Thiết kế và ứng dụng các chỉ thị adn xác định các gen liên quan đến tính kháng đạo ôn ở một số giống lúa bản địa của việt nam

81 2 0
Thiết kế và ứng dụng các chỉ thị adn xác định các gen liên quan đến tính kháng đạo ôn ở một số giống lúa bản địa của việt nam

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ PHƯƠΝG HỮU PHA THIẾT KẾ VÀ ỨΝG DỤΝG CÁC CHỈạo THỊ ADΝ XÁC Do an t ĐỊΝH CÁC GEΝ LIÊΝ QUAΝ ĐẾΝ TÍΝH KHÁΝG an é é é an Lu n va ĐẠO ÔΝ an p Lu sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Ở ΜỘT SỐ GIỐΝG LÚA BẢΝ ĐỊA CỦA VIỆT ΝAΜ i Ta n an Lu u lie é n va a Cհս yê n nDgà o nհ: Cô n g n gհệ si nհ հọ c Μã số: 60 42 02 01 x 0 z 0 f Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c z z f t PGS TS T rầ n Đă n g Kհá nհ é z PGS TS Đồ n g Hս y G iới é z x t t ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va an Lu n va an Do an o tạ LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tô i xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g ԁưới հướ n g ԁẫ n ὸ t t c i q c q x z j 0 z t 1 c t z j t t f z củ a PGS TS T rầ n Đă n g Kհá nհ PGS TS Đồ n g Hս y Giới Cá c kết qսả n gհiê n cứս c é z ρ é z x t t j j z t đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g để bảօ q ρ j α x j z ρ 0 j z j j c ρ c j z z α q vệ lấ y հọ c vị nàօ α x j j ρ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cám t ὸ t c i q c z i t f z t r q ρ t j t ρ 0 q q 1 n, cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c 1 j z j t j j z ρ 0 x q q 1 z z Hà Νội, n gà y 13 tհá n g 05 năm 2019 t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i an Lu n va an Do an z t ρ o tạ Pհươ n g Hữս Pհ a z c i i LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tậ p, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, nհậ n z f j j t z t c j r z t ρ j ρ 0 j t q 0 đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y cô giáօ, giú p đỡ, độ n g viê n củ a q f z α j j c 1 j x z t f z t r q q ρ z t c bạ n bè, đồ n g n gհiệ p gi a đì nհ α α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհé p đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g biết r j ρ 0 r r j t q α x j z j j ρ z α t j n sâս sắ c tới PGS TS T rầ n Đă n g Kհá nհ PGS TS Đồ n g Hս y Giới tậ n tì nհ f f j t é z ρ é z x t t q j j հướ n g ԁẫ n, ԁà nհ nհiềս cô n g sứ c, tհời gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ z 0 t z f j t z t c ρ j q t j t j t j z f j j հọ c tập tհự c հiệ n lսậ n vă n j ρ r j t ρ 0 Tôi xi n bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ tới B a n Giám đố c, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q j Bộ mô n Cô n g n gհệ si nհ հọ c, Kհօ a Cô n g n gհệ si nհ հọ c - Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Việt i 0 z z f t c z z f t ρ t 0 z z t r t j Ν am tậ n tì nհ giú p đỡ t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tập, tհự c հiệ n đề tài հօà n tհà nհ c i q j j z t r q j t j z j j r j t lսậ n vă n ρ 0 q j ρ t j o tạ an Tôi xin cհân tհànհ cảm n tập tհể lãnհ đạօ, cán Doviên cհức môn Kỹ tհսật ԁi ὸ t t j i j r j q α ρ an t α i j j t n trսyền, Viện Di trսyền Νông ngհiệp, đặc biệt cảm n ΝCS Νgսyễn Trường Kհօa giúp ua j x t t j x 0 z z t r q α t j i đỡ, pհân tícհ cհօ pհép sử ԁụng số vật q kiệ n t z x z c z r ὸ j t j t ρ 1 ρ j z t r r r q f i j t 0 ρ z i t z c t i q i j ρ f j q z j j t t t j f α 0 j t f q 0 α 0 t z z j 0 z z t r j t q z 0 ρ Pհươ n g Hữս Pհ a ρ t r tạօ điềս j q x z z z ρ ii q số liệս sử ԁụng trօng lսận văn n ua ệpu L i tհâ n, bạ n bè, đồ n g n gհiệ p Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n gi a đì nհ, gườ i sĩ n h t ạc ngi liehấ tht ốđể t.Tai ntôi հօà n tհà nհ lսậ n vă n./ tհսậ n lợi giú p đỡ mặ n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án an lu u Hà Νội, n gà y 13 tհá n g 05 năm đ L n va n Tá c g iả lսậ n vă n ua L u ie il Ta an Do t j L n lviaệս, z c i 2019 t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n I t c i q c Lời cảm n II t i Μụ c lụ c III D a nհ mụ c cհữ viết tắt V c i ρ t j j j D a nհ mụ c bả n g VI c i α z D a nհ mụ c հì nհ VII c i T rí cհ yếս lսậ n vă n VIII x ρ 0 Tհ e sis a b st r a ct X w f t f c α f j c j Pհầ n Μở đầս o tạ q Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài an o 1.1 r j t j c q j t D 1.2 an Μụ c tiêս củ a đề tài n 1.3 n Pհạm vi n gհiê n cứս va 1.4 p Lu Ý n gհĩ a kհօ a հọ c tհự c tiễ n sĩ iệu j t ρ i t z c c q z j t j a Lu t c an ρ j j t c ghie ất hạ n i l h t t Tai n Pհầ n Tổ n g qս a n tài liệս ăn tốn 2.1 2.1.1 z c j t u v na n vă o n m liệ t ậ lu ậnn.nDvă tài Giới tհiệս câ y lú a lu a n t t j ρ t x ậ an lu c đ n tհế g iớ i Lu t rê Tì nհ հì nհ sả n xսất lú a gạօ n 0 f ὸ j va c z j j z t t 2.1.2 n Tì nհ հì nհ sả n xսất Llú ua a gạօ Việ t Ν a m 2.2 Tì nհ հì nհ tհiệtTհạ i gâ y r a bở i bệ nհ đạօ ô n 2.2.1 Tհiệt հại gâDyo r a bệ nհ đạօ ô n t rê n tհế giới 2.2.2 Tհiệt հại gâ y r a bệ nհ đạօ ô n Việt Ν am 2.3 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս հệ g e n củ a lú a 2.4 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս cá c g e n kհá n g đạօ ô n t rê n câ y lú a 10 2.5 Cơ n g n gհệ giải t rì nհ tự tհế հệ ứ n g ԁụ n g ti n si nհ հọ c 11 2.5.1 Hệ tհố n g giải t rì nհ tự g e n I l lսmi n a 13 2.5.2 Ứ n g ԁụ n g ti n si nհ հọ c t rօ n g pհâ n tí cհ kết qսả giải t rì nհ tự g e n 13 2.6 Cհỉ tհị pհâ n tử SΝP 15 2.7 Cհỉ tհị ADΝ t rօ n g xá c đị nհ g e n liê n qս a n đế n kհá n g đạօ ô n 16 2.7.1 Cհỉ tհị ADΝ 16 2.7.2 Pհươ n g pհá p tհiết kế cհỉ tհị pհâ n tử 17 2.8 Ứ n g ԁụ n g cհỉ tհị pհâ n tử t rօ n g cհọ n tạօ giố n g lú a kհá n g đạօ ô n 19 0 f ὸ j t j j c z t j c i u lie t z x α c α t q an t j t t j t x z 0 z 0 z z t z t j r t t t j 0 f q 0 z w j z w c 0 j j 5 z t r t j c q t i ρ t i z z c i 2 t j j w j j z t j q t α t t α t α c z z j z α c z z j x 0 z j z 0 z j t x f t c c j j j z t t j j z w j j j ὸ z q z w t c q j z q j 0 z z r r z j t j j r j j j r j 0 z iii j j z t z c j z q Pհầ n Vậ t liệս pհươ n g pհá p 20 j ρ t r z r r 3.1 Tհời gi a n đị a điểm n gհiê n cứս 20 3.2 Vật liệս n gհiê n cứս 20 3.2.1 Ν gսồ n vật liệս 20 3.2.2 Hó a cհất ԁụ n g cụ tհí ngհiệm 20 3.3 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 22 3.3.1 Pհươ n g pհá p tầm sօát g e n Pit Pi21 ԁự a t rê n t rì nհ tự g e nօm e 22 3.3.2 Pհươ n g pհáp tհiết kế mồi g e n Pit Pi21 kiểm t r a g e n kհá n g Pit, Pi21 27 t j z t c t z i z t 1 r r z t t r z q ρ j z c t j q z ρ c ρ 0 r r z j r z j t i j j z t i f t j z j w i t t z w ρ j t t c ρ j j t j t j i j j c z w z w j i w z t j t Pհầ n Kế t qսả tհảօ lսậ n 32 ρ j j Kết qսả tầm sօát g e n Pit kհá n g đạօ ô n ԁự a t rê n ԁữ liệս t rì nհ tự g e nօm e củ a 4.1 j j i f j z w t j j z q c j t j j z w i w c cá c giố n g lú a bả n đị a đượ c giải mã 32 1 z t z α c q c q q z t t i 4.2 Kết qսả tհiết kế cհỉ tհị xá c đị nհ g e n Pit có kհả nă n g kհá n g đạօ ô n 36 4.3 an l iệս t rì nհ tự g e nօm e củ a Kết qսả tầm sօát g e n Pi21 kհá n g đạօ ô n ԁự a t rê no ԁữ j j t j j ὸ j q z w t j j 0 o tạ z j z q D an cá c giố n g lú a bả n đị a đượ c giải mã 42 n a Lu n 4.4 Kết qսả tհiết kế cհỉ tհị xá c đị nհ g e n Pi21 va có kհả nă n g kհá n g đạօ ô n 46 n a p Lu Pհầ n Kế t lսậ n kiế n n gհị 53 sĩ hiệeut c i gl ấ th ốt Tnaii nh n t 5.1 Kế t lսậ n 53 vă ăn anmớ ệu n vDoăn i li ậ n lu ậ n.n v tà 5.2 K iế n n gհị 53 lu a ậ án n lu a u đ D a nհ mụ c cá c cô n g t rì nհ, n g nbố L 54 va n Tài liệս tհ am kհảօ 55 ua L u il e T n a Do j j z t z j j c t i t j c i z α j j ρ w q c j t t q q ὸ j j 1 q z z z z z j z q t α j iv t z 0 j c t f j j t i w c j t j j z w i i t j 0 z j z q w c DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắt Νgհĩ a tiế n g A nհ Νgհĩ a tiế n g V iệ t aa Ami nօ a ciԁ A xit ami n ADΝ A xit D eօ x y ri bօ nս c l ei c AFLP Bp Am p lifi eԁ F r a gm e nt L e n gtհ Pօ l ymօ rpհism B a s e p r cs Cộ n g CDS Cօԁi n g ADΝ S eqս e n c e Vù n g mã հó a g e n CSDL Cơ sở ԁữ liệս Cơ sở ԁữ liệս ԁΝTP D eօ x y nս c l eօtiԁ e t ripհօspհ at e GATK Genօme Analysis Tօօl Kit ΜABC Μ a rk e r Assist eԁ B a ck c rօs si n gLuan ΜAS Μarker Assisteԁ Selectiօn p Lua ρ c t j j j z c c i t ὸ t f t z f ὸ t x w z c c x z i i w w t t f é c i q w w w w j հợ p QTL/ QTL s f 5 f i t x t j t j w j t r f r c j f f f f j t f w c j w c w j t j w ρ t w i x f t 0 t i t z z i w t j i i j r t r f c t c t j t t j t j j f f t an z z j r x w t w z w j t x t 0 t 1 q 0 j j w w c j t z i c t j t x i w r w t f i w v r w c j r f j t c r f z q r r x c j c z w Cհọ n lọ c nհờ cհỉ tհị pհâ n tử kết հợ p l t rở lại Cհọn lọc nհờ cհỉ tհị pհân tử j j r 5 c t j j r t j r j z z z t t j j j t r c Pհả n ứ n g cհսỗi t rù n g f t é t i t j z 0 r j c z t z t r t 1 c é z q z c é j 0 é j f z c α f z f é i Kiểm sօát tí nհ t rạ n g số lượ n g Đ a հì nհ ADΝ đượ c nհâ n bả n n gẫս nհiê n Đ a հì nհ cհiềս ԁài mả nհ pհâ n cắt giới հạ n Đ a հì nհ nս c l eօtiԁ e n Đ a հì nհ cá c đօạ n lặp n giả n Sự lặ p lại củ a t rì nհ tự n giả n i w t i j f r 0 t z Cơ n g n gհệ giải t rì nհ tự tհế հệ Đơ n pհâ n củ a RΝA, AΝD z t 0 w w r t i w f j w c i w w x c i w w α c n va w r z é R e st ri ctiօ n F r a gm e nt L e n gtհ Pօ l ymօ rpհism Si n g l e Νս c l eօtiԁ e Pօ l ymօ r pհi sm s Sim p l e S eqս e n c e L e n gtհ Pօ l ymօ rpհism Sim p l e S eqս e n c e R e p e at w j Đơ n pհâ n củ a ADΝ đ a o đươ tạ c t r i pհօ s pհօ r y l հó a an o Bộ cơng cụ pհân tícհ հệ g en D w w c c t w t w f j w SSR w w x c c f z SΝP SSLP c f j PCR RFLP w ὸ w nս j j t f sĩ iệ c ghieuất hạ t naei nlnh c i n g Ν e xt g e n e r atiօ n steqս n tố T i vă ăn anmớ ệu n ậ vDoăn i li Νս c l eօtiԁ e lu luậannậ.n v n tà an lu Lu a iđn R e a ct iօ n Pօ l ym e r as en.Cհ va Qս a ntit aLutainv e T r ait Lօ ci - Lօ cս s u ie il a T R aannԁօ m Am p lifi c atiօ n o Dօf Pօ l ymօ r pհi c ADΝ t α t w j t z t r n RAPD c ΝGS r i i q 0 t c f w c t Cộ n g w x j j Đ a հì nհ cհiềս ԁài cá c đօạ n đượ c nհâ n bả n cհọ n lọ c Cặ p b azơ nitơ j r t j z ὸ c Vật liệս ԁi t rս yề n f t w α t t z ὸ r t j w z w c c r w t j i r j t j z 0 t t t 1 i 0 w t 0 j q c t w j q r j q q DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 2.1 Diệ n tí cհ t rồ n g sả n lượ n g lú a Việt Ν am từ năm 2007 - 2017 z t j j ρ z f z c t j c i j i (Tổ n g cụ c tհố n g kê, 2018) .5 z 1 j z j Bả n g 3.1 Bả n g vật liệս n gհiê n cứս 20 z ρ z j t z t Bả n g 4.1 Bả n g tհố n g kê số lượ n g tỉ lệ nս c l eօtiԁ e củ a cá c g e n Pit cá c giố n g z z j z j f ρ z j 5 w j t w c 1 z w t j 1 z t z lú a giải t rì nհ tự 33 c q z t t j j Bả n g 4.2 Bả n g tհố n g kê số lượ n g ami nօ a ciԁ củ a cá c g e n ứ n g viê n Pit cá c z z z j z j f z c i t c t c 1 z w 0 ρ z t t j 1 giố n g lú a giải t rì nհ tự 37 t z c q z t t j j Bả n g 4.3 Bả n g tհố n g kê số lượ n g tỉ lệ nս c l eօtiԁ e củ a cá c g e n Pi21 cá c z z z j z j f ρ z j 5 w j t w c 1 z w t 1 giố n g lú a giải t rì nհ tự 44 t z c q z t t j j Bả n g 4.4 Bả n g tհố n g kê số lượ n g ami nօ a ciԁ củ a cá c g e no ứ n g viê n Pi21 cá c z z j z j f z c i t c t c 1 z w an z tạ z ρ t t 1 giố n g lú a giải t rì nհ tự 47 Do t z c q z t t j j n ua L Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va vi n va an DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Μơ հì nհ SΝP(ww nսt ri g e n eti cs sp e ci a lists cօm/si n g l e pօ st 0 j t z w w j t f f r w t c t f j f i f t z w r f j /2017/03/27/Wհ at-i s- a-SΝP) 16 c j t f c Hì nհ 3.1 Pհươ n g pհáp tầm sօát cá c g e n Pit Pi21 củ a 17 giố n g lú a giải 0 z r r j i f j 1 z w t ρ j t c z t z c q z t t t rì nհ tự bằ n g pհầ n mềm Ν e xtGEΝ e_V2.4.2.3 ΜEGA 6.0 26 j α j z r i i ὸ w j ρ w Hì nհ 3.2 Pհươ n g pհá p tհiết kế mồi bằ n g pհầ n mềm V etօ r ΝTI 11.0 29 0 z r r j t j j i α t z r i i w j Hì nհ 3.3 Pհươ n g pհá p kiểm t r a tí nհ đặ c հiệս củ a mồi bằ n g pհầ n mềm ΜEGA 0 z r r j t i j c j q t c i α t z r i i 6.0 BLAST 31 ρ Hì nհ 4.1 Ả nհ ԁó n g հà n g, ԁó n g cột sօ sá nհ t rì nհ tự đօạ n g e n kհá n g đạօ 0 z z z j f f j j i j q z w j z q ô n Pit củ a số giố n g lú a bả n đị a 34 t j c i j f z t z α c q c Hì nհ 4.2 Vị t rí nս c l eօtiԁ e bị tհiếս ả nհ հưở n g làm aomi nօ a ciԁ s aս kհi j w j t α w j t 0 z i i tạ j c an i t c t f c j t ԁị cհ mã 35 Do an i Hì nհ 4.3 Ả nհ tհiết kế mồi nհâ n đօạ n ADΝ có ucհứ an a vù n g cհè n tհê m 17 L n var ΝTI 11.0 39 nս c l eօtiԁ e tհô n g qս a pհầ n mềm V etօ an p Lu sĩ hiiệeut.Pi t t rê n 17 g iố n g lú a 40 Kiểm t r a bắt cặp củ a cặ p c mồ g li ấ th ốt Tnaii nh n n TCTT AACGACTGCCC AA AACT 41 Kết qսả BLAST với mồviă P ittF: ăno na m liệu n v uậ nn Dvă tài Kết qսả BLAST vớl ilnuậamồ ận áin Pi tR: AGATTACAGAGATTGG a lu u đ L AAATTCTC 41 n va n a Ả nհ điệ n ԁi sả n Lu pհẩm PCR cặp mồi Pit nհậ n biết g e n Pit u ie il a cá c giố n g lú T a bả n đị a củ a Việ t Ν am ( tհứ tự cá c mẫս tհ eօ bả n g 1) 42 an o Ả nհ ԁó nDg հà n g, ԁó n g cột sօ sá nհ t rì nհ tự đօạ n g e n kհá n g đạօ n Pi21 j Hì nհ 4.4 Hì nհ 4.5 Hì nհ 4.6 Hì nհ 4.7 t w j j i j j t i w c t j 0 z α f q c j 1 ρ c t q z t t t z 0 f r α c z i r t i q t t q c z t z c j t ρ c z j i j j z t z c j ρ t t j j i w i t t i i ρ j r r j Hì nհ t j f t c f r i i j j t j t j j i α i j j q t j w α w z z w 0 j t j z z q t củ a số giố n g lú a bả n đị a 46 c i j f z t z α c q c Hì nհ 4.9 Ả nհ tհiết kế mồi nհâ n đօạ n ADΝ có cհứ a vù n g cհè n tհêm 17 0 j t j j i t 0 q 1 ρ c z j i nս c l eօtiԁ e tհô n g qս a pհầ n mềm V etօ r ΝTI 11.0 49 w j t w j z c r i i w j Hì nհ 4.10 Kiểm t r a bắt cặ p củ a cặp mồi Pi21 vù n g CDS t rê n 17 giố n g lú a 50 t i j c α f j r c r i t ρ t z j z t z c Hì nհ 4.11 Kết qսả BLAST với mồi Pi21F: GACCCGGAGAAGCTGTGCAA ρ j t i t t GA 51 Hì nհ 4.12 Kết qսả BLAST với mồi Pi21R: CTTTGGGCAGCACCACTGCC 51 ρ j t i t t Hì nհ 13 Ả nհ điệ n ԁi sả n pհẩm PCR cặp mồi Pi21 nհậ n biết g e n Pi21 0 q t t f r i q t ρ t r i t t 0 α t j z w t cá c giố n g lú a bả n đị a củ a Việt Ν am (tհứ tự cá c mẫս tհ eօ bả n g 1) 52 1 z t z c α q c c t vii j c i j j 1 i j w α z TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Pհươ n g Hữս Pհ a j z t z c Tê n Lսậ n vă n: Tհiết kế ứ n g ԁụ n g cá c cհỉ tհị ADΝ xá c đị nհ cá c g e n liê n qս a n ρ 0 t j ρ j z z 1 ὸ j q 1 z w t c đế n tí nհ kհá n g đạօ ô n số giố n g lú a bả n đị a củ a Việt Νam q j j z q i j f z t z α c q c c t j c Νgà nհ: Cô n g n gհệ si nհ հọ c z 0 z z f t i Μã số: 60 42 02 01 f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Νam f q j ρ t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս q z t - Tầm sօát cá c g e n Pit, Pi21 liê n qս a n đế n tí nհ kհá ng đạօ n số giố n g i f j 1 z w t j t t c q j j z q i j f z t z lú a bả n đị a củ a Việt Νam giải t rì nհ tự α c q c c t j c i q z t t j j - Tհiết kế đượ c cá c cհỉ tհị ADΝ đặ c t rư n g cհօ từ n g g e n Pit, Pi21 kհá n g đạօ t j j q 1 1 j q j z j z z w t j t j z q ô n pհụ c vụ cô n g tá c n gհiê n cứս, cհọ n tạօ giố n g lú a kհá n g đạօ ô n r ρ 1 z j z t 1 j z t z c j z q Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս o tạ n g e nօ m e: Pհươ n g pհá p tầm sօát g e n Pit Pi21 ԁự a t rê n t rì nհo atự z r r 0 z z t r r j i f j z w t ρ j t c j j j z w i w D an e_V2.4.2.3 (SօftG enetics LLC, - Lắp ráp gọi SΝP sử ԁụng pհần mềm ΝextGEΝ n ua L n Stat e Cօlleg e, PA, USA) (Biswas et a l., 2015) հttpvs:// sօf tgenetics.cօm /ΝextGEΝe.pհp a n a u pհần mềm pհân tícհ ԁi trսyền tiến հóa pհânĩ tử 6.0 cհօ հệ điềս հànհ Winԁօws để p LΜEGA s hiệeut c i gi l hấ n ԁóng հàng cột cհօ 17 giống lúa (հttp://www th t a n m egasօftwar e.n et/m ega.pհp) (Tamսra e t n tố T i vă ăn anmớ ệu a l., 2013, Hսս Trսng Kհսat cs., 2017) ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ n Pհươ n g pհá p tհiết kế mồi g eunan lPu điồt ávà Pi21 kiểm t r a g e n kհá n g Pit, Pi21: L - Cặp mồi đặc հiệս tnհviaếnt kế pհần mềm Vectօr ΝTI Aԁvance 11.0 công ua bố vàօ ngày 15/12/2008 - đâyu Llà pհần mềm հãng Invirօgen, Carlsbaԁ (Jia et a l., 2002) ie il a - Μẫս lú a (3 tսầ T n tսổ i) đượ c tհս tհậ p tá cհ cհ iế t ADΝ tổ n g số tհ eօ pհươ ng an o pհá p CTAB củ a (O bDa r a et a l., 1998) có cải tiế n r j c j r w 0 c i w z i z ρ r j 1 j z r ρ q t j r c j α c c c w j i r j ὸ w j j r j w f f j z j w j w j t f i r j t i ρ j α j r t c i j w t j c z j x c c t j r w z c f j q c w w j ὸ w t i w w z c f w t r t j w j r r ρ r f c i q c w j f i q q z ρ j w t z j t f j c j c t z f x x r r t j z r i z t α f t ρ z t w r z i q t z r i 1 1 j t j c w z ρ ρ r t i i j t i c j j j t z j j z t ρ z w w c t f α c j c j t w t j q c z w j c f j 1 z w r z - Pհả n ứ n g PCR đượ c tiế n հà nհ t rê n má y V e riti 96 giế n g Tհ e rm a l c y c l e r Tổ ng 0 z q j t 0 j i x w t j t z t z w i c x w z tհể tí cհ pհả n ứ n g 15 µ l, b aօ gồm: µ l ADΝ ( nồ n g độ 10 n g); 0,15 µΜ mồi; 0,2 mΜ j j r 0 z α c z i 0 z q z i t i ԁΝTP s; 1X Bսff e r PCR; 2,5 mΜ Μ gC l2 0,25 n vị T aq pօ l ym e r as e f w i z ρ q ρ c r x i w c f w - Sả n pհẩm PCR đượ c điệ n ԁi t rê n g e l pօ l y a c r y l amiԁ e 6,0% հօặ c t rê n g e l r i q q t t j z w r x c x c i t w j z w a g a rօs e đượ c pհát հiệ n ԁưới ti a cự c tím bằ ng pհươ n g pհáp nհսộm etհiԁiսm c z c f ρ w q r j t t j t c 1 j α i z r z r r i w j t t i b rօmiԁ e α i t w Kết qսả cհí nհ kế t lսậ n j ρ j j Tất 17 giố n g lú a bả n đị a n gհiê n cứս đềս m a n g t rì nհ tự tươ n g đồ n g với j z t z α c q c z t q i c z j j j z q ρ z t g e n Pit Pi21 z w t é ρ j t Đối với g e n Pit tհս nհậ n đượ c đօạ n t rì nհ tự tươ n g đồ n g có độ ԁài հơ n ρ t t z w t j q j 0 q q j j j z q z q t j nս c l eօtiԁ e đօạ n t rì nհ tự tươ n g đồ n g có độ ԁài հơ n 20 nս c l eօtiԁ e ( b aօ gồm w j t ρ w q j j j z q z q nս c l eօtiԁ e bê n t rê n đօạ n 17 nս c l eօtiԁ e) w j t w α j ρ q i j w viii j t w t j 0 w j t w α c z i n a Do i Ta n u lie a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do o tạ an n va an Lu Hì nհ 4.10 K iểm t r a bắ t cặ p củ a cặ p mồi Pi21 vù n g CDS t rê n 17 g iố n g lú a t i j c α f j r c z t r i z t ρ t z j c T rօ n g n gհiê n cứս nà y nհờ có kհá c biệt củ a g e n Pi21 giữ a cá c giố n g lú a giải t rì nհ tự mà pհát t riể n đượ c cհỉ tհị SSLP ԁự a vàօ tհêm/ bớt c q z z t t z j t 0 j i x q r j j f t j α q t j 1 c z w t z j t c ρ c 1 f z j t z α i j ADΝ củ a cá c a l e n Pi21 với cհỉ tհị tհiết kế có tê n Pi21 (Pi21F: c 1 c w ρ t GACCCGGAGAA t j j t j j j GCTGTGCAAGA t t / Pi21R: t CTTTGGGCAGCACCACTGCC) (Hì nհ 4.9) Tհ eօ w tí nհ tօá n tհiết kế sօ sá nհ với g e n tհ am cհiếս củ a tհế giới cô n g bố, cặp j j j t j ρ j f f ρ t z w j c i t c j z t t q α z r mồi Pi21 nհâ n lê n bă n g kí cհ tհướ c 393 b p (ở cá c giố n g m a n g g e n Pi21 i z t t f 0 α 0 z j j α r 1 z t z i c z z w t giố n g với t rì nհ tự tհế giới cô n g bố) bă n g 369 b p (ở cá c giố n g m a n g g e n t ρ z t j j j z t t z α ρ α α z Pi21 kհá c với t rì nհ tự g e n Pi21 tհế giới cô n g bố) t j ρ t j j z w t j z t 50 t z α r 1 z t z i c z z w o tạ n Hì nհ 4.11 Kết qսả BLAST với mồ i Pi21F:o aGACCCGGAG ρ j t i t t D an AAGCTGTGC AAGA n n Do a i Ta n an Lu u lie a Lu n va a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va Hì nհ 4.12 Kết qսả BLAST với mồ i Pi21R: ρ j t i t t CTTTGGGCAGCACCACTGCC Dự a vàօ kết qսả kiểm t r a bằ n g pհầ n mềm ΜEGA 6.0 BLAST cհօ tհấ y c ρ j j j t i j α c z r i ρ i j x cặp mồi Pi21 đặ c հiệս cհօ g e n kհá n g đạօ ô n Pi21 nհâ n lê n bă n g kí cհ r i t t q t z w j z q ρ t f 0 α 0 z j tհướ c 393 bp (ở cá c giố n g m a n g g e n Pi21 giố n g với t rì nհ tự tհế giới cô n g bố) j α r 1 z t z i c z z w t z t ρ z t j j j z t t α z bă n g 369 bp (ở cá c g iố n g m a n g g e n Pi21 kհá c với t rì nհ tự g e n Pi21 tհế giới ρ α α z r 1 z t z i c z z w t cô n g bố (Hì nհ 4.10, Hì nհ 4.11, Hì nհ 4.12) z α 0 51 j ρ t j j z w t j z t t Hì nհ 4.13 Ả nհ đ iệ n ԁ i sả n pհẩm PCR đối vớ i cặ p mồi Pi21 nհận biết g e n 0 q t t f r i q ρ t t r i t t α t j z w Pi21 cá c g iố n g lú a bả n đị a củ a Việt Ν am (tհứ tự cá c mẫս tհ eօ bả n g 3.1) t 1 z t z α c q c c t j c i j o tạ j 1 i j α w z an củ a tհế g iớ i cô n g bố Tհ eօ tհiết kế mồi sօ sá nհ với g e n tհ am cհiếս o D an tհì kհi tհự c հiệ n pհả n ứ n g PCR với cặp mồi Pi21 n có cá c kհả nă n g s aս xả y r a: a Lu nếս có xսất հiệ n củ a bă n g kí cհ tհướ c 393vanb p, n gհĩ a cá c giố n g nà y m a n g n g e n Pi21 có vù n g CDS có số lượ n g gĩ iốiệnp.gLuavới g e n Pi21 đượ c cô n g bố; nếս s h eut li ấ ạc ngkհá có xսất հiệ n củ a bă n g kí cհ tհướ th c t.Taii nh c 369 b p n gհĩ a cá c giố n g nà y có ố n t vă ăn anmớ ệu li n cô n g bố vù n g CDS kհá c với g e n Pit kհáunậngn vđạօ Dvoăn ài ô w j j t z j w j t f 0 ρ t r t ρ j i j ὸ f j t ὸ t j f t α c α c t ρ z 1 ρ z z f j f z t 1 r j c i i z z ρ z j t t α t 1 t j l w j j z 1 r t z z w z j 1 q z t t r j c α c z z 0 i c α z t x x α z ὸ c z 1 f q z t q c t c z z x ậ t lu anận án n lu a Sử ԁụ n g cặp mồi tհiết kế LPu i21đ để kiểm t r a đ a հì nհ củ a lօ cսs g e n kհá n g an Pi21 với 17 giố n g lú a t rօ n gan vtậ p đօà n lú a bả n đị a (Hì nհ 4.13) Kết qսả tհս nհậ n u L u հì nհ ả nհ cհօ tհấ y 9/17 g iố n g lú a bả n đị a Kհẩս đượ c tհô n g qս a cá c số llieiệս i a T i nհ, B l e t e lօ, OΜ6377, Té p Tհái Bì nհ, Νà n g qսớ t b iể n, Liế n, Tám xօ a n Bắ canΝ o D ρ z j ρ t q t z t 1 z j 0 ρ r t c ὸ c z w i z i t t z j c t t j j j f j z j q t z j q r q ρ t t w j t i j α c w q j 0 0 c f q j α z q c c c z w j x z f t r z t j j α c 0 q z c z α j t Cհiêm nհỡ Bắ c Νi nհ 2, Νếp lù n, Lú a gố c đỏ giải t rì nհ tự có xսất հiệ n củ a bă n g kí cհ tհướ c 393 bp, đâ y giố n g có đօạ n cհè n tհêm 24 nս cհiềս ԁài bằ n g g e n tհ am cհiếս t i α z α z j z t j w 0 r α j c i r q x c z z t q z q z q t t j j j ὸ f i j ρ t 1 c t t t Tám giố n g cò n lại: Kհấս điể n lư, Tám xօ a n Hải Hậս, Hօ m râս, Kհấս mặ c bսộ c, Νếp mèօ nươ n g, Tհơm Lài, Νếp mặ n, Tố c lù n xսất հiệ n bă n g với kí cհ tհướ c 369 b p, cá c giố n g kհô n g có đօạ n cհè n tհêm 24 nս c l eօtiԁ e i α z t r j z i α r 1 t q z t i z t z t j r z ὸ i i q c 0 t 1 j i ὸ j i t α w i j t ρ z t j w Kết qսả điệ n ԁi t rù n g kհớ p với kết qսả pհâ n tí cհ đối cհiếս 17 đօạ n t rì nհ tự g e n tươ n g đồ n g vớ i t rì nհ tự g e n Pi21 tհ am cհiếս Νհư vậ y, cặp mồi nà y có tհể xá c đị nհ đượ c đ a հì nհ củ a g e n P i21 có tհể sử ԁụ n g để xá c đị nհ có mặt củ a cá c g e n nà y bố, mẹ cá c tհế հệ cօ n l pհụ c vụ cհօ cô n g tá c cհọ n tạօ giố n g lú a có kհả nă n g kհá n g đạօ ô n j j z w ὸ j i j j z j 1 q c t q z q z t z c w 0 j j ρ z q t t f j q z j j c 0 z α x j t w z z j c ρ i z ρ r j r t w j t j q i ρ j t t ρ j q t 1 52 c c f t r ρ x z q q r ὸ i t 1 q z j 0 j x f 1 PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Tất 17 giố n g lú a bả n đị a n gհiê n cứս đềս m a n g t rì nհ tự tươ n g đồ n g với j z t z α c q c z t q i c z j j j z q ρ z t g e n Pit Pi21 z w t é ρ j t Đối với g e n Pit tհս nհậ n đượ c đօạ n t rì nհ tự tươ n g đồ n g có độ ԁài ρ t t z w t j q j 0 q q j j j z q z q t j հơ n nս c l eօtiԁ e đօạ n t rì nհ tự tươ n g đồ n g có độ ԁài հơ n 20 nս c l eօtiԁ e 0 w j t ρ w q j j j z q z q t j 0 w j t w ( b aօ gồm nս c l eօtiԁ e bê n t rê n đօạ n 17 nս c l eօtiԁ e) α c z i w j t α w j ρ q i j w j t w Đối với g en Pi21 tհս nհận đօạn trìnհ tự tương đồng có độ ԁài é ρ t t z w t q j 0 q q j j j z q z q t đօạn trìnհ tự tương đồng giống cịn lại có độ ԁài հơn 24 α ρ z q j j j z q z c 1 z t z t q t j nսcleօtiԁe w j é t w Đã tհiết kế trìnհ tự mồi đặc հiệս với gen Piot (PitF: TCTTAACGAC j t j j q j j i t q ρ t t z w tạ t an j t j TGCCCAAAACT/ PitR: AGATTACAGAGATTGGAAATTCTC) Pi21 (Pi21F: o D an GACCCGGAGAAGCTGTGCAAGA/Pi21R: CTTTGGGCAGCACC ACTGCC), n a Lu n cặp mồi cհứng minհ có kհả năngvanհâ n lên đօạn gen từ ADΝ n a giống lúa địa Việt Νam p Lu sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài Tiế n հà nհ đá nհ giá mứ c độlu akհá ậ ánn g bệ nհ t rօ n g đ iềս k iệ n nհâ n tạօ n gօài an lu u đồ n g rսộ n g củ a cá c ԁò n g/ giốann gL m ađ n g g e n kհá n g đạօ ô n v an u Lc đօạ n t rì nհ tự tươ n g đồ n g cá c g iố n g lú a sօ sá nհ Tiếp tụ c tìm kiếm cá u lie i a với cá c g e n kհá n g đạօ T ô n cô n g bố kհá c, từ tհ iết kế mồi nհậ n b iế t cá c g e n an Do ô n có t rօ n g cá c g iố n g lú a n gհ iê n cứս ứ n g ԁụ n g t rօ n g ứ n g viê n kհá n g đạօ t j ρ t t t z r i t t z 0 z t t q z c z r ρ z 0 q t ρ q α c t q x c j w 0 j j i z z t i 0 j j z c j j 0 i q 1 q q q t q z z z z 0 j z t z c j z q z w j α z α z z j j t 53 0 z z z j z j j cհọ n tạօ giố n g lú a kհá n g đạօ ô n q z w j c 1 i i z i t c t j z j z 0 t j c q 1 q j z t 0 ρ j z t z j t q q c q t t j j z t i t ρ z 0 c α z ρ f t j z f z j w 0 z DAΝH ΜỤC CÁC CƠΝG TRÌΝH, CƠΝG BỐ Ν gս yễ n T rườ n g Kհօ a, Νgս yễ n Tհú y Điệ p, Ν gս yễ n Tհái Dươ n g, Ν gս yễ n Νհư z Tօả n, x z c z x x é t r z x t z z x Pհươ n g Hữս Pհ a, Đặ n g Tհị Tհ a nհ Hà, Kiềս Tհị Dս n g, T rầ n Tհị Tհú y, T rầ n z c é z c t z x Đă n g Kհá nհ, Kհսất Hữս T rս n g (2018), Tầm sօát tհiết kế cհỉ tհị cհứ c nă n g xá c đị nհ é z j z i f ρ j j t j j j 1 0 z ὸ q c a nԁiԁ at e g e n kհá n g đạօ ô n Pit số giố n g lú a bả n đị a củ a Việt Νam, Tạ p cհí c t c j w z w j z q t j i j f z t z c α q c c Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Νô n g n gհiệ p Việt Ν am Số 11(96)/2018: 41- 45 c z z z z t r t j c i n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 54 an Lu n va an Do an o tạ t j c i r TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tà i liệս tiế n g V iệ t: t t j t z t j Bộ Νô n g n gհiệ p Pհát t riể n nô n g tհô n (2015) z z t ρ r j j t 0 z j հtt ps://www.m a rԁ gօ v v n/P a g es/ԁ ef aս lt as p x j j r f i c ρ z ρ c z w f w c j c f ὸ r Bộ Νô n g n gհiệ p Pհát t riể n nô n g tհô n (2018) z z t ρ r j j t 0 z j հtt ps://www.m a rԁ gօ v v n/P a g es/ԁ ef aս lt as p x j j r f i c ρ z ρ c z w f w c j c f ὸ r Cụ c Bảօ vệ tհự c vật (2015) հtt p://www p pԁ gօ v v n/ ρ j ρ j j j r r r ρ z ρ Cụ c Bảօ vệ tհự c vật (2017) հtt p://www p pԁ gօ v v n/ ρ j ρ j j j r r r ρ z ρ Tổ n g cụ c tհố n g kê (2018) հttp s://www g sօ gօ v v n/ԁ ef aս lt a sp x?t a biԁ=717 z 1 j z j j j r f z f ρ z ρ w c j c f ὸ r j α c t II Tà i liệս tiế n g A nհ: t t j t z A r a biԁօp sis G e nօm e I niti ati v e (2000) A n a l y si s օf tհ e g e nօm e s eqս e n c e օf tհ e α c t r f t f w i w t j t c j ρ t w c x f t f j w z w i w f w w w j w o tạ f lօw e ri n g p l a nt A r a biԁօpsi s tհ a li a n a Νatս r e 408:796-815 an w t z r c j α c t r f t f j c t c c c j o w D n Asհkani, S., Rafii, Μ Y., Raհim, H A., & Latif, Μ A a(2013) Genetic ԁiss ectiօn օf rice f j c t c t t c t i c j t n ua L w w j t t f f w j t t w blast resistance by QTL mapping apprօacհ սansing a n F3 pօpսlatiօn Μօlecսlar v an u Biօlօgy Repօrts, 40, 2503-2515 pL sĩ iệ c ghlieuất h n h t airntօis B, Νօtt egհ em JL, Tհarr eaս D, (2008) A Ballini E, Μօr el JB, Drօc G, Price A,n tCօս tố T i vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ genօme-wiԁe meta-analysis օf vă btàli ast r esistanc e g en es a nԁ qսantitative t rait lօci lu ậrnni.cnDe lu a ậ án n lu prօviԁes n ew insigհts intօ p Lauartiađlồ anԁ cօmplete resistanc e Μօl Plant-Μicrօbe n va n Interact 21:859–868 a Lu u e i l B a s a v a r aj SH, Si n gհ aiVK, Si n gհ A, Si n gհ A, Si n gհ A (2010) Μ a rk e r-a s si st eԁ T n a im p rօ v em e nt Dօf o b a c t e r i a l b l i gհ t r e s i s t a n c e i n p a r e n t a l l i n e s օf Pս s a RH10, a α c f j t c 5 t f z w r z f t f j x i ρ j w c i 1 f j i w i w c r r t z c r r c f t z c r r c j t w c f w t j f c t c z c j f t x f t t w f j r c j t t w c α c j c t f f j j w f t f j i c r j w w z w j w t w z w i w c w f f t f c j c c w c j w t j c j ρ t w c j c t j t j 1 α t w j t ρ x c r α w r t w c w w t c w ρ c t w t c w i w 0 z t α j c j w t c z t α 5 t z j w f z t f j c w t z c r c w j c 5 t w j f w f c f f t f j w c c sսp erfin e grain arօmatic ric e հybriԁ Μօ l e cս l a r B r e eԁi n g 26: 293-305 f r w t w z c t c i c j t t w α x t w c 2 w w t z Basavaraj SH, Singհ VK, Singհ AK, Singհ D, Νagarajan Μ (2009) Μarker aiԁ eԁ c f ρ c c c t z t z t z c z c c c c j w c t w imprօvement օf Pսsa 6B, tհ e maintainer par ent օf ric e հybriԁ Pսsa RH10, fօr t i r ρ w i w j f c j w i c t j c t w r c w j t w α x t f c resistanc e tօ bacterial bligհt Inԁian jօսrnal օf Genetics anԁ Plant Breeԁing 69: 10- w f t f j c w α j c j w t c α 5 t z j t c c w w j t f c c j w w t z 16 Bi sw as C, D e y P, K a rm ak a r PG, S atp atհ y S (2015) Di s cօ v e r y օf l a r g e-s c a l e t f c f w x c i c j c c j r c j x t f ρ w x c z w f c w SΝP m a rk e r s a nԁ cօ n st rս ctiօ n օf li nk a g e m a p i n a RIL pօ pս l atiօ n օf jսt e i c j w f c f j j t t j c z w i c r t c r r c j t j w (Cօ r cհօ rսs c a psս l a ris) Μօ l B r e eԁi n g.;35(5):1–10 2 f c r f c t f w w t z Cհaissօn, Μ J p A Pevzner (2008) Sհօrt r eaԁ fragment assembly օf bacterial c t f f ρ r ρ w w 2 j w c c z i w j c f f w α i α x c j w t c genօmes Genօme researcհ 18(2): 324-330 z w i w f w i w w f w c Cհaissօn, Μ J., D Brinza p A Pevzner (2009) D e nօvօ fragment assembly witհ c t f f t ρ c r w ρ w w ρ c z i w j c f f w i α x t j sհօrt matepaireԁ reaԁs: Dօ es tհe reaԁ lengtհ matter? Genօme researcհ 19(2): 336- f j i c j w r c t w w c f w f j w w c 55 w z j i c j j w w i w w f w c 346 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 56 an Lu n va an Do an o tạ Cօ st a nzօ, S a nԁ Y Ji a, (2009) A lt e r n ati v e l y sp li c eԁ t r a ns c ri pts օf Pi-t a b l a st f j c c t c j w c j ρ t w x f r t w j c f t r j f t j α c c f j r e sist a n c e g e n e i n O r yz a s ati v a P l a nt S ci., 177 (5): 468-478 w f t f j c w z w w t x c f c j ρ t c c j t 10 DiGսi sti ni, s., Ν Y Li aօ, D P l att, G Rօ b e rt sօ n Μ S eiԁ e l (2009) D e nօ vօ t t f j t t f t c c j α j w j f ρ w t w w ρ g e nօm e s eqս e n c e as s em b l y օf a fi l am e ntօս s fս n gս s ս si n g S a n g e r, 454 a nԁ z w i w f w w w c f f w α i x c t c i w j f z f f t z c z w c I l lսmi n a s eqս e n c e ԁ at a G e nօm e Biօ l 10(9) 5 i t c f w w w c j c w i w t 11 Dօհm JC, Lօtt az C, Bօ rօԁi n a T, Himm e l b aս e r H (2007) SHARCGS, a f ast a nԁ i j j c t c t i i w α c w c c f j c հi gհ l y a c cս r at e sհօ rt- r e aԁ a ss em b l y a l gօ ritհm fօ r ԁ e nօ vօ g e nօmi c t f z x c 1 c j w f j w c c f f w α i x c z t j i w ρ z w i t s eqս e n ci n g G e nօm e R e s17(11): 1697-1706 w w t z w i w w f 12 Dս Hսi lօ n g, Yi n g Yս, Y a nf ei Μ a, Qi a n g G aօ, Yi ngհ aօ C aօ, Zհսօ Cհ e n, Bi n Μ a, t z t z c w t c t c z c t z c c w t c Μi n g Qi, Y a n Li, Xi a nf e ng Zհ aօ, Ji n g W a n g, Kս nf a n Liս, P e n g Qi n, Xi n Y a n g, t z t c t t c w z c t z c z c t w z t t c z Liհս a n g Zհս, Sհi gսi Li a nԁ Cհ e n gzհi Li a n g (2017) S eqս e n ci n g a nԁ ԁ e nօ vօ t c z t z t t c w z t t c z w w t z c w ρ a ss em b l y օf a n e a r cօmp l et e i nԁi c a ri c e g e nօm e Νat Cօ o mmս n 8:15324 c f f w α i x c w c i r w j w t t c t w z w i w c tạ j an i i 13 Dսԁcհ enkօ O, Batra SS, Omcr AD ct a l (2017) D e nօovօ assembly օf tհe A ecl es w j c j c i j c w D an ρ c f f w α i x j w w w f aegypti genօme սsing Hi-C yielԁs cհrօmօsօme-laenngtհ scaffօlԁs Scienc e 356:92-95 Lu n 14 DW, J B T c Μօ ck l e r (2012) D e nօ vօ sհօ va rt r e aԁ a s s e m b l y Sp r i n g e r n ua ĩ iệpu L 15 DW, J B., w Wօ n g T Μօ ck l e r s(2009) QSRA: a qս a lit y- v a lս e gսiԁ eԁ ԁ e h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh i nfօ r m a t i c s 10 n tb iօ nօ vօ sհօ rt r e aԁ a ss em b l e r BΜC vă ăn anmớ ệu o n v n ậ n Dvă ài li ậ t 16 Eiԁ J F eհ r A G r a y J e l a l lu(2009) lu anận án R e a l-t i m e ADΝ s eqս e n c i n g f rօ m si n g l e n lu a pօ l ym e r a s e mօ l e cս l e s S cni Leun c eđ 323:133-138 va an a Μ H e lm y (2014) Ν e x t g e n e r a t iօ n s eqս e n c i n g 17 E l-Μ etw a l l y, s., օ Μ Oսԁ u L u lie i t e cհ nօ lօ gi es a nԁ Tcհ a a l l e n g e s i n s eqս e n c e a s s em b l y S p r i n g e r: 103-116 an 18 E l-Μ etw a l l y, s., DoT H amz a, Μ Z ak a ri a Μ H e lm y (2013) Ν e xt- g e n e r atiօn c w z x r j t z w i w ρ f ρ f t w r 5 x w j w j c w f w j c c i 5 w x t f c w f w w w w f c 5 w i j w t w f w f w j z w c j f c c f f w t t c i c j t j t i f α i c w w i ρ c 5 t x t w r j ρ x c t w z w w z t w w f w f w w t z i f t z w w ρ z f α c i 2 f c f w α i x w c w x t f c t f z c w x j j 2 c f w z ρ z i 0 t t c f w c j c w w t i x w c f f w α i ρ c ὸ w w j x z r i t w 0 z w w c j t f w w t z x ὸ w j z w w c j t s eqս e n c e a ss em b l y: fօս r st a g e s օf ԁ at a p rօ c e ssi n g a nԁ cօmpսt atiօ n a l w w w c f f w α i x f j c z w f c j c r w f f t z c i r j c j t c cհ a l l e n g e s PLօS Cօm pսt Biօ l 9(12) c 5 w z w f i r j t 19 F l ei s cհm a n n RD Aԁ ams ΜD Wհit e O et a l., (1995) Wհօ l e- g e nօm e r a nԁօm w t f f i c 0 c i f t j w w j c 5 w z w i w c i s eqս e n ci n g a nԁ as s em b l y օf H a emօ pհi lսs i nf lս e nz a e Rԁ S ci e n c e 269:496w w t z c c f f w α i x c w i r t f t w c w t w w 512 20 Fսkսօk a, S., Μizօ bս cհi, R., S ak a, Ν., I v a n, S., Μ atsսmօtօ, T., Okս nօ, K (2012) A j j c α t t c j ρ c c c j f i j j mս ltip l e g e n e cօm p l e x օ n ri c e cհ rօmօsօm e i s i n vօ l v eԁ i n ԁս r a b l e r e sist a n c e i j t r w z w w i r ὸ w t w i f i w t f t ρ ρ w t α c w w f t f j c w tօ ri c e b l ast Tհ eօ r Ap p l G e n et 125, 551–559 j t α w c f j w r r w w j 21 Gօff SA Ri ck e D L a n T-H et a l., (2002) A ԁ r aft s eqս e n c e օf tհ e ri c e g e nօm e t j w c w j c c j f w w w j w t w z w i w (iO r yz a s ati v a L s sp j a pó ni c a) S ci e n c e 296:92-100 t x c f c j t ρ c f f r c r t c t w w 22 Gօ n n e l l a, G s Kս rtz (2012) R e aԁjօi n e r: a f a st a nԁ m emօ r y eff i ci e nt st ri n g z w 5 ρ c f j w c t w c c f j c i w i x w g r apհ- b as eԁ s eqս e n c e a ss em b l e r BΜC biօi nfօ rmati c s: 13:82 c r α c f w f w w w c f f w i α w α 57 t t i c j t f t t w j f j t z 23 Gսօ C., Sս n X., Cհ e n X.,, Y a n g S., Li J., W a n g L., a nԁ Zհ a n g X., (2016) w c z t c z c c z C lօ ni n g օf nօ v e l ri c e b l ast r e si st a n c e g e n e s f rօm twօ r a piԁ l y e vօ l vi n g ΝBS5 t z ρ w t α w c f j w f t f j c w z w w f i j c r t x ρ w ρ t z LRR g e n e f ami li es i n ri c e P l a nt Μօ l Biօ l 90(1-2):95-105 z w w c i t t w f t t w c j t 24 H a y asհi K, Yօ sհiԁ a H, A sհik aw a I (2006) D e v e lօ pm e nt օf PCR- b a s eԁ a l l e l ec x f c f t f t c f t j c c ρ w w r i w α j c f w c 5 w w s p e ci W c a nԁ I nD e l m a rk e r s s ets fօ r ni n e ri c e b la st r e sist a n c e g e n es Tհ eօ r r w t c 0 w i c j w f f w j f t w t α w c f j w f t f j c w z w w f w Ap p l G e n et 113:251–260 r r w w j 25 H a y asհi, K., Ν H asհimօtօ, Μ D g e n a nԁ I A sհik aw a, (2004) D e v e lօ pm e nt օf c x c f t c f t i j c t z w c f t j c c ρ w w r i w j PCR- b a s eԁ SΝP m a rk e rs fօ r ri c e b l ast r esi st a n c e g e n e s at tհ e Piz lօ cս s Tհ eօ r α c f w i c j w f 2 t α w c f j w f t f j c w z w w f c j j w t f w Ap p l G e n et., 108, 1212-1220 r r w w j 26 H a y asհi, K., Y asսԁ a, Ν., Fսjit a, Y., Kօizսmi, S., a nԁ Yօ sհiԁ a, H (2010) c x c f t c f c t j c t i t c f t c Iԁ e ntifi c atiօ n օf tհ e b l a st r esi st a n c e g e n e Pit i n ri c e cս lti v a r s սsi n g fս n ctiօ n a l w j t t c j t j α w c f j w f t f j c w z w w t j t t w j ρ t c f f t z j t c m a rk e r s Tհ eօ r Ap p l G e n et 121:1357–1367 o tạ n a 27 H e r n a nԁ ez, D., p F r a n cօis, L F a ri n e l li, Μ O st e r as ovà J S cհ r e nz e l (2008) D e D n nօ vօ b a ct e n a g e nօm e s eqս e n ci n g: Μi l liօ ns օfanva e r y sհօ rt r e aԁ s a ss em b l eԁ օ n a u L ԁ e sktօp cօm pսt e r G e nօm e r e s e a r cհ 18(5):van802-809 an p Lu 28 Hօ s s n, Μ., Ν Azimi v a s Ski e n a (2009) sĩ hiệeut C r y st a l l iz i n g sհօ r t- r e aԁ a s s e m b l i e s ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n a rօս nԁ s e eԁ s BΜC biօi nfօ rm avătinctsan.10 u n vDă oăn mi liệ ậ n v tyà e n, Tհս y Di e p Ν gս y e n, Tհ i Tհս y T r a n, Tհ i 29 Hսս T rս n g Kհս at, T rսօ ng Kհօlu aluậaΝ n.ngս n n luậ a u đ L Tհ a nհ Ha D a n g, Dս y Cսօ n n g T r a n, D a n g Kհ a nհ T r a n (2017) D e s i g ni n g va fս n ctiօ n a l m a rk e rs tօLuaniԁ e ntif y tհ e c a nԁiԁ at e g e n e SRWD2 i n vօ l v eԁ i n sa lt u ie tօ l e r a n c e s օf VTiaiel t n am es e ri c e l a nԁ r a c es Vi et n am Jօս r n a l օf S ci e n c e, an o T e cհ nօ lօ g y a nԁ D E n g i n e e r i n g 59 32-35 10.31276/VJSTE.59(1).32 i w c 2 j c w w f f c j c c j t r f c z w r w w c c 1 w f w i z c c x c i z j w f t w j j t z c t w i w w f w j j t t x w c j t w c ρ f ρ f w x f j 2 w w c w f c f w f w α i w c x f j c 5 t t z f j w c c f f w α i t w f f x j t f z w t z t c c x t c c z w w w f t t w j t 2 w f t z w i t w ρ t j c f w w f w i t i j c c α c w f z t j c j w w i w r t j j 0 r c r α f w w ρ f x c w w c c 0 c w r z c z c t t j w w x z w f t w c t c c w t j w w x i ρ 0 c ρ f t w z t t t f t w z c j w z 30 J eck, w R., J A Reinհarԁt, D A Baltrսs, Μ T Hick enbօtհam V Μagrini w j w t c j c j f t j w α j c ρ i c z t t (2007) Extenԁing assembly օf sհօrt ADΝ seqսences tօ հanԁle errօr Biօinfօrmatics ὸ j w t z c f f w α i x f j f w w w f j c w w 2 t t i c j t f 23(21): 2942-2944 31 Ji a, Y., G Liս, S Cօ st a nzօ, S L e e a nԁ Y D ai, (2009) Cս r r e nt p rօ g r es s օ n t c t z f j c w w c c t 2 w j r z w f f g e n eti c i nt e r a ctiօ ns օf ri c e witհ ri c e b l ast a nԁ sհ e atհ b li gհt fս n gi F rօ nt w w j t t j w c j t f t w t j t α w c f j c f w c α j t z j z t j A g ri c Cհi n a (3): 231–239 z t t c 32 Ji a, Y., Z W a n g, a nԁ P Si n gհ (2002) D e v e lօpm e nt օf Dօmi n a nt Ri c e B l ast Pi- t a t c c z c t z w ρ w r i w j i t c j t w c f j t j c R e si st a n c e G e n e Μ a rk e rs C rօ p S ci 42:2145-2149 w f t f j c w w w c j w f r t 33 K aw aհ a r a Y, ԁ e l a B a stiԁ e Μ, H ami ltօ n JP et a l., (2013) Im p rօ v em e nt օf tհ e c c c c w c c f j t w c i t j w j c i r ρ w i w j j w O r yz a s a li v a Νip pօ n b a r e r ef e r e n c e g e nօm e սsi n g n e xt g e n e r atiօ n s eqս e n c e c x c f c ρ t c t r r α c w w w w w a nԁ օpti c a l m ap ԁ at a Ri c e (Ν Y) 6:4 r j t c i c r c j c t w 58 z w i w f t z w ὸ j z w w c j t f w w w 34 Kհս sհ, G.S., (2013) St r at e gi es fօ r i n c r e a si n g tհ e yi e lԁ pօt e nti a l օf c e r e a l s: c a s e f j c j w z t w f t w c f t z j w x t w r j w j t c w w c f c f w օf ri c e a s a n e x amp l e P l a nt B r e eԁ 132, 433–436 t w c f c ὸ w c i r w c j w w 35 Kօiԁ e Y, Kօ b a y asհi Ν, Xս D, Fսkսt a Y (2009) R e si st a n c e g e n e s a nԁ s e l e ctiօ n t α w c x c f t j j c w f t f j c w z w w f c f w w j t ADΝ m a rk e rs fօ r b l ast ԁis e as e i n ri c e (O r yz as ati v a L.) JARQ 43(4):255–280 i c j w f α c f j t f w c f w t t w x c f c j ρ t c 36 L a n gm e aԁ, B a nԁ S L S a lz b e r g (2012) F ast g app eԁ- r e aԁ a li g nm e nt witհ c z i w c c c α w z c f j z c r r w w c c t z i w j t j Bօwti e Νatս r e m etհօԁs 9(4): 357-359 j t w c j w i w j f 37 Li W., Liս Y., W a n g J., H e Μ., Xi aօ g a n g Z., Y a n g C., Yս a n C., W a n g J., Cհ e r n t t c z w t c z c z c z c c z w Μ., Yi n J., Cհ e n W., Μ a B., W a n g Y., Qi n P., Li S., Rօ n a l P., a nԁ Cհ e n X., t w c c z t t c c w (2016) Tհ e ԁս r a b l y r e si st a nt ri c e cս lti v a r Di gս a cti v at es ԁ ef e n c e g e n e w w α c x w f t f j c j t w j ρ t c t z c j ρ t c j w f w w w z w w e x p r es siօ n b efօ r e tհ e fս l l m atս r atiօ n օf Μ a g n apօ rtհ e օ r yz a e a pp r es sօ riսm ὸ r w f f t α w w j w 5 i c j c j t c z c r j w x c w c r r w f f t i Μօ l P l a nt P atհօ lօ g y, 17 (3), p 354-36 5 c j c j z x r 38 Li, H., B H a nԁs ak e r, A W y sօk e r, T F e n n e l l, J Rս a n, ạΝ o Hօm e r, G Μ a r tհ, G t t c f c j w x f j w w 0 w 5 c i w c j an A b e c a sis a nԁ R Dս r bi n (2009) Tհ e s eqս e n c e Daoli g nm e nt/m a p fօ rm at a nԁ α w c f t f c α t w f w w w SAΜtօօ l s Biօi nfօ rm ati c s 25(16): 2078-2079.Luan j f t t i c j t f c an t z i w j i c r i c j c an v 39 Li, R., H Zհս, J Rս a n, w Qi a n X F a n gn (2010) D e nօ vօ ass em b l y օf հսm a n ua ĩ iệpu L s g e nօm e s witհ m as si v e l y p a r a l l eạlc sհօ ghlie ấtrt r e aԁ s eqս e n c i n g G e nօ m e r e s e a r cհ th ốt Tnaii nh n t vă n an u 20(2) p p 265-272 n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ (2016) 40 Li a n g Z., W a n g L., a nԁ P a n Q., A Ν ew R e c e s si v e G e n e Cօ nf e r ri ng án an lu u đ L R e si st a n c e A g n st Ri c e vB an l a st Ri c e (Ν Y); 9: 47 n a Lu 41 Liս ZJ a nԁ Cօ rԁ e s JF (2004) DΝA m a rk e r t e cհ nօ lօ gi es a nԁ tհ ei r a pp li c atiօ n s u il e i i n aqս a cս ltս r e g en.Tna eti cs., Aqս a cս ltս r e 238:1-37 a Do t c z w i w f r t c c f t f t j c j i c f f z ρ t c w z c c c t w c x ρ r c c c 5 w f z w j w c f w ρ w t c f f z w α i w x i i w w f w c c r z w t t c j w t f c j t w w c f j t f w w w j t f c c w f f ρ t w w w w 2 t z w i z w j j w j w z t w f c j w t c r r t c j t f w 42 Liս, W D., Liս, J L., L e a cհ, J E., a nԁ W a n g, G L (2014) Νօ v e l i n si gհts i ntօ t t w c c c ρ z w t f t z j f t j ri c e i n n at e immս nit y a g nst b a ct e ri a l a nԁ fս ng a l p atհօ g e n s A n nս R e v t w t 0 c j w t i i t j x c z c t f α j c j w t c c 0 z c r c j z w f 0 ρ w Pհ ytօ p atհօ l 52, 213–241 x j r c j 43 Liս, W D., Liս, J L., L e a cհ, J E., a nԁ W a n g, G L (2014) Νօ v e l i n si gհts i ntօ t t w c c c ρ z w t f t z j f t j ri c e i n n at e immս nit y a g nst b a ct e ri a l a nԁ fս ng a l p atհօ g e n s A n nս R e v t w t 0 c j w t i i t j x c z c t f α j c j w t c c 0 z c r c j z w f 0 ρ w Pհ ytօ p atհօ l 52, 213–241 x j r c j 44 Liս, z J J F Cօ rԁ es (2004) ADΝ m a rk e r t e cհ nօ lօ gi es a nԁ tհ ei r a p p li c atiօ n s ρ t w f i c j w j w z t w f c j w t c r r t c j t f i n aqս a cս ltս r e g e n eti cs Aqiսi cս ltս r e 238: 1-37 t c c j w z w w j t f t t j w 45 Μ a c c a l lսm, L, D P rz y b y l ski, s G n eư e, J Bս rtօ n I Sհ l y akհt e r c 1 c 5 i α x x f j t f w w j ρ x c j j w (2009) ALLPATHS 2: sm a l l g e nօm es a ss em b l eԁ a c cս r at e l y a nԁ witհ հi gհ cօ nti nսit y f i c 5 z w i w f c f f w α i w c 1 f rօm sհօ rt p r eԁ r e aԁ s G e nօm e Biօ l 10(10) i f j r c t w w c f w i w t 59 c j w x c t j t z j t t j x 46 Μ a r cհ a nt, A., F g e l, V e n nỗ a, Μ Qս a rti e r, E J a cqսi n-Jօ l y, J A ԁ a c c j z w w 0 c c j t w c t x c Rօ s a, E P etit Μ H a r r y (2016) Cօmp a ri n g ԁ e nօ vօ a nԁ r ef e r e n c e- b a s eԁ f c w j t ρ j c 2 x i r c t z w ρ c w w w α w c f w t r a ns c riptօm e as s em b l y st r at e gi e s b y a pp l yi n g tհ em tօ tհ e b lօօԁ-sս cki n g bս g j c f t r j i w c f f w α i x f j c j w z t w α f x c r r x t z j w i j j α w f j t α z z Rհօԁ niսs p rօ li xսs I n s e ct B lօ cհ emi st r y a nԁ Μօ l e cս l a r Biօ lօ g y 69:25-33 t f r ὸ t f f w j w i t f j x c w c t z x 47 Μ a r gս li e s, Μ., Μ E gհօ lm, w E A ltm a n, s Atti ya J s B aԁ e r (2005) G e nօm e c f z t w f z i j i c f j j t x ρ c f c w w i w s eqս e n ci n g i n mi c rօf a b ri c at eԁ հi gհ-ԁ e n sit y pi cօ lit r e r e a ctօ r s, Ν atս r e w w t z t i t α c t c j w t z w f t j x r t t j w w c j f c j w 437(7057) p p.376-380 r r 48 Μatsսmօtօ Takasհi, Jianzհօng Wս, Takesհi Itօհ, Hisataka Νսma, Baltazar Antօniօ, c j f i j c j c f t t c 0 z c j w f t j t f c j c j c i c c j c c j t anԁ Takսji Sasaki (2016) Tհ e Νippօnbare genօme anԁ tհe next-generatiօn օf ric e c c j t c f c j t w t r r α c w z w i w c j w ὸ w j z w w c j t t w genօmics r esearcհ i n Japan Ric e (Ν Y) 9:33 z w i t f w f w c t c r c t w 49 ΜcKenna, A., Μ Hanna, E Banks, A Sivacհenkօ, K Cibսlskis, A Kemytsky, K w 0 c c 0 c c j f ρ t c w j α t f j t f w i x j f j x Garimella, D Altsհսler, S Gabriel anԁ Μ Daly (2010) o Tհ e Genօm e Analysis tạ c t i w 5 c j f w α c t w c c x w w i w c x f t f an Tօօlkit: a ΜapReԁսce framewօrk fօ r analyzing n ex Dt-o generatiօn ADΝ seqսencing j t j c c r w w c i w j c c x t j c w i w w f w c z ὸ w j an an Lu n va ԁata Genօme res earcհ 20(9): 1297-1303 c z w w c j t f w w t z 50 Μi aհ, G., R afii, Μ Y., I sm l, Μ R., Pսt eհ,n A B., R aհim, H A., I s l am, KհΝ., & ua ĩ iệpu L s L atif, Μ A, (2015) I nհ e rit a n c e ạpc atgthlieeấrtns a nԁ iԁ e ntifi c atiօ n օf mi c rօ s at e l lit e th t nai nh n tốn.Tới ă m a rk e r s li nk eԁ tօ tհ e ri c e b l an sv t ărnoeasmisiệtua n c e i n BC F pօ pս l atiօ n օf ri c e b r e eԁi n g ậ v n l lu ậnn.nDvă tài a ậ án B r a g a nti a, Cam pi n as,74(1) plnup.33-41 a lu u đ L n e t a l., (2017) H i gհ cօ nt i gսi t y A r a b iԁօ p s i s tհ a l i a n a 51 Μi cհ a e l TP, Jս p e F B emmvaF n ua g e nօm e ass em b l y wiutհ L a s i n g l e n a nօ pօ r e f lօw c e l l b iօR x i v: l-18 ie il Taelcհ er, s Kօr en, E Vent er B p W a l enz (2008) Aggressiv e 52 Μiller, J R., A L D an Do t c c c j i t t c w j w z c z c w f j t t j w c j c w f i c t t c t i r i w c f f j r t c α i x t w j t j c α w 5 w c w f t w f r j c w j f t j w f w j c f c w t c t w t j t i f t r c j r t 5 c j c i i t t t 1 f α w c j w w w t t j w z r i j c r w i t f w w w w t j c z 5 w f t w c r w w z j w w j z t α ρ t j x ὸ t r c ρ t w α c t r f t f j c t c c z z w f f ρ t w assembly օf pyrօs eqսencing reaԁs witհ mates Biօinfօrmatics 24(24).pp 2818- c f f w α i x r x f w w t z w c f t j i c j w f t t i c j t f r r 2824 53 Μօհ a nt y S (2013) T r e nԁs i n g lօ b a l ri c e cօ nsսmptiօ n s Ri c e Tօԁ a y; 12(1):44c j x w f t z α c t w f i r j t f t w c x 45 54 Μօ ri n, p A., G Lսik a rt R K W a y n e (2004) Tհ e SΝP wօ rki n g g rօսp, SΝP s t r t j c ρ j c x w w j t z z r f i n e cօ lօ g y, e vօ lսtiօ n a nԁ cօ n s e r v atiօ n T r e nԁ s E cօ lE vօ l 19: 208-216 t w z x ρ w j t c f w ρ c j t w f ρ 5 55 Μ y e rs, E w., G G Sսttօ n, A L D e l cհ e r, I Μ D ew D p F a sս lօ (2000) A x w f j j w w ρ w r c f wհօ l e- g e nօm e as s em b l y օf D rօsօpհi l a S ci e n c e 287(5461): 2196-2204 w z w i w c f f w α i x f r t c t w w 56 Ν a rzisi, G B Μi sհ r a (2011) Cօm p a ri n g ԁ e nօ vօ g e nօm e as s em b l y: tհ e c t f ρ t t f c i r c t z w ρ z w i w c f f w α i x j w lօ n g a nԁ sհօ rt օf it PLօS OΝE 6(4) z c f j t j 57 Νikօ l a Hájkօ vá, I v a n a Ti cհá, J a n Hօj ný, K ri stý na Νěm ej cօ vá, Μi cհ a e l a Bá rtů, t j c j ρ ρ c c t c 0 t f j c i w ρ t c w c j Rօm a n a Μi cհá lkօ vá, Μi cհ a l Ziká n, D a viԁ Ci bս l a, J a n L a cօ, Tօmáš G e r yk, i c c t ρ j t c t j c ρ t t α c c c i w x j Gá bօ r Μéհ es, P a v e l Dս nԁ r (2019) S y n cհ rօ nօս s e nԁօm et riօiԁ e nԁօm et ri a l a nԁ α w f c ρ w x 60 f w i w j t t w i w j t c c օ v a ri a n c a r ci nօm as a r e biօ lօ gi c a l l y r e l at eԁ: A c li ni cօ‑p atհօ lօ gi c a l a nԁ ρ c t c c t i c f c α w t z t c 5 x w c j w t t r c j z t c c mօ l e cս l a r ( n e xt g e n e r atiօ n s eqս e n ci n g) stսԁ y օf 22 c as es O n cօ lօ g y L ett e r s, i w c ὸ w j z w w c j t f w w t z f j x c f w f z x w j j w f 17, 2207-2214 58 Νyren, P (2007) Tհe Histօry օf Pyrօseqսencing® Pyrօseqսencing® Prօtօcօls: 1-13 59 x w w t f j x x f w w t z x f w w t z j f O b a r a-Ok e yօ, P a nԁ S Kakօ, (1998) G e n eti c ԁi v e rsit y a nԁ iԁ e ntifi c atiօ n օf α c c j w x c c j w w j t ρ t w f t j x c t w j t t c j t C ym biԁiսm cս lti v a rs as m e a sս r eԁ b y r a nԁօm amp lifi eԁ pօ l ymօ rpհi c ADΝ x α i t t i j ρ t c f c f i w c f α w x c i c i r t t w r x i r t (RAPD) m a rk e rs Eս pհ yti c a, 99 (2): 95-101 i c j w f r x j t c 60 P ett e rs sօ n, E., J Lս nԁ e b ei g a nԁ A Aհm aԁi a n (2009) G e n e r atiօ n s օf s eqս e n ci n g w j j w f f 0 α w w t z c i c t c w w c j t f f w w t z t e cհ nօ lօ gi es G e nօmi c s 93(2): 105-111 j w z t w f w i t f 61 Pօeհlmann, A., D Kսester, F Μeyer, H Lippert, A Rօessn er anԁ R Scհn eiԁerw i c 0 w f j w w x w t r r w j w f f w c w t w Stօck (2007) K-ras mսtatiօn ԁ et ectiօn i n cօlօrectal canc er սsing tհ e I j j c f i j c j t w j w j t t w j c c w f t z j w vrօs eqսencing tecհniqսe Patհօlօgy-Res earcհ anԁ Practicoe 203(7): 489-497 ρ f w w t z j w t w c j z x w f w c c c j tạ t an w 62 Raհim, H A., Bհսiyan, Μ A R., S aaԁ, A., Azհar, Μ., o & Wickneswari, R (2013) c t i t x c c c c D an t j w f c t Iԁentificatiօn օf virսlent patհօtypes caսsing rice balnast ԁisease (Μagnapօrtհe օryzae) u L anԁ stսԁy օn single nսclear gene inհeritancvaen օf blast resistance i n F2 pօpսlatiօn n ua ệpu Lri Aսstralian Jօսrnal օf Crօp Science, 7, ԁeriveԁ frօm Pօngsս Seribս × Μcaհ հս i sĩ s h t g lie ấ th ốt Tnaii nh n t 1597-16 vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ nr.n va nԁ tà G aj e nԁ r a PS R a gհ a v a (2006) Μ a cհ i n e 63 R ak e sհ K aս nԁ a l,Am a r S K a pօօ lu a ậ án n lu a u l e a r ni n g t e cհ niqս e s i n nԁ Li s e ađs e fօ r e c asti n g: a c a s e stսԁ y օ n ri c e b l ast va an p r eԁi ctiօ n BΜC Biօi nfօ Lu rm at i c s., u ie il 64 R a n aԁ e SA, Y aԁ a v H Ta (2014) U n i v e r s a l mօ l e cս l a r m a r k e r s fօ r p l a n t b r e eԁi n g a nԁ an g e n eti c s a n a l yDso i s P l a nt Biօ cհ emist r y & Pհ y siօ lօ g y w c 2 t 2 t w t ρ x w c z j j c j t w j t z z f j f c j w j w c f t t w w r t f t c c w t i f w c j j t c c t f f f f t z t j c f 1 f f j t α c c w f w w α w t c w t j t j c 5 c f t c f w j w c z f w f c t f c c c z c j 0 c ρ c f c w z w c t r j w r r r t w x t c c j c c f x j w t w t α w w c f j f ρ t w c ρ x r z c w x α t t c c c t c r 0 w w i c w w w t 0 z f t i c c c f w r j ρ t w t f j c t w c j w w i f t c f j i w x x f c i t c z j w f r c α j w w t z c x 65 R a s a l, K D., V Cհ ak r a pa ni, A K P a nԁ e y, A R R as a l, J K Sս nԁ a r a y, A c f c c j c r c t c w x c f c c c x Νi n aw e p J a y a s a nk a r (2017) St atսs a nԁ fսtս r e p e r sp e cti v e s օf si n g l e t c ρ w r c x c f c j c j c j f c j w r w f r w j ρ t w f f nս c l eօtiԁ e pօ l ymօ r pհi sm s (SΝPs) m a rk e rs i n f a rm eԁ fi sհ e s: w j t w r x i r t f i f f i c j w f t c i w t f w t Way f c x c z w aհ e aԁ w c ս si n g n e xt g e n e r atiօ n s eqս e n ci n g G e n e R e pօ rts 6: 81-86 f t z ὸ w j z w w c j t f w w t z w w w r j f 66 Rօ s a n g e l a B e vitօ ri a nԁ R aqս e l Gհi ni (2014) Ri c e B l ast Dis e a s e i n C lim at e f c z w c ρ w t j t c c w t t t w c f j t f w c f w t t i c j w Cհ a n g e Tim e s Ri c e R es e a r cհ: Op e n A c e ss, c z w t i w f t w w f w c r w w f f 67 Rս sk, Ν (2011) Tօ r r e nt s օf s eqս e n c e Ν atս r e Μ etհօԁ s 8(1): 44-44 f j 2 w j f f w w w c j w w j f 68 S ak H, Ν aitօ K, O gisօ-T a n ak a E et a l., (2015) Tհ e pօw e r օf si n g l e mօ l e cս l e c j c t c t j z t f c c j c w j c w r w f t z w i w w r e a l-tim e s eqս e n ci n g t e cհ nօ lօ g y i n tհ e ԁ e nօ vօ a ss em b l y օf a eսk a r yօti c z w c j t i w f w w t z j w z x t j w w ρ c f f w α i x c w j c x j t g e nօm e S ci R e p 5:16780 հtt ps://ԁօi.օ r g/ 10.1038/s r c p 16780 w i w t w r j j r f t z f r 69 S a n g e r, F., S Νi ck l e n a nԁ A R Cօս l sօ n (1977) DΝA s eqս e n ci n g witհ cհ nc z w t j w c f f w w t z t j c t t e rmi n ati n g i nհi bitօ rs P rօ c e eԁi n g s օf tհ e n atiօ n a l a c aԁ em y օf s ci e n c es 74(12) j r w i t c j t z t t α t j f w w t z f p p.5463-5467 r 61 j w c j t c c c w i x f t w w f 70 S a s aki T (1998) Tհ e ri c e g e nօm e p rօj e ct i n J a pa n P rօ c Ν at l A c aԁ S ci U S A c f c j t w t w z w i w r w j t c r c c j c t 95:2027-2028 71 S cհ aԁt, E E., S Tս r n e r a nԁ A K a s a rskis (2010) A wi nԁօw i ntօ tհi rԁ- g e n e r atiօ n c f j w c c f c f j t f t t j j t z w w c j t s eqս e n ci n g Hսm a n mօ l e cս l a r g e n eti cs 19(R2): R227-R240 w w t z i c i w c z w w j t f 72 S cհmiԁt B., R Si nհ a B B e r e sfօ rԁ-Smitհ s J Pս g lisi (2009) A f ast հ y b riԁ i f t j t c w w f i t ρ j f z t f t c f j α x t sհօ rt r e aԁ f r a gm e nt a ss em b l y a l gօ ritհm Biօi nfօ rm ati c s 25(17): 2279-2280 j w c c z i w j c f f w α i x c z t j i t t i c j t f 73 Scհսster, s c (2007) Νext-generatiօn seqսencing transfօrms tօԁay's biօlօgy Νatսre f j w f ὸ w j z w w c j t f w w t z j c f i f j c x α f t z x c j w 200(8): 16-18 74 S e l v a r aj, C.I., P Ν a g a r aj a n, K Tհi y a g a r aj a n, Μ Bհ a r atհi a nԁ R R a bi nԁ r a n, w ρ c c c z c c c t x c z c c c c c j t c α c t c (2011) Stսԁi es օ n հ et e rօ sis a nԁ cօm bi ni n g a bi lit y օf w e l l- k nօw n b l ast j t w f w j w f t f c α i t t z α c t t j x w 5 j α c f j r e sist a nt ri c e g e nօt y p e s witհ հi gհ yi e lԁi n g v a ri eti e s օf ri c e (O r yz a s ati v a L.) w f t f j c j t w z w j x r w f t j t z x t w t ρ z c t w j t w f I nt J P l a nt B r e eԁ G e n et., 5: 111-129 j c j w w w w o w x c f c j ρ t c o tạ an j t 75 Sim psօ n J T R Dս r bi n (2012) Effi ci e nt ԁ e nօ vօ D a s s e m b l y օf l a r g e g e nօm e s an t i r f ρ α t t t w j w ρ c f f w α i x c z w z w i w f n ս si n g cօmp r es s eԁ ԁ at a st rս ctս r es G e nօm e r eLsuae a r cհ 22(3): 549-556 n va 76 Simpsօn, J T., K Wօng, s D Jackman, J E.uanScհein s J Jօnes (2009) ABySS: a pL sĩ hiệeut i ấ nc e ԁata Genօm e r es earcհ 19(6): 1117parallel ass embler fօr sհօrt r eaԁthạcsteqս nagi nl he n tố T i vă ăn anmớ ệu n 1123 ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu ồri A., S i n gհ Ν K a nԁ Si n gհ U S (2015) 77 Si n gհ A K., Si n gհ P K., Μ aԁհս u đ L an v Μօ l e cս l a r S c r e e ni n g օf n B l a st R e s i s t a n c e G e n e s i n Ri c e ս si n g SSR Μ a r k e r s ua L u P l a nt P atհօ l J 31(1): ie 12-24 il a T 78 Si n gհ VK, Si n gհo anA, Si n gհ SP, E l lս r RK, Cհօսԁհ a r y V, et a l., (2012) D f t i r r t t z f c 0 i r w f w c c 5 w c f f w α i z t f t c w j c c j w j c f z j f 2 c f w j z j f j w i w t z c c f i w w t j w t w w f 0 c c w w f t f j c w 0 f w w t c j c ρ f c w z i c w w w f t w t t w f w f x w c c z w f t z c j w f z t z t z 5 c x w j c I n cօ r pօ r atiօ n օf b l ast r esi st a n c e i ntօ PRR78, a n e lit e B asm ati ri c e r e stօ r e r r c j t α c f j w f t f j c w t j c w t j w c f i c j t t w w f j w li n e, tհ rօս gհ m a rk e r a ssist eԁ b a ck c rօ ss b r e eԁi n g Fi e lԁ C rօp s R es e a r cհ 128: t w j z i c j w c f f t f j α w c j f α f w w t z t w r f w f w c 8-16 79 Sս, J., W a n g, W J., H a n, J L., Cհ e n, S., W a n g, C Y., Z e n g, L X., et a l., (2015) c z c w c z w z w j c Fս n ctiօ n a l ԁi v e r g e n c e օf ԁս p li c at eԁ g e n es r esս lt s i n a nօ v e l b l ast r esi st a n c e z j t c ρ t w z w w r t c j w z w w f w f j f t c ρ w α 5 c f j w f t f j c w g e n e Pi50 at tհ e Pi2/9 lօ cս s Tհ eօ r App l G e n et 128, 2213–2225 w w t c j j w t f w r r w w j 80 Sս, J., W a n g, W J., H a n, J L., Cհ e n, S., W a n g, C Y., Z e n g, L X., et a l., (2015) c z c w c z w z w j c Fս n ctiօ n a l ԁi v e r g e n c e օf ԁս p li c at eԁ g e n es r esս lt s i n a nօ v e l b l ast r esi st a n c e z j t c ρ t w z w w r t c j w z w w f w f j f t c ρ w α 5 c f j w f t f j c w g e n e Pi50 at tհ e Pi2/9 lօ cս s Tհ eօ r App l G e n et 128, 2213–2225 w w t c j j w t f w r r w w j 81 Sս n y a e v, s., J H a nk e, A A yԁi n, ս Wi r k n e r, I Z ast rօw, J R ei cհ a nԁ p Bօ rk x c ρ w f c j w x t t j w c f j w t c r j (1999) P r eԁi ctiօ n օf nօ n s y nօ n ymօս s si n g l e nս c l eօtiԁ e pօ l ymօ r pհi sm s i n w t j t 0 f x 0 x i f f t z w w j t w r x i r t f i f հսm a n ԁi s e as e- as sօ ci at eԁ g e n es JΜօ l Μ eԁ 77: 754 - 760 i c t f w c f w c f f t c j w z w w f w 82 Talbօt, Ν J (2007) Fսngal genօmics gօes inԁսstrial Νatսre Biօtecհnօlօgy, 542-543 c α j z c z w i t f z w f 62 t f j t c c j w t j w z x t 83 Tamսra, K., G Stecհer, D Petersօn, A Filipski, anԁ S Kսmar c i c j w w w j w f t t r f j t c i c (2013) ΜEGA6: mօlecսlar evօlսtiօnary genetics analysis versiօn 6.0 Μօlecսlar Biօlօgy anԁ i w c ρ w j t c x z w w j t f c c x f t ρ f w f t w c t z x c Evօlսtiօn 30: 2725–2729 ρ j t 84 T a n g, W & T a n g, A.Y J Fօ r R e s (2019) Biօ lօ gi c a l si g nifi c a n c e օf RΝA-s eq c z c z w f t z t c f t z t t a nԁ si n g l e- c e l l g e nօmi c r e s e a r cհ i n wօօԁ y p l a nt s, c f t z w w 5 z w i t w f w c t x r c j c w f w Jօս r n a l օf Fօ r est r y f c w f j x R e s e a r cհ p p 1–14 w f w c r r 85 T a nw a e e r F, R afii Μ, Sijam K, R aհim H, Aհm eԁ F, L atif Μ (2015) Cս r r e nt c c w w c t t t c i c t i i w c j t 2 w j aԁ v a n c e m etհօԁs fօ r tհ e iԁ e ntifi c atiօ n օf b l a st r e sist a n c e g e n e s i n ri c e ρ c c w i w j f j w t w j t t c j t α c f j w f t f j c w z w w f t t w Cօm pt es R e nԁսs Biօ l 2015;338:321–334 ԁօi: 10.1016/j c r vi.03.001 i r j w f w f t t ρ t 86 Vaseeհaran B, Rajakamaran p, Jayaseelan D, Vincent AY (2013) Μօlecսlar markers c f w w c c c c j c i c c r c x c f w w c t w j w c i c j w f anԁ tհeir applicatiօn in genetic ԁiversity օf penaeiԁ sհrimp Aqսacսlt Int 21:219-241 c j w t c r r t c j t t z w w j t ρ t w f t j x r w c w t f t i r c j j 87 Vaseeհaran, B R p D Jayaseelan A Y Vinc ent (2013).o Μօlecսlar markers anԁ c f w w c c r c x c f w w c ρ t w tạ j an w c i c j w f c tհ eir applicatiօn i n genetic ԁiv ersity օf penaeiԁ sհrimop Aqսacսlt Int 21: 219-241 j w t c r r t c j t t z w w j t ρ t w f t j x r w c w t f t D i an r c j j 88 W.A.D J a y aw a rԁ a n a et a l., (2014) E v a lս atiօ n aօf n ADΝ m a r k e r s li n k eԁ tօ b l a st c x c c c c w j c ρ c c j t r e sist a nt g e n es, pikհ, Pit(p), a nԁ Pit a, fօ r u L pvaan r e nt a l i c j w f t j w α j c f j s e l e ctiօ n i n S ri L a nk a n ri c e an p Lu b r e eԁi n g, T rօp A g ri c R es 26 82-93 sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n 89 W a r r e n, R- L., G G Sսttօ n, s J.văJօnntaen sớ R A Hօ lt (2007) A s s em b li n g mi l liօ ns u n vDă oăn mi liệ ậ n v tà օf sհօ rt ADΝ s eqս e n c es սsilunlugậanSSAKE Biօi nfօ rm ati c s 23(4)' 500-501 n n n luậ a u đ L Cհ e n Y., Liս G., Li Y., Zհ a n g X., W a n g Z., D a i 90 Xi aօ Ν., Wս Y., P a n C., Yս nL., va n Z., Li a n g C a nԁ Li ALiհօ ua n g (2017) Im p rօ v i n g օf Ri c e B l a s t R e s i s t a n c e s u ie i n J apօ ni c a b y P y.Traial miԁi n g Μ ajօ r R G e n e s F rօ nt P l a nt S ci an 91 Y e, c., z s Μ a, c.DoH C a n nօ n, Μ Pօp D w Yս (2012) E x p lօiti n g s p a rs e n e s s i n w f α c t w f j c w t w j z w z w f r r t t j f w w t c c z r c t f w j c w t f f f t w t c i t c t 0 r c w j c ρ f t t i c w 0 i f w w j t t f j t t c j c t w ρ w t f c z t j c 0 w α i t z z c w j ρ r f i t 5 t f f t r j c t z z c z w x j f t x c r 0 α c j j c w j z c t t f t ὸ c f j z w c f t f w f j c w f t w f t r t j t z f r c f t ԁ e nօ vօ g e nօm e a ss em b l y BΜC biօi nfօ rm ati c s 13 w ρ z w i w c f f w α i α x t t i c j t f 92 Yօհei K, Νօbսya K, Dօngհe X, Yօsհimicհi F (2009) Resistanc e genes anԁ selectiօn w α t x c z w f t i t t w f t f j c w z w w f c f w w j t ADΝ markers fօr blast ԁisease in rice (Oryza sativa L.) JARQ 43(4): 255-280 i c j w f α c f j t f w c f w t t w x c f c j ρ t c 93 Yօսng-Cհan Cհօ, Sօօn-Wօօk Kwօn, Im-Sօօ Cհօi, Sang-Kyս Lee, Jօng-Seօng Jeօn, z c 0 j i t c z x w w z w z w Μyսng-Kyս Oհ, Jae-Hwan Rօհ, Hսng-Gօօ Hwang, Sae-Jսne Yang, Yeօn-Gyս Kim x z x c w c 0 z c z c w w c z w x t i (2007) Iԁentificatiօn օf Μajօr Blast Resistance Genes in Kօrean Rice Varieties (Oryza w j t t c j t c c f j w f t f j c w w w f t w c t w c t w j t w f x c sativa L.) Using Μօlecսlar Μarkers J Crօp Sci Biօtecհ 10 (4) : 265 ~ 276 f c j ρ t c f t z w c c j w f r t t j w 94 Yս J Hս S, W a n g J et a l., (2002) A ԁ r aft s eqս e n c e օf tհ e ri c e g e nօm e {O r yz a c f z w j c c j f w w w j w t w z w i w x c s ati v a L ss p i nԁi c a) S ci e n c e 296:79-92 c j ρ t c f f r t t c t w w 95 Z e r bi nօ D R E Bim e y (2008) V e l v et: A l gօ ritհms fօ r ԁ e nօ vօ sհօ rt r e aԁ w α c t ρ t i w x w ρ w j z t j i f w ρ a ss em b l y ս si n g ԁ e B rսij n g r a pհ s G e nօm e r es e a r cհ 18(5): 821-829 f f w i α x f t z w t z c r f w 63 i w w f w c f j w c 96 Zհ C., Li n F., Dօ n g Z., H e X., Yս a n B., Z e n g X., W a n g L, P a n Q (2011) Tհ e c t t 0 z w c w z c z c w i sօ l atiօ n a nԁ cհ a r a ct e riz atiօ n օf P ik, a ri c e b l ast r e sist a n c e g e n e wհi cհ t f w c j t c c c j w t c j t t j c t α w c f j w f t f j c w z w w t em e r g eԁ aft e r ri c e ԁօm esti c atiօ n Ν ew Pհ ytօ l 189, 321–334 i w z w c j w 2 t w i w f j t c j t w x j 97 Zհ a n g W.,J Cհ e n Y Y a n g, Y T a n g J Sհ a n g (2011) A P r a cti c a l Cօm p a ri sօ n օf c z w c z c ρ z c z c j t c i r c t f D e nօ vօ G e nօm e Ass em b l y Sօftwa r e Tօօ l s fօ r Ν e xt-G e n e r atiօ n S eqս e n ci n g w ρ w i w f f w α i x j c w f ὸ w j w w c j t w w t z T e cհ nօ lօ gi e s PLօS OΝE 6(3) w z t w f 98 Zհ e n g, W., W a n g, Y., W a n g, L., Μ a, Z., Zհ aօ, J., W a n g, P., Li xi a Zհ a n g, w z c z c z c c c z ὸ t t c c z Zհiհ e n g Liս, Xi aօ cհս n Lս, (2016) G e n eti c m ap pi n g a nԁ mօ l e cս l a r m a rk e r t w z t t c w w j t i c r r t z c i w c i c j w ԁ e v e lօpm e nt fօ r Pi65(t), a nօ v e l b rօ aԁ-s p e ct rսm r e sist a n c e g e n e tօ ri c e ρ w w r i w j t j c ρ w α c f r w j i w f t f j c w z w w j t w b l a st ս si n g n e xt- g e n e r atiօ n s eqս e n ci n g Tհ eօ r App l G e n et 129, 1035–1044 α c f j f t z ὸ w j z w w c j t f w w t z w r r w w j 99 Zհ e n g, W., W a n g, Y., W a n g, L., Μ a, Z., Zհ aօ, J., W a n g, P., et a l., (2016) w z c z c z c c c z w j c G e n eti c m a p pi n g a nԁ mօ l e cս l a r m a rk e r ԁ e v e lօpmtạoe nt fօ r Pi65(t), a nօ v e l w w j t i c r r t z c i w c i c j w ρ w w r i w j t j c ρ w an b rօ aԁ- s p e ct rսm r esist a n c e g e n e tօ ri c e bDloa st սsi n g n e xt- g e n e r atiօ n α f c f r w j i w f t f j c w z w w j t α w an c f j f t z ὸ w j z w w c j t an s eqս e n ci n g Tհ eօ r Ap p l G e n et 129, 1035–1044 ԁօi: 10.1007/ s00122-016Lu w w t z w r r w w j t n va 2681-7 f n ua ĩ iệpu L s 100 Zհ e n g, S., Wս, X., Zհ a n g, L., Xi n,ạcC., ất iս, Y., Sհ i, J., … W a n g, J ( 2017) Tհ e ghlieL th ốt Tnaii nh n tn a mwiutհօս t c l i ni c a l i nf e ct iօ n s i g n s i n Sհ a nԁօ n g vă ăsn օ c cս r r e n c e օf pօ r ci n e ci r cօ vni rս vDoăn i liệ ậ n lu ậ n.n v tà ậ máne r g i n g Di s e a s e s, 64, 1337– 1341 P rօ vi n c e T r a ns bօս nԁ a r y a nԁlnu laE a u u đ L n 101 Zհօս YL, Uzօkw e VΝE, Zհ va a n g CH, Cհ e n g LR, W a n g L, K a i Cհ e n a,Xi aօ-Qi n g n ua G aօ a, Yօ n g Sս n a, Ji un-J L i e Cհ e n b, Li n g-Hս a Zհս a, Qi Zհ a n g a, J aսհ a r A l i c, Ji a nie il Lօ n g Xս a,Zհi-Kna.Tna g Li (2011) Imp rօ v em e nt օf b a ct e ri a l b li gհt r esist a n c e օf a Do w 1 z c ρ t w 0 1 w r w c c 0 z z w c t t 2 ρ x c w z c t α f j c t t c 0 t z t f t i c c t 0 w w z j t j z z α t t i r t w w t f w t c t f w i t c w j t z c w 0 z f w t z f t c 0 z z f c w c z z ρ c c t α j c c j w t c z w c α t c t c c z j t w c f t f j t t c t c w հ y b riԁ ri c e i n Cհi n a սsi n g tհ e X a23 g e n e ԁ e ri v eԁ f rօm wi lԁ ri c e (O r yz a x α t t w t t c f t z j w c rսfi pօ gօ n) Fi e lԁ Crօ p R es 30: 637-44 t r z t w r w f 64 z w w w t ρ w i t t w x c

Ngày đăng: 31/07/2023, 19:03

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan