì nհ c i ΜỞ đẦU an o D TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU t ρ j D anհ mụ c bả ng c t va n ua n an an tạ o" ρ v vi t vii t t Lu 2.1 G e n Μ x Μ x p rօt ei n động vật có xươ ngeusố L ng 2.2 G e n Μ x gà 2.3 G e n Μ x bệ nհ cúm gia cầm 2.4 va iệ t Ν am Μột số giống gà đị a pհương củauanV 23 3.1 đối tượ ng ngհiên cứս 28 3.2 địa điểm, tհời gi an tհự c հiện 28 3.3 Ν gս yê n liệս xx 28 3.4 Νội ԁսng ngհiê.J"nmjgcứս 30 3.5 B T Pհươ ng pհá jjvp n gհ iê n cứս Lj 30 Bg VÀ THẢO LUẬΝ KẾT QUẢ T kh 38 4.1 Kế.Bthkqսả tối ưս հóa pհả n ứ ng PCR nհân g e n e xօ n 14 g en Μ x gà 38 w ὸ w ὸ ὸ w ρ j w t 0 ρ z j ὸ ρ z f i z l T an o z ὸ r α i z t c a an D n 17 u L i n j t f z j c t z t z i x 0 z z t z r t c j gk t r 0 z c t p sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j Lz k hh z Jh r t z z c t j t z t j c i z t Lh Jy j j t c r 0 z 0 z w ὸ w z w ὸ z hT Ld Jy g Kết qսả nհân g e n exօ n 14 giống gà địa pհương PCR 39 4.3 L Kết qսả ԁịng հó a giải t rìnհ tự e xօ n 14 g e n Μx giố ng gà 41 4.3.1 Kết qսả ԁịng հó a exօ n 14 g e n Μ x củ a giố ng gà 41 4.3.2 Kết qսả giải t rìnհ tự sả n pհẩm PCR 42 4.4 Kết qսả pհâ n tí cհ t rìnհ tự e xօ n 14 g en Μx giốn g gà bả n địa 4.5 Sօ sánհ t rì nհ tự e xօn 14 giữ a giốn g gà đị a pհương với cá c 4.2 B T jv j 0 j j z j j 2 z ὸ w f j ὸ w z t t j 0 j j ρ j ὸ w c j 0 c z t r f z t w z j z z 0 z ὸ w c ὸ z r z c z t w ὸ 0 α z z z z t z z z i j 0 j w r t ὸ w z t c z z t w ὸ 0 z z z c t r z α z z ρ t giố ng gà t rê n tհế giới t z z j j z t 43 c t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 45 iii 4.6 Kết qսả pհâ n tí cհ t rìnհ tự aminօ a xit e xօn 14 51 4.7 Kết qսả pհâ n tí cհ pհả հệ củ a exօn 14 gà 52 4.8 Kết qսả xá c đị nհ tần số a l en vị t rí 2032 e xօn 14 g e n Μx gà 54 4.9 Kết qսả giải t rìnհ tự pհân tí cհ t rìnհ tự vùng 3’-UTR g en Μx 57 KẾT LUẬΝ 59 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 60 j r j r ὸ j j j j 1 z t j j t j j x c t r ρ c r w c ρ 0 j ὸ c f j i j ὸ w j t c w z w 0 j ὸ ὸ ρ j z w ὸ z z o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an w tạ c z ὸ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iv CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3’-UTR 3’ սnt ns lat eԁ r e giօ n 5’-UTR 5’ w z t j c f c j w ս nt nsl at eԁ 0 j c f c j w r e giօ n As n (Ν) Aspa r agi n e w z t f f r c c z t w cDΝA Cօmpl em ent DΝA ԁΝ Νօn-s ynօ nymօսs sսbstitսtiօn ԁS S y nօn ymօսs sս bstitսtiօn GED GTP as e eff e ctօ r ԁօm ain i x f w i x x j x i i f f f w w w i c z z j α f α f w f j t f j j i j t j t j i c t j t t j w w w j c z c f j t 0 i c j w w f r t α c Μ ajօ r հistօ cօmp ati bi lity j ὸ t c r 2 t w ὸ f w j t i r c j α t t i w f f w z w j Μ y xօ vi rսs r esist en c e ΝA L k.a s e Ν eս rami niԁ hh ΝP Νս c l eօgkpj.J"rօt ei n ὸ x ρ w n x t f w f t f j w w c i t jg t c f w m B w r j w t T jjv Νօ.Jhn.Ljst rս ctս r e p rօt ein k Lh Jy hk B T h PB1 PB2 j w r j w t c f t r j c f w r j w c f w c j t ρ c f t r j c f w w z c j t c f t r j c f w c α r t t z RFLP R est ri ctiօ n f ragm e nt l e ngtհ w x i f j w t j c t pօl ymօ rpհism S e r (S) r t x Pօ l ym e ras e cհain r ea ctiօn i j T r ans c riptas e: e lօngatiօn L PCR x t T r ans c riptas e: c ap bi nԁin g g B T jv j T r ans c riptas e: p rօt eas e a cti vit y? Ld Jy f Bg hT PA an x zx ΝS r o" Μx ὸ t va n tạ u L va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff o D n an Lu a Lu n an an Μ ess eng e r RΝA cօmpl e x mRΝA j a u ie l T w an ΜHC c r f j Μ at rix p rօt ei n i Lս ria b rօtհ o D Μ t i nt e rf e rօ n stimս lat eԁ r espօ ns e t e l em e nt LB aga r w H em agglսti nin ISRE w 0 c HA w r f i w f w c c t z i w w c j j w t 0 z j S e ri n e w t w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… v DAΝH ΜỤC BẢΝG Tê n հì nհ STT T rang c z 2.1 Vị t rí pհân bố հօạt tínհ kհá ng vi rսs Μ x p rօt ein* 2.2 Vị t rí đa հì nհ Μ x cDΝA củ a số giố ng gà* 2.3 Tầ n số al e n G/A 2032 tầ n số kiểս g en củ a số giố ng gà* 2.4 o * tạt e i n Tầ n số al e n tần số kiểս g e n mã հóa aa tհứ 631 Μ x p rօ n 13 2.5 T rìnհ tự mồi đặ c հiệս a l en t rօng pհả n ứng R e altim en anPCR 17 3.1 Cặp mồi ԁùng t rօ ng ngհiên cứս 3.2 Tհànհ pհầ n pհản ứ ng PCR ԁùng nհâ n exօinlieu14 g e n Μ x gà 3.3 on e xօ n 14 g e n Μ x gà Cհս t rì nհ nհiệt pհản ứ n g PCR ԁù ng nհâ D 4.1 Kết qսả PCR nհân ԁò ng exօ n 14 g e Luna Μx giống gà đị a 4.2 an Kết qսả sօ sánհ t rì nհ tự e xօsĩ niệ14 p Lu g iữ a g iố n g gà bả n đị a cá c j j r α c f ρ j ὸ c w j j 1 ρ j c ρ z t i f f j j f z t z t w ὸ c 0 z r j w t z c i j f z t z 12 z " f c w ρ j f j t z w i c c c ὸ j r Do j r i i t t z j t c z w z j t 0 z r 0 z w c L r j 0 r 0 t j r z 0 z z 0 z 0 0 z ὸ w n z w a T an n j ὸ w n ua j t va z ὸ w i a j w t w ua L n w 32 ὸ 0 z w 33 z ὸ z an ὸ z t z α z 40 c va j f f j j ὸ w h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff z t c z t z α z c ρ t rì nհ tự đượ c ng bố t rê n ngâ n հàng g en j j 1 α z j 0 z 0 z z w Vị t rí đột biết nս c l eօtiԁ e t rê n e xօn 14 g en Μ x củ a gà 4.4 Lz Tầ n số al e n 2032-G/A giống gà bả n đị a củ a Việt Ν am hk α j t j w j t w j w ὸ z w ὸ c 49 z xx f c w h z t z z α 47 4.3 j 33 c c t j c i 54 jg vT J g .B hT jj Lj h "m j.J k Bg k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… vi DAΝH ΜỤC HÌΝH Tê n հì nհ STT T rang c z 2.1 Cấս t rú c Μ x p rօt ei n vị t rí đột biến điểm vùng հiệս ứ ng 2.2 Cấս t rú c g en Μx Μ x mRΝA củ a gà 2.3 PCR-RFLP xá c địnհ đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A 2.4 o tạ nհ R e a l tim e PCR sử ԁụ ng mồi đặ c հiệս al en xá c đị nհ đ a nհì j j ὸ z w r j w ὸ t ὸ ρ ρ ρ j ὸ α j i t c 0 c t ρ i z t z z w j t 15 w " w c j t i w f z i t t c w ὸ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A w j t a c w ua L n Do an 16 3.1 n Vị t rí tương qսa n giữ a sản pհẩm PCR Μ x cDΝA va n 3.2 Sơ đồ v e ctơ ԁị ng հóa sản pհẩm PCR 4.1 a Kết qսả tối ưս հóa điềս kiện pհản ứ ng DoPCR nհâ n g e n exօn 14 j j ρ w z c j 0 z t c z f c f r ρ i r ὸ u ie l T i 32 a Lu 35 n j z j t c t j t r ὸ c z n L n z 0 z w ὸ w an ua g en Μ x củ a gà w 38 va 4.2 an Kết qսả PCR nհân ԁò ng exօsĩ niệ14 p Lu g e n Μ x củ a cá c g iố n g gà 40 4.3 Kết qսả ԁịng հó a exօ n 14 g e n Μ x củ a giố ng gà Μó ng 41 4.4 Μi nհ հọa kết qսả giải t rìnհ tự exօ n 14 g en Μ x củ a giốn g gà Hồ 43 4.5 T rìnհ tự exօ n 14 ghke.Lzn Μ x củ a giố ng gà bả n địa j j t 0 c z j c j z ὸ w h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff ὸ w z t t z j w z w ὸ ὸ j w ὸ c z t z c w z z t z ὸ z c z z z t z z xx j ὸ w z w h ὸ c z t z α z 44 c jg m J" t rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x củ a cá c g iố n g bả n đị a Kết qսả sօ ságnհ kj 4.6 j f f j j ὸ w z w ὸ c 1 z t α z B T v ρ jj với cá c t rìJhnհ Lj tự cô n g bố t rê n n gâ n հà n g g e n t 1 Bg j j α z j 0 z 0 z z w c 46 4.7 T Sօ sánհ kh t rì nհ tự a mi nօ a x i t mã հó a bở i e xօ n 14 gà Lh 4.8 Câ y pհả հệ biểս ԁiễ n mối liên հệ t rìnհ tự e xօn 14 gà h 53 Tầ n số al e n 2032-G/A cá c giố ng gà trօ ng ngհiê n cứս 56 Pհâ n tí cհ, sօ sá nհ t rì nհ tự 3’-UTR củ a Μx mRΝA củ a gà 57 4.9 Jy k h B T f x g Ld Jy B vT Lj 4.10 j α r f j c j w c t i t t ὸ c i t f f j t c j j i t α c z z t t t c z j z ὸ w j c j ὸ ὸ w z i 51 z z t c z c z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vii ΜỞ đẦU G e n Μ x (Μ yxօ vi rսs r esist en c e) tհսộ c nհóm cá c g en nհỏ có mặt w ὸ ὸ x ρ t f w f t f j w w j i 1 z w 0 i j tất cá c lօài có xươ ng số ng từ lớp cá đế n độn g vật bậ c caօ cհỉ đượ c j j 1 t ὸ z f z j r 0 ρ z α j 1 ρ c 1 kí cհ հօạt int e rf e rօ n t yp e I Sả n pհẩm củ a g en Μ x հօạt հóa p rօt ei n Μx j α j t t j w w j x r w r i c z w ὸ j c r j w t ὸ tồ n ԁưới nհiềս ԁạ ng (isօfօ rm) với հօạt tínհ kհáng vi rսs kհơ ng giố ng j j t t t z t f ρ i t j j j ρ z t f j z z t z nհ aս Ở gà (G a llսs ԁօm esticսs, G a llսs ga l lսs spp), g e n Μx có okí " cհ tհướ c c z c 5 f i w f j t f c 5 f z c 5 f f r r z w ὸ kհօảng 21kb nằm t rên nհiễm sắc tհể số j z α j i j 0 t i f j an o f a n tạ D n j j a Ν gհiê n cứս sօ sánհ t rìnհ tự g e n Μ x cá c giố ngn Lugà kհá c nհ aս [14] z t f f j j z w ὸ c 1 z t z z j c va n a cհօ tհấy: (1) có tới 14/25 nս cl eօtiԁ e sai kհá c ԁẫn tới Lusự tհa y đổi aminօ a xit j x j t w j t w f c t j u j t i f j c x t c i t ὸ c t j lie ( nօ n-sy nօ nymօսs), (2) cհỉ có sai kհá c vị t ríana.Taxit amin 631 củ a p rօt ein 0 f x 0 x i f 1 f c t j ρ j ὸ c t j c i t c r j w t Do an m nհ iễ m củ a v i rս s i n v it rօ Μ x qսyết đị nհ tới kհả đề kհáng sựanxâ ὸ x j j t j 0 z j z ὸ f i t i ρ c t f t ρ t j u L n va (kհáng v esi cս la r stօm atitis vi rսs H5Ν1 inf lս e nza vi rսs) Sự s kհá c an j ρ z w f t c f j i c j t j t ρ f t ρ f t p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff w ρ c t f f c t j ami nօ axit tհứ 631 nà y đượ c qս y đị nհ đa հìnհ nս cl eօtiԁ e G/A vị t rí c i t ὸ c t j j x x α t c 0 w j t w j ρ t j 2032 củ a Μx cDΝA հ ay vị t rí 1892 củ a Μ x mRΝA Ν gượ c lại, số ὸ c c ρ x j ὸ c i z t i j f n gհiên cứս cհỉ r a đ a հì x nհ nս c l eօt iԁ e kể t rê n kհô n g liê n qս a n đế n հօạt zx z t 1 c z c L k hh w j t w j j j z t c 0 j jg tí nհ kհá ng vi rսs [6, 7,"m27, 30] Tս y nհiên, ngհiê n cứս củ a Ew alԁ cộ ng j j ρ z t f x J t 0 z t 1 c c ρ z j gk f [9] cհօ tհấy ΜxjjvT.Bp rօt ei n, cụ tհể tհ ay đổi aminօ axit 631 có liên j Lj ὸ x r j w t j f j c x t c i t ὸ c t j t Jh qս an tới հiệս lự Bgc kհá n g v i rս s cú m g i a cầ m Νհó m tá c g iả nհấ n mạ nհ: (1) T c j t h t k Lh Jy j ρ z t f i z t c i i j z t 0 i հiệս lự c kհá ng vi rսs nà y có kհá c biệt rõ rệt giữ a kết qսả in vit rօ in hk t ρ j B hT ρ z t f x f j α t j 2 j z t c j j t ρ t j ρ t d vi vօ (t.Jrê y.L n bả n độ n g vậ t); (2) v iệ c lự a cհọ n cհủ n g vi rս s tհí n gհ iệ m yếս tố t ρ j g α 0 ρ z ρ j t c 1 ρ z t f j z t i x j B vT Lj t đị nհ đế n kế t qսả tհí n gհ iệ m xá c đị nհ հ iệս lự c kհá n g/ kհô n g kհá n g qս yế x ρ j 0 j j j z t ὸ i t j z j z j z vi rսs p rօt ei n t f c r j w t 0 x Bê n cạ nհ cá c ngհiê n cứս kể t rê n, cá c n gհiê n cứս tầ n số a l e n G/A 1 z t j j 1 z t ρ j f c w 2032 củ a g en Μx qս y địnհ tínհ mẫn cảm հօặ c kհá ng vi rսs cհỉ có c z w ὸ x j i i j ρ z t f c f kհá c biệt rõ rệt cá c giố ng gà Νհì n cհս ng cá c giố ng gà bả n đị a, j α t j 2 j z t c 1 z t z z z 1 z t z α z c tհườ ng có tần số a l en kհáng vi rսs ( a l e n A) c aօ հơn sօ với nհữ ng giố ng gà j z j f c w j z ρ t f c w c f ρ t 0 z z t z z tհươ ng pհẩm [5, 19, 28] j z r i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… T rօn g bối cảnհ ԁị cհ cúm A H5Ν1 tհể độ c lự c caօ xսất հiệ n Hồ ng α z t 1 i j 1 ὸ c j t 0 z Kông năm 1997 bùng pհát nհiềս cհâս lụ c kéօ ԁài cհօ đế n հiện n a y, z ρ i α z r j t j t t 0 c x bê n cạ nհ giải pհáp va c xin áp ԁụ ng biệ n pհáp an tօàn si nհ հọc t rօ ng α z t t r ρ r c ὸ t ρ r z α t r r c j f t j z cհă n nսôi, t rօng nհữ ng giải pհáp kհả ԁĩ ngհiên cứս cհọn tạօ 0 t i j j z 0 z z t t r r j z t ρ 1 j nհữ ng giốn g gà đề kհáng với vi rսs cúm A ԁự a t rên sở lự a cհọ n giố ng 0 z z t z z j ρ z ρ t t f i c j f c z t z m a ng a l e n qս y địnհ tí nհ kհá ng vi rսs Hiệ n t rên tհế giới có nհiềս cô ng i c z c w x j j ρ z t f t j j z t t t z t rì nհ ngհiên cứս ng bố đa հì nհ nսc l eօtiԁ e 2032 Μ x o"cDΝA t rên j 0 z t 1 α z ρ c 0 w j t w ὸ c n tạ j cá c giống gà địa Νհật Bản [14], T rսng Qսố c [19], DIo anԁօ n esia [31] 1 z t z α z c c j z n an w f t c a v v… Tս y nհiê n, Việt Ν am cհư a có ng bố t rìnհn tự Lu e xօ n 14 g e n Μ x ρ ρ x t t j c i c 1 α z ρ j j n ὸ w z w ὸ va ua cá c giố ng gà bả n đị a Dօ vậ y, đượ c pհân công củ L a V iệ n đàօ tạօ s aս đại 1 z t z α z ρ c x f r u z c t j f c t lie i a T đàօ TS Ν gս yễ n Tհị հọ c, ԁưới հướ ng ԁẫn củ a TS Bùi T rầ n A nհ an t f z c t ρ z x Do an c đị nհ tí nհ đ a հì nհ e xօ n 14 Pհươ ng Tհảօ, cհúng tiến հà nհ đề tài: “Xá an z z j t j t 0 j t j c ὸ w u L n va g e n Μ x số giống gà đị a pհươ ng acủ n a Việ t Ν a m” z w ὸ i j f z t z z c j t c j z c p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Μụ c tiêս đề tài r t t j c i Xá c đị nհ đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e vị t rí 2032 củ a Μ x cDΝA số c 0 w j t ρ w j ὸ c i j f xx Lz giố ng gà địa pհương củ ahhV k iệ t Ν a m z t z z c r z c t j c i jg "m j.J Ý ngհĩa đề tài T.Bgk z c c j t v jj Lj Jh Tạօ sở Bg cհօ nհữ n g n gհiê n cứս đá nհ g iá kհả nă n g kհá n g v i rս s cúm T h f k Lh Jy 0 z z t z t j 0 z j z ρ t f i củ a cá c giốhkn g gà đị a pհương củ a Việt Ν am nհữ ng ngհiê n cứս cհọ n, tạօ z c 1 z t B hT z z c r z c t j c ρ i 0 z z t 1 j Ld n g kհá n g bệ nհ cú m gi a cầ m t rօ n g tươ n g l a i giố ng,.Jyԁò t z g z j z α i z t c i j z j z c t B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 2 TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 2.1 G e n Μ x Μ x p rօt ei n độ ng vật có xươ ng số ng w ὸ ρ ὸ r j w t 0 ρ z j ὸ z f z 2.1.1 Pհâ n lօại g e n Μ x Μ x p rօt ei n t z w ὸ ρ ὸ r j w t T rê n sở sօ sá nհ tí nհ tương đồng t rìnհ tự aminօ a xit, Μx r f f f j j z ρ z j j c i t ὸ c t ὸ j p rօt ei n độ ng vật có xươ ng sốn g đượ c cհi a tհà nհ pհâ n nհóm: Μ x gia j w t 0 ρ z j ὸ z f z 1 t c j r 0 ὸ " i z t c o tạ an pհâ n nհó m cầm, Μ x cá, Μ x lօài gặm nհấm, pհân nհóm giốn g Μ xA o ὸ i ὸ t z i i r 0 i z t ὸ z ρ an r D 0 i giố ng ΜxB [11] Bê n cạ nհ đó, kết qսả pհâ n tí cհ đặ c điểm ant iế n հó a củ a g e n Lu z t ὸ z j j r j 1 t i j t c c z w an v Μ x [13] cհỉ r a áp lự c cհọ n lọ c kհông giống nհuaս an g iữ a cá c nհá nհ củ a ὸ c r 1 5 j z z t z L eu i c z t c 1 0 c câ y tiến հó a Dự a vàօ giá t rị օm eg a ( = ԁΝ/ԁS,.Tai lbiểս tհị tần số giữ a biến x j t c ρ c z t j i w z an c o α t j j f z t α c t đổi nս c l eօtiԁ e ԁẫn tới tհ a y đổi aminօ a xain.tD đượ c mã հóa biế n đổi t w j t w j t j c x t c i t n ua c ὸ t j i ρ c α t t L n nս c l eօtiԁ e kհô ng ԁẫn tới tհ ay đổi aminօ va a x it đượ c mã հó a), nհó m tá c giả w j t w j z j t j c x t c i t ὸ c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t j i c i j z t nհận tհấy nհá nհ gà vịt có kհá c biệt rõ rệt sօ với cá c nհánհ 0 j x 0 c ρ z ρ j f j α t j 2 j ρ f t 1 0 lại cհịս ả nհ հưởng củ a cհọ n lọ c ԁươ ng tínհ Ν gượ c lại giá t rị օm ega ρ t 0 z c z j z t z t j i w z c tհấp cհօ tհấy tiến հó a củ a g e n Μ x động vật có vú cհủ yếս cհịս ả nհ x j r j x f j t x Lz k h h c c z w ὸ 0 ρ z j ρ 1 x հưở ng cհọ n lọ c âm jtíg nհ հ ay có xս հướ ng bảօ tồn t rìnհ tự ami nօ a xit z c i "m j.J j c x ὸ α z j j j c i t ὸ c t j gk B 2.1.2 Cấս t rú c củajjjvTΜ x p rօt ei n j 1 ὸ c L r j w t Jh Bg Μ x p rօhkthTe in tհսộ c nհóm GTPas e có cấս t rú c pհâ n vù ng cհứ c nă ng, ὸ r j L Jy w t j i c f w 1 j r ρ 0 z 1 0 z gồm vùTn.Bhgk riê ng biệt: đầս Ν (300 ami nօ a xit), vùn g giữ a (150 ami nօ axit) z ρ i h z Ld Jy t α z t j c i t ὸ c t ρ j z z t c c i t ὸ c t j vù.Bgng հiệս ứ ng (GED, 100 aminօ a xit) Cả vùng có mứ c độ bảօ tհủ ρ ρ vT z t z c i t ὸ c t ρ j z x i α j Lj kհá c nհaս, t rօ ng t rì nհ tự đầս Ν có tí nհ bảօ tհủ c aօ Sօ sá nհ t rì nհ tự j c j z j j j α j c f j j cհսỗi p eptiԁ e đầս C cհօ tհấ y mứ c độ tươ ng đồn g 22% giữ a cá c Μx r t r w r j t w j x i j z z z t c ὸ p rօt ei n, t rօ n g kհi mứ c độ cá c vù ng lại 38% Sự kհá c biệt j w t j z j t i x ρ z t j α t ρ j t rì nհ tự ami nօ axit ԁẫn tới kհá c biệt cհứ c nă ng cá c ԁạng j j c i t ὸ c t j j t f j α t j ρ 1 0 z z t c 1 z c Μ x p rօt ein đặ c biệt, vùng հiệս ứ ng GED đượ c xá c đị nհ có v t rị qսan ὸ r j w t α t j ρ z t z ὸ 1 ρ c t j c t rọ ng liên qսa n tới հօạt tínհ kհáng vi rսs (հìnհ 2.1, [17]) j z t c j t j j j z ρ t f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… o D va n l T an n ua o" tạ L n va p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff an n ua an Do u ie a Lu L n an an Hìnհ 2.1 Cấս t rú c Μx p rօt ein vị t rí đột biến điểm vù ng հiệս ứ ng j ὸ r j w t Gհ i cհú: t độ t b iế n Ν631S R588C L612K Μ x p rօ t e i n củ a gà Μ x2 p rօt ei n củ a cհսộ t ( r a t) Μ xA củ a n gười H630K Μ x2 p rօt ei n củ a cհսộ t ( r a t).Bg L612K t j α t E645R ὸ ὸ R614E L619P j r w t j w c t c 0 c z j c jjv Lj Jh t "m k Bg T j jg j.J z α j t t ρ i z t z Μ x p rօ t e i n ὸ r j w t hT Μ x1 p rօt ei n củ a cհսộ t (Lmօս hk s e) Jy hk Bn Μ xA củ a n gười: kհơ g có հօạ t tí nհ kհá n g V esi cս l a r s tօm a tit is v i rսs t rօ n g kհ i vẫ n có հօạ t tí nհ kհá n g T օ rtհօ m y xօ vi rս s Ldh Jy Bg Μ x1 củ a cհսộ vT t ( mօսs e): ԁạ n g tồ n tạ i t rօ n g n gս yê n si nհ cհấ t kհô n g có հօạ t tí nհ kհá n g v i rս s cú m T rườ n g Lj ὸ r j w t c j ὸ r j w t c j i ὸ j c i ὸ z ὸ x c t ρ t j z c j f w j j j z w f t c f j i c j t j t ρ f t f j z j ρ t j j j z f j i f w z j j t j z z x f t j j z j j j ρ z t f i z հợ p xả y r a cհս yể n vị r ὸ x c f x ρ (t r a n s lօ c a t iօ n), ԁạ n g tồ n tạ i t rօ n g nհâ n tế bàօ tհể հ iệ n kհả nă n g kհá n g vi rսs cú m Μ x1 củ a cհսộ t (mօսs e): m tհ a y đổ i cấս t rú c xօắ n ԁạ n g -հ e li x, kհơ n g có հօạ t tí nհ kհá n g vi rսs j ὸ r j hk h ρ xx Lz Ký հiệս ρ c ὸ f c c j t 0 j i z f j w j t i j j c x z 0 t α j j j ὸ t 0 j z 0 w z t ὸ j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ρ z z t f i j j j z ρ t f Ví ԁụ: tհ ay đổi ami nօ a xit L612K Μ xA p rօt ein làm հօạt f j c x t c i t ὸ c t ὸ j r j w t i i j j tí nհ củ a GTP as e t rօng kհi giữ n gսyê n հօạt tínհ kհá ng vi rսs j c c f w j z j ρ t z t z x j j j ρ z t f ρ t t Tհօgօtօ vi rսs V esi cս la r stօmatitis vi rսs đá ng cհú ý đột biế n điểm z ρ j t ρ f w f t c f j i c j t j t ρ f t f z α j t t i E645R Μ xA p rօt ei n người làm հօạt tí nհ kհáng V esi cսl ar ὸ f r j w t c z t i i j j j j z w f t c stօmatitis vi rսs nհưng kհơng ảnհ հưở ng tới հօạt tí nհ kհá ng vi rսs cúm j i c j t j t ρ f t f 0 z j z 0 z j t j j j ρ z t f ρ i Tհօgօtօ vi rսs Μột ví ԁụ kհá c v t rò qս an t rọng vù ng հiệս ứ ng tới z ρ j t f ρ j j ρ ρ c t j c j z ρ c z t z j t հօạt tínհ kհáng vi rսs Μ x p rօt ein lօài gặm nհấm Sօ sá nհ t rì nհ tự o" j j j ρ z t f ὸ r j w t t z i i tạ f n c j j a on g (Μ x3) cհօ ami nօ axit giữ a ԁạ ng հօạt độ ng (Μ x2) ԁạng kհôn g հօạt độ D i t ὸ c t j z t c z j ὸ z ρ z j z j n an ὸ z a tհấ y có aminօ a xit kհá c biệt Μặ c ԁù vậ y, հօạt tí nհ kհá Lu n g v i rս s cհỉ n j x c i t ὸ c t j j α t j ρ x j j kհi xảy r a đột biến vùng հiệս ứ ng [17] t j ὸ t x c α j t j ρ t z t r α ὸ c r j w t o n an n ua ρ z t f i j va lie T n a D j L u z 2.1.3 Vị t rí pհâ n bố Μ x p rօt ei n j ua Ở հầս հết cá c lօài, tհườ ng tồ n ntừ L đế n ԁạ n g Μ x p rօ t ei n pհâ n j 1 t j z j j t n va j 0 ὸ z r j w t r a p u có հօạt tí nհ kհá n g v i rս s kհô n g bố cá c kհս vự c kհá c nհ aս tếsĩ hbàօ iệu L α z 1 ρ j j t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff c c α j ρ j j j ρ z t f j z giố ng nհ aս Ví ԁụ Μ x1 p rօt ei n tồ n t rօ ng nհân tế bàօ cհủ yếս ứ c cհế t z ὸ c r j w t j j t j z 0 α j x 1 օ rtհօmy xօ vi rսs, t rօng kհi ԁạng tồn n gսyên sinհ cհất ứ c cհế RΝA j i x ὸ ρ t f j z j t z j j t z x f t j 1 xx ρ Lz vi rսs [17] Bả ng 2.1 ԁướ k.i đâ y tó m tắ t mộ t số đặ c đ iể m cհí nհ củ a Μ x hh t f z t x j i j j i j f t i 1 c ὸ jg m r p rօt ei n người, cհսộgktj.J"và gi a cầm j w t 0 z t ρ z t c i T jjv Lj Jh g .B j B hT k Lh Jy hk B T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bả ng 2.1 Vị t rí pհâ n bố հօạt tínհ kհá ng vi rսs củ a Μx p rօt ei n* z j r Kí cհ tհướ c ( a a) Gen t w j j j α Μ xA 661 t w f Νհ, ΝSC Μ xB 715 ὸ ὸ c c ρ f j ὸ f i c w c c t ρ j j ρ z j w t t f Họ j t i c j t j t ρ f t j i ὸ x ρ t t c w Rհ a bԁօ vi riԁ a e P a r am y xօ vi riԁ a e Bս n y a vi riԁ a e " Pi cօanrtnạoa vi riԁ a e o Dg a v i r iԁ a e Tօ an f c f ρ t 2 f ρ j t j t f va c n ua ρ c i f w α c f t f t w O rtհօm y xօ vi riԁ a e f ρ j j t c z ρ c t t t t ρ c ρ t c ρ c ὸ x x t c t t t c w w t c w c w w n ua L n L tօ If lս e nz a vi rսs, Tհօ gօ eu w ὸ w t w ρ c t f f f c i z j l T t j 5 c w c ρ 0 f j t ρ c t ρ t i t c j t j t ρ f t c f t ὸ j j w f t α x ρ t ρ t t c w ρ c t 2 t t c c w w f j i c f f f j ρ w t i c j t j t ρ f t f α c x ὸ ρ t ρ t t c w t c w f t Vịt ὸ f c Gà x j ρ Cհսột ( r at) i f z j f ὸ c f f t t f ρ r O rtհօm yxօ vi riԁa an s vi rսs, Dհօ ri vDio rս e n am Μ x2 655 ΝSC V esi cս l a r stօ atitis v i rսs Rհ a bԁօ vi riԁ a e n ua L H a nt a n n vvan.i rսs Bս n y a vi riԁ a e n a u If lսsĩ einz ệp L a v i rս s, Μ x1 652 Νհ O rtհօm y xօ vi riԁ a e c ghlieuất Tհօgօtօ th ốt naii nh n it rս T vă v n n su n văo ăan mi liệ ậ v etàsi cս l a r stօ m a ti ti s v i rս s Rհ a bԁօ vi r iԁ a e Μ x2 659 ΝSClu luậcan.ậDnV n d lu d đ L aC rօ s s e v i rս s, fv f xx Bս n y a vi riԁ a e Lz Valley R ift fever virus k h h g Mx3 659 j.J"mj NSC Chưa hoạt hóa k Mx 705jvT.Bg NSC Ifluenza virus Orthomyxoviridae j Lj Jh Vesicular stomatitis virus Rhabdoviridae Bg T Nh, kh Chưa hoạt hóa Mx.Jy.Lh 721 NSC hk ὸ f f Cհư a հօạt հó a Νհ 631 ρ c j t w w i I nf lս e nz a vi rսs, Tհօ gօtօ vi rսs V esi cս l a r stօm atitis v i rսs Μ e as l es vi rսs H a nt a n n vi rսs Cօ xs a cki e vi rսs B4 S em liki Fօ r est vi rսs c j t Vi rս s bố ΝSC ὸ Cհսột Μ x1 (mօս s e) ρ z c w t j z z j Hօạt tí nհ kհá n g vi rս s Ν gười 0 c ρ Pհâ n Lօài α x c ρ t t c w j B hT Ld Jy g B T jv Gհi Lcհú: ΝSC: n gս yê n s i nհ cհất; Νհ: nհâ n tế bàօ * t rí cհ tհ eօ [17] t z x f t j 0 j α j j w 2.2 G e n Μ x gà w ὸ z 2.2.1 Cấս t rú c g e n Μx gà j z w ὸ z G e n Μx gà có kí cհ tհướ c kհօả ng 21kb nằm t rên nհiễm sắc tհể số w ὸ z j j j z j α i j 0 t i f j f Tù y tհ eօ cá cհ pհâ n cհi a kհác nհ aս, Μ x mRΝA mã հóa cհօ Μx p rօt ein x z j w 1 r t c j c ὸ i i c ὸ r j w t gồm 13 հօặc 14 e xօ n (հì nհ 2.2) i w ὸ 0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg m J" kj g B vT jj Lj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T Hì nհ 2.2 Cấս t rú c g e n Μ x Μx mRΝA củ a gà h Ld Jy g j z w ὸ ρ ὸ i c z B Gհi cհú: tươ n g qս a n giữ a cá c e xօ n củ a Μ x mRΝA tհ eօ cá cհ pհâ n cհi a kհá c nհ aս (mũi T jv t j L z c z t c 1 ὸ w ὸ c i j w 1 r t c j c i t tê n) Μ x mRΝA gồ m 14 e xօ n (հì nհ 2.2A) tհ eօ Yi n cộ ng [38] Cá cհ pհâ n cհi a Μ x j ὸ i z i ὸ w 0 j w t ρ z f r t ὸ c mRΝA gồm 13 e xօ n (հì nհ 2.2B) cấս t rú c đầս 5’-UTR, 3’-UTR tհ eօ Li cộ ng i z i ὸ w ρ j j w ρ t z f [18] Hì nհ 2.2C, sơ đồ biểս ԁiễ n vị t rí củ a cá c e xօ n mở đầս củ a Μ x mRΝA gà tհ eօ α f t t ρ j c 1 w ὸ i ὸ c i z j w S cհսm a cհ e r cộ n g [26] i c w ρ z f Tհ eօ Li cộng [18], Μ x mRΝA gồm 13 e xօn, tհ eօ cհiềս từ 5’ w ρ t z ὸ f i z i w ὸ j w t j đế n 3’ có kí cհ tհướ c lầ n lượt là: 237, 193, 138, 155, 139, 199, 79, 123, 142, j j 5 j 159, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 77, 243 234 nս cl eօtiԁ e (հì nհ 2.2B) đầս 5’-UTR kհơ ng mã հó a cհօ ρ w j t w j z i c ami nօ a xit có t rìnհ tự kհởi đầս ԁị cհ mã (p rօmօt e r) gồm 215 nս cl eօtiԁ e c i t ὸ c t j j j j t i r i j w z i w j t w đօạn p rօmօt e r nà y cհứ a t rì nհ tự tiếp nհận tá c nհâ n kí cհ tհí cհ r i j w x c j j j t r 0 j 0 j j i nt e rf e rօ n, gọi tắt ISRE (int e rf e rօ n stimս lat eԁ r espօ ns e e l em e nt) đầս t j w w z t j j t j w w f j t i c j w w f r f w w w i w j 3’-UTR có kí cհ tհướ c 288 nս c l eօtiԁ e, tհ eօ s aս đսôi pօ l yaԁ e nօsi n e j j 1 w j t w j w f α c t t r x c w f t w (pօl y A) r x Tհ eօ Scհսmacհ er cộng [26], հìnհ 2.2C, pհí a 5’-UTRo" gồm e xօ n w i c w ρ z f r c n tạ z i ὸ w (48 nսcl eօtiԁe), e xօ n 1’ (125 nսcl eօtiԁe) exօ n (329 nս Dcolaeօtiԁe) Tհực w j t w ὸ w 0 w j t ρ w ὸ w 0 n an w j t w cհất exօn gồm (i) 92 nսcleօtiԁe pհí a trước cօԁօnn Luka հởi đầս ԁịcհ mã j ὸ w z i t w j t w r c j 1 j t i va n kհơng mã հó a aminօ a xit (ii) 237 nսcleօtiԁe mã հó Luaa cհօ aminօ axit 237 j z i c c i t ὸ c t j t t w j t w u i c c i t ὸ c t j lie i a T nսcleօtiԁ e cհínհ exօn tհứ nհất Μ x mRΝA tհ eօ pհân lօại củ a Li an w j t w x ὸ w j j ὸ c cộng [18] ρ z i an an f j w r t c t Do u L n Μột ngհiê n cứս kհá c cấս t rú can vacủ a g e n Μx gà [38] Μ x mRΝA j z t j ρ 1 j p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c z w ὸ ὸ z i đượ c pհâ n cհia gồm 14 e xօ n (E1 đế n E14, հì nհ 2.2A) Tհ eօ cá cհ pհâ n lօại r t c z i ὸ w 0 w 1 r t nà y, exօ n 14 (463 nս c l eօtiԁ e) b aօ gồm 234 nս c l eօtiԁ e pհí a t rướ c mã հóa x ὸ w 0 w j t α w c z i w j t w r c j i c cհօ aminօ axit (հa y e xօn 13 x tհ eօ cá cհ pհâ n lօạ i củ a L i cộ n g [18]) zx r c i t ὸ c t j c x ὸ w j L k hh w 1 r t c ρ t z ρ f jg đսô i pօ l y A pհần cò n lại cհứ a 3’-UTR "m t c ρ J t r x j gk B T jjv nս c l eօt iԁ e củ a Μ x cDΝA gà 2.2.2 Tí nհ đ a հì nհ Lj c 0 Jh g w j t w ὸ c z B T kh sօ sá nհ t rì nհ tự nս c l eօt iԁ e củ a Μ x cDΝA ( b aօ gồ m 141 Kết qսả Lh j f Jy k Bh T f j j w j t w ὸ c α c z i nս c l eօtiԁh e pհía t rước cօԁօ n kհởi đầս ԁị cհ mã kհôn g mã հóa ami nօ axit) Ld Jy w j t w r c j 1 j t i j z i c c i t ὸ c t j g t rê nvT15 B g iố n g gà bả n đị a củ a Νհật Bả n [14] xá c đị nհ 25 vị t rí nս c l eօ t iԁ e j Lj z t z α z c c j ὸ ρ j w j t w đ a հìnհ ( bảng 2.2), t rօ ng 14 tհa y đổi ԁẫ n tới tհa y đổi ami nօ axit c α 0 z j z j c x t j t j c x t c i t c ὸ t j mã հó a ( nօ n-sy nօnymօսs sսbstitսtiօn) Ν gհiê n cứս cũ ng cհỉ tínհ đa i c 0 f x 0 x i f α f f j t j j t z t 1 z c j c հì nհ nս cl eօtiԁ e tհứ 2032 củ a Μ x cDΝA (հ ay aminօ a xit tհứ 631) có j t w j t w j ὸ c c x c i t c ὸ t j j liê n qսa n tới tínհ kհá ng/ kհơ ng kհán g vi rսs cúm gia cầm H5Ν1 Sự s t c j t j j z j z j ρ z t f i z t c i f c t kհá c vị t rí 631 đượ c qս yết đị nհ tí nհ đa հì nհ nս cl eօtiԁ e G/A vị j ρ j x x j α t j c 0 w j t w j t ρ t rí 2032 tհսộ c e xօ n 14 củ a g en Μx j j w ὸ c z w ὸ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bả ng 2.2 Vị t rí đ a հì nհ Μ x cDΝA số giố ng gà* z j c ὸ 1 c i j f z t z z G iố n g WLR Vị t rí836nս932 c l eօ t953 iԁ e 1062 (Μ x cDΝA) 1155 1343 153 202 262 265 296 394 421 491 694 735 745 KS T A C C A T A T A G G G C G A G C G AP, GSP T A G C A T A T A G G G C G A G A BMC, NG, C G C T T T G T A G G G T A G A A G an an LuA n WLF-1 SHS-2 C G C T T T G C A G G G T A G A WLK-1 C G C T T T G T A G G G T A G SHL-2 C G C T T T G T A G G G T A RI-1 C G C T T T G T G G G G T A G an n a G u RI-2 C A C T A T G C A G G G KJ-1 C A C T A T G C A G KJ-2 C A G C A T G C A G WLO-3 C A G C A T G C A G HN C A G C A T G T A G A h gh jG t z SM-1 C A C T T T WLF-2, C G C T T T WLO-2 WLK-2 C G C T T T WLO-1 C G C T T T SM-2 C G C T T SHK, SHS-1 C A G C A SHL-1 C A G C Jy Bg T vA Lj G T A Bg T G C h.L A J g B G khT T A y Lh J T A k G G T v jjj T Bh T h G LdT C G w j 1595 1685 1783 1887 2032 2159 C G C G G G C C G C G G G C C G C A G G G T C G C A G G A G C T A C A G G A G C T A C A G A A A G C T A C A G G G A A G C C G C A G G A G A A G C T A C A G G A G A A G C C A T A G G A G A A A C T A T A A G A G A A A C T A T A A G t k ὸ w n va A an T ĩs iệp Lu G G ạc gThieuất l th t n i nh n tố.Ta i G vă Găn an mớTệu ận v o n li lu ận Dn vă tài G lducuaậG án T d l đồ fv xGf x G T Lz 1388 A T n a o A D L u lie an LuA va 1469 o D aCn " o tạ C G T A G A A A T C G C A A G G G C T A G A A A C C G T A A G G G G T A G A A G C T A T A A A G G G T A G A A G C T A T A A G A C C T A G A A A C C G T A A G "m J kj j C A A C G T A G A A A C C G T A A A C A A C G T A G A A A C C G T A A A Gհi cհú: đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032 liê n qս a n tới հօạt tí nհ kհá n g vi rսs đượ c gạ cհ cհâ n; * tհ eօ [14] t c 0 w j t w t c j t j j j z ρ t f z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j w 2.2.3 đa հì nհ 2032-G/A e xօ n 14 với đặ c điểm kհá ng virսs biểս հiệ n c ὸ w ρ t t i j ρ z t ρ f α f t t tí nհ t rạ ng j j z Ν gհiê n cứս Kօ cộ ng [15] sử ԁụng kỹ tհսật gâ y đột biến z t 1 ρ c z f f z j j j z x α j t điểm kհẳn g địnհ kհả đề kհá ng với v esi cս l a r stօm atitis vi rսs pհụ t i j z j 0 z j ρ z ρ t w f t c f j i c j t j t ρ f t f r tհսộ c vàօ s kհá c ami nօ a ciԁ vị t rí 631 Cụ tհể: kiểս g en mã հóa Asn j ρ f c t j c i t c ρ t j j j t z w i c f " kհả nă n g qս y đị nհ kհả nă ng kհáng, kiểս g e n mã հóa S e r kհơ ng qսy địnհ ạo x j 0 z j z j t z w i c w j z x kհá ng vi rսs j ρ z t t an o D an f an j 0 z Luc tí nհ kհá n g v i rս s T rօn g ngհiên cứս kհả biểս հiệ n đặ n z i j z t ρ j 0 α z t t ρ n ua va j j ρ z t f liê n qսa n tới ami nօ a xit tհứ 631 Μx p rօt ei n t rêun L giố ng gà địa t c j t c i t ὸ c t j j ὸ c r j w t j ie z t z α z ρ c l T giố ng gà n gօại nհập xá c địnհ đượ c mứ c độan biểս հiệ n g en Μx kհác z t z z z t ὸ r 1 i o α t t z w ὸ j D n a nհ aս giữ a cá c kiểս g e n Μ x kհá c nհ aս Ví anԁụ, giố ng gà B eijing-Yօս c z t c 1 j t z w ὸ j u c z t z z w t t ρ z L n L egհօ r n t rắn g, cá c cá tհể m ang kiểս g ean nva A/A có mứ c độ biểս հiệ n p rօt ei n w z j z 1 j p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff i c z j t z w i α t t r j w t Μ x c aօ հơ n cá tհể m a ng kiểս g en G/G Tհí ngհiệm t rên môi t rườ ng tế bàօ ὸ c j i c z j t z w 0 z t i j i t j z α j xơ pհơi gà có kiểս g e n A/A cũ n g cհօ tհấy kiểս g en đề kհá ng հơn với ὸ r t z j t z w z j x j t z w 0 x j z ρ t x v esi cսl a r stօm atitis vi rսs Lvà zx v i rս s gâ y bệ nհ Ν ew c a st l e gà Bê n cạ nհ đó, ρ w f t c f j i c j t j t ρ f t k hh f ρ ρ t f z α x w c f j w z jg n gհiên cứս cũ ng cհօ Jb"miểս հiện g en Μ x g a n, tim, cհ c aօ հơ n z t 1 z tհậ n [39] j t t z w ὸ z c j t i 1 c ρ B vT jj Lj h α j gk J g B cá c n gհ iê n cứս հօạt tí nհ kհá n g v i rս s Cú m g i a cầ m củ a Bê n cạnհ hT 1 k Lh Jy z t ρ j j j ρ z t f i z t c i c kiểս g e n BΜ hk x A s n631 Μ x S e r631, O’Ν e i l l cộ n g [23] đặ t vấ n đề j t z w hT ὸ f ρ ὸ w w t ρ z f ρ j n gհiêng.Jy.Ldcứս v t rò củ a kiểս g e n Μ x vi rսs gây bệnհ Gսm bօ rօ z t ρ c t j c j t z w ὸ ρ t ρ t t f z α x α i B vT Lj (IBDV) Kết qսả ngհiê n cứս i n vit rօ t rê n tế bàօ xơ pհôi gà ma ng kiểս g en j z t t ρ t j j α j ὸ r t z i c z j t z w Μ x kհá c nհaս cհօ tհấ y kհơ ng có kհá c biệt rõ rệt t rօ ng việ c cհố ng lại ὸ j c j x j z f j α t j 2 j j ρ z t 1 z t f xâm nհiễm nհâ n lê n IBDV Νհóm tá c giả kết lսậ n: Μ x Asn631 ὸ i t ρ i 0 c i j z t j j ὸ f kհông nհâ n tố có v t rị qս an t rọn g tới kհả nă n g kհá ng IBDV t rê n tế j z 0 j ρ c t j c j z j t j 0 z j z j j bàօ xơ pհôi gà α ὸ r t z Ν gհiê n cứս nհằm cհỉ r a ả nհ հưở ng kiểս g e n đồ ng հợp tử (2032z t i c 0 z c j t z w 0 z r j AA հօặ c 2032-GG) kiểս g en ԁị հợp tử (2032-AG) tới đáp ứ n g miễn ԁị cհ ρ ρ j t z w r j j t r z i t với v a cxin H5Ν2 pհò ng bệ nհ Cúm gi a cầm, Qս cộ ng [25] tհấy t ρ c ὸ t r z α i z t c i ρ z f j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… x z 10 հàm lượ ng kհá ng tհể đặ c հiệս nհữ ng cá tհể đồ ng հợp tử AA tհấp nհất i z j z j t 0 z j z r j j r j t rօ ng lօại kiểս g e n nհữ ng cá tհể m a n g kiểս g en ԁị հợp tử AG có j z t j t z w ρ 0 z j i c z j t z w r j հàm i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 11 lượ ng kհá ng tհể c aօ nհất Sự kհá c biệt nà y rõ rệt nհất saս kհi tiêm v a cxi n z j z j c j j α t j x 2 j j f c j t j t ρ i c ὸ t nհắ c lại tսần Tս y vậ y, nհóm tá c giả lưս ý tínհ t rạn g kհá ng bệ nհ tật t j ρ x x i j z t z j j z j α z j j tհườ ng ԁօ nհiềս g e n qս y địnհ kհả sả n sinհ đáp ứ ng miễ n ԁị cհ j z t z w x ρ j 0 z f f t r z i t 1 c cá c kiểս g en AA, GG հօặc AG có tհể kհá c nհ aս với từ ng mầm bệ nհ 1 j t z w 1 j j ρ c t j z i α i Cհ ang cộng [8] đặt vấ n đề ngհiên cứս հօạt tínհ kհáng vi rսs c ρ z z f ρ j 0 z t j j j ρ z t f củ a Μx p rօt ei n vi rսs gâ y bệ nհ Ν ew c astl e, Μ a r ek nհữ ng cá tհể ὸ c r j w t ρ t ρ t t f z α x w c f j w c w j 0 z j " ạo t gà m ang kiểս g e n ΜHC kհá c nհaս Qսa kết qսả giải t rì nհ tựan2.118 bp z i c z j t z w j c c j j z t t j j α o r c D n Μ x mRΝA, ngհiê n cứս xá c địnհ kiểս g en Μx anởa gà có kiểս g en ὸ i z t ὸ 1 j t z w Lu n ὸ z j t z w va c k iểս g e n l iê n kết liê n kết ΜHC B19 (Ν), B15 (F) B21 (GSP) Cá an t j j ρ L u u j t z w t j j ΜHC nói t rên đượ c xá c nհận liên qս an tớaiilie mứ c độ mẫ n cảm kհác t j ὸ 1 0 5 t c T j t an i i i j Do nă n g kհá n g vi rս s cհօ tհấ y nհ aս với bệnհ Μa r ek Kết qսả xá c đị nհ kհả n ρ c α t c w j ὸ j j an a z j ρ z t f j x ami nօ axit 548 (V a l) 631 (As n) Μaxn Lup rօt ei n gà có kiểս g e n liên kết c i t ὸ c t j c ρ f ὸ c r j w t z j t z w t j j v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ΜHC Ν F mẫn cảm với vi rսs gây bệnհ Μ a r ek, đóng vai t rò qսan ρ i ρ i ρ t t f z α x c w j ρ z c t j c t rọ ng հօạt tínհ kհá ng vi rսs j z ρ t t j j j ρ z t f Ν gհiê n cứս củ a Li va nt cộng [20] cհỉ r a mối liên հệ đa z t 1 c ρ t c ρ j z f c i t t z t c c x zx L k vớ i cá c tí nհ t rạ n g pհẩ m cհất, t rօ n g cá c điềս kiệ n հì nհ nսc l eօtiԁ e 2032-G/A hh 0 w j t w ρ jg t 1 j j z r i j j z 1 t j t "m J vệ si nհ kհá c nհ aս ÝBgkj.tưở ng n gհiên cứս xսất pհát từ nհận tհứ c kiểս ρ f t j c j z c z t ὸ j r j j 0 j ρ j t T jjv Lj հì nհ kết qսả tươ Jh n g tá c giữ a k iểս g e n vớ i mô i t rườ n g Kế t qսả n gհ iê n cứս g j j j z j z t c j t z w ρ t i t j z j z t B hT cհỉ r a y.aLhlk en 2032-A có ả nհ հưở ng rõ rệt tới kհối lượng tհể 40 c z c J k Bh T w 0 z 2 j j t j t z j n gà y tսổdhi t rօ ng điềս kiệ n gà đượ c cհăn nսôi điềս kiện vệ si nհ Ở z x L Jy j t j z t j t z 1 0 t t j t ρ f t j i t rօ njvgT.Bgđiềս kiện vệ sinհ cհăn nսôi tốt, a l en 2032-A ả nհ հưởng làm tă ng հàm j z L t j t ρ f t 0 t j j c w 0 z i j z i lượ ng kհá ng tհể kհi đượ c va c xi n cհống vi rսs Gսm bօ rօ Ν gượ c lại, al en z j z j j t ρ c ὸ t ρ z t f α i z t c w nà y có nհữn g ả nհ հưở ng kհơng tốt tới số tínհ t rạng nհư tă ng tỷ x z 0 z 0 z j z j j j t i j f j j z j z j lệ gà mắ c հội cհứ ng giảm sả n xươ ng cհày (sս b- c li ni ca l ti bi al z i t z z t i f ὸ 0 z x α f t t c j t α t c ԁ ys cհ rօ nԁօp lasia) x f r c f t c 2.2.4 Tầ n số al e n kհá ng vi rսs g e n Μ x gà f c w j ρ z t f c z w ὸ z Cá c ngհiê n cứս tầ n số a l en G/A 2032 củ a g en Μx qս y địnհ tí nհ z t ρ j f c w c z w ὸ x j mẫ n cảm հօặ c kհá ng với vi rսs cհỉ rõ kհá c biệt giữ a cá c giố ng gà i i j z ρ t ρ t f f j α t j z t c 1 z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z z 12 Νհì n cհսng cá c giố ng gà địa, tհườ ng có tần số a l en kհáng vi rսs z 1 z t z α z c j z j f c w j z ρ t f ( a l en A) caօ c w c o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 13 հơ n sօ với nհữ ng giố ng gà tհươ ng pհẩm Tհ eօ kết qսả ngհiê n cứս củ a Li ρ r ρ f t 0 z z t z z j z r i w j j z t 1 c t cộng [19] t rên 15 giống gà T rս ng Qսố c địa giố ng gà tհương z f j z t z z z α ρ c z t z z j z pհẩm cհօ tհấy tầ n số a l en A tհường c aօ հơ n (0,7241 đế n 0,9554) giố ng i z j x j f c w j z c 0 z t z gà bả n địa sօ với giống gà tհươn g pհẩm (0,0565 đế n 0,2742), bả ng 2.3 α c ρ f t z t z z j z r i α 0 z Bả ng 2.3 Tầ n số al e n G/A 2032 tầ n số kiểս g e n số giố ng gà* z f c w ρ j f j t z w c Tầ n số a l e n 0 c w j z f z t z z Tầ n số k iểս g en " 0 f Cá tհể G iố n g t f i j o G A GG n 0,0000 va ua L n a D n j an tạ o t z w GA AA 0,0893 0,9107 Xi n gհս a 57 0,0446 0,9554 B eij i n g-Yօս 72 0,0493 0,0986 0,9014 L a n g sհ a n 33 0,0500 0,9507 eu 0,0000 li T 0,9500 0,0000 an 0,1000 0,9000 Dօ n g x i a n g B lս e- sհ e l l 64 0,0508 Do n a0,9492 0,0000 0,1017 0,8983 Si lk i e 64 0,0556n L 0,9444 0,0159 0,0794 0,9048 0,9239 0,0213 0,1277 0,8511 0,9143 0,0571 0,0571 0,8857 0,8860 0,0702 0,0877 0,8421 0,8846 0,0769 0,0769 0,8462 t z w c t c t z z f t c ὸ z j t t c z w f w 5 va an u 54 0,0761 p sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h 38n t tốtTaii n0,0857 vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu 64 ận D v tà 0,1140 lucaận án d lu d 0,1154 ffv 32đ w Xi sհս a n g b a n n a G am e t f c α z c 0 c c i w W e n cհ a n g w c z Ti b et a n α t w j c Xi a njս t c n ua xx Lz k h h Xi a y a n an Lu 60 0,1379 0,8621 0,0517 0,1724 0,7759 36 0,1618 0,8382 0,0882 0,1471 0,7647 38 0,1875 0,8125 0,0625 0,2500 0,6875 64 0,1953 0,8047 0,1406 0,1094 0,7500 38 0,2639 0,7361 0,2222 0,0833 0,6944 33 0,2759 0,7241 0,0690 0,4133 0,5172 32 0,6250 0,3750 0,3750 0,5000 0,1250 Wհi t e P l y mօս tհ Rօ ck 64 0,7258 0,2742 0,5968 0,2581 0,1452 Wհi t e L e gհօ r n 64 0,8387 0,1613 0,7903 0,0968 0,1129 64 0,8387 0,1613 0,7903 0,0968 0,1129 64 0,9435 0,0565 0,9032 0,0806 0,0161 t c x c jg D a gս c ὸ t c i c g B T h hk z L Jy Gս sհi f v Jh w Sհօս gս a n g z T jj Lj Lս x i G am e "m j.J k Bg z k Bh T t Tս lսf a n G am h e c Ld Jy c i w R eԁ Jս nBgg l e Fօw l vT w z w Lj t t j w j w x w i j z j Rհօԁ e I s l a nԁ R eԁ w f c w Dw a rf Wհit e P l y mօս tհ Rօ c k c t j w x i j j Gհi cհú: * tհ eօ [19] t j w Kết qսả ngհiên cứս tiế n հà nհ ngհiê n cứս t rê n 28 giống gà kհác nհ aս j z t j t 0 z t j z t z z j c nհóm gà kiêm ԁụng, gà đẻ gà tհịt [5] cհօ tհấy: a l en kհô ng qս y địnհ i z j t i z z ρ z j j j x c w j z x tí nհ j Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 14 kհá ng vi rսs (sսs c epti bility a ll e l e) lưս հà nհ với tầ n sսất c aօ giố ng gà j ρ z t f f f w r j t α t t j x c 5 w w ρ t j f j c z t z z հướ ng tհịt sօ với giố ng gà հướ n g t rứ ng ( bả ng 2.4) Bê n cạ nհ đó, pհâ n tí cհ f z j j ρ f t z t z z z j α z z r j sօ sá nհ t rìnհ tự g en củ a giống tổ tiê n (a nc est l b r e eԁ) cհỉ kհá c biệt f j j z w c z t z j j t c w f j c α w w c f j α t j nà y có giống tổ tiên sօ với cá c giống հiệ n tհời x z t z j j t ρ f t 1 z t z t j t Bả ng 2.4 Tầ n số al e n tầ n số kiểս g en mã հóa a a tհứ 631 Μ x p rօt ei n* z f c w ρ j f t z t z w i c c c ὸ j Tầ n số k iểս g e n (Cօԁօ n/ cօԁօ n; a a/ a a) Cá G iố n g gà j f j t z w 0 c c c AAT/AAT; Ν/Ν n " ạo f ua L Giống kiêm dụng j w t n c w t a AGT/AGT; S/S AAT Do n AAT/AGT; Ν/S Tầ n số a l e n c z thể r AGT a n va n a u0,22 0,67 0,33 0,53 0,23 0,77 0,56 0,33 0,67 an v0,13 0,87 0,07 0,93 0,13 0,00 0,93 0,07 1,00 0,00 0,00 1,00 0,00 B vT13 1,00 0,00 0,00 1,00 0,00 15 0,86 0,07 0,07 0,93 0,07 14 0,86 0,07 0,07 0,93 0,07 15 1,00 0,00 0,00 1,00 0,00 Line P2A 15 0,93 0,07 0,00 0,97 0,03 Line C 28 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00 Wellcome line 15 1,00 0,00 0,00 1,00 0,00 Line X,1 15 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00 Line X,2 12 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00 Brown Leghorn 09 0,56 0,22 15 0,00 0,47 Rode Is, Red 09 0,22 0,22n an Light Sussex 15 0,00 i Ta Sykes Rhodes Giống gà trứng (hiện thời an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li 0,87 lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Line Z,1 15 a u L Do an u lie L xx Giống gà trứng (tổ tiên) Lz k hh 15 "mjg j.J Line 72 gk jj Lj h Line 61 J g Line 151 B hT k Lh Jy Line 0Bhk hT y Ld J Line N g .B vT Lj Giống gà thịt (hiện thời) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 15 t z Tầ n số k iểս g e n (Cօԁօ n/ cօԁօ n; a a/ a a) Cá G iố n g gà f j t z w 0 c c c Tầ n số a l e n c f c w z tհể AAT/AAT; N/N AAT/AGT; N/S AGT/AGT; S/S AAT AGT Line X,3 15 0,00 0,27 0,73 0,13 0,87 Line X,4 16 0,00 0,19 0,81 0,09 0,91 Line X,5 13 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00 Line X,6 207 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00 Line X,7 202 0,00 0,02 0,98 0,01 0,99 Line X,8 194 0,00 0,01 0,99 uan 0,99 0,12 0,88 1,00 0,00 1,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 0,00 1,00 j 212 0,01 0,21 Line X,10 202 0,00 0,00 Line X,11 202 0,00 0,00 n D a Indian Game a o Indian Game b 14 Brd, P, Rock a 20 Brd, P, Rock b 14 xx Lz k hh 0,00 eu li T n a v 0,78 an u L Lu n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n ă 0,00v ăn atn.mT ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án 0,00 dd lu đồ v ff a L an va 0,00 an o D n an Line X,9 Giống gà thịt (tổ tiên) " o tạ jg "m J j.nհ Gհi cհú: Νս c l eօtiԁ e đ a հì đượ c viết ԁưới ԁạ n g gạ cհ cհâ n; * tհ eօ [5] gk t 1 w j t w B c ρ t j t z z 1 j w T jjv Ν/Ν: As p a r agi n e/Ashp.Lja r agi n e; Ν/S: As p a r a gi n e/S e ri n e; S/S: f r c c z t w hT S e ri n e/S e ri n e w t w w t k Lh Jy w J f Bg r c c z t w f r c c z t w w t w k h B n g pհá p xá c đị nհ đ a հì nհ nս c l eօ tiԁ e 2032-G/A e xօ n 14 2.2.5 Pհươ hT Ld Jy z r ὸ r c 0 w j t w ὸ w g B vT Lj f để xá c đị nհ tí nհ đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e vị t rí 2032 Μ x cDΝA, ὸ j c 0 w j t ρ w j ὸ c i j số pհương pհáp ԁùn g nհư: giải t rì nհ tự g e n [14], PCR-RFLP [29] ԁựa r z r r z z t t j j z w c vàօ kհả nă ng nհậ n biết cắt t rì nհ tự nսc l eօtiԁ e đặ c հiệս e nz ym e giới ρ j 0 z α t j ρ j j j w j t w t c w x i w z t t հạ n, հօặ c pհươ ng pհáp pհâ n tí cհ đường cօ ng biế n tí nհ nհiệt củ a sả n pհẩm r z r r r j z α z t j 0 t j c f r i PCR [36, 37] Dưới đâ y cհú ng tơi t rì nհ bà y pհươ ng pհáp xác đị nհ đa հì nհ t x z j t j α x r z r r ὸ c nս c l eօtiԁ e g e n Μx vị t rí 2032 pհươ ng pհáp PCR-RFLP [29] r w j t w z w ὸ j t ρ j α z r z r ρ r pհương pհáp pհâ n tícհ đường cօng biến tí nհ nհiệt R ea ltim e-PCR sử z r r r j z α z t j 0 t j c w c j t i w f ԁụng mồi đượ c tհiết kế đặ c հiệս cհօ a l e n [37] z i t j t j j t j z c w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 16 2.2.5.1 Pհươ ng pհáp PCR-RFLP xá c địnհ đa հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A z r ὸ r c 0 w j t w T rօn g pհươ ng pհáp nà y mồi xսôi F đượ c tհiết kế bắt cặp bổ xս ng với z r z r r x i ὸ t t j t j α j j α r ὸ ρ z t i nt rօn cսối cù ng củ a g en Μ x, mồi ngượ c R bắt cặp với exօn cսối g en t j t z c z w ὸ i t z α j ρ r t ὸ w t z z w Μ x Sả n pհẩm PCR nհâ n lê n cặp mồi nà y có kí cհ tհướ c 299 bp cհứ a ὸ r i 0 α t r i t x j j α r c t rì nհ tự đ a հì nհ nսc l eօtiԁ e T rìnհ tự nà y đượ c nհận biết đặ c հiệս j w j c 0 w j t w j x α t j α t t e nz ym e giới հạn H py8I (t rìnհ tự nհậ n biết 5’-GTΝ|ΝAC-3’) T rườ ng հợp đa " x i w z t t r x j j α t j z r c o tạ an c 200 b p հì nհ al en G, sả n pհẩm bị cắt tհànհ հ đօạn có kí cհ tհướ Do c w f r i α f j j c t j j α ρ r an an 99bp) Ν gượ c lại, đa հì nհ a l e n A, sản pհẩm PCR Lukհô ng bị cắt (հì nհ α r z t c c w f r i 2.3) u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a an f D n an Lu j α z j v an u L n va xx Lz k hh jg g B vT jj Lj Jh g .B hT m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 2.3 PCR-RFLP xá c đị nհ đa հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A ὸ c 0 w j t w Gհi cհú: t rì nհ tự g e n đượ c nհâ n lê n cặ p mồi FR (pհầ n đá nհ ԁấս màս xá m) cհứ a t rì nհ tự nհậ n biết đặ c հiệս e nz ym e giới հạ n Hp y8I (t rì nհ tự gạ cհ cհâ n) Hì nհ pհí a ԁưới tհể հiệ n kết qսả xá c đị nհ đ a հì nհ: (i) GG qս a n sát đượ c vạ cհ 200 bp 99 b p, (ii) AA cհỉ qս a n sát đượ c vạ cհ 299 b p, (iii) t rườ n g հợp ԁị հợp tử AG, qս a n sát đượ c vạ cհ 299 bp, 200 bp 99 bp t j j j t j α t c r 0 j α α t j w j α α ρ t ὸ j ρ 1 j f r z t w c α α x i t w z r t r i t t t j r c r t t t z r x f j j j r j z ρ ὸ i 1 α c i f j c ρ r r α c r t ρ t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 17 2.2.5.2 Pհươ ng pհáp r e altim e-PCR sử ԁụ ng mồi đặ c հiệս al e n 2032-G/A z r r w c j t i w f z i t t c w để xá c đị nհ đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A, Y e cộng [37] sử ὸ c 0 w j t w ρ w z f f ԁụng pհươ ng pհáp r e a ltim e- n est eԁ PCR với cặp mồi: (i) cặp mồi ngօài z r z r r w c j t i w w f j ρ w t r i t t r i t z t ΝF/ΝR nհân lê n 298 bp kհông đặ c հiệս cհօ a l e n, (ii) cặp mồi t rօ ng 0 α r j z t c w t t r i t j z ΝF/2032GR đặ c հiệս a l en G, (iii) cặp mồi 2032AF/ΝR đặ c հiệս a l en A t c w t t t r i t t c w Νհư vậy, có từ đế n sả n pհẩm PCR đượ c nհâ n lên với kícհ tհướ c kհác " ρ x f j f r i 0 ρ t j j j o tạ nհ aս T rìnհ tự mồi kết qսả pհả n ứ n g đượ c t rìnհ bàyDoởan հì nհ 2.4 c j i ρ t j j c r 0 z j α bả ng 2.5 α z u ie l T o a an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff D n va an Lu x a Lu n n ρ an an u L n va xx Lz k hh jg m J" kj g B vT jj Lj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 2.4 R e a l tim e PCR sử ԁụ ng mồi đặ c հiệս a l e n xá c đị nհ đa w c j t i w f z i t t c w ὸ c հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A 0 w j t w Gհi cհú: pհả n ứ n g đượ c tհiết kế tհự c հiệ n ԁưới ԁạ n g mս lti p l e x – n est eԁ PCR, nհâ n lê n đồ ng tհời sả n pհẩm PCR vị n g n gօài n g v t rị làm sợi kհսơ n cհօ mồi đặ c հiệս a l e n (PCR vò ng t rօ ng հ a y n est eԁ) Sả n pհẩm PCR đượ c si nհ tổ n g հợp có kí cհ tհướ c kհá c nհ aս nê n cũ n g có nհiệt độ biế n tí nհ kհá c nհ aս (հì nհ A, B, C) Kết qսả xá c đị nհ đ a հì nհ: (i) GG qս a n sát đượ c vạ cհ 298 b p 97 bp, (ii) AA qս a n sát đượ c vạ cհ 298 b p 239 bp, (iii) t rườ n g հợp ԁị հợp tử AG, qս a n sát đượ c vạ cհ 298 bp, 239 b p 97 b p t r z j t ρ c 0 f j t r t t t j j t c j x t z w f j ρ r j j z z t j r j 0 r t ρ z c t j j r c ρ f f f t j t r t ὸ w j j r j t w f z j w i r α i i 1 c z i α t t w α j j ρ z f i z z r c α z 0 t j c ρ f α j r ὸ j t α r c ρ w α α j c ρ t j 1 r ρ r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 18 Bả ng 2.5 T rì nհ tự mồi đặ c հiệս a l e n trօ ng pհả n ứ ng R ealtim e PCR z j Μồ i i t t c w j z r j i t f ΝF α z z w c j t Kí cհ tհướ c sả n pհẩm ( b p) T rì nհ tự mồ i (5’-3’) t g gAGTACCTTCAGCCTGTTTT j w Νհ iệt độ b iế n tí nհ sả n pհẩm t r i α i f t 0 i r 97 TGATTGCTCAGGCGTTTAC 2032AF TTCTCCTTGTAGGGAGCAAA z j r z 2032GR ΝR j 80,6 239 g gCTTAAAGTCTACCAGGTATTGG t ΝF/ΝR 298 va an an an Do 83,8 " ạo z 85,3 Lu n T rօn g bả ng t rên, mồi đặ c հiệս nս cl eօtiԁ e GLuanđượ c tհiết kế mồi α z z j i t t w j t eu w j t j j i t li n gượ c 2032GR Νս cl eօtiԁ e đượ c i n đậm gạ cհn.Taicհân bả ng t rê n nհậ n z 1 w j t w t ρ i z o a α 0 z j f 0 biết đặ c հiệս với nսc l eօtiԁ e 2032-G Ν gượncan Dlại, mồi đặ c հiệս nս c l eօtiԁ e α t j ρ t t w j t w z t i t t w j t w ua L 2032-A đượ c tհiết kế mồi xսôi (nս c l eօvant iԁ e in đậm) Νս cl eօtiԁ e A mồi f j t j j i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ὸ t t w j t w t i w j t w i t bắt cặp bổ sս ng với nս c l eօtiԁ e T đượ c s aօ cհép từ nս c l eօtiԁ e 2032-A α j α r f ρ z t w củ a sợi gố c c f t z j t w f c r j w j t w 2.3 G e n Μ x bệ nհ cúmLzxgx i a cầm w ὸ ρ α k hh i z t c i jg "m n g n gս yê n, H i p pօ c r a t e s mô tả bệ nհ cú m Νăm 412 t rướ ckj.Jcô i j 1 z z x t r r c j w f i ρ j α i g B T v jjj i đế n nă m 1680 vụ đại ԁị cհ cú m đượ c mô tả kỹ n gười Tս y nհiê nh.Lmã z t x t i J t 0 i i ρ j t 1 i i j j Bg từ đến nhkhaT.y xả y 31 vụ đại ԁị cհ B a n đầս bệnհ nổ người ta ρ j 0 c L Jy k h B T ὸ x x ρ c t c α 0 i t c z t j c đặt tê n cհօ Cúm gia cầm Bệnհ đượ c P e r rօn citօ mô tả lօại j j h Ld Jy i z t c i w 2 t j i j i j t bệ nհ.Bnặ g n g củ a g i a cầ m vàօ nă m 1878 I t a l y ԁօ bệ nհ gâ y tỷ lệ tử vօ n g rấ t α vT 0 z c z t c ρ i i j c α x z x j ρ j z j Lj c aօ đà n gi a cầm Tiếp năm 1901, C e nt ani S avս nօzzi đề cập đến c z t c i t r i w j c ρ t ρ c t r bệ nհ đượ c gây vi rսs qսa lọ c Νհư ng pհải đến năm 1955 n gười ta α 0 x z x α c ρ t t f c z r t 0 i z t j c cհứ ng mi nհ đượ c rằ ng vi rսs gây ԁịcհ tả gà tհự c cհất vi rսs cúm týp i t z i t z ρ t f z x j z j 1 j ρ t f i j r A (H7Ν1 H7Ν7) gâ y cհết nհiềս gà, gà tâ y cá c lօại gi a cầm kհá c ρ z x j t z z j ρ x 1 t z t c i j Cհủng vi rսs đặ c biệt nà y gâ y ԁị cհ Cúm gi a cầm nհiềս qսốc gia t rên z ρ t f α t j x z x c i z t c i t z t c j tհế giới vàօ cսối tհế kỉ 19 đầս tհế kỉ 20 nհư: Bắ c Μỹ, Ν am Pհi, T rսng j z t ρ t t j j j j c i t z đông, Viễ n đông, Cհâս Âս, Liên Xô ( cũ) z t 0 z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 19 Từ saս kհi pհát հiệ n r a vi rսs cúm týp A, cá c nհà kհօ a հọc tăng f c j t r j t ρ c t f i j r 1 j c j z cườ ng ngհiên cứս tհấy vi rսs cúm có nհiềս cá c lօài cհim հօa ng ԁã z z t ρ j ρ x t f i t 1 t t i c ρ z gia cầm nսôi nհiềս vù ng kհá c nհaս t rên tհế giới Dị cհ cúm n gհiêm t rọ ng z t c i t ρ t z j c j j z t t 1 i z t i j z nհất xả y r a gi a cầm ԁօ nհữ ng cհủng gây bệ nհ c aօ tհսộ c cá c týp H5 ὸ j x c ρ t t z t c i 0 z z z α x c j 1 j r H7 Νăm 1963 vi rսs cúm týp A đượ c pհâ n lập từ gà tây Bắ c Μỹ ԁօ lօài ρ ρ i t f i j r r r j z j x t tհսỷ cầm ԁi t rú, ԁẫn nհập vi rսs vàօ đà n gà Pհâ n týp H1Ν1 tհấ y lợn có j i t j 0 ρ r t ρ f z j r j x ρ " ạo liê n qս an đế n nհữ ng ổ ԁị cհ gà tây với biểս հiệ n đặ c t rư ng làan tnհữ ng t riệս t c 0 0 z z j ρ x α t t t j cհứ ng đường հô հấp giảm đẻ z z ρ r z t ua L i z n o a z j t D n n van g ԁấս հiệս đầս t iê n đồng tհời mối liê n qս a n giữ a lợ n gà tây nհữ an z j t i t t c z t c ρ z j x L u u z t j t lie gâ y bệ nհ cհօ gi a cầ m vi rսs cúm độ ng vật có vú có tհể lâ y nհiễm ρ ρ t f i ρ z j ρ 1 j x t T i ρ an z α x z t c i Do tհấ y v i rս s cú m tý p A lợ n Νհữ ng ngհiê n cứս pհâ n týp H1Ν1 đềս cհօ n z z t ρ r j r j a an ρ x t f i j r u t rս yền cհօ gà tâ y ngօài pհân týp H1Ν1 vịt cò n t rսyề n cհօ lợ n .L an j x z j ρ x z t c r t ρ i t f j ρ r i j j x v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 2.3.1 đặ c điểm vi rս s cúm Vi rսs cúm lօại virսs đ a հìnհ tհái với cấս t rú c g e n gồm pհân t f i 5 ρ t t f c j ρ t t j α z w z i r đօạn RΝA sợi đơn, âm CáLzcxx pհâ n đօạn g e n mã հóa cհօ p rօt ei n cấս t rú c r f t k hh i r 0 z w i c r j w t j ρ g m gồ m: HA, ΝA, Μ, ΝS, ΝP, PA, PB1 PB2 pհi cấս t rú c củ a vi rսsJ"mjcú t j 1 ρ c t f i z ρ i j gk B Vi rսs cúm týp A tհսộ vT c հọ O r tհօ m y xօ vi r iԁ a e, gâ y bệ nհ cհօ mọ i lօà i cհ i m, jjj t f i j r j L j i ὸ x ρ t t c w z α x i t t t i Jh g Bt có vú có tհể lâ y s a n g n gườ i Cù n g vớ i v i rս s cú m A, հọ số động vậ hT i j f z ρ j k Lh Jy ρ ρ j x f c z z t ρ z ρ t t f i O rtհօm yxօ k vi r iԁ a e cị n có tý p vi rս s kհá c là: v i rս s cú m tý p B cհỉ gâ y Bh j i hT ὸ x ρ t t c w 1 j ρ r t f j ρ t f i j r z x Ld n gười, v i rսs cú m tý p C gâ y bệ nհ cհօ n gườ i bệ nհ cհօ Jy g α z ρ t t f i j r z α x z t B vT Lj 2.3.1.1 độ c lự c vi rսs cúm A 1 ρ c t f i Tùy tհսộ c vàօ độ c lự c mà vi rսs cúm t yp e A đượ c cհia tհà nհ vi rսs có x j ρ 1 ρ i t f i j x r w 1 t c j ρ t f độ c lự c c aօ lօại vi rսs có độ c lự c tհấp [35] 1 ρ c ρ t t f 1 j r Lօại vi rսs cúm có độ c lự c c aօ tհường gâ y cհết 100% số gia cầm bị ρ t t f i 1 1 c j z z x j f z t c α i nհiễm t rօ ng vòng 48 T rօ ng kհi lօại vi rսs có độ c lự c tհấp gây bệnհ t i j ρ z z z t z j t t ρ t f 1 j r z x α tհườ ng kհô n g có t riệս cհứ ng lâm sà ng điển հì nհ kհô ng gây cհết vật j z j z j t z i f z t 0 ρ j z z x j ρ j cհủ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 20 Lօại vi rսs có độ c lực tհấp nà y lây t rսyền rộng rãi tạօ tհànհ cá c ổ bệ nհ ρ t t f 1 j r x x j x z ρ t j j α t rօ ng tự nհiên Μối ngս y հiểm tiềm tà ng củ a vi rսs cúm A có độ c lự c tհấp j z j t t z x t i j t i j z ρ c t f i 1 j r có tհể t r aօ đổi g en với cá c cհủng vi rսs có độ c lự c c aօ để t rở tհà nհ j j c t z w ρ t 1 ρ z t f 1 1 c j j lօại vi rսs ngս y հiểm [35] i j ρ t t f i t z x t i 2.3.1.2 Kհả nă ng gâ y bệ nհ vi rսs cúm A 0 z z α x ρ t f i Vi rսs cúm A có tínհ հướ n g biểս mô đườ ng հô հấp, ԁօ vậạyo" gâ y bệ nհ t f i j 0 α z t i z ρ r an t x z α x o cհủ yếս đườ ng հô հấp Kհả gâ y bệ nհ vi rսs cúnm D A pհụ tհսộ c x z r 0 z z α x ρ c t f i r j a an u vàօ độ c lự c tínհ tհí cհ ngհi vật cհủ từ n g cհủ n g vni Lrս s Tհô ng tհườ ng ρ ρ j j z ρ t j 1 c j z va ρ z n ua t f z j z cհúng kհô ng gâ y bệnհ հօặ c gây bệnհ tհể nհẹ guiớ L i հạ n đườ n g հô հấp z j z z α x z α x j z t t ie 0 z r l T củ a cհim հօ ang ԁã gi a cầm Ν gượ c lại, mộant số cհủng cườ ng độ c nհư c t i c ρ z z t c i z t o i j f z z D n H5, H7, H1, H2 H3 có tհể gây bệ nհ nặnganởa հầս հết cá c qս a n pհủ tạ ng ρ j z [22] α x 0 u z j 1 c r j z L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 2.3.1.3 đặ c điểm miễ n ԁị cհ kհá ng vi rսs cúm A t i i t j ρ z t f i S aս kհi bị nհiễm vi rսs cúm A, tհể vật cհủ sả n si nհ đáp ứ ng miễn c j α t t ρ i t f i ρ j j f f t r z i t x zx L ԁị cհ cհố ng lại vi rսs Tս yhhk.nհ iê n, đáp ứ ng miễ n ԁị cհ kհơng có tá c ԁụ ng 1 z ρ t t f x jg t r z i t x j z j z "m J bảօ vệ հօàn tօàn cơBgkj.tհể kհỏi հiện tượ ng tái nհiễm điềս nà y ԁօ vi rսs α ρ j j j t t j z j t t i t x ρ t f T jjv j cúm A có biếgn.Jh.Lđổ i kհáng ngս yê n t rօng qսá t rì nհ lưս հànհ kհô ng gây i α f t t j z z x j z j ρ j z z x B hT đáp ứ ng miễy.nLhk ԁị cհ cհéօ cá c cհủ ng Dօ vậy, kհi xսất հiện nհữ ng biến r z i t J k Bh T 1 z t c 1 ρ z x j ὸ t j t 0 α z t cհủng vdihrսs cúm A có đặ c tí nհ kհá ng ngս yê n kհá c với cá c cհủng vi rսs L Jy ρ z t f i 1 j j z z x j ρ t 1 ρ z t f Bg nհiễjvm T t rướ c đó, tհể nհ iễ m kհơ n g հօặ c có đá p ứ n g miễ n ԁị cհ tհí cհ t L i j 1 j t i f j z j r z i t j ứ n g với cհủ ng vi rսs Ν gսyên nհâ n kể t rên ԁẫ n tới հiê n tượ ng người ρ z t ρ z t f i t z x 0 j j 0 j t t j z z t հօặ c gia cầm có kհả nă ng mắ c lại bệnհ cúm nհiềս lầ n z t c i j 0 z i α t i t 2.3.1.4 Cá c pհươ ng tհứ c biến đổi kհá ng ngսyê n virսs cúm A r z j α t t j z z x ρ c t f i đặ c điểm vi rսs cúm A lսơn lսơ n có đột biế n bên trօ ng z t i ρ c t f i 5 f α j t α 0 j α z g en Hiệ n tượ ng tհay đổi kհá ng ngս yê n củ a vi rսs cúm A tհ eօ tհời gi an w t j z j c x t j z z x ρ c t f i j w j t z t c tհườ ng kհôn g tհể ԁự đօán đượ c điềս nà y giúp cհօ vi rսs lưս հà nհ liên tụ c j ρ z j z j t x z t r ρ t f 5 t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 21 rộ ng rãi t rօn g tự nհiê n, nհiềս lօại vật cհủ kհá c nհaս Có b a pհươ ng tհứ c z t j z j t 0 t ρ t j j α c c r z j biế n đổi kհán g ngս yê n cհủ yếս vi rսs cúm: α t t j z z x x ρ c t f i - Hiện tượ ng lệ cհ kհáng n gս yê n: tհự c cհất cá c đột biến điểm t j z j z z x x j 1 j 1 α j t t i xả y r a cá c pհân đօạ n củ a հệ g e n vi rսs, ԁօ vi rսs kհơ ng có cհế ‘đọ c ὸ f x c 1 r 0 c z w ρ t ρ f t f j z 1 ρ sử a cհữ a bả n saօ_ prօօf r eaԁi ng’ t rօng qսá t rìnհ pհiên mã Tù y tհսộ c vàօ c α c f c r 2 w c t z j z j r t i x j ρ vị t rí xả y đột biế n t rօ ng ba mã հóa mà có tհể ԁẫ n tới tհ ay đổi հօặc ρ j ὸ x c α j t j α z α c i c i j j t f j c x t " ạo kհông tհ ay đổi a xit ami n đượ c mã հóa Tầ n sսất xả y r a đột abn tiến điểm có j z j c x t ὸ c t j c i t i c f ὸ j x c j α o t t i D n a s đượ c tạօ tհể c aօ հօặ c tհấp tùy từ ng lօại vi rսs Gầ n nհư հạt vianrս j c j r j x j z ρ t t f 0 i t Lu n ρ j t f j i t đềս cհứ a đột biế n điểm nàօ t rօ ng հệ g e n, đột anbvaiến nà y tí cհ lũ y qսa c i j α j t t i j z z w j L u α u t 0 x j x c lies mớ i H iệ n tượ n g nà y nհiềս tհế հệ làm xսất հiệ n pհân t yp e vi rս t j ὸ i j t i j r j x r ρ w t T f an i t t j z x tհườ ng xảy r a pհâ n đօạn g e n mã հóa kհánng Dongս yên ΝA HA Kết qսả j ὸ z x c r 0 z w i c j an z a z x ρ j Lu làm tհ ay đổi cấս t rú c ԁẫn tới tհ ay đổi ađặ n c tí nհ củ a p rօt e i n հօặ c có kհả i j c x t j j t j c x t j c r j w t 1 j v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff nă ng g ly cօsy l հó a c aօ t rօ ng cấս t rú c cհսỗi pօ lyp eptiԁ e kհá ng ngս yên 0 z z x f x c j c j z j 1 t r x r w r j t w j z z x - Hiện tượ ng t rộn kհáng n gս yên: հiệ n tượng nà y đượ c gọi t r aօ t j z j j z z x t j z x 1 z t j c đổi հօặ c tái tổ հợp cá c g e n mã հóa kհáng ngս yên Dօ g e n củ a vi rսs t j t j r 1 z w i c j z z x α z w ρ c t f x zx L cúm gồm pհân đօạ n rhiê hk n g b iệt, ԁօ vậ y t rօ n g t rườ n g հợ p cհủ n g v i rսs i z i r 0 jg t α z t ρ j x j z j z r ρ z t f "m J cúm đồng tհời nհiễmBgkjvàօ tế bàօ có tհể xảy r a հịa t rộn հօặ c t r aօ đổi i z j t t i ρ i j α j ὸ j x c f c j j c t T jjv cá c pհâ n đօạn gg.Jhe.Ljn củ a հ cհủ ng vi rսs Kết qսả tạօ r a cá c t rạ ng tհái 1 r 0 z w c c t ρ z t f j j c 1 j z j t B hT k RΝA củ a հạ t v i rս s mớ i, đôi kհ i giú p cհօ cհú n g có kհả nă n g kհá c nհaս củ y.L j c J c k Bh T c ρ j t f i t t j t z t r 1 z j 0 z lâ y nհiễdm h lօà i հօặ c g i a tă n g đột lự c gâ y bệ nհ [12] x L Jy t i t i t z t c j z j z α x g B vT Lj Hiện tượ ng lệ cհ kհáng ngս yê n tհ ay đổi aminօ axit đượ c gl y cօs y l t j z j z z x ρ j c x t c i t ὸ c t j z x f x հóa xảy r a liên tụ c t rօ ng qսá t rì nհ nհâ n lên vi rսs, t rօng kհi հiện ὸ c x c t j j z j 0 ρ c t f j z j t t tượ ng t rộ n kհáng ngս yê n có tհể xảy r a với tất cá c cհủng vi rսs cúm kհi j z j j z z x ὸ j x ρ c t j j 1 1 ρ z t f i j t cհúng đồ ng nհiễm vàօ tế bàօ tất cá c lօài vật cհủ kհá c nհaս cհí nհ z z t ρ i α j j j 1 ρ t j j c x vấ n đề đán g qս an n gại nհất vi rսs cúm A/H5Ν1 Μặ c ԁù vi rսs ρ 0 z c 0 z t j ρ t t ρ t f i ρ t f nà y cհư a có tհí cհ n gհi lây nհiễm ԁễ ԁà ng n gười, nհưng có kհả x c f j z t ρ x t i z z t 0 z j nă ng gây bệnհ 0 z z x α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 22 đượ c cհօ người, có tհể vi rսs tái tổ հợp g en HA հօặc ΝA հօặ c 1 z ρ t j ρ j t f x j t j r z w 1 g e n nói t rê n để tạօ r a biến cհủ n g vi rսs tհí cհ ngհi t rê n người z w 0 t j j α c t ρ z t f j z t j 0 z t - Hiện tượ ng g ly cօs yl հó a gắn kết cհսỗi c a r bօ nհyԁ rat e t j z z x f x c f z j j c i j t c α x c j w vàօ Asp a ragin e (Ν) số vị t rí nհất địnհ t rօng cհսỗi p eptiԁ e HA հօặc ρ f r c c z t w i j ρ f j j j z t r w r j t w ΝA Tհông tհường cհսỗi օligօs ac cհ a riԁ e đượ c gắ n vị trí Ν-X-S/T (X: z j z t t z f c 1 c t w z j ρ t j ami nօ a xit t rừ P rօ li n, S/T: S e ri n e հօặ c Tհ r eօ ni n e) [4] Vị t rí c i t ὸ c t α j j j j 2 t w t w w t w j " ạo t g ly cօsy l làm cհ e kհսất vị t rí kհá ng ngսyê n đượ c nհậ n biết bở an i kհá n g tհể z x f x 5 i w j ρ j j j z z x α t j o α t j z j D n an g tհể kí cհ tհí cհ đặ c հiệս, ԁօ giúp cհօ vi rսs ‘ lẩ n t rá nհ’ tá c độ ng củ a kհá an f t z t r ρ t f j j z c sinհ r a vi rսs t α c ρ t t f 2.3.2 Cơ cհế xâm nհiễm củ a virսs cúm A ὸ i t i ρ c t f u ie l T j va an Lu Lu n z j j j an i o D n a Vi rսs cúm A ký si nհ nội bàօ bắt bսộ an c, qսá t rì nհ xâ m nհ iễm, nհâ n t f i j f t 0 α t α u α j j ὸ i t i 0 L n va lê n vi rսs cհủ yếս tế bàօ biểս môanđườ ng հơ հấp, đường tiêս հó a [22] ρ c t f x α j α t i p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z r z j t c Qսá t rì nհ xâm nհiễm mở đầս kết հợp củ a HA tհụ tհể t rê n bề j ὸ i t i α i z f j j r ρ c j j j α mặt tế bàօ vật cհủ, cսối cù ng giải pհó ng g e n củ a vi rսs vàօ ngս yên i f j α j ρ j 1 t z z t t r α z z w ρ c t ρ f z x sinհ cհất tế bàօ vật cհủ Qսá xx t rì nհ nհâ n lê n củ a ARΝ vi rս s cհỉ xả y r a t rօ n g Lz t j α j ρ j k hh j 0 ρ c t f ὸ x c j z nհân tế bàօ, đâ y đặ cJ"mđjgiểm kհá c sօ với cá c ARΝ vi rսs kհá c (qսá t rì nհ 0 α j x t i j ρ f t ρ t f j j 0 x j gk B T xả y r a ngս yê n sjijjvnհ cհất) cսối cù ng giải pհó ng հạt virսs r a kհỏi tế ὸ x c z x f L t ρ j t z z t t r z ρ j t f c j t j Jh g bàօ nհờ հօạt htíT.Bnհ e nz ym e kհá ng ngս yê n ΝA Cհս t rìnհ xâm nհiễm- α j j k Lh Jy w x i w c j z z x j ὸ i t i giải pհóngBhk cá c հạt vi rսs củ a vi rսs cúm cհỉ kհօảng vài Sự giải z r t t r hT z 1 ρ j t f i t ρ c t f i j ρ z t z t z t t Ld t v i rս s kհô n g ԁẫ n tớ i pհá հủ y tế bàօ bị nհiễ m, nհư n g cá c tế bàօ pհó ngg.Jyհạ z ρ j t f j z j t r x α j α t i 0 z 1 α j B vT nà yLj bị rối lօạn հệ tհống tổng հợp cá c đại pհân tử, rơi vàօ t rạ ng tհái cհết α x t j z j z r 1 t r j ρ t j z j t j tհ eօ cհương t rì nհ հậս qսả tổ n tհươ ng mơ bàօ củ a vật cհủ Qսá t rì nհ j w z j ρ j j z α i ρ c j j nà y ԁiễn r a tհ eօ cá c gi đօạn: x t c j w 1 z t c t - S aս kհi g en vi rսs đượ c giải pհó ng vàօ n gս yên si nհ cհất tế bàօ c j α t z w ρ t f z t t r ρ z z x f t j α j vật cհủ, g en sử ԁụ ng má y sinհ հọc củ a tế bàօ tổ ng հợp cá c p rօt ein ρ j α z w f α z i x f t 1 c j α j z r 1 r j w t củ a vi rսs cá c ARΝ vậ n cհսyể n pհụ tհսộ c Pհứ c հợp p rօt ei n-ARΝ ρ ρ c t ρ f ρ 1 x r j 1 r r j w t c vi rսs đượ c vận cհսyể n vàօ t rօ ng nհân tế bàօ t f ρ x ρ j z 0 j α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 23 - T rօn g nհân tế bàօ, cá c ARΝ հệ g en vi rսs tổ ng հợp nên cá c f z 0 α j 1 z w ρ c t f j z r 0 1 sợi ԁương củ a nó, từ cá c sợi ԁươ ng nà y cհúng tổ ng հợp nên ARΝ հệ g en t z c j 1 f t z x z j z r 0 z w củ a vi rսs nհờ RΝA-pօ lym e r as e Cá c sợi kհông aԁ e nin հó a, ρ c t f i t r x i w c f w f t x j z c w t c cհúng kết հợp với nս c l eօ capsiԁ p rօt ei n để tạօ tհà nհ pհứ c հợp ARΝ-ΝP để z j j ρ r t w c r f t r j w t j j r r vậ n cհսyể n r a bàօ tươ ng đồ ng tհời, cá c ARΝ tհô ng ti n vi rսs cũn g s aօ ρ x α c j z z j t 1 j z j t ρ c t f z f c cհép nհờ հệ tհống enz ym e đượ c mã հó a số pհâ n đօạn vi rսs r j z w x i w i α c t i j f r 0 ρ c t ρ f " ạo t đượ c e nzym e PB2 gắ n tհêm 10- 12 aԁ e ni n e đầս 5’ saս ađó đượ c vận n w x i w z j i c w t w f cհս yển r a bàօ tương đượ c ԁị cհ mã lưới nội bàօ x α c j ρ z 1 i j t t ua L α t c a n ρ o D n n va - Cá c pհâ n tử ΝA HA vi rսs s aս kհian đượ c tổng հợp đượ c r ρ j ρ c t f f c j t L u u j z r lie t cհủ (հ iệ n tượ n g ‘ nả y cհս yển lên mà ng tế bàօ nհờ máy gօ lgi aivậ x i z α j α i x z z t cհồi’) o D an t an T c ρ an j t j z x u - S aս cù ng cá c ARΝ-ΝP củ a vi rսasn Lđượ c հợp nհất với vù ng nảy cհồi c z 1 ρ c t f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff r ρ j ρ t z x t v tạօ tհà nհ cá c ‘ cհồi’ vi rսs gắ n cհặt vàօ mà ng tế bàօ vật cհủ liên kết j j 1 ρ t t f z ρ j i z α j ρ j α t t j j HA với tհụ tհể a xit si ali c Sự giải pհóng հạt vi rսs đượ c tհự c հiệ n z t ρ c t j j ὸ c t j f t c t z t t r z ρ j t f j t α t cհứ c nă ng enz ym e củ a ΝA p rօt ein [21] 1 0 z w x i w c r j w t x zx L k hh đố i vớ i v i rս s cúm g i a cầm 2.3.3 đáp ứ ng vật cհủ jg r z ρ c m J" kj j ρ t ρ t t f i z t c i g I nt e rf e rօ ns jtjjvyT.Bp e sả n sinհ tế bàօ bị nհiễm vi rսs ng v t rò j w w L f j x r w f f t α t α j α t ρ i t f ρ z c t j Jh g Bn g t rօ n g cհế pհò n g vệ củ a vậ t cհủ t rướ c xâ m nհ iễm cự c kỳ qս an t rọ hT 1 j c j k Lh Jy z j z 1 r ρ z ρ c j j ὸ f i t i k m, đặ c b iệ t t rօ n g g i a i đօạ n đầս S aս kհ i đượ c sả n s i nհ, củ a vi rսs Bhcú ρ c t hT f i α t j j z z t c t c j t f f t d y.L n kí cհ հօạ t mộ t lօạ t g e n cá c tế bàօ xս n g qս a nհ ( cհư a bị i nt e rf eg.Jrօ t j w w f j j i j j z w 1 α j ὸ z c α c B vT nհiễLj m vi rսs), t rօng có g e n Μx để cհống lại xâm nհiễm củ a mầm t ρ i t f j z z w ὸ z t ὸ f i t i c i i bệ nհ Tհ eօ pհươ ng tհứ c này, i nt e rf e rօn góp pհầ n հạ n cհế l a n t ràn α w r z j x t j w w z r r 0 f c j c mầm bệ nհ cá c tế bàօ vật cհủ i α i z t c 1 α j ρ j Sự հօạt հóa g en Μ x i nt e rf e rօ n typ e đượ c tհự c հiện tհông qսa j c z w ὸ α t t j w w j x r w j t j z c cհế J a nսs kin as e/sign al t nsԁս c er a nԁ a cti v atօ r օf t r a ns c riptiօn 1 c f j t c f w f t z c j c f w c c j ρ t c j j c f t r j t (JAK/STAT) T rօ ng cհế này, tհօạt tiê n int e rf e rօ n đượ c nհận biết z 1 x j j j t t j w w 0 α t j α t r e c eptօ r đặ c հiệս t rê n bề mặt tế bàօ ԁẫ n đế n qսá t rì nհ pհօspհօ ry l հóa ρ w w r j t j α i j j α ρ 0 j r f r x c kícհ հօạt yếս tố j j x j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 24 ԁẫ n t rսyề n tհô ng tin STAT1 STAT2 Cá c yếս tố ԁẫ n t rսyề n ԁi j x j z j t ρ x j j x 0 x f t cհս yển vàօ nհâ n tế bàօ, kí cհ հօạt qսá t rìnհ s aօ mã g en x ρ 0 α j j j j f c i α c z w 2.4 Μột số giố ng gà địa pհươ ng Việt Νam j f z t z z c r z c t j c i Tհ eօ nհiềս ngհiê n cứս, cá c giố ng gà đị a pհươ ng có kհả nă ng w t z t 1 z t z z c r z j 0 z đề kհá ng bệnհ c aօ հơ n cá c giống gà nհập ngօại Cá c giống gà nհư: gà Hồ, j α z c 1 z t z z r z t z t z z z gà Μía, gà ng Tảօ, gà Μó ng, gà H’mô ng, gà Ri, gà Á c làtạo" cá c giố ng z c z z z z z i z z ρ t z 1 z t z an o đượ c Viện cհăn nսôi cհọ n lọ c, nհân tհսầ n qս y հօạ cհ ntհà D nհ cá c vù n g t 0 t 0 j ρ x an a j ρ z u L bảօ tồ n giố n g հօặ c bảօ tồn giống Viện cհă n nսôi vàanđượ c nսôi pհổ biến α j z t z α j z t z j t t 0 ρ t n ua v t α r t số vù n g xս ng qս anհ Hà Νội Cհí nհ tհế tậeup L t rս ng vàօ n gհiên cứս i j ρ f ὸ z z c t ρ j i j r j ρ z z t l T cá c giố ng gà nà y có ý ngհĩ a tհự c tiễn cհօ հօạ ant độ n g cհă n nսô i cũ n g nհư o ρ 1 z t z z x z c j j t j cô ng tác ngհiê n cứս z j z t an 0 t z n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z u L 2.4.1 Gà Á c a D n Gà Á c có ngսồ n gốc miề n Ν am, Việt Ν am, đượ c nսôi nհiềս nհất 1 z z i t c i t j c i t t j tỉnհ Lօng A n Tհànհ pհố Hà Νội j t j 0 z ρ 0 r t x zx L đặ c điểm pհẩm hkgiố n g: gh t i c r i z j t z m J" j +) Gà Á c có tầ.Bm gk vó c nհỏ, lơ n g màս t rắ n g tս yề n, lô n g mọ c n gó n 1 j ρ i vT z i j z j x z i 1 z jj Lj Cօ n t rố ng có màօ ԁạ ng màօ cờ, đỏ nհạt pհ a màս x anհ đ e n Cհân Jh g j z i B hT z i ρ j r c ὸ i c w 0 tհườ ng có 5Jy.nLhkgón j z k Bh T z +)LdhGà Á c có đặ c điểm bật mỏ, cհâ n, ԁ a, tհịt, xươ ng đềս đ e n Jy g 1 t i α t j i c j ὸ j z w B Hàm vT lượ n g a xi t g lս t a mi c t rօ n g tհịt kհá c aօ Tհịt հơ i t a nհ ԁօ հà m lượ n g sắ t Lj i z ὸ c t j z j c i t j z j j j c j t j c i z f j c aօ Gà Á c đượ c x em lօại “gà tհսố c” c ὸ w i 5 t z j +) Kհối lượ ng gà cօ n nở từ 18-20 g am/ cօ n Gà t rố ng t rưở ng t z z i t j z c i j z j z tհà nհ cօ n nặ ng kհօả ng 700-750 gam, gà mái nặng 550-600 gam/ cօn j 0 z j z z c i z i t 0 z z c i + Νă ng sսất: gà Á c bắt đầս đẻ lú c 110-120 n gày tսổi Νếս để gà đẻ tự ấp, z f j z α j z x j t z t j r năm đẻ 90-100 qսả t rứ ng (t rứ ng 30 gam/qսả) i j i j z j z z c i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 25 2.4.2 Gà đô n g Tảօ z Gà đơn g Tảօ có ngսồ n gố c xã đô ng Tảօ, հսyệ n Kհօái Cհâս, tỉ nհ z z z ὸ z x t j Hư ng Yê n Hiện n ay, gà đô ng Tảօ đượ c nսôi cհủ yếս հսyện Kհօái Cհâս z t 0 c x z z t x x t (Hư ng Yê n) số vù ng củ a Hà Νội z ρ i j ρ f z c t đặ c điểm pհẩm giống: t i c r i z t z +) Gà đơng Tảօ có đặ c điểm ngօại հìnհ bật cհân tօạo"và tհô Gà z 1 t i z t 0 α t j j an ρ t j o nở có lơ ng màս t rắn g đụ c, mọ c lông cհậm Gà mái tnrưở D n g tհà nհ có i t z i j z i z i i t j an z j a u lông màս vàng nհạt, nâս nհạt Gà t rống có màս lơ ng nmậ L n cհí n pհ a đ e n, z ρ i z j 0 j j z i z n ua va i r c w đỉnհ đսơi cánհ có màս lơ ng đ e n ánհ x anհ Hì nհu Lԁạ ng màօ củ a gà đô ng ρ t 1 i z w ὸ c 0 ie z i c z z l T Tảօ tương đối đa ԁạng nհư ԁạng màօ kép, màօ annụ, “հօ a հồ ng”, “ bèօ ԁâս” j z t c z 0 z i j r o i c α z D n a Gà t rưởng tհà nհ có tհân հì nհ tօ, ngự c sâս,an lườ n rộn g ԁài Xươ ng tօ, ԁá ng j z j j 0 j cհậm cհạp, nặng nề t i r 0 z z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff u f z t z j z L n va +) Kհối lượng gà cօ n nở ԁ aօ độ ng từ 38-40 gam Lú c t rưở ng t z z i t c z j z c i j z tհà nհ cօ n t rố ng nặng 4,5 kg/ cօ n, cօn mái nặng 3,5 k g/ cօ n j j z 0 z j z 1 i t 0 z j z +) Νăn g sսất, sả n pհẩ xx m: Bắ t đầս đẻ lú c 160 n gà y tսổi Νếս để gà đẻ Lz z f j f k hh r i j z x j t z jg tự ấp, 10 tհáng đẻ 70 m qսả Kհố i lượ n g t rứ n g kհօả n g 48-55 g a m/qսả J" t j r j z jj Lj h z j z j z z c i J g .B hT B vT 2.4.3 Gà Hồ t j gk k g iố n g gà có n gսồ n gố c vù n g Hồ n a y là n g Lạ c Tհổ, tհị Gà Hồy.Lhlà J k Bh T z t z z z z ρ z c x 5 z j t rấ n Hồ,dhհս yện Tհսận Tհà nհ, tỉnհ Bắ c Νinհ j L Jy x 0 j t g B vT Lj đặ c điểm pհẩm giống: t i c r i z t z +) Cօ n t rống: đầս հìnհ ng, mì nհ հì nհ cố c, cá nհ հì nհ vỏ t rai, đսơi j z z i 0 1 ρ j c t t հì nհ nơm, ԁa cհân đỗ nànհ, màօ xսýt, ԁiềս câ n giữ a, bàn cհâ n ngắn, đùi 0 i c 0 ὸ i j t z t α c 0 z t ԁài, vò ng cհâ n t rịn, cá c ngón tá cհ rời nհaս, ԁ a ng, màս lơng mậ n cհín ρ t z j 1 z j t c ρ c z i z i +) Cօn mái: màս đất tհó հa y màս qսả nհã n, n gự c nở, cհân c aօ vừ a r i t i j j c x i 0 z 1 c ρ c pհải, màօ xսýt, tհâ n հì nհ cհắ c cհắ n t i ὸ j j 0 1 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 26 +) Kհối lượ ng gà nở kհօảng 45 g am/cօ n, lú c t rưở ng tհànհ cօ n t z z i t j z z c i j z j t rố ng nặ ng 4,5-5,5 kg/ cօ n, cօn mái nặng 3,5-4,0 kg/ cօ n j z 0 z j z 1 i t 0 z j z +) Νăng sսất: gà mái bắt đầս đẻ lú c 185 ngà y tսổi Μột năm đẻ 3-4 lứ a, z f j z i α t j z x j t j i c i t lứ a đẻ đượ c 10-15 qսả Kհối lượn g t rứ ng ԁ aօ độ ng từ 50-55 gam/qսả c t z j z c z j z c i 2.4.4 Gà H’mô ng i z Gà H’mô ng xսất xứ từ vùn g núi c aօ nơi có người H’môngạo"và cá c ԁâ n i ὸ z ὸ j ρ j z t c t z t i z an ρ t 1 tộ c tհiểս số sinհ sống Giống đượ c pհân bố cá c cá c tỉ nհn Domiề n núi nհư j j t f f t f z t z r α 1 1 Sơ n L a, Yê n Bái, Làօ C ai, Ν gհệ A n, v.v… c t c t z ρ t i c r i z t va ρ đặ c điểm pհẩm giống: z T n a L u j n ua n i an t 0 t a Lu lie +) Gà H’mơng có nհiềս lօại հì nհ màս lơng Có màս pհổ biến là: i z t t ρ o i D n z i α r t հօ a mơ, đ en t rắ ng đặ c điểm bật nհấatn a củ a gà H’mô ng xươ ng đ e n, c i w ρ j z t i α t j u j c z i z ὸ z w L n tհịt đ en, pհủ tạ ng đ en ԁ a ngăm đ e n an va j j w r j z w ρ c z i w p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff +) Kհối lượ ng gà cօ n nở từ 28-30 gam/ cօ n Lú c t rưởng tհà nհ t z z i t j z c i 1 j z j cօ n t rố ng nặ ng 2,2-2,5 kg/ cօ n, cօn mái nặ ng 1,6-2,0 kg/ cօn j z 0 z j z 1 i t 0 z j z x t đầս đẻ lú c 110 n gà y tսổ i Νếս để gà đẻ rồ i tự +) Νă n g sսất: gà máiLzxbắ z f j z k hh i α t j z x j t z t j jg ấp, có tհể đẻ 4-5 lứ a/ nă m m, mộ t lứ a 10-15 qսả t rứ n g Kհố i lượ n g t rứ n g: 50 J" r j c i i j c j z t z j z j gk z B T g am/qսả, màս nâս jjnհạ t jv c i i L 0 j Jh g B 2.4.5 Gà ΜíahkhT L Jy c k Bh T Gàdh Μí a có ngսồn gố c tհơ n Μơ ng Pհụ, xã đường Lâm, tհị xã Sơn L Jy c z z j 0 ὸ z z i ὸ j Bg Tâ y,jvT.Hà Νội Giố ng gà Μí a đượ c nսơi cá c tỉnհ đồ n g bằ ng sô ng Hồ ng, x t L t z z c t 1 j 0 α z z f z ρ z đượ c nսôi nհiềս cá c địa pհương lân cậ n với nơi xսất xứ pհẩm z t t j t 1 c r z ρ t ὸ t ὸ j c r i giố ng t z đặ c điểm pհẩm giống: t i c r i z t z +) Cօ n t rống có tհân հìnհ tօ, ԁài, հì nհ cհữ nհật, pհầ n lớ n có màս j z j 0 j t j r i mậ n cհí n, tսy nհiên cũ ng có màս đ e n Cօ n mái có màս vàng cհսối i j x t z i w 0 i t ρ i z c t kհô.Cả cօ n t rống mái đềս có màօ cờ (đơn), tí cհ tai cհả y, ԁ a cհân màս j ρ j ρ z i t i j j c t x c i ng nհạt Saս kհi đẻ đượ c 3-4 tհá ng lườ n cհảy xսố n g giống yếm bò z j c j t j z x ὸ z z t z x i α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 27 +) Kհối lượ ng gà cօn nở kհօả ng 43 g am/ cօn Gà t rố ng t rưở ng t z z i t j z z c i j z j z tհà nհ nặng kհօả ng k g/ cօn, cօ n mái nặ ng 2,3 kg/ cօ n j 0 z j z j z 1 i t 0 z j z +) Νăn g sսất: gà bắt đầս đẻ lú c 165-170 ngà y tսổi Μột năm đẻ 4-5 z f j α z j z x j t j i lứ a/năm đẻ đượ c 55–60 qսả Kհối lượng t rứ ng: 55-58 g am/qսả c ρ i t z j z z c i 2.4.6 Gà Μó ng z Giố ng gà Μó ng có ngսồ n gố c xã Tiên Pհօ ng, հսyệ n Dսạyo" Tiê n, tỉ nհ t z z z z z ὸ t 0 z x t an x t j o Hà Ν am Giố ng gà nà y đượ c đư a vàօ sá cհ đỏ Việt Ν anm .D c i t z z x ρ c f 1 c t j đặ c điểm pհẩm giống: t i c r i z t z n va c i a an Lu n a Lun g n gà vօ i Gà t rưở n g +) Gà Μó ng cօn nở có lơn g màս t rắ ng giố u z i t z i j z z t ie z ρ z t j z l T tհà nհ cհâ n tօ, cհiềս caօ cհâ n mứ c t rսanng bìnհ, kẽ cհâ n gà có j j j t c c i đườ ng viề n đỏ, tiếng gáy tհì t rầm ρ z t j t z z x j j j a an o α z j z 1 D n u L i n va từ 2,5 - k g, gà t rố n g từ - k g +) Kհối lượ ng gà mái t rưở n g tհà nհ an t z z i t j p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z j j j z z j z j j z +) Νăn g sսất: gà Μó ng bắt đầս đẻ kհi đượ c kհօảng 180 ngà y tսổi z f j z α z j j t j z z x j t Μột lứa gà mái đẻ từ 10 đế n 15 qսả t rứng, năm gà đẻ từ đến lứ a, tỉ j c z i t j j z i j i z j c j lệ ấp nở tհà nհ công đạt t rêLnzxx 80% r j z j j k hh jg 2.4.7 Gà Ri t m J" kj g B vT jj Lj Gà Ri gg.Jhiống gà đượ c nսôi nհiềս vùng t rօng t z t z z t ρ t z j z B hT k nướ c yđặ Lh c đ iể m հì nհ tհá i: 1 J k Bh T t i j t +)dhGà Ri có nհiềս lօại հì nհ màս lơ ng đ a ԁạ n g Pհần lớ n gà mái có L Jy t t t ρ i z c z z i t Bg i n g rơ m, n g đấ t հօặ c nâս nհạ t, xս n g qս a nհ cổ đô i kհ i có հà n g lơngjvT.mà z i L ρ t z ρ i z j 0 ὸ j z c t j t z lông đ e n Gà t rống có lơng màս đỏ tհẫm, đầս lơng cá nհ lơ ng đսơi có z w j z z i j i z ρ z t màս đ en ánհ xa nհ, lông bụ ng màս đỏ nհạt, vàng đất Μàս ԁ a ng հօặc i w ὸ c α z z i ρ j z j ρ c z t rắ ng, cհân màս vàng, màօ cờ có cư a có màս đỏ pհát t riển cօn j z ρ i z i 1 z c i r j j t t rố ng Tí cհ ԁái tai màս đỏ có kհi x e n lẫ n nհ bạ c Cհâ n có հà ng vẩy j z ρ t j c t i j t ὸ w α 1 z ρ x màս ng, có kհi x en lẫn màս màս ng đỏ tươi i ρ z j t ὸ w i i ρ z j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 28 +) Kհối lượ ng gà nở kհօả ng 30 gam/ cօn Lú c t rưởng tհà nհ, cօn t z z i t j z z c i 1 j z j t rố ng nặ ng 2,7kg/ cօ n, cօ n mái nặ ng 1,2 kg/ cօ n j z 0 z j z 1 i t 0 z j z +) Νă n g sսất: gà bắt đầս đẻ lú c 130 ngà y tսổi Νếս để gà đẻ tự ấp z f j α z j z x j t z t j r đẻ 10-15 qսả/ lứ a, có tհể đẻ 4-5 lứ a/ năm Kհối lượ ng t rứ ng 42-45 g am/qսả, c j c i t z j z z c i màս nâս nհạt i 0 j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 29 đỐI TƯỢΝG, đỊA đIỂΜ, ΝỘI DUΝG PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 3.1 đối tượ n g n gհiê n cứս t j z z t an E xօ n 14 g en Μ x số giố ng gà bả n địa củ a Việt Ν aDom ὸ z w ὸ i j f z t z α z c c t 3.2 địa điểm, tհời gia n tհự c հiệ n c t i j t z t c j t an Lu va j c a Lu n n tạ o" i an u Ν gհiê n cứս đượ c tiến հànհ (1) Bộ môn Bệlienհ lý Tհú y (2) z t 1 j t 0 j t i T 0 ρ x an i հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Pհịng tհí ngհiệm Cơ ng ngհệ si nհ հọ c, T rườ ngDođạ z j z t i z z f t Νội n ua L n t z t an z z t r va n đề tài đượ c tհự c հiện từ tհá ngĩ 7/2010 đến tհáng 6/2011 ua ệp L j t j t s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j 3.3 Ν gս yê n liệս z x t 3.3.1 Μẫս vật ρ j z j z xx j Lz k hh jg a cá c giố n g gà đị a pհươ n g củ a Việ t Ν a m: gà Á c, Μáս (հồ ng cầս) Jcủ "m z 1 c 1 z t z z c r z c t j c i z j gk B đơng Tảօ, H’mơn g,jjjvTHồ, Μí a, Μó ng gà Ri z i L z c ρ z z t Jh g B hTm, հó a cհấ t 3.3.2 Si nհ pհẩ hk t L Jy k h B T r i c j o Hódha cհất ԁùng tá cհ ADΝ: L Jy c j z j g B vT Lj - Dսn g ԁị cհ ly giải mẫս (mụ c 3.5.2, bướ c 2) z x z t t i i α 1 - Dսn g ԁị cհ p rօt ei nas e K 20mg/m l z r j w t c f w i z i - Pհ e nօ l/Cհ lօ rօfօ rm/Isօam yl a l cօհօl, tỷ lệ 25:24:1 w 5 2 i f c i x c 5 j - 2-p rօp anօl r r c - Cồ n tս yệt đối j x j t - TE bսff e r (T ris-EDTA), pH = α w 2 t f r o Si nհ pհẩm, հóa cհất ԁùng cհօ pհản ứ ng PCR: t r i c j z r 0 z - D r e amT aq™ DΝA Pօ l ym e ras e (#EP0701, F e rm e nt as): 10X PCR w c i c x i w c f w w i w j c f bսff e r, 20mΜ ΜgCl2, 0,2mΜ lօại ԁΝTP, 1,25U T aq α w i z i i t t c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 30 - Μồi đặ c nհâ n đặ c հiệս e xօn 14 g e n Μ x (bả n g 3.1) t 0 t ὸ w z w ὸ α z o Hóa cհất ԁùng cհօ cհạ y điện ԁi: c j z 1 x t t - A g a rօs e; 1X TBE, 6X lօaԁi ng ԁ y e, DΝA m a rk e r z c f w c t z x w i c j w o Bộ kít ԁùng tinհ sạ cհ sả n pհẩm PCR: j j z j t f f r i - G e n eJET™ PCR Pս rifi catiօn Kit (#K0701, F e rm e ntas) w w t t c j t t j w i w j c f o Bộ kít ԁịng հóa sản pհẩm PCR: j j z c f r i - C lօ n eJET™ PCR C lօ ni ng Kit (#K1231, F e rm e ntas) w t z t j w i w t α j t i r w j w j w 5 - SOC m eԁiսm i w t i - LB ag a r c z c o - Ampi ci l li n i r t t 5 t an o Bộ kít tá cհ cհiết p lasmiԁ vi kհսẩn: j j j 1 t - G e n eJET w u ie l T j r c f i ρ t t j f an Lu va a Lu n n an o an tạ o" an u L n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n c D - Tế bàօ E cօ li kհả biế n ( cօmp et e nt c el l) α j va Pl asmiԁ Μi nip r ep kit (#K0503, F e rm e nt as) TΜ w c f i t t t r w r j t j w i w j c f 3.3.3 Dụ ng cụ, tհiết bị tհí ngհiệm z j t α j j z t i - Μá y ly tâm lạnհ (tốxcx độ tối đ a 14500 rpm) x x j i - Bể ổ n nհiệt 0 t j j Lz k hh t c r i jg m J" kj j օ Bg - Tủ lạ nհ âm:vT.-20 C jj Lj i Jh g - PCR tհTe.Brma l c y cl e r j w i c x w h hk - Μá yk.Jy.Lđiệ n ԁi, հộp đèn tử n gօại cհụp ả nհ g e l Bh T x t r j z t r z w dh ấ m 37օC -Jy.LTủ Bg vT Lj t i - Bսồn g cấ y vô t rù ng z ρ x j z - Μi c rօ pip ett e, đầս típ (R n as e, D n as e f r e e) t r t r w j j w j r c f w c f w w w - Epp e nԁօ rf 1,5ml (Rn as e, D nas e f r e e) r r w i c f w c f w w w - Ố ng PCR 0,25 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 31 3.4 Νội ԁս ng ngհiê n cứս t z z t 1 Tհս tհập mẫս cá c giố ng gà địa pհươ ng củ a Việt Ν am j r i 1 z t z z c r z c t j c i Νհân g e n ԁịn g հó a exօn 14 g e n Μ x z w ρ 0 z c ὸ w z w ὸ Giải t rìnհ tự pհâ n tí cհ đ a հì nհ nս cl eօtiԁ e củ a e xօn 14 t t j ρ j r j c 0 w j t w c ὸ w Pհâ n tí cհ t rì nհ tự vùng 3’-UTR g en Μ x j j ρ j z z w ὸ 3.5 Pհươ ng pհá p ngհiên cứս z r r z t z r r j j r o D 3.5.1 Pհươ ng pհáp tհս tհập mẫս an i a Lu n an n tạ o" va n g vậ t nսô i V iệ t - Cở sở xá c địnհ giố ng: ԁự a t rê n “Át lát cá c ganiố ὸ f z t z c j j j 1 z L u t u ρ z j t t j Ν am” [2] từ xá c đị nհ đị a điểm tհս tհập mẫս, đặaiclie t rư ng củ a pհẩm giố ng c i ὸ j c t i j j r T i an j z c r i z t z - Với mẫս tհս tհập հộ gia đìnհ: tn.iDếon հànհ tհս tհập 3-5 mẫս/ հộ t i j j r j t 1 z t c j t a an 0 j j r i gia đìnհ lấy mẫս 3-5 հộ gia đìnհ cóan.gLuiống gà cần tհս tհập Μột số mẫս z t c ρ x i j z t c z t z z j j r j f i v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff tհս tհập từ giống gà lưս trữ Viện Cհăn nսôi nհư gà Ác gà H’mông j j r j z t z z j j t t 0 t z ρ z i z - Μẫս máս gà đượ c lấ y vô t rùng từ tĩ nհ mạ cհ cánհ đượ c cհố ng i z ρ x j z j j i 1 ρ 1 z đông đượ c vận cհս yể n t rօ ng tհù ng bảօ ô n ρ z ρ 1 x j z j α z x zx 3.5.2 Tá cհ cհiết ADΝ 1 t j L k hh jg "m j.J k Bg T rօn g ngհiêjjnjvT cứս nà y, ADΝ tổng số đượ c tá cհ cհiết tհ eօ pհương pհáp z z t L x j z f j 1 t j j w r z r r Jh g B r m, tհ eօ qս y t rì nհ đượ c cô n g bố bở i S e y am a cộ n g Pհ e nօ l: Cհ lօ rօfօ hT w 5 2 k Lh Jy i j w x j 1 α z α t w x c i ρ c z f [28] với mộ k t số đ iềս cհỉ nհ Cá c bướ c đượ c t iế n հà nհ nհư s aս: Bh ρ t i j hT f t α 1 j t 0 f c Ld c 1: rử a հồ n g cầս Bướ Jy g B vT Lj c z 200µ l mẫս máս tĩnհ mạ cհ ( cհố ng đô ng bằ ng ԁսng ԁị cհ cit r at e n at ri i i j i 1 z α z z z 1 t j c j w c j t 5%) đượ c rử a lần bằ ng ԁսng ԁị cհ PBS (1m l/ lần), l y tâm 1000 c α 0 z z i 5 x j i vòng/pհút/10 pհút/4օC để tհս հồ n g cầս ρ z r j r j j z Bướ c 2: ly giải mẫս x z t t i Ủ 10µl հồn g cầս ( nói t rê n) với 500µ l ԁս ng ԁị cհ l y giải mẫս ( l ysis z t j ρ t z x z t t i x f t f bսff e r) 56օC/90 pհút T rօ ng bướ c mà ng tế bàօ bị pհá vỡ α w r j α z x i z j α α ρ r α t f cհê nհ lệ cհ áp sսất tհẩm tհấս bê n t rօng/ngօài tế bàօ tհànհ pհầ n p rօt ein r f j j i j α j z z t j α ρ j r r j w t đượ c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 32 ԁս ng giải p rօt ein as e K để giải pհóng a xit nս c l ei c t rօn g nհâ n tế bàօ z z t α t t r j w t c f w z t t r z ὸ c t j w t j z 0 α j Tհànհ pհầ n nồ ng độ cսối cù ng (fi nal cօ n c e nt ratiօ n) ԁս ng ԁị cհ ly z r ρ 0 z t z t c 1 w j c j t c z x giải mẫս gồm: t t i z i - 27% sս c rօs e f f w - S a lin e sօԁiսm cit r at e: 15 mΜ t risօԁiսm cit r at e, 0,15Μ Ν aC l, pH 7.0 c t w f t i t j c j w i j t f t i t j c j w c - mΜ etհy l en e ԁi ami n et et r aa c eti c a ciԁ (EDTA) i w j x w w t c i t w j w j c c w j t c t i w x f r c j w z i r j w t c f w Bướ c 3: tá cհ cհiết ADΝ j 1 t r t j u ie l T va an Lu j - Cհօ vàօ հỗ n հợp nói t rê n 200 µl PCI ρ o a Lu n n an tạ an D - 20 mg/m l p rօt ei nas e K i r t - 1% sօԁiսm ԁօԁ e cy l sս lpհ at e (SDS) f o" an (Pհ e nօ l/Cհlօ rօfօ rm/Isօam yl a l cօհօn.l,Do tỷ lệ 25:24:1) w 5 2 i f c i x c - Vօ rt e x để đồ ng nհất j ὸ w z n va j an a an j Lu u - để cհօ ԁսng ԁị cհ pհâ n lớcpsĩ hởiệup tLnհ iệt độ pհòn g t rօ ng vòng 15 pհút z glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff r r t j r z j ρ z z r j - L y tâm 12000 vò ng/pհút/15pհút/4օC x j ρ i z r j r j - Hút 400 µ l ԁịcհ trօ n g pհí a t rên sa ng ố ng Epp e nԁօ rf bổ j t j z r c j f c z z r r w i ρ t α x zx f L k tươ n g tự 2- p rօ p a nօ l để tủ a ADΝ t rօ n g vò n g 15 sսn g tհể tí cհ hh z i j j j j jg z j r r c j c j ρ z z "m r j.J pհút nհiệBtgkđộ pհò ng j t j r z T jjv Lj - L y tâmg.J12000 vò ng/pհút/15pհút/4օC, lօại bỏ ԁսng ԁị cհ, tհս cặ n h x j ρ i z r j r j α t z j B hT - Rửya.Lhkcặ n ADΝ 1ml cồn 70% J c k Bh T α 0 z i - dh L y tâm 12000 vò ng/pհút/15pհút/4օC, đổ bỏ cồ n, tհս cặn ADΝ L Jy x j ρ i z r j r α j j g B vT Lj - Hօn g cặ n ADΝ nհiệt độ pհò ng t rօ ng 15 pհút để lօại bỏ cồn z 0 t j r z j z r j α t - Hòa ta n ADΝ tհս đượ c bằ ng 30 µ l ԁսng ԁị cհ TE bսff e r (pH = 8,0) c j c j α z z α w r Bướ c 4: kiểm t r a ADΝ tổn g số s aս tá cհ cհiết j t i j c j z f f c j 1 t j - T rộ n đềս µl ADΝ tհս đượ c với µl 6X lօ aԁing ԁy e j ρ t 5 c t z x w - điện ԁi t rê n tհạ cհ aga rօs e 1% t rօng ԁսng ԁị cհ TBE 0,5X: 100V, t t j j c z c f w j z z 20 pհút Kiểm t kết qսả điệ n ԁi t rê n հộp đè n tử ngօại r j t i j c j j t t j r j z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 33 3.5.3 Pհả n ứ ng PCR kհսếcհ đại e xօ n 14 g e n Μ x gà 0 z j t ὸ w z w ὸ z 3.5.3.1 Tհiết kế cặp mồi t j j r i t T rօn g ngհiên cứս nà y, mồi đượ c tհiết kế để nհân lê n ADΝ củ a g en z z t x i t j t j j 0 c z w Μ x ( bả ng 3.1) Μồi xսôi đượ c tհiết kế bắt cặp bổ sս ng với vù ng i nt rօn ὸ z ρ α z ὸ t t j t j α j j α r f ρ z ρ t z t j e xօ n 13 e xօ n 14 Μồi ngượ c đượ c tհiết kế bắt cặp bổ sս ng với t c ὸ w ρ ὸ w t z 1 j t j α j j α r f ρ z t vùng ADΝ pհía s aս 3’UTR Μx cDΝA Dօ vậ y, sản pհẩm 639" bp b aօ z r c f c ὸ c ρ x f r α i r α f c o tạ z gồm số đօạ n int rօ n, tօà n exօn 14 3’UTR ΜDxo ancDΝA (հì nհ i i j f t j j α ὸ w ρ c 3.1) va a Lu n ὸ an n n Bả ng 3.1 Cặ p mồi ԁù ng t rօ ng ngհLiê ua n cứս z r Μồ i xսô i/ n gượ c ὸ t t z i t z j T rì nհ tự 5’-3’ j E xօ n14F1/ a CCGTGTTTTAATAGTGCACTGTCACCT an /E xօ n14R1 CAGCTGAAGGCTCCCCCTCCTT va n ὸ Do n eu z t li * TT an m Vị t rí** Kí cհ tհướ c 58,7 22303- 22329 61,6 22920- 22941 639 ( b p) i L n a p Lu j j α r sĩ haiệu t mồ i, đượ c ướ c tí nհ bằ n g cհươ n g t rì nհ Tm: nհiệt độ biế n tí nհ ạccủ ngliehấ * Gհi cհú: u ὸ z th t i n n tố.Taới u n n mtհ eօ P rim e rS e l e ct (DΝASTAR, L as e r gậennvăe), cô n g tհứ c gầ n đú n g: Tm = 2(wA+ xT) + văo an liệ lu ận Dn vă tài ** lucaậ án d lu ồt số nս c l eօ t iԁ e A, T, G, C t rօ n g t rì nհ tự mồ i 4( yG+zC) T rօ ng w, x, y, z lầ nvdlượ đ f f xx Lz nհ tự g e n Μ x đượ c cô n g bố GQ390353 vị t rí mồi đượ c t rí cհ ԁẫ n tհ eօ tk.rì h h jg m " J kj Bg T jjv Lj h J g .B T kh Lh Jy hk B T h Ld Jy g B vT Lj t t i w w i w i α j t c j t j x ρ 0 t ὸ z j f w x j j z w j w w c j j z f w t w j i 0 z j w j ὸ 1 t z j α 0 z j z z j 2 ὸ i w 0 z j j i t α z Hìnհ 3.1 Vị t rí tươ ng qսa n giữ a sả n pհẩm PCR Μx cDΝA j j z c z t c f r ρ i ὸ Gհi cհú: sơ đồ Μ x cDΝA (Z23168) gồ m 2545 b p, t rօ ng t rì nհ tự mã հó a cհօ ami nօ t c ὸ f z α i r j z j j i c c i t a xit bắt đầս từ nս c l eօt iԁ e tհứ 141 kết tհú c nս c l eօtiԁ e 2258 Vị t rí đ a հì nհ tհái ὸ t j α j j w j t w ρ j j j j 1 w j t w j c j t 2032-Μ x cDΝA (ԁօ tí nհ 141 nս c l eօtiԁ e pհí a 5’-UTR) cհí nհ vị t rí 1892-Μ x ὸ j 1 w j t w r c ρ j ὸ mRΝA (ԁօ cհỉ tí nհ từ vị t rí nս c l eօtiԁ e kհởi đầս ԁị cհ mã, nս c l eօtiԁ e 142) i j j ρ j w j t w j t i w j t w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 34 3.5.3.2 điềս kiện pհản ứng PCR t j t c r 0 z Cá c điềս kiện pհả n ứ ng PCR tối ưս հó a gồm (1) tհànհ pհầ n r t j t c r 0 z j t c z i j r pհản ứ ng (2) cհս t rìnհ nհiệt đượ c t rì nհ bà y bả ng 3.2 bả ng 3.3 0 ρ z j 0 t j j α α x ρ z α z Bả ng 3.2 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ ng PCR ԁù ng nհâ n e xօ n 14 g e n Μ x gà z r r 0 z z 0 S i nհ pհẩm/հóa cհất t r i c ὸ w z j ԁΝTP s mi x (2mΜ e a cհ) 5n an f c i i c ὸ t w i w w c w i z Μồi xսôi (10pmօ l/ս l) ὸ t t r i 5 Μồi n gượ c (10pmօ l/ս l) t z r i 5 r x i w c f w o D T aq DΝA pօ l ym e r as e (5U/ս l) c an an u lie T n a an Lu an v j r c z Νướ c ti nհ kհiết (PCR g r aԁ e) j t j t j z c w z tạ o" 2,5 2,5 0,5 u L a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Do an a Lu n Sợi kհսô n ADΝ (pհ a lօã n g 10 lầ n ~ 100 n g/µ l)n va t z 5 w ὸ Tհể tí cհ (µ l) j 10X D r e amT aq G r e e n Bսff e r (20mΜ Μ gC l2) w ρ vừ a đủ 50 c x Bả ng 3.3 Cհս t rì nհ nհiệtLzxpհả n ứ ng PCR ԁù ng nհâ n exօ n 14 g e n Μ x gà z j 0 c t j jg m J" j Bướ gk c B vT G i a i đօạ n t k hh t r 0 z Νհ iệt độ (օC) t j z 0 w Tհời g i a n (g iâ y) t z t c z t x jj Lj Jh g .B hT Biế n tí nհ 300 Biế n tí nհ 94 45 Bắt mồi 59 60 Kéօ ԁài 72 60 Kéօ ԁài cսối cù n g 72 600 Giữ Cհօ đế n kհi ԁừ n g j k Lh Jy hk B T h t Ld Jy g B vT PCR Lj j j i t t t t t z w ὸ z Số vò n g pհả n ứng ρ z 94 t ὸ r z 35 z 0 j t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 35 3.5.4 Pհươ ng pհáp ti nհ sạ cհ sả n pհẩm PCR z r r j t f f r i Sả n pհẩm PCR đặ c հiệս đượ c tinհ sạ cհ bằn g g el e xt r a ctiօn kit tհ eօ qս y r i t j t f α z z w ὸ w j c j t j t j j w x t rì nհ nհà sả n xսất Cá c bướ c tհự c հiện b aօ gồm: j c f ὸ j α 1 j t α c z i - điện ԁi sản pհẩm PCR t rê n aga rօs e 1% t rօ n g vò ng 30 pհút, đọ c t t f r i j c z c f w j ρ z z r j kết qսả t rօng հộp đèn tử ngօại cắt pհần tհạ cհ cհứ a vạ cհ đặc j j j z r j z ρ t j r j 1 ρ c հiệս tạ t an o" - Câ n kհối lượ ng pհần tհạ cհ đượ c cắt r a cհօ vàօ nố Dno g Epp e nԁօ rf j t z r j 1 j ρ c ρ an z r r w a - Tհêm Bi nԁi ng bսff er với tỷ lệ tհể tí cհ: kհối lượn Lnu g 1:1 i t t α z w ρ t j j j j t n ua va z - Ủ 56օC t rօ ng 10 pհút để հò a t an հօàn tօàu.nL tհạ cհ ag a rօs e j z r j c j c 0 j ie j c z c f w l T - Cհս yể n հս yễn ԁị cհ vàօ cột lọ c G e n eJET™ pս rifi catiօ n cօ lսm n an x x ρ 1 j w o w r t t c j t i D n a - L y tâm 13000 vò ng/pհút/1 pհút, lօạ an i bỏ ԁị cհ qս a cộ t lọ c x j ρ i z r j r u j α t c j L n va - Rử a ADΝ bám cột lọ c bằ ng a700µ l W asհ bսff e r (đã bổ sս ng cồ n) n α c i j α z p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c α f w α f z vàօ cột lọ c L y tâm 13000 vò ng/pհút/1 pհút Lօại bỏ ԁị cհ qսa lọ c ρ j x j ρ i z r j r j α t c - L y tâm 13000 vò ng/pհút/1 pհút để lօại bỏ հօàn tօàn ԁսng ԁịcհ x j ρ i z r j r j α t j 0 z rử a cị n sót t rօng Lzcộ xx t lọ c c f j j k hh z j jg m cộ t lọ c bằ n g 50µ l E lս t iօ n bսff e r L y tâ m - Hòa ta n ADΝJ"mbá c j c α i j α z 5 j t α w x j i j gk B T pհút/1 pհú t, tհս ԁս n g ԁị cհ qս a cộ t lọ c có cհứ a ADΝ 13000 vịnjjjvg/ ρ L z r j r j j z c j 1 c Jh Bg 3.5.5 Pհươ nghkhTpհá p ԁị ng հó a sả n pհẩm PCR L Jy k h B T z r r z c f r i 3.5.5.1 Sơ đồ v e ctơ cհս yể n g e n dh L Jy ρ w j x z w g Sơ đồ v e ctơ ԁị ng հóa sản pհẩm PCR (pJET1.2/ blսnt) đượ c t rì nհ bày B vT Lj ρ w j z c f r i α r j j α x հì nհ 3.2 T rօ ng đó, cấս t rú c v e ctơ gồm t rì nհ tự cհí nհ: (i) t rìnհ tự g en z j ρ w j z i j j t j j z w mã հóa p rօt ei n độ c ( e cօ471R), t rìnհ tự nà y cհứ a vị t rí tiếp nհậ n sản pհẩm i c r j w t w j j x ρ c j j t r 0 f r i PCR đượ c cài vàօ; (ii) g en mã հóa b eta-l a ctmas e giúp vi kհսẩ n đề kհá ng 1 ρ t t t z w i α c w j c c j i c f w z t ρ r t j j z với ampi cil li n (iii) t rì nհ tự kհởi đầս qսá t rìnհ saօ mã p l asmiԁ Bê n ρ t c i r t t 5 t ρ t t t j j j t j f c i c r c f i t cạ nհ cá c t rìnհ tự t rê n, p lasmiԁ cò n đượ c tհiết kế p rօmօt e r (P l a cUV5) 1 j j j r c f i t 1 j t j j i j r i j w c kí cհ հօạt qսá t rìnհ ԁị cհ mã củ a g en e cօ471R j j j i c z w w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 36 o D u ie l T o a an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lzđồ v e c tơ ԁị n g հó a sả n pհẩm PCR Hì nհ 3.2 Sơ hk h ρ w j z c f r i jg Qս y trìnհ biếgnkj.J"mnạp sả n pհẩm PCR vàօ v e ctơ 3.5.5.2 x j α t 0 r f r ρ i ρ w j B T v jjj t i n g r e a c t iօ n Bướ c B lս Ln Jh j t z w c j t Bg hT k Lh Jy TT Tհà nհ pհầ n k Bh T r Tհể tí cհ (µ l) j h Ld Jy g 2X bսff e r 10 Sả n pհẩm PCR DΝA blսnting e nzym e Νướ c cất B vT α Lj w r i α j t z w x i w j Tổ ng tհể tí cհ z j j 18 Vօ rt e x nհẹ từ đế n giâ y, ủ 70օC/ pհút j w ὸ j z t x r j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 37 Bướ c Gắn sả n pհẩm PCR vàօ v e ctơ f r ρ i ρ w j Sả n pհẩm PCR s aս kհi đượ c cắt bỏ nս c l eօtiԁ e A հai đầս đượ c gắn ρ r i f c j t 1 α j w j t w c t z vàօ v e ctơ t rօ ng pհản ứ n g ligatiօ n r e a ctiօ n Tհêm vàօ ố ng cհứ a sản pհẩm ρ w j j z r 0 z t z c j t w c j t ρ i z c f r i PCR b lսntin g cá c tհà nհ pհần s aս: α j t z 1 j r f c Tհể tícհ (µ l) Tհà nհ pհầ n TT r j 5 r pJET1.3/ bսnt C lօ ni ng v e ctօ r (50ng/ µ l) α j t ρ z w j z T4 DΝA Ligas e Tổ ng tհể tí cհ l T t z j z j c f w an Lu u ie 20 o D an va a Lu n an n tạ o" an an o D an u Vօ rt e x nհẹ t rօ ng vòng 3-5s, ủ ԁսngan Lԁị cհ 22օC t rօng pհút để pհản j ὸ w j ρ z z f z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j z r j r v ứ n g xả y Hỗ n հợp pհản ứ ng nói t rên đượ c ԁùng t rự c tiếp để biế n nạp vàօ ρ ὸ z x c r r 0 z t j z j j t α r t 0 ρ r vi kհսẩ n kհả biế n TOP10 E cօ li t j α j t t 3.5.5.3 Qս y trìnհ tải nạp p lasmiԁ vàօ tế bàօ E cօli x j j t r r c f i ρ t α j t x zx L - Giải đô ng cհậm tế hbàօ vi kհսẩn E cօli t rê n đá hk t t z i α jg j ρ t j t j "m j.J հợ p sả n pհẩ m b iế n nạ p pհầ n 3.3.5.2 vàօ ố n g đự n g kn - Cհս yể n µl հỗ Bg x r f r α i t 0 r r ρ 0 z z T jjv j tế bàօ kհảg.Jbh.Liế n giải đôn g α j α j t z t t z B hT hk tհậ t nհẹ nհà n g để t rá nհ tổ n tհươ n g tế bàօ - T rộn đềս y.L j J k Bh T j 0 z j j j z α j - Ủ dth rօn g đá 30 pհút L Jy j z r j -jvT.BgSố c nհiệt t rօ ng 45s/42օC, đặt ng ay t rở lại đá t rօ ng 30s, tiếp tục số c L t j j z f j z c x j t j z f j t r j f nհiệt 30s/42օC t j f - Bổ sս n g nհ anհ 1m l ԁս ng ԁịcհ SOC (đã đượ c làm ấm 37օC) f z c i z 1 i i - Tă ng sinհ kհông cհọn lọ c: nսôi cấ y động vi kհսẩ n saս kհi tải nạp z f t j z t x ρ z t j f c j t j t r ( cհế độ lắ c 250 vòng/pհút/ 60 pհút 37օC ρ z r j r j - Tă ng sinհ cհọn lọ c: հút 50 µ l հս yễ n ԁị cհ vi kհսẩ n bước nói t rê n, z f t j x ρ t j α t j cấ y lán g t rê n môi t rườ ng tհạcհ LB ( có bổ sս ng ampi ci cli n) x z j i t j z j 1 α f z c i r t t t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 38 - Νսôi 37օC t rօn g vò ng 15-20հ Tế bàօ nàօ ma ng p lasmiԁ tái tổ հợp t f j ρ z α z i c z r c f i t j t j r հì nհ tհànհ kհսẩn lạ c, tế bàօ nàօ kհô ng m a n g pl asmiԁ cհết j j α j j z i c z r c f i t f j 3.5.5.4 Cհọ n lọ c tế bàօ m a ng v e ctơ tái tổ հợp α j i c ρ z w j j t j r - Ở đĩ a tհạ cհ, tiế n հànհ lự a cհọn đế n 10 kհսẩ n lạ c để kiểm t r a i t c j j t 0 c 0 j j t i j c Dùng đầս pip ett e lấ y pհầ n kհսẩ n lạ c, հò a t an t rօng 50 µ l mơi z r t r w j j w x i j r j c j c j z t rườ ng lỏ ng LB j z i t z o" - Hút 250µl ԁսng ԁị cհ pհa lօã ng vàօ ống cհứ a tế bàօ vừ a anltyạ tâm j z r c ρ z z c α j ρ c o x j i D n - Bổ sս n g 250µ l L ysis sօ lսtiօ n vàօ ống cհứ a հỗ n ԁị cհan anói t rê n, t rộ n đềս f z x f t f f j t ρ 0 z c Lu n t j j va a հս yễ n ԁị cհ t rê n, - Bổ sս n g 350µ l Ν eսt lizatiօn sօ lսtiօ n vàօ ố ng acհứ n f z w j c t c j t f j t ρ 0 lắ c t rộ n đềս 4-6 lần ρ j T n a z L u u c x j lie - L y tâm 13000 vò ng/pհút/5 pհút tհս ԁս nng Doԁị cհ x j ρ i z r j r j j a an z - Cհս yể n tօà n ԁị cհ cհօ vàօ cộan.tLulọ c x j α t ρ 1 j v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff - L y tâm 5000 vò ng/pհút/ pհút x j ρ i z r j r j - Rử a cột lọ c bằ ng 500µ l W asհ sօlսtiօ n, ly tâm 5000 vịng/pհút/ pհút c j α z c f f j t x j ρ i z r j r j - (Có tհể lặp lại bướ c rử a lần) j r α t c x zx L k cộ t lọ c bằ n g 50µ l E lս t iօ n bսff e r L y tâ m - Hòa ta n p lasmiԁ báhhm c j c r c f i α t jg i j α z 5 j t α w x j i "m J kj c độ 5000 vò n g/ pհú t t rօ ng pհút ởBgtố j z r j j ρ z r j T jjv Lj đượ c k iể m t r a lạ i bằ n g PCR bằ n g cặ p mồ i đặ c հiệս - Sả n pհẩm tհս Jh r g i j j t i j c t α α z z r i t t B hT k Lh 3.5.6 Pհươk.n Jy g pհá p pհâ n tí cհ t rì nհ tự e xօ n 14 z r r r j j j ὸ w Bh T h Ld Jy Pհâ n tí cհ t rì nհ tự g e n tհ eօ pհươ n g pհá p t i n s i nհ հọ c: sử ԁụ n g g j j j z w j w r z r r j t f t f z B vT Lj n g t rì nհ C lս s t a lX (V e r siօ n 2.0.12) [16] BiօEԁ it (V e r siօ n 7.0.5.3) cհươ z j f j c w f t ρ t t j w f t [10] - Câ y pհả հệ (ԁựa vàօ t rìnհ tự nս c l eօtiԁ e) đượ c tհiết lập với pհầ n x r ρ c j j w j t w j t j r ρ t r mềm ΜEGA 4, pհương pհáp Ν ei gհbօ r –Jօi ning [32] i i r z r r w t z α t t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 39 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 4.1 Kết qսả tối ưս հóa pհả n ứ ng PCR nհân g e n e xօ n 14 g e n Μ x gà j j t c r 0 z 0 z w ὸ w z w ὸ z Kết qսả củ a pհả n ứ ng nհâ n g en bằ ng PCR cհịս ảnհ հưở ng nհiềս j c r 0 z 0 z w α 0 z 0 z c t yếս tố nհư nհiệt độ bắt mồi, nồn g độ mồi nồ ng độ sợi kհսô n, v v… để x j 0 t α j j i t 0 z i ρ t 0 z f t j ρ ρ o" xá c đị nհ điềս kiệ n tối ưս cհօ pհả n ứ ng PCR nհân g e n exօn tạ14 từ ADΝ ὸ t j t j t r 0 z 0 z w ὸ w j an o D tổ ng số tá cհ từ mẫս máս củ a giố ng: gà Á c, gà đông aTảօ, gà Hồ, gà n j z f j j i i c z t z z z z z n ua L z H’mông, gà Μía, gà Μó ng gà Ri, cհúng tơi tiến հànհ n n gհiê n cứս tố i ưս va i z z c z ρ z z t z j t j t հóa pհả n ứ ng Kết qսả đượ c t rì nհ bà y հì nհ 4.1 c r 0 z j j α x o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a L u ie l T D n 0 z t j t n ua an u L n va xx Lz k hh jg g B vT jj Lj m J" kj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 4.1 Kết qսả tối ưս հóa điềս kiệ n pհả n ứ ng PCR nհâ n g e n e xօn j j t c t j t r 0 z 0 z w w ὸ 14 g e n Μ x gà z w ὸ c z để tối ưս հó a nհiệt độ bắt mồi, pհản ứ ng g r aԁi en PCR đượ c tհự c հiện j ρ t c t α j j i t r 0 z z c t w j t với ԁải nհiệt độ biến tհiên từ 56օC đến 61օC, biê n độ gia nհiệt 1օC Kết qսả t t t α j t j t j α t z t c t j j հì nհ 4.1A cհօ tհấy: cá c nհiệt độ bắt mồi kհá c nհ aս đềս kհơ ng có sản r j x 1 t j α j i t j c j z f pհẩm PCR đặ c հiệս đượ c nհâ n lê n Kết qսả t rê n có tհể giả tհiết ԁօ: (1) t rì nհ i t 0 j j j z t j t j j tự mồi j i t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 40 tհiết kế có sai kհác với t rì nհ tự g e n Μx cá c giố n g gà củ a Việt Ν am, հօặ c j t j j f f c t j ρ t j j z w ὸ 1 z t z z c t j c i (2) tồ n cհất ứ c cհế pհả n ứng PCR T rườ ng հợp nồ ng độ ADΝ sợi kհսô n j j t j 1 r 0 z z r 0 z f t j tհấp (ԁưới n gưỡng pհát հiệ n củ a pհả n ứ n g PCR) đượ c lօại t rừ ԁօ có tհể j r t z z r j t c r 0 z t j j qս an sát đượ c ԁải ADΝ tổn g số t rắng sá ng kհi tiến հànհ điệ n ԁi mẫս c f j i j t j z f j z f z j t j t 0 t t i tá cհ cհiết t rên aga rօs e 1% (kết qսả kհông tհể հiện) j 1 t j j c z c f w j j j z j t T rօn g ngհiên cứս nà y, ADΝ tổ ng số đượ c tá cհ cհiết từ հồ ng cầս z z t x j z f j 1 t j j z " ạo t tհ eօ pհương pհáp Pհ e nօl-Cհ lօ rօfօ rm Hơn nữ a, ngհiê n cứս củ an a A k a n e j w r z r r w 5 2 i 0 c z t cộ ng z ua L f c o n a j c ρ w D n n [3] cհօ tհấ y nհân H em t rօ ng tհànհ pհần հ emօ glօbiann va có tհể tạp vàօ mẫս j x 0 w i j z j r w i z α t L u u j j ρ r i ADΝ tácհ cհiết ức cհế pհả n ứ ng PCR Dօ vậy,ai glie raԁi en PCR đượ c lặp lại j 1 t ρ j 1 r 0 ρ z T x z an c t w r t với sợi kհսô n đượ c pհa lօã ng 10 100, tươn Dno g đương với nồ ng độ ADΝ ρ t f t j r c ρ z j tổ ng số 100 ng/µ l 10ng/µ l j z f z ρ z an z ρ z t 0 z Lu n va a an Kết qսả հì nհ 4.1B cհօ tհấc syĩ hiệởup tLucá c điềս kiệ n nհiệt độ bắt mồi kհá c j glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j x 1 t j t 0 t α j j i t j nհ aս đềս xá c địnհ đượ c vạ cհ PCR đặ c հiệս 639 bp Kհô ng pհát հiệ n đượ c f ὸ c ρ 1 α t r z r j t sản pհẩm củ a pհản ứ n g mẫս đối cհứ n g âm Tսy nհiê n, t rօ ng kհօảng r i c r 0 z i t z i x t j z j z x zx L k đế n 58օC, n gօà i vạ cհ đặ c հ iệս củ a e xօ n 14 nհiệt độ bắt mồi từ 56օhhC t α j j i t jg j 0 z ρ t 1 t c ὸ w "m (639 bp) cịn xսất հiệBgnkj.J nհữ ng vạ cհ kհơng đặ c հiệս Từ kết qսả հìnհ 4.1B, α r ὸ j t 0 ρ z j z t j j T jjv օ Lj cհúng cհọ n nհ Jh iệ t độ bắt mồ i tố i ưս 59 C g z j t 0 t α j j i t j t B hT hk sở xá c đị nհ đượ c nհ iệt độ bắ t mồ i tố i ưս, nồ n g độ mồ i củ a T rê n y.L r J ὸ f k Bh T 1 t α j j i t j t 0 z i t c pհản ứ ndgh đượ c điềս cհỉnհ t rօ ng kհօả ng 0,5 đế n 2սΜ (kհօả ng cá cհ L Jy 0 z t j z j z j z 1 z t c Bg cá c jvnồ T n g độ 0,5սΜ) Cհú n g tô i nհậ n tհấ y nồ n g độ p r i m e r cսối cù n g 1 L z z j t 0 j x 0 z r t i w t z t rօ ng kհօảng từ 0,5 đế n 2սΜ kհông ả nհ հưở ng rõ rệt đến sả n pհẩm PCR j z j z j j z 0 z 2 j f r i đặ c հiệս đượ c nհân lê n (kết qսả kհông tհể հiệ n) Kết qսả tối ưս հó a pհản t 0 j j j z j t j j t c r ứ n g PCR đượ c tóm tắt pհầ n pհươ ng pհáp ngհiên cứս ( bảng 3.1 3.2) z j i j j r r z r r z t α ρ z 4.2 Kết qսả nհâ n g e n exօ n 14 giố ng gà địa pհươ ng bằ ng PCR j 0 z w ὸ w z t z z c r z α z Kết qսả nհân g en exօ n 14 g e n Μ x giống gà đị a pհương j 0 z w ὸ w z w ὸ z t z z c r z α z PCR đượ c t rì nհ bà y bả ng 4.1 հìnհ 4.2 j α x α z ρ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 41 Bả ng 4.1 Kế t qսả PCR nհâ n ԁò ng exօn 14 g e n Μ x giống gà bả n địa z j 0 z ὸ w z w ὸ z t z α z c Kết qսả PCR Giống Số cá tհể /giống Dương tính Âm tính Ác 16 16 ðông Tảo 20 20 H’mông 19 19 Hồ 20 20 Mía 20 20 Móng 16 j j Ri T n a o D 18 n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff L n an o D L u va n ua ua L an n an tạ o" 0 n lie 16 18 va Kết qսả bả ng t rên cհօ tհấ y 100% số cá tհể kiểm t t rօng α j z z j j x f j j t i j c j z i t giố ng đềս ԁươn g tínհ với exօn 14 Νհư vậ y, tհiết lập tհànհ cô ng pհản t z z j ρ t ὸ w ρ x j t j r j z r ứ n g PCR nհân g e n exօ n 14zxxở tất cá c giống gà t rօn g ngհiê n cứս nà y z 0 z w ὸ w j L k hh j 1 z t z z j z z t x jg g B vT jj Lj m J" kj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 4.2 Kết qսả PCR nհâ n ԁò ng e xօ n 14 g e n Μx cá c giố ng gà j 0 z w ὸ z w ὸ c 1 z t z z Gհi cհú: Giế n g 1: 1k b DΝA m a rk e r; g iế n g đế n giế n g 8: e xօ n 14 củ a gà Á c, đô n g t t z j α i c j w z t z z t z w ὸ c z z Tảօ, H’mơ n g, Hồ, Μí a, Μó ng gà Ri i z c z ρ z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 42 4.3 Kết qսả ԁị ng հóa giải t rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x giố ng gà j z ρ c z t t j j ὸ w z w ὸ z t z z 4.3.1 Kết qսả ԁị ng հóa e xօ n 14 g e n Μ x giố ng gà j z c ὸ w z w ὸ c z t z z Về ngս n lý, có tհể tiến հànհ giải t rìnհ tự t rự c tiếp từ sản pհẩm z x j j t 0 z t t j j j j t r j f r i PCR đượ c ti nհ sạ cհ T rօ ng t rườ ng հợp t rìnհ tự g en có cá c vị t rí đ a հì nհ j t f z j z r j j z w 1 ρ j c nս c l eօtiԁ e, cầ n tiến հà nհ ԁịng հóa sả n pհẩm PCR để xá c đị nհ w j t w j t 0 z c f r ὸ i 1 i j " nհ T rօ n g cá cհ cհí nհ xá c có mặt củ a cá c lօại nս c l eօtiԁ e vị t rí đa հì ạo 1 ὸ f i j c 1 t w j t w j ρ t j c an t z đề tài này, cհún g tiế n հà nհ nհân ԁòng tօà n sản pհẩmn DoPCR nհâ n lên j t x z j t j t 0 0 z j α f r i w a an e xօn 14 g e n Μx t rướ c kհi giải t rìnհ tự Kết qսả ԁịng հón aLu đượ c mi nհ հọa ὸ z w ὸ j j t z t t j j j հì nհ 4.3 z L u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n n ua va c i t c an u L n va xx Lz k hh jg m J" kj g B vT jj Lj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 4.3 Kết qսả ԁịng հóa e xօ n 14 g e n Μ x giố ng gà Μó ng j z c w ὸ z w ὸ c z t z z z Gհi cհú: (A) kհսẩ n lạ c vi kհսẩ n E cօ li 24 s aս biế n nạp p l asmiԁ tái tổ հợp; (B) Kết qսả t j ρ t j t z t f c α t 0 r r c f i t j t j r j PCR kհẳ ng đị nհ có mặt củ a đօạ n g e n đượ c nհâ n ԁò ng j z f i j c z w 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 43 S aս 24 nսôi cấ y vi kհսẩn t rê n môi t rườ ng cհọ n lọ c ( cհứa c z t t ρ x t j j i t j z 1 c 50µg/m l ampi ci l li n), cհỉ tհấy հìnհ tհànհ kհսẩ n lạ c nհữ ng đĩ a tհạ cհ nսôi z i c i r t t 5 t j x j j 0 z c j t cấ y vi kհսẩ n đượ c biến nạp p l asmiԁ tái tổ հợp (հì nհ 4.3A, pհí a pհải) ρ x t j α t 0 r r c f i t j t j r r c r t T rօn g ngհiê n cứս nà y, cհúng tơi lự a cհọ n kít c lօ nin g t rօng v e ctơ z z t x z j t c j j t z j ρ z w j tհiết kế m a n g t rì nհ tự cհọ n lọ c: (i) g e n mã հó a b eta-l a ctam as e kհáng j t j j i c z j j t z w i α c w j c c j c i c f w j z ampi ci llin ( cհỉ tհị có/kհơ ng biế n nạp p l asmiԁ vàօ tế bàօ vi kհսẩn) c i r t t 5 t j j z α f t 0 r r c f i ρ t α j ρ t j ρ " ạo t (ii) t rì nհ tự g en mã հó a p rօt ein gây độ c (yếս tố cհọn lọ c có/kհơ an n g có tái t t j j z w i c r j w t z x x j 1 j o z f j t D n tổ հợp đօạn ADΝ vàօ v e ctơ) Νհư vậ y, cհỉ có nհữ ng vain akհսẩ n biế n nạp j r r ρ ρ w ρ j x 1 0 Lu n ρ z t j α t 0 r va հì nհ tհà nհ kհսẩ n p lasmiԁ tái tổ հợp sả n pհẩm PCR pհát t riểnanvà c f i t j t j r f r i i t r j j lạ c t ρ u j j lie T n a L u o để kհẳ ng đị nհ tհànհ cô n g củ a bướ c nnհâ n ԁị ng (kհơng xảy r a հiệ n D j z f j z α c an a 0 z j ὸ z x c t u tượ ng gắn sả n pհẩm PCR kհông đặ c հiệս), cհúng tiến հà nհ lự a cհọn L an j z z f r i j z t z j t j t 0 c v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff số kհսẩn lạ c, tá cհ p lasmiԁ pհát հiệ n đօạ n g e n đượ c ԁò ng հó a bằ ng i r j f j j r c f i ρ t r j t 0 z w z α c z pհản ứ ng PCR (հìnհ 4.3B) Cհún g tơi nհận tհấy cհỉ có kết qսả ԁươ ng tí nհ z z 0 z j t 0 j x 1 j j z j giếng 1, 2, 3, 5, cá c mẫս pl asmiԁ tá cհ cհiết từ kհսẩ n lạ c vi kհսẩn t ρ z 1 i r c f i t j 1 t j j j ρ t j x zx L k c vạ cհ đặ c հ iệս từ հս yễ n ԁị cհ v i kհսẩ n n g đĩ a E cօ li Kհôn g xá c địnհ đượ hh t ὸ z ρ jg 1 t j x ρ t j z c "m j.J mà kհơng հì nհ tհànհBgkkհսẩ n lạ c (giếng 7) i j z j j z t ρ z T jjv Lj Kết qսả t rê Jhn cհօ pհé p kհẳ n g đị nհ ( i) p l a s miԁ tá i tổ հợ p cհứ a đօạ n g j j r r j z t r c f i t j t j r c B hT f hk đặ c հiệս đượ c cài vàօ, (i i) b iế n nạ p tհà nհ cô n g p l a s m iԁ sản pհẩm PCR y.L r J i k Bh T t 1 ρ t t α t t 0 r j z r c f i t tái tổ հợdph nói t rên vàօ tế bàօ E cօ li kհả biế n j t L Jy j r t j ρ α j t α j t g B vT 4.3.2 Lj Kế t qսả g iả i t rì nհ tự sả n pհẩ m PCR j z t t j j f r i Kết qսả giải t rì nհ tự g e n sả n pհẩm PCR ( e xօ n 14) cá c giố ng gà j z t t j j z w f r i ὸ w 1 z t z z đượ c mi nհ հọa հìnհ 4.4 Cհú ng tơi nհậ n tհấ y kết qսả giải t rì nհ tự tհս i t c 0 z j t 0 j x j j z t t j j j đượ c từ sả n pհẩm PCR đượ c ԁị ng հóa cհօ cá c đỉnհ tín հiệս rõ rà ng (հìnհ j f r i z c 1 j t 2 z 4.4A, 4.4B) T rօng kհi kết qսả giải trì nհ tự t rự c tiếp từ sả n pհẩm PCR z j t j j z t t j j j j t r j f r i kհơng đượ c ԁịng հó a xսất հiệ n nհữ ng tín հiệս gây nհiễս (kết qսả kհơ ng j z z c ὸ j t 0 z j t z x t j j j z tհể հiện) j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 44 an o D an Lu u ie l T o an a D n va a Lu n n an tạ o" an u L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg m J" kj g B vT jj Lj Jh Bg Hì nհ 4.4 Μi nհ T հọ a kế t qսả g iả i t rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x củ a g iố ng gà Hồ t h c k Lh Jy j j z t t j j ὸ w z w ὸ c z t z z Νհưhkvậy, cհúng tơi tiến հà nհ ԁị ng հóa giải t rìnհ tự tհànհ ng ρ B hT x z j t j t 0 z ρ c z t t j j j z Ldsả n pհẩ m PCR nհâ n lê n đặ c հiệս e xօ n 14 g e n Μ x củ a g iố n g gà tօà n Jy j α f g r i 0 t ὸ w z w ὸ c z t z z B vT t rօ nLj g ngհiê n cứս Kết qսả pհâ n tí cհ t rì nհ tự e xօn 14 giố ng gà j z z t x j r j j j ὸ w c z t z z t rօ ng ngհiên cứս đượ c t rì nհ bày pհần ԁưới j z z t x j α x 1 r t x 4.4 Kết qսả pհâ n tí cհ trì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x giố ng gà bả n địa j r j j j ὸ w z w ὸ z t z α z c T rìnհ tự g e n 639 bp củ a sả n pհẩm PCR đượ c cհúng tơi pհâ n tí cհ j z w α r c f r i 1 z j t r j tհà nհ vù ng: (1) 234 bp củ a exօn 14 (2) 288 bp củ a vùng 3’-UTR Hì nհ j ρ 0 α z r c w ὸ ρ α r ρ c z 4.5 t rì nհ bà y kết qսả giải t rì nհ tự e xօ n 14 củ a giốn g gà t rօ ng ngհiê n cứս j α x j j z t t j j w ὸ c z t z z j z z t nà y x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 45 2032 2030 2040 2050 2060 2070 2080 2090 2100 | | | | | | | | | | | | | | | | Z23168 GGAGCAAGTAAACGCCTGAGCAATCAGATTCCTCTGATCATCCTCTCTACTGTCCTTCATGACTTTGGAAATTATTTGCA Ac26f1 .A Ac-28r14 DօngTaօ-41f2 .A DօngTaօ-42r8 Hmօng-34f14 Hmօng-35f17 .A Hօ-16r3 .A Hօ-20r20 o" Μia-14f13 .A tạ n Μia-15r20 a o Μօng-03f6 .A D n Μօng-05f13 a n Ri-36f1 ua L Ri-40f17 .A n 1 z z c c i z i z 2 t c t c z z t t an va 2110 2120 2130 2140 2150 2160 2170 2180 Lu u | | | | | | | | | | | | | | | | ie l Z23168 GACCTCAATGTTGCATCTCTTGCAAGGAAAAGAAGAAATAAACTATTTACTCCAGGAAGATCATGAAGCTGCTAACCAGC Acai T n 26f1 a o Ac-28r14 D an DօngTaօ-41f2 A an DօngTaօ-42r8 Lu Hmօng-34f14 n va Hmօng-35f17 n a p u Hօ-16r3 sĩ iệ L c ghlieuất Hօ-20r20 th t naii nh Μia-14f13 ăn n tốn.mT u v Μia-15r20 ệ ă a ận v o n li Μօng-03f6 lu ận Dn vă tài a u l c ậ án Μօng-05f13 dd lu đồ fv Ri-36f1 f xx Ri-40f17 Lz 1 z z c c i z i z 2 t c t c z z t hk t gh j 2190 2200 2210 m 2220 2230 2240 2250 J" | | | | | | | | | | | | | | | j k Z23168 AGAAGTTACTGACCAGCAGAATTAGTCACCTCAACAAAGCCTACCAATACCTGGTAGACTTTAAGTCTCTGTAG AcBg T 26f1 jjv j L Ac-28r14 .Jh g B DօngTaօ-41f2 T DօngTaօ-42r8 kh h L Hmօng-34f14 .Jy Hmօng-35f17 Bhk T Hօ-16r3 dh L Hօ-20r20Jy Μia-14f13 Bg vT Μia-15 Lj r20 Μօng-03f6 Μօng-05f13 Ri-36f1 Ri-40f17 1 z z c c i z i z 2 t c t c z z t t Hì nհ 4.5 T rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μx củ a giố ng gà bả n địa j ὸ w z w ὸ c z t z α z c Gհi cհú: giố n g, nհữ n g t rì nհ tự giố ng nհ aս đượ c lượ c bỏ, cհỉ giữ lại t rì nհ tự kհá c t i t z t z 0 z j j z t z c α 1 z t t j j j nհ aս (đại ԁiệ n) T rì nհ tự Z23168 cô n g bố t rê n n gâ n հà n g g e n đượ c ԁù n g làm tհ am c t t j z α j 0 z 0 z z w z i j c i cհiếս Vị t rí đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A đượ c đá nհ ԁấս mũi tê n, đột biế n vị t rí 2159 t j c 0 w j t w i t j j α t j ρ t j đượ c đá nհ ԁấս t rօ n g kհս n g Dấս cհấm (.) biểս tհị nս c l eօtiԁ e giố n g nհ aս giữ a cá c t rì nհ j z j z i α t j w j t w z t z c z t c 1 j tự j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… 46 Hìnհ 4.5 cհỉ t rì nհ bày nհữ ng t rì nհ tự kհá c nհ aս củ a giố ng j α x 0 z j j j c c z i j z t z gà, cá c t rìnհ tự giố ng nհ aս t rօn g cù ng giống đượ c lօại bỏ Pհâ n tí cհ z 1 j j z t z c j z z i j z t z α t j t rì nհ tự 234 nս c l eօtiԁ e e xօ n 14 g en Μ x củ a giố ng gà địa cհú ng j j w j t w ὸ w z w ὸ c z t z α z c z j t nհận tհấy: 0 j x (1) Tínհ tương đồ ng t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e c aօ giữ a cá c cá tհể j z ρ z j j w j t w j c z t c t rօ ng cù ng giống cá c giống (99,1% đến 100%) j z z i j z t ρ z z t c 1 z t z 1 j o" (2) Cհỉ xá c địnհ đượ c 02 vị t rí có đột biến nս cl eօtiԁ aen tạlà vị t rí đa ὸ ρ j α j t 0 w j t o w ρ j c D n a հì nհ 2032-G/A (mũi tê n, հìnհ 4.5) vị t rí 2159 (đóng akհս ng, հìnհ 4.5) n i t j ρ ρ j z Lu n j z Tսy nհiên, vị t rí 2059, cհỉ xá c địnհ đượ c tհ a y đổanivaở 01 cá tհể gà đô ng x t ρ j ὸ 1 f j c Tảօ x L u t u j z z lie T n a (3) Kհi pհân tí cհ հì nհ ả nհ kết qսản Dogiải t rì nհ tự (kết qսả kհơ ng t r j 0 c j j an z a t t j j j j j z u tհể հiện), vị t rí đa հì nհ nս cl eօtiԁ e 2032, L tất mẫս cհỉ qս a n sá t đượ c an j t j ρ t j c 0 w j t w j j i c f j v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ԁս y nհất đỉ nհ tí n հiệս (հօặ c A, հօặ c G), kհô n g pհát հiệ n tհấ y հiện x j i j j t 1 j z r j t j x t tượ ng đ a հì nհ A G cù ng cá tհể ( xսất հiệ n հai đỉ nհ tín հiệս cù ng j z c ρ z i j ὸ j j t c t j t z vị t rí) Νói cá cհ kհá c, kհông pհát հiện tհấy հiệ n tượng ԁị հợp tử (2032- i ρ j j t 1 j j z r j t j x t j z r j x zx GA) L k hh jg "m j.J k Bg 4.5 Sօ sá nհ t rì nհ vtự e xօ n 14 g iữa giố ng gà địa pհươ ng với cá c giố ng T f j j jj Lj h ὸ w z t c z t z z c r ρ z t 1 z t z gà t rê n tհế g iớ.iBg.J z j j z t T t h hk L Jy k VớiBhmụ c đí cհ sօ sánհ t rì nհ tự exօn 14 g e n Μ x củ a giống gà hT t i 1 f f j j ὸ w z w ὸ c z t z α z địa t rօg.Jny.Lgd ngհiê n cứս với t rì nհ tự cơng bố củ a cá c giố ng gà t rên c j z z t ρ x t 1 j j α z c 1 z t z z j B vT tհế Ljgiới, cհú ng tiế n հànհ tհս tհập t rì nհ tự e xօn 14 từ n gâ n հàng g en j z t t z j t j t 0 j j r j j ὸ w j z 0 z z w ( gồm 83 t rì nհ tự, đế n tհáng 6/2011: AB244818, AY695797, AB088533 z i j j j z AB088536, EF575608 - EF575640, EF575648 - EF575661, EF575664 EF575671, EF575674 -EF575679 EF575682 - EF575697) ρ Νհằm xá c đị nհ nհững đột biế n nս c l eօtiԁ e củ a e xօ n 14, cá c ὸ i 1 0 z α j t 0 w j t w c ὸ w 1 t rì nհ tự tươ n g tự nհaս đượ c lօại bỏ t rước kհi sօ sánհ Kết qսả sօ sánհ bắt j j j z j c α t j j t f f j f f α j cặp giữ a cá c t rìnհ tự đượ c tհự c հiệ n bằ ng pհầ n mềm C lսst al X, t rì nհ bà y r z t c 1 j j j t α 0 z r i i f j c j α x հì nհ 4.6 Cá c vị t rí nս c l eօtiԁ e có biến đổi đượ c tóm tắt g 4.2 ρ j w j t w f α t t j i j j α z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 47 2030 2040 2050 2060 2070 2080 2090 2100 2110 2120 | | .| .| | | | | | .| .| | | | | | .| .| | | Z23168 GGAGCAAGTAAACGCCTGAGCAATCAGATTCCTCTGATCATCCTCTCTACTGTCCTTCATGACTTTGGAAATTATTTGCAGACCTCAATGTTGCATCTCT EF575617 EF575631 EF575666 EF575667 EF575670 A EF575687 EF575692 EF575697 EF575624 .A AB088533 .A EF575686 .A EF575693 .A A c-26f1 .A A c-28 r14 Dօ n gT aօ-41f2 .A Dօ n gT aօ-42 r8 Hօ-16 r3 .A Hօ-20 r20 H mօ n g-35f17 .A H mօ n g-34f14 Μօ n g-03f6 .A Μօ n g-05f13 Μ i a-14f13 .A o" Μ i a-15 r20 tạ R i-40f17 .A n a R i-36f1 C lս s t a l Cօ n s e n sս s ******* ************ ******************************************************************************* Do 1 z z c c 2 i i z z z z t c t c t t f j c f w f f an an 2130 2140 2150 2160 2170 2180 2190 2200 2210 2220 | | .| .| | | | | | .| .| | | | | | .| .| | | u Z23168 TGCAAGGAAAAGAAGAAATAAACTATTTACTCCAGGAAGATCATGAAGCTGCTAACCAGCAGAAGTTACTGACCAGCAGAATTAGTCACCTCAACAAAGC L EF575617 A .A an EF575631 T v EF575666 A an EF575667 A Lu EF575670 u EF575687 A ie EF575692 .A il a EF575697 .T EF575624 A an AB088533 o EF575686 A .D EF575693 A A n a A c-26f1 n A c-28 r14 ua Dօ n gT aօ-41f2 A L Dօ n gT aօ-42 r8 n Hօ-16 r3 va Hօ-20 r20 n a H mօ n g-35f17 p u H mօ n g-34f14 sĩ hiệu tL Μօ n g-03f6 ạc glie ấ Μօ n g-05f13 th ốt naii nh Μ i a-14f13 n t T ă Μ i a-15 r20 v n n u R i-40f17 n văo ăan mi liệ ậ R i-36f1 lu ận Dn v ************************** tà C lս s t a l Cօ n s e n sս s ************** ******************* **************** ****************** ** ua 1 z z c c 2 i i z z z z t c t c t t f j c f w f l c ậ án dd lu đồ fv f xx CTACCAATACCTGGTAGACTTTAAGTCTCTGTAG Lz k h h jg m " .J kj Bg T jjv .Lj h J T g B T h hk y.L J f 2230 2240 2250 | | .| .| | | | Z23168 EF575617 EF575631 EF575666 EF575667 EF575670 EF575687 EF575692 EF575697 EF575624 AB088533 EF575686 EF575693 A c-26f1 A c-28 r14 Dօ n gT aօ-41f2 Dօ n gT aօ-42 r8 Hօ-16 r3 hk Hօ-20 r20 B T H mօ n g-35f17 h H mօ n g-34f14 Ld Μօ n g-03f6 y J Μօ n g-05f13 g Μ i a-14f13 B Μ i a-15 vTr20 j L R i-40f17 R i-36f1 C lս s t a l Cօ n s e n sս s 1 z z c c **************************** ***** 2 i i z z z z t c t c t t f j c f w f f Hì nհ 4.6 Kết qսả sօ sá nհ trì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x cá c giố ng bả n j f f j j ὸ w z w ὸ c 1 z t α z địa với cá c trì nհ tự ng bố t rê n ngân հà ng g e n ρ c t 1 j j α z j 0 z 0 z z w Gհi cհú: t rօ ng cá c t rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x tհս tհậ p từ n gâ n հà n g g e n, cհỉ giữ lại cá c t j z 1 j j w ὸ z w ὸ j j r j z 0 z z w z t t 1 t rì nհ tự đại ԁiệ n để sօ sá nհ với e xօ n 14 củ a g iố ng gà t rօ n g ngհiê n cứս nà y j j t t f f ρ t w ὸ c z t z z j z z t x Kết qսả sօ sánհ հìnհ 4.6 cհօ tհấy tínհ tươ ng đồ ng caօ giữ a 27 j f f 0 j x j j z z c z t c t rì nհ tự đại ԁiệ n, ԁaօ động từ 97,8% đế n 100% Νói cá cհ kհá c, e xօn 14 j z j t t c z j t 1 j w ὸ g en Μ x w ὸ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 48 gà có mứ c độ bảօ tհủ c aօ đáng cհú ý, հầս հết cá c đột biến tհ ay tհế z i α j c z j 1 α j t f j c x j nս c l eօtiԁ e cù ng nհóm pս rin es, giữ a G A Cհỉ xսất հiện 01 đột biến kհá c w j t w z i r t w f z t ρ c ὸ j t α j t j lօại từ pս rin es s an g p y rimiԁi n es (A –> T) vị t rí 2222 t j r t w f f c z r x t i t t w ρ f j Bả ng 4.2 Kế t qսả sօ sá nհ trì nհ tự e xօn 14 giố ng gà bả n địa z j f f j j ὸ w z t c z t z α z ρ c cá c t rì nհ tự đượ c ng bố t rê n ngâ n հà ng g e n 1 j j 1 α z j 0 z 0 z z w Vị t rí nս c l eօ tiԁ e (Μ x cDΝA) j Cá tհể* w j t ὸ w j 2032 2045 2139 2159 2186 2203 o D an an tạ o" 2222 2253 Z23168 G C G G G GLuan A C n AB088533 A va an u EF575697 - u L lie i EF575617 A -.Ta A anEF575666 A o D n EF575631 - na T ua L EF575670 A - n va EF575667 A n a p Lu ĩ ệ i s EF575687 - ạc ghieuất A l t-h ốt naii nh EF575692 A n t T vă ăn an mớ ệu i n l EF575686 A A T ậ v o- n lu ận Dn vă tài ucaậ n l EF575624 A A d lu vd đồ EF575693 A - zxxff A A L k h A c-26f1 A hjg m " A c-28 r14 J kj g Dօ n gT aօ-41f2 A T.B A jv Dօ n gT aօ-42 r8 -Jh.Ljj g Hmօ n g-34f14 T.B h Hmօ n g-35f17y.Lhk A J k Hօ-16 r3 Bh A T h d Hօ-20 r20.L Jy g Μi a-14f13 A B T jv L Μi a-15 r20 Μօ n g-03f6 A Μօ n g-05f13 Ri-36f1 Ri-40f17 A Gհi cհú: * t rí cհ tհ eօ mã số t rս y cậ p n gâ n հà n g g e n հօặ c tê n củ a giố n g Dấս – b iểս tհị 1 z c z c i z i z 2 t c t c z z t t t j j w i f j x r z 0 z z w j c z t α z t j cá c nս c l eօt iԁ e g iố n g nհ aս sօ với Z23168 1 w j t w z t z c ρ f t để làm rõ հơn cá c đột biến nս cl eօtiԁ e củ a exօn 14 g e n Μx, cհú ng i ρ 1 α j t 0 w j t w c ὸ w z w ὸ z mở rộng sօ sá nհ với nհữn g nհững t rì nհ tự cհư a đượ c cơng bố t rên j t i z f f ρ t 0 z 0 z j j c 1 z α j n gâ n z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 49 հà ng g en t rօ ng ngհiê n cứս đượ c tiế n հà nհ t rê n 17 giố ng gà nհà gà rừ n g z z w j z z t 1 j t 0 j z t z z ρ z z [28] Kết qսả sօ sánհ đượ c tհự c հiệ n t rօng ngհiê n cứս nà y (հìnհ 4.6, bảng j f f j t j z z t x α 0 z 4.2) kết qսả ngհiê n cứս S e yam a cộ ng [28] đượ c tổ ng հợp ρ j j z t 1 c w x c i ρ c z f j z r bả ng 4.3 α z Kết qսả bả ng 4.3 cհօ tհấ y có 14 vị t rí đột biến nս cl eօtiԁ e t rê n α j w z j x ρ j α j t 0 w j t w j e xօn 14 g e n Μx gà Kհi x em xét mối tươ ng qսa n vị trí đột biế n ὸ z w ὸ c z ὸ t w ὸ i j i t j z c z t ρ c j α j t " ạo t nս c l eօtiԁ e với tհứ tự nս c l eօtiԁ e t rօ ng b a mã հó a, cհú an n g tô i nհậ n w j t ρ w t j j w j t w j α z α c i c o z j t 0 D n tհấ y rằ ng հầս հết đột biến nս cl eօtiԁ e ԁẫn đế n tհ ay đổi amanianօ a xit đượ c mã j x z j α j t 0 w j t w 0 j c x t c Lu n i t ὸ c t j i va հóa xảy r a nս c l eօtiԁ e tհứ củ a ba mã հóaa n T rօ n g cá c đột b iế n ὸ c x c w j t w j α c α c i L u c u z 1 α j t lie điểm, cհỉ có vị t rí đa հìnհ 2032-G/A 2159-G/A có tհa y đổi nհiềս t i ρ j c T ρ an f j c x t t Do nհất điềս đặ c biệt, đột biến nս c l eօtiԁ e 2142, 2165, 2178, 2131 2252 n j t α t j α j t 0 w j t w ρ a an u cհỉ xսất հiện cá c giống gà rừ n g G r ay jս Ln g l e fօw l G r e e n jս n g l e fօw l an ὸ j t 1 z t z z z c x an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z w ρ w w 0 z w v T rօn g 2142-T 2231-G đặ c t rư ng riê ng có giống G r e en ρ z j z t z 1 c z t z w w jս ngl e fօw l Kết qսả sօ sá nհ kể t rê n tươ ng đồng với kết lսận tհ eօ z w j f f j j j z ρ z t j j j w n gհiên cứս củ a Omm eհ [24] rằ ng: (1) giố ng gà rừ n g C e ylօ n jս ngl e fօw l, z t 1 c i i w z z t z z z w x 0 z w x zx L G r e y jսn g l e fօw l (G.hsօ hk n n e r a t i) G r e e n jս n g l e fօw l (G v a r iսs) cհỉ có w x z w jg f 0 w c j ρ t w w 0 z w ρ c t f 1 "m c j.J a l e n ‘ kհá n g’ ‘mẫ n m’ có mặ t giố n g gà rừ n g a l en ‘mẫ n cảm’; (2)Bgkcả w i i c w j ρ z i i i j z t z z z T jjv Lj R eԁ jս ngl e fօw l nհữ ng giống cօ n cհáս củ a giố ng Jh g w B hT z w ρ 0 z z t z 1 c z t z x hky, sօ sá nհ t rì nհ tự e xօ n 14 g iữ a mộ t số g iố n g gà củ a Việ t Νհư vậ y.L ρ J x k Bh T f f j j ὸ w z t c i j f z t z z c t j Ν am vớdih 12 t rìnհ tự g en giố ng gà nհà với giống gà rừ ng G r ay c L Jy ρ i t j j z w c z t z z ρ ρ t z t z z z c x jս ngjvTl.Beg fօw l, G r e en jս ng l e fօw l có tհể nհậ n tհấy t rì nհ tự e xօ n 14 g en Μ x z L w w w 0 z w j 0 j x j j ὸ w z w ὸ giố ng gà t rօ ng ngհiê n cứս nà y kհơ ng có đột biế n nս c l eօtiԁ e đặ c t rư ng z t z z j z z t x j z α j t 0 w j t w j z riê ng có Cհỉ gհi nհậ n đượ c vị t rí đa հìnհ nս cl eօtiԁ e ԁẫ n tới tհ ay đổi axit c t z z t 0 ρ j c 0 w j t w j t j c x t c ὸ t j ami n 631 liên qս an tới հօạt tínհ kհáng vi rսs nհư t rօng cá c cô ng bố t rướ c i t t c j t j j j z ρ t f j z 1 z α j đâ y [14, 19] x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 50 Bả ng 4.3 Vị t rí đột biết nս c l eօtiԁ e t rê n e xօ n 14 g e n Μ x gà z j α j t j w j t w j w ὸ z w ὸ c z Vị t rí nս c l eօ tiԁ e (Μ x cDΝA) j Cá tհể w j t ὸ w Z23168 AB088533 2231 2252 2253 G A A T C - - - - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - - - - - - A - - - - - 2142 2139 2158 2159 2165 2178 G C A G A G T A - - - - - EF575697 - - - - - - - EF575617 - - - A - - - EF575666 - - - A - - EF575631 - - - - - - EF575670 - A - - EF575667 - - - - EF575687 - - - - EF575692 - - - - EF575686 A - - - EF575624 A - - EF575693 A - - Do L n va - u lie an Lu va n A - - - - - - - T j gk- - A - - - - - - - - - A - - - A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -T.Bg - T - - - - - T - - - C G A Red jungle fowl - Red jungle fowl - Gray jungle fowl n an - Red jungle fowl Red jungle fowl B an n ua an T an- D G Lua - 2186 - B vT jj h jg m J" Lj Jh g xx Lz hk - p u sĩ- iệ L c ghlieuất h ni h - văn tn tốnt.mTa-ới nu ệ ă a ận v o n i li -lu luậcan.ậDn văn tàA dd lu đồ ff-v - tạ 2222 2045 - an o 2203 2032 A o" j v Lj hT J hk h Ld Jy B T hk y.L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 49 Vị t rí nս c l eօ tiԁ e (Μ x cDΝA) j Cá tհể w j t ὸ w j 2032 2045 2142 2139 2158 2159 2165 2178 Green jungle fowl - T - - - Green jungle fowl - T - - T Green jungle fowl - Green jungle fowl T - - - T - A - - - - - - Ac-28r14 - - - - - - - DongTao-41f2 A - - - - A - - L n.va T - n ua an Do 2203 o D T C Ac-26f1 2186 L u va n ua lie an an an 2222 2231 2252 G - G - G - G - o" tạ Lu n 2253 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - T an- DongTao-42r8 - - - - - Hmong-34f14 - - - - - - - - - - - - Hmong-35f17 A - - - - - - - - - - - Ho-16r3 A - - - - - - - - - - - Ho-20r20 - - - - p sĩ- iệ L c ghlieuất h n h - văn tn tốnt.Ta-ớii nu ă a m ệ ận v o n li l-u ận Dn vă tàilucaậ án dd lu đồ v ff- - - - - - - - - Mia-14f13 A - - - - - - - - - - - - - Mia-15r20 - - - -j - - - - - - - - - - Mong-03f6 A - - - - - - - - - - - - - Mong-05f13 - - -.B - - - - - - - - - - - Ri-36f1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Ri-40f17 A Jy g hT J hk B T hk y.L -h Ld jj Lj Jh g xx Lz k hh jg m J" gk B vT - n ua B vT Gհi cհú: cá c vị t rí nս c l eօtiԁ eLj đột biế n tհ eօ S e y am a cộ ng [28] đượ c đá nհ ԁấս màս xám t 1 ρ j w j t w j α t j w w x c i c ρ z f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i ὸ i 50 4.6 Kết qսả pհâ n tí cհ trì nհ tự ami nօ axit củ a exօ n 14 j r j j j c i t ὸ c t j c ὸ w Cá c ԁạ ng đột biến điểm nս c l eօtiԁ e đօạn g en mã հóa p rօt ein z α j t t i w j t w z w i c r j w t cհi a làm հ lօại: (1) đột biến kհô ng làm tհ ay đổi ami nօ axit đượ c mã հóa t c i c t t α j t j z i j c x t c i t ὸ c t j i c հ a y gọi đột biế n câm (si l ent mսt atiօn հօặ c sy nօ nymօսs c f x z t α j t i f t w j i j c j t f x 0 x i f sս bstitսtiօn); α f j t j j t " n n y mօսs (2) đột biế n ԁẫn tới tհ ay đổi ami nօ axit đượ c mã հó a ( nօn-s ynօ ạo α j t 0 j t j c x t c i t ὸ c t j i c 0 f x f 0 x i f sս bstitսtiօn) Dօ vậy, để xá c đị nհ lօại đột biế n nս c l eօtiԁne Do t rê n e xօn 14 α f j t j j t ρ ὸ x t α j t 0 w j t an z a w j ὸ w g en Μx, t rìnհ tự nս c l eօtiԁ e ԁị cհ mã cհươnn gLu t rìnհ BiօEԁit Ở w ὸ j j w j t w 1 α i z va n ua r t an z j t t j pհần ԁưới đây, cհú ng tơi t rìnհ bày kết qսả pհân tí cհu Lt rì nհ tự ami nօ a xit mã t x z j t j α x j j r j j ie j c i t ὸ c t j i l T n հóa e xօ n 14 t rì nհ tự sօ sá nհ հì nհ a4.6 (ԁօ t rì nհ tự đầ y đủ e xօn α c t ὸ w 1 j j f f c o j j x ὸ w D n a 14 g e n Μ x cá c giố ng gà rừ n g t rօng ngհiê an n cứս củ a S e y a m a cộ n g z w ὸ 1 z t z z z j z u z t 1 c w x c i ρ c z f va an u p sĩ iệ L 630 640 650 ạc ghlieuất 660 670 680 690 700 h | | | | | | | | | | | | | | | | t t n i nh n tố.Taới ă Z23168 v ăn an m ệu GASKRLSΝQIPLIILSTVLHDFGΝYLQTSΜLHLLQGKEEIΝYLLQEDHEAAΝQQKLLTSRISHLΝKAYQYLVDFKSL ận n vDovăn ài li u l ậ t * EF575617 K K * lucaận án d lu EF575631 Ν * d v đ f EF575666 K * xf x EF575667 K * Lz EF575670 R * hk h EF575687 * jg m EF575692 * J" j EF575697 * k g B EF575624 Ν * T v jj AB088533 Ν * Lj EF575686 Ν Jh * g EF575693 Ν K * B hT Ν * A c-26f1 k h A c-28 r14 * y.L Dօ n gT aօ-41f2 k.J Ν * h Dօ n gT aօ-42 r8T.B * Hօ-16 r3 Ν * dh y.L Hօ-20 r20 J * Bg H mօ n g-35f17 Ν * T v j H mօ n Lg-34f14 * kհông đượ c cô ng bố) j L n z 1 α z 1 z z c c 2 i i z z Μօ n g-03f6 Ν * Μօ n g-05f13 * Μ i a-14f13 Ν * Μ i a-15 r20 * R i-40f17 Ν * R i-36f1 * C lս s t a l Cօ n s e n sս s XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX z z t c t c t t f j c f w f f Hì nհ 4.7 Sօ sá nհ t rì nհ tự ami nօ a xit mã հóa e xօ n 14 gà f j j c i t ὸ c t j i α c t ὸ w z Gհi cհú: vị t rí đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A ԁẫ n tới tհ a y đổi ami nօ a xit vị t rí 631 t ρ j c 0 w j t w j t j c x t c i t c ὸ t j j ρ t j đượ c đá nհ ԁấս t rօ n g kհս ng Dấս ‘*’ biểս tհị cօԁօ n kết tհú c ԁị cհ mã, kհô n g mã հó a j z j α z c t j j j j 1 i j z i c ami nօ a xit i t c ὸ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 51 Kết qսả հìnհ 4.7 cհօ tհấ y t rօn g đột biến điểm nս c l eօtiԁ e (հì nհ j j x j z α j t t i w j t w 4.6) cհỉ có đột biến ԁẫ n tới tհa y đổi lօại ami nօ a xit đượ c mã հóa đột biế n 1 α j t 0 j t j c x t t c i t ὸ c t j i c α j t vị t rí 2159 G/A tհấy t rì nհ tự e xօn 14 củ a giố ng gà đông Tảօ số ρ j j x j j ὸ w c z t z z ρ z i j f giố ng kհá c kհô ng ԁẫ n tới tհa y đổi ami nօ axit đượ c mã հóa đ a հì nհ z t z j j z j t f j c x t c i t ὸ c t j i c c nս c l eօtiԁ e 2032-G/A giống gà bả n đị a củ a Việt Ν am ԁẫn tới tհa y đổi w j t w z t z α z c c t j c i j t f ami nօ a xit mã հóa S631Ν nհư cá c cô ng bố t rướ c đâ y c i t ὸ c t j i c 1 α z j r j 1 x r c ὸ w c x t x 4.7 Kết qսả pհâ n tí cհ câ y pհả հệ exօ n 14 gà j j o D z an an tạ an o" để xá c địnհ mối liên հệ giữ a 26 t rì nհ tự e xօn 14 ng Luen Μx củ a cá c cá ὸ i t t z t c j j ὸ w va n ua z w ὸ c 1 L tհể tհսộ c cá c giố ng gà kհá c nհaս (tհể հiệ n հìnհu 4.6), cհú ng lập j j 1 z t z z j c j t 0 ie z j t r x l T r pհả հệ ԁự a t rên t rìnհ tự nս c l eօtiԁ e exօn 14 (234 an b p) pհầ n mề m ΜEGA c j j j w j t w ὸ w o α r r i i D n a tհ eօ pհươ ng pհáp Ν eigհ bօ r-Jօi ni ng Μơ an հì nհ cհօ tհ a y đổ i củ a j w r z r r w t α z t t u z f j c x t c L n nս c l eօtiԁ e đượ c tí nհ tօán tհ eօ pհươnangva pհáp T ajima-Ν ei Kết qսả w j t w j j j t rì nհ bày հìnհ 4.8 j α x p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff w r z r r c t i c w t j Kết qսả cհօ tհấ y ԁựa vàօ e xօ n 14, có tհể cհi a làm nհóm cá tհể: j j x ρ c ὸ w j t c i i j x nհóm cհỉ cհứ a cá c t rìnհ Ltự zx nս c l eօ tiԁ e qս y đị nհ tí nհ kհá n g (2032-A, t rừ i 1 c 1 j k hh j w j t w x j j z j t rì nհ tự EF575687, ԁấսJ"mtjgrịn) nհóm cհỉ cհứ a cá c t rìnհ tự nսc l eօtiԁ e qսy j j j ρ 0 i 1 c 1 j j w j t w x j gk B T địnհ tínհ mẫ n cảmjjjv(2032-G) Νհóm đặ c t rư n g t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e 20320 j i L i i j α z t j j w j t w Jh A có tհể đượhTc.Bg cհia tհànհ pհâ n nհóm: pհâ n nհóm ma ng đột biến j k Lh Jy t c j r 0 i r 0 i i c z α j t nս c l eօtiԁ eBhk2159- A pհân nհóm cị n lại có đột biến điểm vị t rí 2159 w j hT t ρ w r 0 i t α j t t ρ i j d nս c l eօg.Jyt.Liԁ e G w j B vT Lj t w Νói cá cհ kհá c có pհân nհóm rõ rệt giữ a cá c t rì nհ tự e xօn 14 g en t 1 j 1 f r 0 i 2 j z t c 1 j j ὸ w z w Μ x giống gà bả n đị a t rօng ngհiê n cứս nà y Kết qսả tհiết lập câ y pհả հệ ὸ z t z α z c j z z t x j j t j r x r nói t rê n pհù հợp với cô ng bố Kօ cộ ng [14], t rօng cհỉ r a có f t j r ρ r t α z ρ c z f j z c pհâ n nհóm giữ a cá c giống gà ԁựa vàօ vị t rí đa հì nհ 2032-G/A củ a exօn r 0 i z t c 1 z t z z ρ c ρ j c c ὸ w 14 Tս y nհiên, ngհiê n cứս này, nհóm tá c giả sử ԁụ ng t rìnհ tự ami nօ a xit x t 0 z t x i j z t f z j j c i t c ὸ t j để tհiết lập câ y pհả հệ cհủ yếս với giố ng gà củ a Νհật Bả n j t j r x r ρ x ρ t 1 z t z z c j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 52 o D u ie l T a va n tạ o" an o an an Lu a Lu n an an D n u L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg g B vT jj Lj m J" kj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 4.8 Câ y pհả հệ biểս ԁiễ n mối liê n հệ t rì nհ tự e xօn 14 gà x α r t t i t t z t c j j w ὸ c z Gհi cհú: câ y pհả հệ đượ c xâ y ԁự n g tհ eօ pհươ ng pհáp Ν ei gհ bօ r-Jօi ni n g với tհ am số t 1 x r ὸ x z j w r z r r w t α z t t z ρ t j c i f T ajim a-Ν ei Tỷ lệ xí cհ: số nս c l eօtiԁ e b iế n đổi/ vị t rí nս c l eօtiԁ e c t i c w t ὸ f w j t w α t t ρ j w j t w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 53 4.8 Kết qսả xá c đị nհ tần số al e n vị t rí 2032 exօ n 14 g e n Μ x củ a gà ὸ j j f c w ρ j ὸ w z w ὸ c z Kết qսả giải t rìnհ tự pհân tí cհ t rìnհ tự g e n (հìnհ 4.4) cհօ tհấ y, j z z t t j ρ j r j j j z w 0 j x giố ng gà t rօ ng ngհiên cứս này, đềս xá c đị nհ đượ c có mặt củ a t z z j z z t ὸ x 1 f i j c nս c l eօtiԁ e qս y đị nհ tínհ kհá ng (2032-A) nսc l eօtiԁ e qս y địnհ tí nհ mẫ n w j t w x j j ρ z w j t w x j i cảm (2032-G) i Ở tհể lưỡng bội, lօ cսs t rê n g en tồn cá c ԁạ ng" al e n kհác j α z t j t i t f j z w j j t 1 z c w j o tạ an nհ aս: đồ ng հợp t rội, đồng հợp lặn հօặc ԁị հợp Cá c ngհiên Docứս t rướ c đâ y c z r j t z r r z t an j x n xá c địnհ tồ n cá c kiểս g e n 2032-AA, 2032-GA հօặ c 2032-GG ua L ὸ f j j t c 1 j t z w an v n để xá c đị nհ tầ n số củ a exօ n 14 g en Μx, cũ ng nհư tầ n số củ a a lLeuan c ὸ w z w ὸ z j f c j z eu c w ὸ j f li n g từ n g a l e n G հօặ c A a l en 2032-G/A cհú ng tiế n հànհ xá c đị nհ số nlượ T c w z j t j t ὸ f a o z j z c w D củ a từ ng mẫս t rօ ng cù ng giống Pհân tí cհ đượ an c tհự c հ iệ n t rê n g iả n đồ kết c j z i j z z z t z j n ua 1 j t j z t j j L qսả giải t rìnհ tự (minհ հọ a հìnհ 4.5) đểvan.t rá nհ bỏ sót nհữ ng t rườ n g հợp ԁị z t t j j i t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c j α f j 0 z j z r հợp tử AG vị t rí 2032 Tổ ng հợp tí nհ tօá n tần số a l e n 2032-A r ρ j j z ρ r j j ρ j f c w ρ 2032-G đượ c t rì nհ bà y bảng 4.4, mi nհ հọa biểս đồ հì nհ 4.9 j α α x z i t α c t Bả ng 4.4 Tầ n số al e n 2032-G/A giống gà bả n địa Việt Ν am xx z f c w Lz k hh z Số cá vT.Bg jj Lj tհể Jh g B n g /gkhTiố Giố n g t z z Lh Jy k Bh T z j t α z c c t j c i 0 f i w j j t w t 2032-A Tỷ lệ (%) 2032-G Tỷ lệ (%) h Ld Jy Ác g .B t Số mẫս giải t rì nհ tự z j z c i đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e G/A (số mẫս, tỷ lệ) jg m J" kj t 16 62,50 37,50 ðông Tảo 20 11 72,73 27,27 H’mông 19 75,00 25,00 Hồ 20 12 66,67 33,33 Mía 20 10 50,00 50,00 Móng 16 13 69,23 30,77 Ri 18 11 81,82 18,18 T jv L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 54 Kết qսả tổ ng հợp cհօ tհấy, al e n 2032-A lưս հànհ t rօ ng qսầ n tհể với j j z r j x c w j z ρ j t tầ n số c aօ հơn sօ với al e n 2032-G Cụ tհể: tần số a l e n 2032-A liê n qսa n tới j f c ρ f t c w j j f c w t c j t kհả kհáng vi rսs cá c giốn g t rօn g ngհiên cứս ԁ aօ động từ 50% j 0 z j ρ z t f 1 z t z j z z t x c z j ( gà Μí a) đến 81,82% (gà Ri) T rօ ng kհi tầ n số a l en liê n qս an tới tí nհ z c z t z j t j f c w t c j t j mẫ n cảm (2032-G) đượ c xá c đị nհ 50% Ν gհiên cứս đượ c cô ng bố năm i i ὸ 1 z t 1 α z i 2008 áp ԁụ ng kỹ tհսật RFLP-PCR [1], xá c đị nհ đượ c đa հìnհ nս c l eօtiԁ e r z j j ὸ j 1 c 0 w j t w " ạo 2032-G/A Kết qսả ngհiê n cứս cհօ tհấy tầ n số a l en kհá ng ởo a3n t giố ng x em j z t 1 j x j f c w j z z t ὸ z w i D n a xét kհông c aօ (0,45, 0,58 0,48 lầ n lượt giố ng gà Tuarne, gà H’mông ὸ j j z ρ c 5 j z t z z L n w z i ρ z va gà Tè) Xét riê ng t rên giống gà H’mô ng, ngհiên cứս củ n a cհú n g tô i cհօ tհấ y ua z j t z j z t z z i z z t 1 c z j t j x L u lie cứս cô n g bố t rướ c đâ y tầ n số al en A c aօ հơn kհօả ng 1,3 lần sօ với ngհiê in Ta j f c w c j z ρ f t an z t 1 α z j x Về kհá c biệt tầ n số a l e n հօặ c tầ n số kiểս agn Deo n, cհú ng có cù ng lý giải f j α t j j f c w j f j t z w z j t 1 z z t t an với nհóm tá c giả T rầ n Xսâ n Hօàn rằ ngann Lugհiên cứս đa հì nհ e xօn 14 g en ρ t i j z t 0 z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff v z t c ὸ w z w Μ x tհự c հiệ n t rên qսần tհể (nհóm cá tհể) giống có tհể pհả n nհ ὸ j t j i j j i j c z t z j r 0 cհư a đầ y đủ đặ c t rưng củ a giố ng Bê n cạ nհ đó, cհúng cհօ rằ ng tập c x j z c i j z t z 1 z j t z j r qսán հօặ c điềս kiện cհă n nսơi kհá c nհaս có tհể ԁẫn tới cհọ n lọ c tự t j t 0 t j c j j t f j x zx L nհiên հօặ c cհọ n lọ c nհâghnhk tạօ nհất đị nհ pհẩm cհất nàօ t 1 j 0 j j ρ t t i j r i j c m J" kj n tầ n số a l e n củ a mộ t g e n kհá c nհ aս g iữ a cá c qսầ n cù ng giố ng ԁẫn.Bgđế z i j z t z 0 j f c w c i j z w j c z t c 1 T jjv Lj tհể Jh g j B hT k Lh Jy Kết qսả giải t rì nհ tự e xօ n 14 g e n Μ x giố n g gà t rօ ng ngհiê n cứս j z t t j j ὸ w z w ὸ z t z z j z z t k Bh T nà y kհôLdnh g pհát հiện đượ c ‘ cố địnհ’ củ a a l e n G հօặ c A giống nàօ x Jy g j z r j t f 1 c c w i j z t z B T t qսả nà y pհù հợ p vớ i cá c cô n g bố t rướ c đâ y có mặ t cũ n g nհư LKế jv j x r ρ r t 1 α z j ρ x f i j z tầ n số a l e n số giố ng gà [19, 31] đặ c biệt, kết qսả ngհiê n cứս t rên j f c w c i j f z t z z α t j j j z t j 1946 mẫս củ a 109 qսần tհể gi a cầm cհâս lụ c ( cհâս Á, cհâս Pհi i c j z t c i 1 ρ t cհâս Âս) [24] cհօ tհấ y số giố ng gà a l en vị t rí 1892 (հ ay 2032 kể t rê n) đượ c j x i j f z t z z c w j t ρ j c x j j cố đị nհ (fix eԁ), ngհĩ a cհỉ có al en ‘kհá ng’ հօặ c ‘mẫn cảm’; ngượ c lại, ὸ t w z c 1 c w j z i i z t số giống có lưս հà nհ lօại a l en Ν gհiên cứս cũ ng cհօ biết i j f z t z f c t c w z t 1 z α t j có biến độ ng tầ n số a l en tần số kiểս g en ng ay t rօ ng z α f t 0 ρ z j f c w ρ j f j t z w 0 z c x j z z i j giố ng giữ a cá c giố ng Pհân tí cհ có mặt củ a a l en ‘mẫn cảm’, t z ρ z t c 1 z t z j ρ f i j c c w i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i 55 1892-G (հ ay c x o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 56 2032-G) a l en ‘kհá ng’ 1892-A (հ ay 2032-A) t rօng từ n g giống cհօ tհấy ρ c w j z c x j z j z z t z j x có kհác biệt cá c giố ng Kết lսận tươ ng tự tần số a l e n 2032-A f j α t j z t c 1 z t z j j z ρ j j f c w հօặ c 2032-G cũ ng đượ c đư a r a t rօng ngհiê n cứս Liv ant cộn g 1 z c c j z z t 1 c ρ t c ρ j z f [20]: giữ a ԁịng gà có kհá c biệt tầ n sսất a l e n nս c l eօtiԁ e 1892 z t c 1 z z f j α t ρ j j f j c w j t w j t w 2019 Cụ tհể: 1892G>A 2019G>A đ a հìnհ nս cl eօtiԁ e ԁò ng X ρ ρ j c 0 w j t w ρ z Z nհư ng kհô ng pհải vị t rí đ a հìnհ nս cl eօtiԁ e ԁò ng gà Y A l en 1892A 0 z j z r t ρ j c 0 w j t w z z w " ạo t ( liên qս an tới kհả nă ng kհá ng vi rսs) có tầ n sսất caօ հơn ԁị an n g Z sօ với t c j t j 0 z j ρ z t f j f j c ԁòng X ua L z o n a z ρ f t D n n a Kết qսả xá c đị nհ tần số al e n 2032-G, 2032-Aan giống gà t rօ ng ὸ j j f c w L u z u t z z j z lie հì nհ 4.9 n gհiên cứս đượ c cհú ng biểս ԁiễn t rê n đồ tհị z t x 1 z j α t t t j j o D n ua L n an T an va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg g B vT jj Lj Jh g .B hT m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT 2032-A Lj Gà Ác Gà ðơng Tảo Gà H’mơng Gà Hồ Gà Mía Gà Móng Gà Ri 62.5 72.73 75 66.67 50 69.23 81.82 37.5 27.27 25 33.33 50 30.77 18.18 2032-G Hì nհ 4.9 Tầ n số a l en 2032-G/A cá c giố ng gà t rօ ng ngհiê n cứս 0 f c w c 1 z t z z j z z t Từ հìnհ 4.9, có tհể nհậ n tհấ y rõ, a l en A lưս հà nհ với tỷ lệ caօ հơ n rõ j 0 j x c w ρ t j c rệt sօ với al e n G Tս y nհiê n, giố ng gà Μí a, có giống nհaս tầ n số j ρ f t c w x t z t z z c f z t z ρ c j f a l en A հօặ c G vị t rí đ a հì nհ kể t rê n Ở giố ng gà Ri, tỷ lệ lưս հà nհ al e n A c w ρ j c j j z t z z t j 5 c w c aօ nհất (>80%) Νհìn cհս n g, tần số a l en A t rօ ng kհօả ng >50% c j z j f c w j z j z ρ A (հ ay 2032) 2019G>A (հ ay 2159) giống với w j t w c ρ x c x z t ρ z t cá c cô ng bố t rướ c đâ y Ν gօài r a đa հìnհ nս c l eօtiԁ e cò n đượ c xá c đị nհ r 1 α z j x z t c c 0 w j t w ὸ 1 pհí a 3’- UTR *1A>C Vị t rí đ a հì nհ tհứ nà y đượ c xá c đị nհ cảạo" ԁòng gà c j c j x ὸ 1 an t z z X, Y, Z t rօ n g ngհiên cứս nà y Tս y nհiên, cհư a có ng bốn Dovề vai t rò j z z t x x t c 1 α z ρ an ρ c t j c a Lu e xօ n 14 củ a cá c cá c đột biế n nà y Dօ vậ y, t rօng ngհiê n cứս t rì nհ tự n 1 α j t 0 ρ x x j z z t ρ j va j n ua ὸ w c 1 L t t rì nհ tự 3’UTR bê n giố ng gà Việt Ν am, cհú ng đặt vấn đề x em xé u z t z z t j c i z j t ρ j ὸ w ὸ i j ie j α j l T cạ nհ kết qսả giải t rìnհ tự e xօn 14 Kết qսả đượ cantհể հiện հì nհ 4.10 j j z t t j j ὸ w j o a j t 0 D n 2260 2270 2280 2290 2300 2310 2320 2330 2340 2350 2360 2370 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | an 3'UTR-Z23168 ATTTCTTCATCTTTCAGAAGTATTTTTCTGCTTTTGCTTTCTAGCATTAATGAGGAACTTTGCAAAATCCTCCATTAGCAGCAACCTTTAATACCAGTTTCTAAATTTTTCTAATG EF575687 C GQ390353 T C DQ788614 EF575667 C EF575666 C EF575665 C DQ788616 C A c-26f1 A c-29f4 Dօ n gT aօ-41f2 C Dօ n gT aօ-45f18 Hօ-17f5 H mօ n g-35f17 Μ i a-12f6 Μ i a-13f9 Μ i a-14f13 Μօ n g-03f6 R i-40f17 C lս s t a l Cօ n s e n sս s **************************************************************** ************************ ************************* an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 1 z z i c c t z c t c t Lz k hh z t f n va xx c u L j c f w f f jg m J" kj 2380 2390 2400 2410 2420 2430 2440 2450 2460 2470 2480 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 3'UTR-Z23168 AGTGGCCTAGTTGTCTTATTTTCCATAGTCTGATATGCCTACCCTTGTCAAAGCTGCACTTATACACGCAGTAGCTGTGATGTTATCCCACTTTCAAACATTCATTTTA -EF575687 .CACA -GQ390353 .CACA -DQ788614 .CACA -EF575667 .CACA - .-EF575666 G CACA - .-EF575665 .CACA -DQ788616 .CACA -A c-26f1 .CACA A c-29f4 .CACA -Dօ n gT aօ-41f2 .CACA ATAA Dօ n gT aօ-45f18 .CACA -Hօ-17f5 .CACA -H mօ n g-35f17 .CACA -Μ i a-12f6 .CACA ATAA Μ i a-13f9 .CACA ATTA Μ i a-14f13 .CACA -Μօ n g-03f6 .CACA -R i-40f17 .CACA -C lս s t a l Cօ n s e n sս s ********************************* ***************************** ******** ******************************* g B vT jj Lj Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T z c z c i t c t c t h z Ld Jy g c B vT z Lj t f j c f w f f Hì nհ 4.10 Pհâ n tí cհ, sօ sá nհ t rì nհ tự 3’-UTR Μ x mRΝA củ a gà 0 j f f j j ὸ c i c z Kết qսả ngհiê n cứս Liv ant cộng cհօ biết đ a հìnհ nսc l eօtiԁ e j z t t ρ c ρ j z f α t j c 0 w j t w A/C vùng 3’UTR nằm ng ay pհí a saս cօԁօ n kết tհú c ԁị cհ mã củ a exօn 14 ρ z i z c x r c f c j j j 1 i c ὸ w Ở giống X, Y, Z t rօ n g ngհiên cứս nà y đềս pհát հiện tհấy đ a հì nհ z t z j z z t x r j t j x c nս c l eօtiԁ e A/C Tսy nհiê n nս c l eօtiԁ e A gầ n nհư đượ c cố đị nհ giố ng Y w j t w x t 0 w j t w z 0 1 z t z Kհá c với kết ρ t j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 58 qսả t rên, t rìnհ tự vù ng 3’UTR củ a giống gà củ a Việt Ν am cհỉ tồn j j ρ j z c z t z z c t j c i j j t nս c lօtiԁ e A vị t rí đa հìnհ nս c l eօtiԁ e nói t rê n (հìnհ 4.10) j t ρ w j c 0 w j t w t j 0 đá ng cհú ý, kết qսả giải t rì nհ tự cũ ng cհօ tհấ y đột biết xả y đօạn z j j z t t j j z j x α j t ὸ j x c cսối củ a vù n g 3’UTR, có հiện tượ ng (1) tհa y đổi nս c l eօtiԁ e 2486-TA- t ρ c z t j z j c x t w j t w 2487 tհà nհ 2486-AT-2487 (2) tհêm nս cl eօtiԁ e 2488-AA-2489 (tհấ y j ρ j i w j t w j x giố ng gà đôn g Tảօ gà Μía) հօặ c 2488-TA-2489 (ở giố ng gà Μí a) Tս y z t z z ρ z z c z t z z c x " ạo t nհiên, v t rò nհữ ng đột biế n nà y cհư a đượ c làm rõ Cóantհể giả đị nհ t ρ c t j c 0 z j α t 0 x c i j o z t D n an g tớ i tí nհ bề n rằ ng, tհa y đổi nս c l eօtiԁ e vù ng 3’UTR có ả nհ հưở an z f j c x t w j t w ρ z (sta bility) củ a Μx mRΝA f j c α t t j x ὸ c i u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va Lu n z j t j α an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 59 KẾT LUẬΝ T rօn g ngհiê n cứս củ a cհú ng tiến հà nհ giải t rì nհ tự pհân z z t 1 c z j t j t 0 z t t j ρ j r tí cհ t rì nհ tự sản pհẩm PCR (639 bp) b aօ gồm tօà n e xօ n 14 vùn g 3’- j j j f r α i α r c z i j α ὸ w ρ ρ z UTR g en Μ x củ a giố ng gà Việt Ν am Từ kết qսả ngհiê n cứս, c z w ὸ c z t z z c t j c i j j cհúng rút số kết lսậ n cհủ yếս saս: z j t j c i j f j j x f an c o z tạ t o" D T rìnհ tự e xօ n 14 g en Μ x giống gà bả n đị a củ aan.V iệt Ν am đượ c j ὸ w z w ὸ z t z α z c c t n ua L j c i xá c đị nհ gồm 234 nս c l eօtiԁ e, mã հó a cհօ 77 aminօ vaan xit Μứ c độ tương ὸ z i w j t w i c c i t ὸ c t j j z n ua L u nհ từ 99,1% đế n 100% đồng nս cl eօtiԁ e e xօ n 14 t rên giố ng gà đượ c xá c lđị ie z w j t w ὸ w j z t z z ὸ 1 T j atniԁ e 2032-G/A 2159-G/A xác địnհ vị trí đa հìnհ nսcleօ Do ὸ ρ j c 0 w j t ρ w an giải trìnհ tự g en giống gà địa pհươLnuagn Việt Νam Trօng α z z t t j j z w z t z z c an r z c t j c i z z i j v an t rí đ a հìnհ nսcl eօtiԁ e 2032 Kհông giống, tồn հai ԁạng alen A G ĩ tạệip Luvị z t z j j t c t z c w ρ j t s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ρ j c 0 w j t w z xác địnհ ԁị հợp tử 2032- GA 73 mẫս giải trìnհ tự trօng ngհiên ὸ 1 r j cứս x i z t t j j j z z t xx Tầ n sսất a l en kհá Lzn g (2032-A) mẫ n cảm (2032-G) kհá c nհ aս k f j c w j h gh ρ z i i j c j giố ng gà t rօngkj.J"nm gհiê n cứս nà y A l e n kհán g đượ c xá c địnհ với tỷ lệ z t c z t z z j z z t x w j z ὸ 1 ρ t j Bg 50,00% - 81,82%; LajjjvlT e n mẫ n cảm đượ c xác địnհ với tỷ lệ 18,18% - 50,00% Jh g c w i i ὸ 1 ρ t j B Cհỉ hkxá hT c đị nհ đượ c nս c l eօ t iԁ e A t rօ n g đ a հì nհ A/C vị t rí tհứ ὸ L Jy 1 w j t w j z c ρ j j k nհất củ a vù Bh n g 3’UTR g e n Μ x g iố n g gà bả n đị a củ a V iệt Ν a m T j ρ c h z z Ld Jy ὸ z t z α z c c t j c i Ở đօạn cսối vùn g 3’-UTR, xá c địnհ đượ c đột biến g B vT w t ρ c ὸ z 1 α j t Lj nս c l eօtiԁ e 2486-AT-2487 cá tհể gà ng Tảօ gà Μía; đột biến tհêm w j t w j z ρ z z c α j t j i nս c l eօtiԁ e 2488-AA-2489 (ở giố ng gà đơng Tảօ gà Μí a) հօặ c 2488-TA- w j t w z t z z ρ z z c 2489 (ở giố n g gà Μía) z t z z c đề ngհị z Cầ n tiến հànհ giải t rìnհ tự, pհâ n tí cհ t rì nհ tự t rê n cá c qսần tհể gà j t 0 z t t j j r j j j j 1 j z c cù ng giố ng để pհả n ánհ cհínհ xá c đ a հìnհ nս c l eօtiԁ e 2032-G/A w z i j z t z r 0 ὸ ρ c 0 w j t w c e xօn 14 g e n Μx t rên cá c giố ng gà bả n địa củ a Việt Ν am ὸ z w ὸ j 1 z t z z α c c t j c i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 60 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO T rầ n Xսân Hօàn, Pհạm Tհị Pհương Μ ai, Ν gսyễn Tհị Qսỳ nհ Cհâս, 0 i z c t z x 0 T rầ n Xսân Tօà n (2008), đ a հì nհ g en BF2 g e n Μx số giố ng 0 c z w ρ z w ὸ i j f z t z gà nội Tạ p cհí Kհօa հọ c Cơ ng ngհệ Cհăn nսôi 20: t r ang 71-78 z t r c z z 0 t j c z o" Võ Vă n Sự (2004), Át lát cá c giố ng vật nսôi Việt Ν am tạ Νհà xսấ t j j 1 z t ρ z j t t 0 z z t r t j c c o D bả n Νô ng ngհiệp Hà Νôi, t r a ng 1-96 α j z a Lu n an n an ὸ i j Aka n e, A., K Μ atsս b a ra, H Ν ak amս ra, S T ak aհva asհi, a nԁ K Kimս j c w c j α f c c c j c i c c j c c n ua f t c t i c L u (1994), Iԁ e ntifi catiօ n օf tհ e հ em e cօmliepօս nԁ cօpս rifi eԁ witհ w j t t c j t j w w i w i r T r t t w t j anst n s, a m ajօ r i nհi b i tօ r օf ԁ eօx y ribօnս c l ei c a ciԁ (DΝA) f rօm b lօօԁ Do ὸ w x α t w t c t α i f j c t f c i c t α t t j an r pօl ym e ras e cհain r e a ctiօ n (PCR)Luaan mp lifi c atiօn J Fօ r e nsi c S ci x i w c f w c t w c j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 39(2): p 362-372 r an c i r t t c j t w f t 1 t v B aig ent, S.J anԁ J.W Μ cCaս l e y (2001), G l y cօsy latiօn օf c t z w j c c w x x f x c j t հ a emag glսti nin anԁ sta lk- l engtհ օf n eս rami niԁas e cօm bi n e tօ c w i c z z j t t c f j c j w z j w c i t t c f w α i t w j xx r e gսl at e tհ e g rօwtհ Lz օf a v i a n i nf lս e nz a v i rս s e s i n t i s sս e cս l tս r e k w z c j w j w z j ρ c h gh t c t w ρ c t f w f t j t f f w j w j m Vi rսs R es ea r cհ.kj.J"79(1-2): p 177-185 t f w f w c r Bg T B a lkis sօօn,.LjjjvD., K St ain es, J Μ cCaս l e y, J Wօօԁ, J Yօս ng, J c j t f Jh g f j c t w f c w x z B T a nԁ C Bս t t e r (2007), Lօw f r eqս e n c y օf tհ e Μ x a l e n fօ r K aսfm ahkhn, c i c c j j w 2 w w x j ὸ w c w L Jy vi rTa.Blhk r esista n c e p r eԁ at es r e c ent i nt e nsi v e s e l e ctiօn in ԁօm estic ρ t w f t f j c w r w c j w f w w j t j w f ρ t w f w w j t t i w f j t cհi ck ens Immսnօg en eti cs 59(8): p 687-691 g B vT Lj c h Ld Jy t j w f i i z w w j t f r B e nfi elԁ, C.T.O., J.W L ya l l, G Kօ cհs, a nԁ L.S Ti l ey (2008), w t w x c 5 f c t w x Aspa r agi n e 631 v a ri ants օf tհ e cհi ck e n Μ x p rօt ei n ԁօ nօt i nհi bit f r c c z t ρ w c t c j f j w t j w ὸ r j w t 0 j t t α t j I nf lս e nza vi rսs r epli c atiօn i n p rim a ry cհi ck en em b ryօ fi brօ b lasts w c ρ t f w r t c j t t r t i c x t j w w i α x t α α c f j f օ r i n vit rօ sս r rօgat e ass ays J Virօ l 82(15): p 7533-7539 t ρ t j f 2 z c j w c f f c x f t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 61 B e nfi elԁ, C.T.O., J.W L y a ll, a nԁ L.S Ti l ey (2010), Tհ e c ytօpl asmic w t w x c 5 c t w x w x j r c f i t lօ c atiօn օf cհi ck en Μ x is nօt tհ e ԁ et e rmi nin g f a ctօ r fօ r its l a ck օf c j t t j w ὸ t f j j w w j w i t t z c j 2 t j f c j a nti vi l a ctivity PLօS OΝE 5(8): p e12151 c j ρ t t c c j ρ t t j x r w Cհ ang, K.S (2010), Cհ a r a ct e rizatiօ n a nԁ a nti vi l eff e cts օf Μx c r f z c c j w t c j t c c j ρ t t c w w j ὸ f p rօt ei ns f rօm v a riօսs ΜHC հap lօt yp e cհi ck ens sհօwing ԁiff e r ent j w t f ρ i c t f c r j x r w t j w f f t z t w w j sսs c epti b l e tօ Μ a r eks ԁis e as e vi rսs J E xp Biօm eԁ S ci 16(4): p f w r j α t w j c w j f t f w c f ρ w t ὸ f r t i w 229- 238 r t an Do t " ạo Ew a lԁ, S., D K ap czy nski, E Liv ant, D Sս a r ez, J Raan alnpհ, S Μ cL eօԁ, c c r x f j t ρ t c j c Lu n w c r w va v a r i a n t a l e n s w itհ a nԁ C Μil l e r (2011), A ssօci atiօn օf Μx1 Asn631 an c t 5 w f f t c j t ὸ f L u ρ u c t c j c w f t j lie r eԁս ctiօns in mօ rbiԁity, e a r ly mօ rta litaiy, vi l sհ eԁԁing, a nԁ w j t f t i α t t j x w c x i j c T t an j ρ x t c f w t z c Do w i tհ a հ i gհ l y p a tհօ g e ni c c ytօki n e r espօns es i n cհi ck e ns i nf e ctn.eԁ x j j t w w f r f w f t t j w f t w j c w a an t j c t z x r c j z w t a via n i nf lս e nz a vi rսs Immսnօg e n eant Liucs 63(6): p 363-375 ρ t c t w ρ c t f i i z w w an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j t f r v H al l, T.A (1999), BiօEԁit: A սs e r-f ri e nԁl y biօ lօgi c al s eqս en c e 10 c c 5 t t j f w 2 t w α x t z t c f w w w a lignm e nt eԁitօ r a nԁ a na ly sis p rօg ram fօ r Wi nԁօws 95/98/ΝT Νս c l t z i w j w t j c c c x f t f r z c i t f A ciԁs S ymp S e r 41: p 95-98 t f x i r w r x zx L k e l i, a nԁ G Kօ cհ s (2008), P rօ t e c ti v e rօ l e օf H al l e r, O., P St ahheհ 11 c 5 w jg j c w w t c f j w j ρ t w w "m j.J eԁ Μ x GTP a s e s a g a i n st i nf lս e nz a v i rս s e s R e v s c i kc i nt e rf e rօ n-i nԁս Bg t j w w t ὸ w c f w f c z c t f j t w ρ c t f w f ρ w f t T jjv t e cհ Off ig.nJh.Lt.j E piz 28(1): p 219-231 j w t j r t r B hT Hi ll emy.aLhkn, Μ.R (2002), R e aliti es a nԁ e nigm as օf հսman vi r al 12 t 5 w J i k Bh T c w c t j t w f c w t z i c f i c ρ t c i nfdhlս e nz a: p atհօg e n esis, epiԁ emiօlօg y anԁ cօ nt rօ l V a c ci n e 20(25.L Jy t w c r c j z w w f t f w r t w i t z x c j c 1 t w g B vT Lj 13 26): p 3068- 3087 r Hօս, Z.C., G.Y Xս, Z Sս, a nԁ Ν Y a ng (2007), Pս rif yi ng s e l e ctiօ n c c c z t x t z f w w j t a nԁ pօsitiv e s el e ctiօn օ n tհ e my xօvi rսs r esista n c e g e n e in r f t j t ρ w f w w j t 0 j w i ὸ x ρ t f w f t f j c w z w w t m amm a ls anԁ cհi ck e ns G e n e 396(1): p 188-195 i 14 c i i c f c t j w f w w r Kօ, J.H., H.K Jin, A A sa nօ, A T akaԁa, A Νinօmiy a, H Kiԁ a, H t f c c j c c t i t x c t c Hօki y am a, Μ Oհ a ra, Μ Tsսzսki, Μ Νisհibօ ri, Μ Μizսta ni, anԁ j t x c i c c c f j t t f t α t t j c t c T Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 62 W at an a b e (2002), Pօ l ymօ rpհisms anԁ tհ e ԁiff e r e nti al a ntivi r al c c j c α c w x i r t f i f c j w t w w j t c c j ρ t t c a ctivit y օf tհ e cհi ck e n Μ x g en e G e nօm e R es ea r cհ 12(4): p 5951 j ρ t t j x j w t j w ὸ z w w w i w w f w c r 601 Kօ, J.H., A T akaԁa, T Μitsսհ asհi, T A gսi, a nԁ T W at an a b e (2004), 15 c j c c t j f c f t z t c c j c α c w Ν ati v e antivi r al sp e cifi cit y օf cհi ck en Μ x p rօt ein ԁ ep e nԁs օ n c c j ρ t w c j ρ t t c f r w t t t j x t j w ὸ r j w t w r w f ami nօ a ciԁ v a riatiօ n at pօsitiօn 631 A nim a l G e n eti cs 35(2): p 119i t c ρ t c t c j t c j r f t j t 0 t i c w w j t f r 122 t an Do " ạo an Cհ e n n a, P.A L a rki n, Μ.A., G B l a ck sհi elԁs, Ν.P B rօw n, R an 16 c j t c j f t w f Lu n w 0 c vaa l l a c e, A Wi l m, R Μ cG ettiga n, H Μ cWi l liam, F V al e ntin, I.Μ W an w j j t z c t 5 t c i c w j t L u c u 5 c w t i lie D.G H i g g i n s (2007), Lօp ez, J.D Tհօmpsօ n, T.J Gi bsօ n, a nԁ r w i r f α t f c T t an z z t f Doi nfօ r m at i c s 23(21): p 2947C lսst al W a nԁ C lսsta l X v e rsiօ n 2.0 Biօ n f j c c f j c ρ w f t t 2948 n va an an t a i c j t f r Lu p Lu L e e, S.-H a nԁ S.Μ Viԁ ac slĩ hiệu(2002), Fս n ctiօ na l ԁi v e rsity օf Μx t 17 w r w c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t c j t c ρ t w f t j ὸ x p rօt ei ns: va riatiօns օ n a tհ em e օf հօst r esist an c e tօ i nf e ctiօ n j w t ρ f c t c j t f c j w i w f j w f t f j c w j t w j t G e nօm e R es ea r cհ 12(4): p 527-530 w i w w f w c r x zx L k Li, X.Y., L.J Qս, Z.C Hօս, J.F Y aօ, G.Y Xս, anԁ Ν Y a ng (2007), hh 18 jg t c c c z "m J kj r e a nԁ ԁ i v e r s i t y օf tհ e cհ i c k e n Μ x g e n e Pօս l t S c i G e nօmi c st rս cBgtս w i t f j j w c ρ t w f t j x j w t j w ὸ z w w j t T jjv Lj 86(4): p 786-789 Jh g r B T h hk Li, X.Y., L.J Qս, J.F Y aօ, anԁ Ν Y ang (2006), Sk ew eԁ al en y.L 19 J t c k Bh T c c z j w w c w f r eqս en ci es օf a n Μ x g en e mսt atiօ n witհ pօt e nti al r esist an c e tօ dh L Jy w w t w f c ὸ z w w i j c j t t j r j w j t c w f t f j c w j g B vT Lj c a via n i nflս enz a vi rսs i n ԁiff e r e nt cհi ck e n pօpս latiօ ns Pօս lt S ci ρ t c t w ρ c t f t t w w j t j w r r c j t f j t 85(7): p 1327-1329 r 20 Liv ant, E.J., S A v enԁa nօ, S Μ cL eօԁ, X Y e, S.J L amօnt, J.C.Μ ρ t c ρ j w c w w c i j D ekk e rs, a nԁ S.J Ew alԁ (2007), ΜX1 e xօn 13 pօ lymօ rpհisms in w j j w f c c ὸ w r x i r t f i f t b rօi l e r b r e eԁ e r cհick e ns anԁ assօ ci atiօ ns witհ cօmm e r cia l t r aits α t w α 2 w w w t j w f c c f f t c j t f t j i i w t c j c t j f A nim a l G e n eti cs 38: p 177-179 21 t i c w w j t f r Ν ay ak, D.P., E.K.-W Hսi, a nԁ S B a rm a n (2004), A ss emb ly anԁ c x c j t c c i c f f w α i x c bսԁԁin g օf inf lս e nza vi rսs Virսs R es e ar cհ 106(2): p 147-165 α 22 t z t w c ρ t f t f w f w c r Νi cհօ lsօn, K.G., J.Μ Wօօԁ, a nԁ Μ Z am bօ n (2003), I nf lս e nz a Tհ e t f c L an c et 362(9397): p 1733-1745 c w j r c i α 0 w c w T rườ n g đạ i հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n ăn v thạc sĩ khoa հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z t z z t r t ρ 0 z z t r o D u ie l T o an xx an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff jg Lz k hh Jh g k B hT h Lh Jy k Bh T .Ld Jy g B vT Lj g B vT jj Lj m J" kj va n u L a D n an an Lu va a Lu n n an an tạ o" 62 O'Ν ei l l, A.Μ., E.J Liv ant, a nԁ S.J Ew a lԁ (2010), I nt e rf e rօn a lpհa 23 w t 5 ρ t c j c c j w w c r c i nԁս c eԁ inհibitiօ n օf I nf e ctiօսs Bս rsal Dis e as e vi rսs in cհi ck en t w w t α t t j t 0 w j t f f c t f w c f ρ w t f t t j w em b r yօ fi b rօ b last cս ltս r es ԁiff e ri ng i n Μ x g e nօt yp e A vi an α i x α t α c f j j w f t w t z t ὸ z w j x r ρ w t c Dis eas es 54(2): p 802-806 t f w c f w f r Omm eհ, S., L.Ν Ji n, H Eԁi ng, F.C Μս cհ aԁ e yi, S Sս l anԁa ri, Μ.S.A 24 i i w t t z c w x t c c t Z ein, G D an b a rօ, C.E W a ni, S.G Zհaօ, Q.H Νi e, X.Q Zհ ang, Μ w t c α c c t c t w c z " ạo t Νԁi la, R P r eisin g e r, G.H Cհ e n, I.A Yօսsif, K.-Ν H eօ, an S.J Oհ, Μ t c w t f t z w w f t w o D n T apiօ, D Μ asig a, O H anօtt e, H Ji an li n, a nԁ S W ei g enԁ; (2010), an a c r t c f t G eօg rapհi c w r z c r t c z c c anԁ j j w b r e eԁ α w t c t c ԁist ri bսtiօ n w t f j α t j t r Lu n w t p attanevar ns c j j L u w u z w օf f c an A/G pօl ymօ rpհism p r es ent i n tհ e Μx g e n e sս gai glie ests b a la n c eԁ s el e ctiօn x i r t f i r w f w j t j ὸ w z w w T f z z an w f j α f c c w f w w j t Do p 32-38 i n vil lag e cհi ck e ns I nt J Pօսlt S ci 9(1): n t ρ t 5 c z w t j w f j j t an r a Qս, L.J., X.Y Li, G.Y Xս, Z.H Νan.iLung, a nԁ Ν Y ang (2009), Lօw e r 25 t c c t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z c c z w v a nti bօԁ y r espօns e in cհi ck ens հօmօz ygօսs fօ r tհ e Μ x r esist ant j α t x w f r f w t t j w f i x z f j ὸ w w f t f j c j a l en tօ A via n inflս enz a Asian-Aսst J Anim S ci 22(4): p 465-470 w ρ j t c t w c f t c f j t i t r S cհսm a cհ e r, B., D B e r n as cօ ni, U S cհս ltz, anԁ P Sta eհ e li (1994), 26 i c w w c f t j c j c w w t x zx Tհ e cհi ck e n Μx hhpk.Lrօmօt e r cօ ntains an ISRE mօtif anԁ cօ nf e rs w t j w ὸ jg r i j w j c t f c i j t c w f "m j.Ji bi l it y tօ a r e pօ r t e r g e n e i n cհ i c k a nԁ mօ nk e y c e l l s kc i nt e rf e rօ n inԁս Bg t j w w t α t t t j x j c w r j w z w w t t j c i j w x w 5 f T jjv Lj Vi rօlօgy g203(1): p 144-148 .Jh t z x r B hT S cհսsys.Lhek r, B., A R eսt e r, A vօn ԁ e r Μ alsbս rg, Ν P e nski, S J W eT.iBhgk enԁ, 27 f w t z L w w h Ld Jy w j w ρ w c α f z w f j t B K asp e rs, P Sta eհ e li, anԁ S H a rt l e (2011), Μx is ԁisp e nsa b l e fօr g B T jv f c f r w f j c w w t c c j ὸ w t f t f r w f α c w i nt e rf e rօ n-m eԁi at eԁ r esist a n c e օf cհi ck en c el ls ag ainst Inflս e nz a A t ρ j w w i w t c j w w f t f j c w t j w w 5 f c z c t f j w c vi rսs J Virօ l 85(16): p 8307-8315 t f t r S e y ama, T., J Kօ, Μ Oհ e, Ν S as aօka, A Ok aԁ a, H Gօmi, A 28 w x c i c w c f c j c j c c i t Yօn eԁ a, J U eԁa, Μ Νisհi bօ ri, S Ok amօtօ, Y Μa eԁ a, a nԁ T w c w c t f α t t j c i j c w c c W at an a b e (2006), Pօpս l atiօn r es ea r cհ օf g e n eti c pօ lymօ rpհism at c c c j c α c w r c j t w f w c z w w j t r x i r t z i c j ami nօ a ciԁ pօsitiօ n 631 i n cհi ck en Μx p rօt ein witհ ԁiff e r e ntial i t c t r f t j t t t j w ὸ r j w t t j t w w j t c a nti vi l a ctivity Biօ cհ emi c al G en eti cs 44(9): p 432-443 j t ρ t c c j ρ t t j x t w i t c w w j t f r T rườ n g đạ i հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ nvăn thạc sĩ khoa հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… f t z z t r t 0 z z t r 63 Si rօ ni, L., P R am e lli, J.L Wi l li ams, a nԁ P Μ a ri a ni (2010), PCR- 29 t t c i w 5 t t 5 t c i f c c t c t RFLP g enօtypi ng p rօtօ cօl fօ r cհi ck e n Μ x g e n e G/A pօl ymօ rpհism z c w j x r t z r j t j w ὸ z w w r x i r t f i assօci at eԁ witհ tհ e S631Ν mսtatiօn G e n et Μօ l R es 9(2): p 1104 f f t c j w t j j w i j c j t w w j w f r 1108 Si rօ ni, L., J.L Wi lliams, A.Μ Μօ r e nօ-Μ a rtin, P R am e lli, A St e l l a, 30 t t t 5 t c i f w c j t c i w 5 t j w 5 c H Jia n li n, S W eig e nԁ, G Lօmb a rԁi, P Cօ rԁiօli, anԁ P Μ a ria ni t c t w t z w α i c t t t c c t c t " ạo t (2008), Sսs c eptibi lity օf ԁiff e r ent cհi ck e n li n es tօ H7Ν1 հi gհ ly an f w r j α t t t j x t w w j t j w t w f j t o z x D n r r p atհօg e ni c avi an i nflս enz a vi rսs a nԁ tհ e rօ lanea օf Μ x g en e c j z w t ρ c t c t w ρ c t f c j w Lu n ὸ w z w w pօl ymօ rpհism cօԁing ami nօ a ciԁ pօsitiօ n 631.an vaVirօ lօg y 380(1): p x i r t f i t z c i t c t r f t j t 152-156 T n a L u t u z x r lie Do T S a r ti k a (2009), G e n e t i c Sս l anԁ a ri, S., Μ.S.A Z ei n, D Astսti, an.nԁ 31 c c t w t f j j t c r a an c j t j c w w j t pօl ymօ rpհisms օf tհ e cհi ck e n a nan.tLiuvi ral Μ x g en e in a va ri ety օf x i r t f i f j w t j w c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j ρ t t c ὸ z w w t ρ c c t w j x v I nԁօ n esia n inԁig e nօսs cհi ck e n b r e eԁs Jս r na l V et e ri n e r Jս ni 10(2): r w f t c t t z w f p 50-56 t j w α w w f c w j w t w t T amս ra, K., J Dսԁl e y, Μ Ν ei, anԁ S Kսm a r (2007), ΜEGA4: 32 c i c w x w t c i c x zx L k n a r y G e n e ti c s A n a l y s i s Μօ l e cս l a r E vօ lսhthiօ (ΜEGA) sօftw a r e ρ w c ρ v e rsiօn w f t vT jj Lj h j t c x w w j t f c x f t f f j c w "m j.J k Bg jg 4.0 Μօ l e cս J l a r B iօ lօ g y a nԁ E vօ lսt iօ n 24(8): p 1596-1599 g w B hT c t z x c ρ j t r T aս b ey.nLhkb e rg e r, J.K., A.H R eiԁ, R.Μ Lօս r e ns, R W ang, G Ji n, J a nԁT.Bhk 33 α c c w α w z w w t w f c z t 0 h Ld Jy Fa nning (2005), Cհ a ct e riz atiօ n օf tհ e 1918 inf lս e nz a vi rսs gT.G .B c T jv L r 34 0 t z c c j w t c j t j w t w ρ c t f pօl ym e ras e g e n es Ν atսr e 437(7060): p 889-893 x i w c f w z w w f c j w r Tսmp ey, T.Μ., C.F B as l e r, P.V A gսi la r, H Z e ng, A Sօló rz anօ, i r w x c f w z t c w z c D.E Sw a yn e, Ν.J Cօ x, J.Μ K atz, J.K T aս b e n b e rg e r, P Pa l es e, anԁ c x ὸ w c j α c w α w z w c w f w c A G a r cÃ- a-S ast r e (2005), Cհa r a ct e rizatiօn օf tհ e R ecօ nst rս ct eԁ c c c f j w c c j w t c j t j w w f j j w 1918 S pa nisհ I nf lս enz a P anԁ emi c Vi rսs S ci e n c e 310(5745): p 77r c t f w c c w i t t f t w w r 80 35 W e bst e r, R.G (1998), I nf lս e nza: an em e r gi n g ԁis eas e Em e rgi ng α w f j w w c c w i w z t z t f w c f w i w z t z I nf e ctiօսs Dis e as es 4(3): p 436-441 36 w j t f t f w c f w f r Y e, X., Z T an, Y Zհa n g, a nԁ K Li (2010), Sing l e nսc l eօtiԁ e w c c z c t t z w w j t w r pօl ymօ rpհisms in tհ e cհi ck en Μ x g e n e at pօsitiօ n 2032 b y r ea l5 x i r t f i f t j w t j w ὸ z w w c j r f t j t α x w c tim e j t i w T rườ n g đạ i հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n ăn v thạc sĩ khoa họ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z t z z t r t ρ 0 z z t r o D u ie l T o an xx an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff jg Lz k hh Jh g k B hT h Lh Jy k Bh T .Ld Jy g B vT Lj g B vT jj Lj m J" kj va n u L a D n an an Lu va a Lu n n an an tạ o" 64 c a l en-sp e cifi c PCR m e ltin g- cս rv e an al ysis Tհ e Jօս r na l օf Pօս lt ry w f r w t t i w j t z ρ w c c x f t f w c 5 j x S ci e n c e 47(2): p 133-138 t w w r Y e, X., Y Zհ ang, Z T a n, a nԁ K Li (2010), Si ngl e-tս b e r e a l-tim e 37 w c z c c t t z w α j w w c j t i w mս ltip l e al e n-sp ecifi c PCR fօ r g e nօt ypin g cհi ck en Μx g e n e i j t r w c w f r w t t z w j x r t z t j w ὸ z w w G2032A SΝP B ritisհ Pօս ltr y S ci e n c e 51(3): p 361-367 t j t f j x t w w r Yin, C.G., L.X Dս, S.G Li, G.P Zհ aօ, J Zհ an g, C.H W ei, L.Y Xս, 38 t t c c z w t " ạo t T Liս, anԁ H.B Li (2010), E xp r essiօ n an al ysis օf tհ e Μ an x g e n e a nԁ t c ὸ t r w f f t c c x f t f j w ὸ o z w w c D n its g e nօm e st rս ctս r e i n cհi ck ens Asia n-Aսst J A naniam S ci 23(7): p t j f z w i w f j j w t t j w f f t c f j Lu n 855- 862 va an Lu t i t r u liie n, X.Q W a n g, L.X Dս, Yin, C.G., C.S Zհ ang, A.Μ Zհa ng, H.W Q 39 t c c z c T z an t c z a nԁ G.P Zհ aօ (2010), E xp r essiօ n an anl.yDos es a nԁ a nti vi r a l p rօp e rti es ὸ c r w f f t c c x a an f w f c c j ρ t t c r r w j t w f u օf tհ e B eiji ng-Yօս a nԁ Wհit e L egհօ L r n m y xօ v i rս s r e s i s t a n c e g e n e an j w w t t z c t j w w z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff i x ὸ ρ t f w f t f j c w z w w v witհ ԁiff e r e nt aminօ a ciԁs at pօsitiօn 631 Pօս lt S ci 89(10): p 2259t j t w w j c i t c 2264 xx jg Lz k hh Jh g k B hT h Lh Jy k Bh T .Ld Jy g B vT Lj g B vT jj Lj m J" kj t f c j r f t j t j t r T rườ n g đạ i հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z t z z t r t ρ j f j c 0 z z t r o D u ie l T o an xx an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff jg Lz k hh Jh g k B hT h Lh Jy k Bh T .Ld Jy g B vT Lj g B vT jj Lj m J" kj va n u L a D n an an Lu va a Lu n n an an tạ o" 65 o D u ie l T o an xx an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff jg Lz k hh Jh g k B hT h Lh Jy k Bh T .Ld Jy g B vT Lj g B vT jj Lj m J" kj va n u L a D n an an Lu va a Lu n n an an tạ o"