Luận án Tiến sĩ Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương Ngành Công nghệ sinh học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Lê Minh Châu NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM PHYTOESTROGEN TỪ PHÔI ĐẬU TƯƠNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội – 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Lê Minh Châu NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM PHYTOESTROGEN TỪ PHƠI ĐẬU TƯƠNG Ngành: Cơng nghệ Sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS ĐỖ THỊ HOA VIÊN PGS TS HỒ PHÚ HÀ Hà Nội - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận án trung thực chưa tác giả khác công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc hoàn thành luận án cảm ơn thông tin luận án ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nghiên cứu sinh Lê Minh Châu Tập thể giáo viên hướng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hoa Viên PGS.TS Hồ Phú Hà i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án Tiến sỹ này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận giúp đỡ lớn nhiều thầy, cô giáo, tập thể Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS – Đỗ Thị Hoa Viên – Bộ môn Công nghệ Sinh học PGS.TS – Hồ Phú Hà – Bộ môn Công nghệ Thực phẩm – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Đại học Bách Khoa Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, định hướng, đào tạo giúp đỡ suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tới thầy cô giáo, cán Bộ môn Công nghệ Sinh học – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình giúp đỡ, bảo động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn tới cán bộ, công nhân viên khoa Hóa Thực phẩm – Viện Dinh dưỡng Quốc gia, phịng Thử nghiệm sinh học – Viện Cơng nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn anh chị em đồng nghiệp Khoa Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Kinh tế - Kỹ thuật Công nghiệp nơi công tác giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi cho học tập thực Luận án Cuối xin gửi tới gia đình bạn bè – người thân nguồn động viên, giúp đỡ trình học tập nghiên cứu lời cảm ơn chân thành Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nghiên cứu sinh Lê Minh Châu ii MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ xi MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Cây đậu tương phôi đậu tương 1.1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ đậu tương Việt Nam 1.1.2 Thành phần hóa học phôi đậu tương 1.1.3 Thành phần chất có hoạt tính sinh học phôi đậu tương 1.2 Phytoestrogen 1.2.1 Tổng quan phytoestrogen 1.2.2 Phytoestrogen phôi đậu tương 12 1.2.3 Khả dụng sinh học phytoestrogen đậu tương 14 1.2.4 Lợi ích phytoestrogen aglycone đậu tương chất chuyển hóa chúng với sức khỏe người 16 1.2.5 Tính an toàn phytoestrogen đậu tương 19 1.3 Các phương pháp chiết xuất phytoestrogen 21 1.3.1 Các phương pháp truyền thống 21 1.3.2 Các phương pháp đại 22 1.3.3 Phương pháp chiết xuất phytoestrogen phôi đậu tương 26 1.4 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside đậu tương thành aglycone 28 1.4.1 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside enzyme 29 1.4.2 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside vi sinh vật 33 1.5 Phương pháp tinh phytoestrogen aglycone 35 1.6 Các sản phẩm có chứa phytoestrogen từ đậu tương 36 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Vật liệu 38 2.1.1 Phôi đậu tương 38 2.1.2 Hóa chất 38 2.1.3 Động vật thực nghiệm 39 2.1.4 Thiết bị thí nghiệm 39 2.2 Bố trí thí nghiệm phương pháp nghiên cứu 39 2.2.1 Phương pháp đánh giá xử lý nguyên liệu 41 2.2.2 Xây dựng chế độ chiết xuất phytoestrogen 44 iii 2.2.3 Phương pháp thu nhận phytoestrogen aglycone 45 2.2.4 Phương pháp đánh giá khả chống oxy hóa cao chiết phytoestrogen 48 2.2.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính phytoestrogen in vivo 49 2.3 Xử lý số liệu 51 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 53 3.1 Đánh giá xử lý nguyên liệu 53 3.1.1 Đánh giá hàm lượng tạp chất phôi đậu tương 53 3.1.2 Đặc tính bột phơi đậu tương 53 3.1.3 Đặc tính bột phôi đậu tương loại lipid 56 3.2 Xây dựng chế độ chiết xuất phytoestrogen 58 3.2.1 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất phytoestrogen 58 3.2.2 Tối ưu hóa phương pháp đáp ứng bề mặt 64 3.3 Thu nhận phytoestrogen aglycone 72 3.3.1 Thu nhận cao phytoestrogen tổng 72 3.3.2 Chuyển hóa phytoestrogen glucoside thành aglycone enzyme βglucosidase 73 3.3.3 Chuyển hóa phytoestrogen glucoside thành aglycone enzyme cellulase 78 3.3.4 So sánh hiệu trình thủy phân glucoside enzyme βglucosidase cellulase 85 3.3.5 Tinh phytoestrogen aglycone 88 3.4 Đánh giá khả chống oxy hóa cao chiết phytoestrogen 92 3.4.1 Đánh giá khả quét gốc tự DPPH cao chiết phytoestrogen 93 3.4.2 Đánh giá lực khử sắt cao chiết phytoestrogen 94 3.5 Đánh giá hoạt tính phytoestrogen in vivo 97 3.5.1 Thử nghiệm liều phytoestrogen an toàn chuột BALB/c 97 3.5.2 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến trọng lượng chuột thí nghiệm 97 3.5.3 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến khối lượng tử cung 99 3.5.4 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến số lượng noãn trứng 103 3.5.5 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến hàm lượng estradiol 107 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 111 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN 113 TÀI LIỆU THAM KHẢO 114 PHỤ LỤC iv PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn phytoestrogen Phụ lục Sắc ký đồ HPLC bột phôi đậu tương Phụ lục Sắc ký đồ HPLC bột phôi đậu tương loại lipid Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen tổng Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone thô Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone thô 10 Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone tinh 12 Phụ lục Khả quét gốc tự DPPH cao chiết 14 Phụ lục Năng lực khử sắt cao chiết 14 Phụ lục 10 Dạng mơ hình tương quan khả quét gốc DPPH acid ascorbic 15 Phụ lục 11 Dạng mơ hình tương quan khả quét gốc DPPH cao phytoestrogen tổng 16 Phụ lục 12 Dạng mô hình tương quan khả quét gốc DPPH cao phytoestrogen aglycone thô 17 Phụ lục 13 Dạng mô hình tương quan khả quét gốc DPPH cao phytoestrogen aglycone tinh 18 Phụ lục 14 Dạng mô hình tương quan lực khử sắt acid ascorbic 19 Phụ lục 15 Dạng mơ hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen tổng 20 Phụ lục 16 Dạng mơ hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen aglycone thô 21 Phụ lục 17 Dạng mơ hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen aglycone tinh 22 Phụ lục 18 Kiểm tra pair T-Test với cân nặng nhóm thí nghiệm 23 Phụ lục 19 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai khối lượng tử cung 26 Phụ lục 20 Kiểm tra T-Test khối lượng tử cung với nhóm nghiên cứu 27 Phụ lục 21 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai số nang sơ cấp 32 Phụ lục 22 Kiểm tra T-Test với số lượng nang sơ cấp 33 Phụ lục 23 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai hàm lượng estradiol huyết 38 Phụ lục 24 Kiểm tra T-Test với hàm lượng estradiol nhóm nghiên cứu 39 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt Acid deoxyribonucleic ADN ANOVA Analysis of variance Phân tích phương sai ASE Accelerated solvent extraction Phương pháp chiết xuất chất lỏng có áp suất AUC Area under the curve Vùng đường cong BMP-2 Bone morphogenetic protein Chất khô CK DPPH 2,2-diphenyl-picrylhydrazyl ĐCSL Đối chứng sinh lý đvC Đơn vị carbon E2 17-β-estradiol ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay Kỹ thuật enzyme liên kết kháng thể ER Estrogen receptor Thụ thể estrogen FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên hợp quốc FDA Food and Drug Administration Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ HDL-C High density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng cao HER Human epidement growth factor receptor Thụ thể yếu tố tăng trưởng thượng bì HPLC High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HPR Horseradish Peroxidase LAB Lactic acid bacteria Vi khuẩn sinh acid lactic vi LD0 Lethal dose 0% Liều an toàn LDL-C Low density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng thấp LOF Lack of fit MAE Microwave-asissted extraction Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ vi sóng Acid ribonucleic thơng tin mARN Phương pháp chiết xuất phân tán pha rắn ma trận MSPD Matrix solid-phase dispersion NAMS North American Menopause Society Hiệp hội mãn kinh Bắc Mỹ NPCE Negative pressure cavitation extraction Phương pháp chiết xuất xâm thực áp suất âm OD Optical density Phép đo mật độ quang PCNA Proliferating cell nuclear antigen Kháng nguyên nhân tế bào tăng sinh PLE Pressurized liquid extraction Phương pháp chiết xuất lỏng cao áp PR Progesterone PSE Pressurized solvent extraction Phương pháp chiết xuất dung môi cao áp SD Standard deviation Độ lệch chuẩn Carbon dioxide siêu tới hạn SC-CO2 SFE Supercritical fluid extraction Phương pháp chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn SLE Solid liquid extraction Phương pháp chiết xuất rắn - lỏng SPE Solid phase extraction Phương pháp chiết xuất pha rắn SPSS Statistical package for the Social Phần mềm máy tính phục vụ cơng tác phân tích thống kê vii TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam Topo Topoisomerase UAE Ultrasonication-asissted extraction Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm UNU University of united nation Đại học Liên hợp quốc US United nation of states Hoa Kỳ UV Ultra violet Tia cực tím UVB Ultra violet-B Tia cực tím loại B VCD 4-vinylcyclohexene diepoxide VLDL-C Very low density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng thấp WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới viii Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 017000 0028775 0009592 VCD+E2 028800 0050473 0016824 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means khoiluong Equal tucung variances assumed F Sig t 3.505 080 -6.093 16 Equal variances not assumed df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differen Differen tailed) ce ce Lower Upper 000 -.0118000 0019366 -.0159055 -.0076945 -6.093 12.704 000 -.0118000 0019366 -.0159938 -.0076062 Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 017000 0028775 0009592 VCD+CE 026600 0042261 0014087 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means khoiluong Equal tucung variances assumed Equal variances not assumed F Sig t df 771 393 -5.633 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differen Differen tailed) ce ce Lower Upper 000 -.0096000 0017042 -.0132128 -.0059872 -5.633 14.105 000 -.0096000 0017042 -.0132527 -.0059473 29 Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 017000 0028775 0009592 VCD+TPCa 021000 0046701 0015567 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F Sig t 1.948 182 -2.188 16 khoiluongt Equal ucung variances assumed Equal variances assumed df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 044 -.0040000 0018285 -.0078762 -.0001238 -2.188 13.309 047 -.0040000 0018285 -.0079409 -.0000591 not Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 028800 0050473 0016824 VCD+CE 026600 0042261 0014087 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means 95% Confidence Interval of the Difference khoiluongt Equal ucung variances assumed Equal variances assumed F Sig t df Std Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower 644 434 1.003 16 331 0022000 0021943 -.0024517 0068517 1.003 15.521 331 0022000 0021943 -.0024634 0068634 Upper not 30 Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 028800 0050473 0016824 VCD+TPCa 021000 0046701 0015567 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means khoiluongt Equal ucung variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 139 714 3.403 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 004 0078000 0022921 0029409 0126591 3.403 15.904 004 0078000 0022921 0029385 0126615 not Group Statistics khoiluongtucung nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+CE 026600 0042261 0014087 VCD+TPCa 021000 0046701 0015567 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means khoiluongt Equal ucung variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 181 676 2.667 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 017 0056000 0020995 0011493 0100507 2.667 15.843 017 0056000 0020995 0011457 0100543 not 31 Phụ lục 21 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai số nang sơ cấp Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova nhomnghiencuu Shapiro-Wilk Statistic df Sig Statistic df Sig .280 040 844 065 VCD 125 200* 951 696 VCD+E2 130 200* 951 696 VCD+CE 177 200* 946 644 VCD+TPCa 167 200* 957 769 sonangs DCSL ocap * This is a lower bound of the true significance a Lilliefors Significance Correction 32 Phụ lục 22 Kiểm tra T-Test với số lượng nang sơ cấp Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 16.67 1.118 373 VCD 10.22 1.716 572 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means sonangs Equal ocap variances assumed F Sig t 1.305 270 9.440 16 Equal variances not assumed df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differen Differen tailed) ce ce Lower Upper 000 6.444 683 4.997 7.892 9.440 13.75 000 6.444 683 4.978 7.911 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 16.67 1.118 373 VCD+E2 25.56 3.432 1.144 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means sonangs Equal ocap variances assumed Equal variances assumed not F Sig t df 7.505 015 16 7.388 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -8.889 1.203 -11.439 -6.338 9.679 000 7.388 -8.889 1.203 -11.582 -6.196 33 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 16.67 1.118 373 VCD+CE 33.67 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 2.998 ocap assumed Sig t 103 16 18.031 Equal variances not assumed df 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -17.000 943 -18.999 -15.001 10.865 000 18.031 -17.000 943 -19.078 -14.922 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 16.67 1.118 373 VCD+TPCa 29.00 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 1.757 ocap assumed Equal variances not assumed Sig t df 204 16 13.081 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -12.333 943 -14.332 -10.335 10.865 000 13.081 -12.333 943 -14.412 -10.255 34 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 10.22 1.716 572 VCD+E2 25.56 3.432 1.144 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means sonangs Equal ocap variances assumed Equal variances assumed F Sig t 3.817 068 16 11.989 not df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -15.333 1.279 -18.045 -12.622 11.765 000 11.989 -15.333 1.279 -18.126 -12.540 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 10.22 1.716 572 VCD+CE 33.67 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 842 ocap assumed Equal variances not assumed Sig t df 372 16 22.589 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -23.444 1.038 -25.645 -21.244 13.864 000 22.589 -23.444 1.038 -25.672 -21.216 35 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 10.22 1.716 572 VCD+TPCa 29.00 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 390 ocap assumed Sig t 541 16 18.093 Equal variances not assumed df 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -18.778 1.038 -20.978 -16.578 13.864 000 18.093 -18.778 1.038 -21.006 -16.550 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 25.56 3.432 1.144 VCD+CE 33.67 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 928 ocap assumed Equal variances not assumed Sig t df 350 -5.653 16 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -8.111 1.435 -11.153 -5.069 -5.653 14.903 000 -8.111 1.435 -11.171 -5.051 36 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 25.56 3.432 1.144 VCD+TPCa 29.00 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 1.187 ocap assumed Sig t 292 -2.401 16 Equal variances not assumed df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 029 -3.444 1.435 -6.486 -.403 -2.401 14.903 030 -3.444 1.435 -6.504 -.385 Group Statistics sonangsocap nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+CE 33.67 2.598 866 VCD+TPCa 29.00 2.598 866 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F sonangs Equal variances 034 ocap assumed Equal variances not assumed Sig t df 856 3.810 16 95% Confidence Interval of the Mean Std Error Difference Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 002 4.667 1.225 2.070 7.263 3.810 16.000 002 4.667 1.225 2.070 7.263 37 Phụ lục 23 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai hàm lượng estradiol huyết Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova nhomnghiencuu Statistic Shapiro-Wilk df Sig Statistic df Sig .111 200* 975 933 VCD 148 200* 938 565 VCD+E2 151 200* 942 608 VCD+CE 108 200* 972 914 VCD+TPCa 107 200* 984 981 hamluongestradiol DCSL * This is a lower bound of the true significance a Lilliefors Significance Correction 38 Phụ lục 24 Kiểm tra T-Test với hàm lượng estradiol nhóm nghiên cứu Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 10.5200 27942 09314 VCD 5.0700 26153 08718 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means 95% Confidence Interval of the Difference hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 020 889 42.720 16 Std Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 5.45000 12757 5.17956 5.72044 42.720 15.930 000 5.45000 12757 5.17946 5.72054 not Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 10.5200 27942 09314 VCD+E2 7.3900 24290 08097 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means 95% Confidence Interval of the Difference hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 240 631 25.362 16 Std Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 3.13000 12341 2.86838 3.39162 25.362 15.696 000 3.13000 12341 2.86797 3.39203 not 39 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 10.5200 27942 09314 VCD+CE 6.3000 20773 06924 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t 1.007 331 36.361 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper df 000 4.22000 11606 3.97397 4.46603 36.361 14.774 000 4.22000 11606 3.97230 4.46770 not Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean DCSL 10.5200 27942 09314 VCD+TPCa 6.5600 33451 11150 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 088 771 27.256 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 3.96000 14529 3.65201 4.26799 27.256 15.508 000 3.96000 14529 3.65121 4.26879 not 40 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 5.0700 26153 08718 VCD+E2 7.3900 24290 08097 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t 143 710 16 19.500 not df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -2.32000 11898 -2.57222 -2.06778 15.913 000 19.500 -2.32000 11898 -2.57233 -2.06767 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 5.0700 26153 08718 VCD+CE 6.3000 20773 06924 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed not F Sig t df 873 364 16 11.048 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differen Differenc tailed) ce e Lower Upper 000 -1.23000 11133 -1.46601 -.99399 15.220 000 11.048 -1.23000 11133 -1.46700 -.99300 41 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD 5.0700 26153 08718 VCD+TPCa 6.5600 33451 11150 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t 179 678 16 10.527 not df 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 -1.49000 14154 -1.79005 -1.18995 15.120 000 10.527 -1.49000 14154 -1.79148 -1.18852 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 7.3900 24290 08097 VCD+CE 6.3000 20773 06924 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 269 611 10.231 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 1.09000 10654 86415 1.31585 10.231 15.624 000 1.09000 10654 86371 1.31629 not 42 Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+E2 7.3900 24290 08097 VCD+TPCa 6.5600 33451 11150 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 488 495 6.023 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 000 83000 13780 53788 1.12212 6.023 14.601 000 83000 13780 53559 1.12441 not Group Statistics hamluongestradiol nhomnghiencuu N Mean Std Deviation Std Error Mean VCD+CE 6.3000 20773 06924 VCD+TPCa 6.5600 33451 11150 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means hamluonge Equal stradiol variances assumed Equal variances assumed F Sig t df 1.214 287 -1.981 16 95% Confidence Interval of the Std Difference Mean Error Sig (2- Differenc Differenc tailed) e e Lower Upper 065 -.26000 13125 -.53825 01825 -1.981 13.371 069 -.26000 13125 -.54276 02276 not 43