(Luận văn) xác định đồng thời nisin a và nisin z trong sản phẩm dinh dưỡng bằng sắc kí lỏng khối phổ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN 9ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Trần Thị Hƣờng Trần Thị Hƣờng lu XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI an n va NISIN A VÀ NISIN Z TRONG SẢN PHẨM DINH DƢỠNG XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI BẰNG SẮC KÍ LỎNG KHỐI PHỔ NISIN A VÀ NISIN Z TRONG SẢN PHẨM DINH DƢỠNG tn to p ie gh BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG KHỐI PHỔ nl w oa Chuyên ngành: Hóa phân tích d Mã số: 8440112.03 nf va an lu oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC z at nh z m co an Lu Hà Nội - 2020 l gm @ Hà Nội - 2020 n va ac th si ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Trần Thị Hƣờng lu an XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI va n NISIN A VÀ NISIN Z TRONG SẢN PHẨM DINH DƢỠNG to p ie gh tn BẰNG SẮC KÍ LỎNG KHỐI PHỔ oa nl w Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 8440112.03 d nf va an lu oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC z at nh NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: z @ PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo m co l gm PGS.TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng an Lu Hà Nội - 2020 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Lời cho em gửi lời cảm ơn sâu sắc tới cô PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo, Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia – Bộ Y tế, cô PGS.TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng, Trường Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN tận tình hướng dẫn, đóng góp ý kiến quý báu, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài viết luận văn lu Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy giáo giảng dạy khoa Hố học, đặc an biệt thầy cô môn Hố Phân Tích, cho em kiến thức q giá, va tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu môi trường đại n tn to Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo Trung tâm kiểm soát gh Bệnh tật tỉnh Nam Định tạo điều kiện thuận lợi để tơi học tập hồn p ie thành đề tài w Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS.Vũ Thị Trang ThS Lê Thị Thúy oa nl đồng nghiệp khoa Dinh dưỡng phụ gia thực phẩm – Viện Kiểm nghiệm an d toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, đồng nghiệp labo Hóa – Trung tâm kiểm soát lu an Bệnh tật tỉnh Nam Định giúp đỡ tơi nhiều q trình làm thực nghiệm oi lm ul sẻ khó khăn tơi nf va Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln động viên, chia z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung chất bảo quản 1.1.1 Định nghĩa chất bảo quản 1.1.2 Phân loại chất bảo quản lu 1.2 Giới thiệu chất bảo quản nhóm Nisin (E234) an 1.2.1 Lịch sử phát va n 1.2.2 Giới thiệu Nisin tn to 1.2.3 Tính chất Nisin ie gh 1.2.4 Phân loại Nisin p 1.2.5 Cơ chế hoạt động Nisin 10 nl w 1.2.6 Độc tính ứng dụng nisin bảo quản thực phẩm 12 oa 1.2.7 Giới hạn cho phép Nisin thực phẩm 14 d 1.3 Các phƣơng pháp xác định Nisin A Nisin Z 16 lu va an 1.3.1 Phương pháp ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 16 nf 1.3.2 Phương pháp sắc kí lỏng kết nối với detector UV 18 oi lm ul 1.3.3 Phương pháp điện di mao quản 19 1.3.4 Phương pháp sắc kí lỏng với detector khối phổ LC – MS/MS 20 z at nh CHƢƠNG : NỘI DUNG VÀ CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 26 z @ 2.2 Nội dung nghiên cứu 26 l gm 2.2.1 Khảo sát điều kiện phân tích thiết bị LC-MS/MS 26 2.2.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 26 m co 2.2.3 Thẩm định phương pháp 27 an Lu n va ac th si 2.2.4 Phân tích hàm lượng Nisin A Nisin Z số mẫu sản phẩm dinh dưỡng 27 2.3 Thiết bị, dụng cụ 27 2.3.1 Thiết bị 27 2.3.2 Dụng cụ 28 2.4 Hóa chất, chất chuẩn 29 2.4.1 Chất chuẩn 29 lu 2.4.2 Các loại hóa chất, dung mơi khác 30 an 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 30 va n 2.5.1 Phương pháp lấy mẫu 30 tn to 2.5.2 Phương pháp xử lý mẫu 3031 ie gh 2.5.3 Phương pháp phân tích 32 p 2.5.4 Phương pháp xử lý số liệu 34 2.5.5 Phương pháp thẩm định: theo quy định ISO 17025, AOAC 34 w oa nl 2.5.6 Phương pháp định lượng 3738 d CHƢƠNG : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 lu an 3.1 Tối ƣu hóa điều kiện phân tích Nisin A Nisin Z thiết bị LC-MS/MS 39 nf va 3.1.1 Tối ưu thông số detector (MS/MS) 39 oi lm ul 3.1.2 Tối ưu hóa điều kiện sắc kí lỏng 40 3.2 Khảo sát trình xử lý mẫu 46 z at nh 3.2.1 Khảo sát nồng độ dung dịch amoni acetate - NaCl dung môi chiết 47 3.2.2 Lựa chọn pH dung dịch đệm 48 z @ 3.2.3 Khảo sát tỷ lệ dung môi chiết 49 l gm 3.2.4 Khảo sát thời gian rung siêu âm 50 3.2.5 Khảo sát số lần chiết mẫu 51 m co 3.2.6 Tối ưu hóa quy trình làm mẫu 52 an Lu 3.2.7 Khảo sát tốc độ rửa giải qua cột chiết pha rắn 53 n va ac th si 3.2.8 Khảo sát thể tích dung mơi rửa giải qua cột chiết pha rắn 54 3.3 Đánh giá phƣơng pháp phân tích 56 3.3.1 Độ đặc hiệu phương pháp 56 3.3.2 Xây dựng đường chuẩn 5758 3.3.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp 59 3.3.4 Độ lặp lại 5960 3.3.5 Độ (độ thu hồi) 61 lu 3.4 Phân tích mẫu thực tế 6364 an KẾT LUẬN 66 va n TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 tn to TIẾNG VIỆT 67 ie gh TIẾNG ANH 6768 p PHỤ LỤC 74 d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Tiếng Anh Tiếng Việt AOAC Association of Official Analytical Chemmist Hiệp hội nhà phân tích thức ACN Acetonitrile Acetonitril CE Collision energy Năng lượng va chạm ESI Eelectrospray ionization Chế độ ion hóa phun điện tử IP Identification point Điểm nhận dạng IPA Isopropanol Isopropanol IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry Liên minh quốc tế hóa học ứng dụng LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitative Giới hạn định lượng Maximum Residue Limit Giới hạn dư lượng tối đa MeOH Methanol Metanol Ultra high performance liquid chromatography Sắc ký lỏng siêu hiệu cao lu Ký hiệu an n va p ie gh tn to MRL d oa nl w UHPLC an lu Độ lệch chuẩn RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối TFA Acid Triflouroacetic Acid Triflouroacetic UHPLC-MS/MS Ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry Sắc ký lỏng siêu hiệu kết nối khối phổ hai lần oi lm ul nf va Standard deviation SD z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cấu tạo chung Nisin Hình 1.2 Cấu trúc phân tử Nisin A Hình 1.3 Cấu trúc phân tử Nisin Z Hình 1.4 Cơ chế hoạt động Nisin lên tế bào chất 12 Hình 2.1 Hệ thống thiết bị UPLC – MS/MS 28 lu Hình 2.2 Sơ đồ quy trình phân tích mẫu dự kiến để xác định Nisin A Nisin Z 32 an Hình 3.1 Ảnh hưởng nồng độ acid formic 43 va n Hình 3.2 Sắc đồ chương trình gradient 45 tn to Hình 3.3 Sắc đồ chương trình gradient 45 ie gh Hình 3.4 Sắc đồ chương trình gradient 45 p Hình 3.5 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ dung dịch chiết mẫu 47 Hình 3.6 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng pH dung dịch đệm 48 w oa nl Hình 3.7 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ dung dịch đệm MeOH 4950 d Hình 3.8 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết 5051 lu an Hình 3.9 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng số lần chiết 5152 nf va Hình 3.10 Ảnh hưởng quy trình làm 5253 oi lm ul Hình 3.11 Ảnh hưởng tốc độ rửa giải 5354 Hình 3.12 Đồ thị khảo sát thể tích dung dịch rửa giải 5455 z at nh Hình 3.13 Sơ đồ quy trình tối ưu phân tích Nisin 5556 Hình 3.14 Phổ khối Nisin A Nisin Z mẫu trắng 5657 z @ Hình 3.15 Phổ khối Nisin A Nisin Z mẫu chuẩn 5657 gm Hình 3.16 Phổ khối Nisin A Nisin Z mẫu trắng thêm chuẩn 5657 m co l Hình 3.17 Đường chuẩn Nisin A 58 Hình 3.18 Đường chuẩn Nisin Z 5859 an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Giới hạn tối đa cho phép Nisin thực phẩm 15 Bảng 1.2 Bảng tóm tắt số nghiên cứu xác định Nisin A Nisin Z phương pháp khác 23 Bảng 2.1 Yêu cầu số điểm IP đạt kỹ thuật khối phổ khác 35 Bảng 3.1 Các thơng số tối ưu hóa điều kiện phân mảnh 40 lu Bảng 3.2 Chương trình gradient lựa chọn 42 an Bảng 3.3 Chương trình rửa giải gradient 44 va n Bảng 3.4 Điều kiện tách, định lượng Nisin A Nisin Z thiết bị LC-MS/MS 45 tn to Bảng 3.5 Số điểm IP Nisin A Nisin Z 5657 ie gh Bảng 3.6 Phương trình đường chuẩn Nisin A Nisin Z 5758 p Bảng 3.7 Giới hạn phát giới hạn định lượng Nisin A Nisin Z 59 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp 60 w oa nl Bảng 3.9 Độ thu hồi Nisin A mẫu khác 61 d Bảng 3.10 Độ thu hồi phương pháp với Nisin Z mẫu khác 62 lu oi lm ul nf va an Bảng 3.11 Kết phân tích 64 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, vấn đề vệ sinh an tồn thực phẩm ln thu hút quan tâm toàn xã hội, quốc gia giới Cùng với phát triển khoa học kỹ thuật, nhiều kỹ thuật mới, đại áp dụng để tạo sản phẩm với chất lượng đáp ứng nhu cầu ngày cao người tiêu dùng Tuy nhiên để tạo nhiều sản phẩm phù hợp với sở thích vị người lu tiêu dùng mà giữ chất lượng toàn vẹn thực phẩm sử dụng, an trình chế biến, nhà sản xuất sử dụng nhóm chất bảo quản để tăng giá va n trị thương phẩm kéo dài thời gian sử dụng thực phẩm Trên thị trường nay, tn to có nhiều loại chất bảo quản dùng để kéo dài thời gian sử dụng thực phẩm, đa gh số chất tổng hợp nhân tạo gây nhiều tác dụng phụ không mong p ie muốn khó bị phân huỷ, để lại dư lượng thực phẩm Gây ngộ độc cấp tính w liều lượng dùng giới hạn cho phép, gây ngộ độc mãn tính dùng với thời gian oa nl kéo dài, liên tục, nguy gây hình thành khối u, đột biến gen… [21, 22, 62] Do đó, d nhà nghiên cứu nhà sản xuất ngày có xu hướng sử dụng chất lu an bảo quản có nguồn gốc sinh học, tự nhiên để dần thay chất bảo quản có nguồn gốc nf va hóa học, mà đáp ứng nhu cầu tiêu dùng loại thực phẩm an toàn, đảm bảo oi lm ul chất lượng, kéo dài thời gian sử dụng Việc sử dụng chất kháng khuẩn có nguồn gốc sinh học bacteriocin, đặc biệt Nisin A Nisin Z bảo quản, chế z at nh biến thực phẩm quan tâm nhiều Ngoài khắc phục nhược điểm phương pháp sử dụng hố chất, nhiệt độ, chiếu xạ, Nisin cịn có nhiều ưu điểm z khác phạm vi ứng dụng rộng, giảm thời gian nhiệt độ trùng sản phẩm, @ gm đảm bảo chất lượng, giá trị dinh dưỡng, cảm quan vị sản phẩm m co l Mặc dù nhóm chất bảo quản Nisin coi an toàn sức khỏe người không gây ảnh hưởng đến môi trường, cần tuân thủ theo quy định an Lu khác quốc gia mức cho phép Nisin thực phẩm Hiện n va ac th si 59 Sonomoto, K., et al (2000), ''Biosynthetic production of nisin Z by immobilized Lactococcus lactis IO-1'', Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 10(1-3), p.325-334 60 Stanley, B., et al (2009), ''Separation and determination of closely related lantibiotics by micellar electrokinetic chromatography'', Journal of separation science, 32(17), p.2993-3000 61 Suárez, A.M., et al (1996), ''Development of monoclonal antibodies to the lantibiotic lu nisin A'', Journal of Agricultural and Food Chemistry, 44(9), p.2936-2940 an 62 TODD, E.C (1996), ''Worldwide surveillance of foodborne disease: the need to va n improve'', Journal of food protection, 59(1), p.82-92 tn to 63 Tramer, J and G Fowler (1964), ''Estimation of nisin in foods'', Journal of the Science of ie gh Food and Agriculture, 15(8), p.522-528 p 64 Twomey, D., et al (2002), ''Lantibiotics produced by lactic acid bacteria: structure, function and applications'', Antonie Van Leeuwenhoek, 82(1-4), p.165-185 nl w oa 65 Vandenbergh, P.A (1993), ''Lactic acid bacteria, their metabolic products and d interference with microbial growth'', FEMS Microbiology Reviews, 12(1-3), va an lu p.221-237 66 Wirawan, R.E., et al (2006), ''Molecular and genetic characterization of a novel nisin nf Applied and Environmental oi lm ul variant produced by Streptococcus uberis'', Microbiology, 72(2), p.1148-1156 z at nh 67 Wolf, C and W Gibbons (1996), ''Improved method for quantification of the bacteriocin nisin'', Journal of applied bacteriology, 80(4), p.453-457 z @ 68 Zendo, T., et al (2003), ''Identification of the lantibiotic nisin Q, a new natural nisin l gm variant produced by Lactococcus lactis 61-14 isolated from a river in Japan'', Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 67(7), p.1616-1619 m co an Lu n va ac th 73 si PHỤ LỤC Phụ lục A: Quy định AOAC độ lặp lại độ thu hồi Phụ lục A1 Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC) Tỷ lệ chất Đơn vị RSD (%) 0,01 10-4 100 ppm 5,3 0,001 10-5 10 ppm 7,3 0,0001 10-6 ppm 11 0,00001 10-7 100 ppb 15 0,000001 10-8 10 ppb 21 0,0000001 10-9 1ppb 30 lu Hàm lượng % an n va p ie gh tn to Phụ lục A2 Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC) Tỷ lệ chất Đơn vị Độ thu hồi [%] 10-4 100 ppm 90 - 107 10-5 10 ppm 80 - 110 10-6 ppm 80 - 110 10-7 100 ppb 80 - 110 10-8 10 ppb 60 - 115 oi lm 1ppb 40 - 120 0,01 oa nl w Hàm lượng % d 0,001 ul 0,0000001 nf 0,000001 va 0,00001 an lu 0,0001 10-9 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 74 si Phụ lục B: Sắc đồ Nisin A Nisin Z Phụ lục Sắc đồ chuẩn Nisin A Nisin Z lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình P.1.1 Sắc đồ chuẩn Nisin A oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ Hình P.1.2 Sắc đồ chuẩn Nisin Z an Lu n va ac th 75 si Phụ lục 2: Sắc đồ khảo sát thành phần acid formic pha động Hình P2.1 Sắc đồ Nisin A, Z acid formic 0% lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình P2.2 Sắc đồ Nisin A, Z acid formic 0,05% oi lm ul nf va an lu z at nh Hình P2.3 Sắc đồ Nisin A, Z acid formic 0,1% z m co l gm @ an Lu Hình P2.4 Sắc đồ Nisin A, Z acid formic 0,2% n va ac th 76 si Hình P2.5 Sắc đồ Nisin A, Z acid formic 0,3% Phụ lục 3: Sắc đồ khảo sát nồng độ dung dịch đệm lu an n va ie gh tn to p Hình P 3.1 Sắc đồ Nisin A, Z nồng độ đệm CH3COONH4 – NaCl: 0,05 – 0,5 M d oa nl w oi lm ul nf va an lu Hình P 3.2 Sắc đồ Nisin A, Z nồng độ đệm CH3COONH4 – NaCl: 0,1 – M z at nh z m co l gm @ Hình P 3.3 Sắc đồ Nisin A, Z nồng độ đệm CH3COONH4 – NaCl: 0,2 – M an Lu n va ac th 77 si Hình P 3.4 Sắc đồ Nisin A, Z nồng độ đệm CH3COONH4 – NaCl: 0,4 – 4M Phụ lục 4: Sắc đồ khảo sát pH dung dịch đệm lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình P 4.1 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 2,0 oi lm ul nf va an lu Hình P 4.2 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 2,5 z at nh z m co l gm @ an Lu Hình P 4.3 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 3,0 n va ac th 78 si Hình P 4.4 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 4,0 lu an n va ie gh tn to p Hình P 4.5 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 5,0 d oa nl w ul nf va an lu oi lm Hình P 4.6 Sắc đồ Nisin A, Z pH = 6,6 z at nh Phụ lục 5: Sắc đồ khảo sát tỉ lệ dung môi chiết z m co l gm @ an Lu Hình P 5.1 Sắc đồ Nisin A, Z với tỷ lệ dung môi chiết 2/1 n va ac th 79 si Hình P 5.2 Sắc đồ Nisin A, Z với tỷ lệ dung môi chiết 1/1 lu an n va gh tn to p ie Hình P 5.3 Sắc đồ Nisin A, Z với tỷ lệ dung môi chiết 1/2 d oa nl w Phụ lục 6: Sắc đồ khảo sát số lần chiết oi lm ul nf va an lu z at nh Hình P 6.1 Sắc đồ Nisin A, Z khảo sát với lần chiết z m co l gm @ an Lu Hình P 6.2 Sắc đồ Nisin A, Z khảo sát với lần chiết n va ac th 80 si Hình P 6.3 Sắc đồ Nisin A, Z khảo sát với lần chiết lu an n va Phụ lục : Sắc đồ khảo sát quy trình làm p ie gh tn to d oa nl w Hình P 7.1 Sắc đồ Nisin A, Z với quy trình oi lm ul nf va an lu z at nh z @ m co l gm Hình P 7.2 Sắc đồ Nisin A, Z với quy trình an Lu n va ac th 81 si Phụ lục : Sắc đồ khảo sát tốc độ rửa giải Hình P 8.1 Sắc đồ Nisin A, Z 6ml lu an n va ie gh tn to p Hình P 8.2 Sắc đồ Nisin A, Z 4ml d oa nl w nf va an lu oi lm ul Hình P 8.3 Sắc đồ Nisin A, Z 2ml z at nh Phụ lục 9: Sắc đồ độ lặp lại z m co l gm @ an Lu Hình P9.1 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần n va ac th 82 si Hình P9.2 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần lu an n va tn to p ie gh Hình P9.3 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần d oa nl w an lu oi lm ul nf va Hình P9.4 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần z at nh z m co l gm @ Hình P9.5 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần an Lu n va ac th 83 si Hình P9.6 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng lần lu an n va tn to p ie gh Hình P9.7 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần d oa nl w an lu oi lm ul nf va Hình P9.8 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần z at nh z m co l gm @ Hình P9.9 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần an Lu n va ac th 84 si Hình P9.10 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần lu an n va tn to p ie gh Hình P9.11 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần d oa nl w an lu oi lm ul nf va Hình P9.12 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa bột lần Phụ lục 10: Sắc đồ độ thu hồi z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 85 si Hình P10.1 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng nồng độ 10ppb lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu Hình P10.2 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng nồng độ 20ppb z at nh z m co l gm @ an Lu Hình P10.3 Sắc đồ Nisin A, Nisin Z mẫu sữa lỏng nồng độ 50ppb n va ac th 86 si Phụ lục 11: Sắc đồ số mẫu thực tế lu an Hình P11.1 Sắc đồ mẫu sữa lỏng không phát Nisin A, Nisin Z n va p ie gh tn to d oa nl w an lu oi lm ul nf va Hình P11.2 Sắc đồ mẫu sữa bột khơng phát Nisin A, Nisin Z z at nh z m co l gm @ Hình P11.3 Sắc đồ mẫu phomai không phát Nisin A, Nisin Z an Lu n va ac th 87 si