(Luận văn) thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu trong vắc xin synflorix™

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ──────*****────── LÊ THỊ HÒA lu an n va ie gh tn to THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH NHẬN DẠNG 10 TÝP p KHÁNG NGUYÊN PHẾ CẦU TRONG VẮC XIN w d oa nl SYNFLORIX™ ll u nf va an lu m oi LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh z an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN m co l gm @ Hà Nội - 2015 ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ──────*****────── LÊ THỊ HỊA lu an n va THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH NHẬN DẠNG 10 TÝP tn to KHÁNG NGUYÊN PHẾ CẦU TRONG VẮC XIN p ie gh SYNFLORIX™ nl w d oa Chuyên ngành : Động vật học (Vi sinh vật học) : 60420103 u nf va an lu Mã số ll LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC oi m z at nh z Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Phạm Văn Hùng an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN m co l gm @ Hà Nội - 2015 ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn “Thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™” cơng trình nghiên cứu cá nhân thực hướng dẫn TS Phạm Văn Hùng Các nội dung nghiên cứu kết trình bày luận văn trung thực rõ ràng Hà Nội, ngày 29/10/2015 lu an Học viên n va tn to p ie gh Lê Thị Hòa d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si LỜI CẢM ƠN Lời xin đươ ̣c bày tỏ lòng biế t ơn sâu sắ c tới giáo viên hướng dẫn: TS Phạm Văn Hùng, Phó viện trưởng Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế đã tận tình hướng dẫn truyề n d ạy nhiều kiến thức quý báu đồ ng thời đô ̣ng viên t ạo điều kiện thuận lợi cho quá trin ̀ h nghiên cứu hoàn thành luâ ̣n văn Tôi xin chân thành cảm ơn th ầy, cô giáo đồng nghiệp Viện Sinh Thái Tài Nguyên Sinh Vật-Viện Hàn Lâm Khoa học Công lu an Nghệ Việt Nam giúp đỡ, chia sẻ truyền đạt cho nhiều kiến thức bổ va n ích q trình tơi học tập Viện tn to Tôi xin chân thành cảm ơn tới anh, chị đồng nghiệp Khoa ie gh Quản lý chất lượng Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế p động viên, chia sẻ hỗ trợ cơng việc để tơi có điều kiện học tập thực nl w tốt đề tài nghiên cứu luận văn oa Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ban Lãnh đạo Viện d Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế, Ths Lưu Anh Thư an lu va đồng nghiệp Khoa Kiểm định vắc xin Vi khuẩn, phòng Tổ chức cán bộ, u nf phịng Khoa học Đào tạo đã ln hỗ trợ tạo điều kiện giúp đỡ ll q trình học tập, làm việc để tơi hồn thành luận văn oi m z at nh Đặc biệt, xin dành những tiǹ h cảm thân thương nhấ t gửi tới gia điǹ h tôi, người đã luô n bên , ủng hộ , ̣ng viên tơi suốt q z trình học tập hoàn thành luận văn Học viên m co l gm @ Xin trân trọng cảm ơn ! an Lu Lê Thị Hòa http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt BSA Bovine Serum Albumin Huyết bò CV Coefficient Variation Hệ số biến thiên DT Diphtheria toxoid Giải độc tố Bạch Hầu Enzyme-linked Immunosorbent Phương pháp miễn dịch gắn ELISA lu an n va Enzyme EU European Union Liên hiệp Châu âu GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt GSK Glaxo Smith Kline ie gh tn to assay p ICH Hiệp hội quốc tế hài hòa Harmonization kỹ thuật Dược phẩm International Electrotechnical Ủy ban kỹ thuật điện quốc tế oa nl w IEC International Conference on d Commission lu Tổ chức tiêu chuẩn quốc tế va Standardization u nf Đơn vị quốc tế Internationnal Unit ll IU International Organization for an ISO m Kháng kháng thể oi KKT Kháng nguyên z at nh KN KT Kháng thể z Limulusamoebocyte lysate LOD Limit of detection gm LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng OD Optic density Độ hấp thu mẫu thử Giới hạn phát m co l an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN @ LAL ac th si Pneumococcal Polysaccharide PCV Vắc xin phế cầu cộng hợp vaccine PD Protein D PPV Pneumococcal polysaccharide Vắc xin phế cầu vaccine polysaccharide PS Polysaccharide SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SOP Standard Operating Procedure Qui trình chuẩn National Institute for Control of Viện kiểm định quốc gia vắc lu NICVB xin sinh phẩm y tế an Vaccine and Biologicals va n NTHi Haemophilus influenza Non-typeable H influenzae tn to không định týp Giá trị trung bình ie gh TB p TMB Technical Report Series Báo cáo kỹ thuật Giải độc tố uốn ván Tetanus toxoid d oa Trang thiết bị an lu TTB Cơ chất nl TT w TRS Tetramethylbenzidine World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới USP United States of Pharmacopeia Dược điển Mỹ ll u nf va WHO oi m z at nh z m co l gm @ an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Phế cầu khuẩn số bệnh gây phế cầu khuẩn 1.1.1 Phế cầu khuẩn 1.1.2 Một số bệnh gây phế cầu khuẩn 1.2 Vắc xin phế cầu vắc xin Synflorix™ 1.2.1 Vắc xin phế cầu lu 1.2.2 Vắc xin Synflorix™ 10 an va 1.3 Phương pháp phân tích miễn dịch sử dụng emzym đánh dấu 15 n 1.3.1 Nguyên lý chung 15 1.4 Thẩm định quy trình 18 ie gh tn to 1.3.2 Một số phương pháp ELISA 15 p 1.4.1 Định nghĩa thẩm định quy trình 18 nl w 1.4.2 Phân loại thẩm định quy trình 19 oa 1.4.3 Các thông số thẩm định quy trình 23 d 1.5 Thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin lu va an SynflorixTM phương pháp ELISA 27 u nf CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 ll 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 m oi 2.3 Phương pháp nghiên cứu 30 z at nh 2.3.1 Thiết kế thử nghiệm 30 2.3.2 Cỡ mẫu 30 z gm @ 2.3.3 Quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin SynflorixTM phương pháp ELISA 30 l m co 2.3.4 Xây dựng quy trình thẩm định cho thơng số tiêu chuẩn chấp thuận thông số cần thẩm định 34 an Lu 2.3.5.Cách tính tốn giá trị cut-off cho thơng số 36 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 37 3.1 Giới hạn phát 37 3.2 Độ mạnh 44 3.3 Độ đặc hiệu 48 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 60 4.1 Thử nghiệm có giá trị 60 4.2 Giới hạn phát 60 4.3 Độ mạnh 62 4.4 Độ đặc hiệu 63 lu KẾT LUẬN 64 an KIẾN NGHỊ 65 va n TÀI LIỆU THAM KHẢO p ie gh tn to PHỤ LỤC d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™ 11 Bảng 1.2 Các thơng số dùng thẩm định tồn phần 20 Bảng 1.3 Các thông số dùng thẩm định phần 21 Bảng 1.4 Các thông số dùng tái thẩm định 22 Bảng 1.5 Các thông số dùng thẩm định 26 Bảng 2.1 Mẫu chuẩn, hóa chất sử dụng cho thí nghiệm 28 Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị sử dụng cho thí nghiệm 29 lu Bảng 2.3 Công thức tính giá trị cut-off cho thơng số 36 an Bảng 3.1 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp va n qua lần thử nghiệm 37 gh tn to Bảng 3.2 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp ie qua lần thử nghiệm 38 p Bảng 3.3 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 7F nl w qua lần thử nghiệm 38 d oa Bảng 3.4 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 14 an lu qua lần thử nghiệm 39 u nf va Bảng 3.5 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 19F qua lần thử nghiệm 40 ll oi m Bảng 3.6 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp z at nh qua lần thử nghiệm 40 Bảng 3.7 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 9V z @ qua lần thử nghiệm 41 l gm Bảng 3.8 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 18C qua lần thử nghiệm 42 m co Bảng 3.9 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 6B an Lu qua lần thử nghiệm 42 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Bảng 3.10 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 23F qua lần thử nghiệm 43 Bảng 3.11 Kết lần thử nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu 45 Bảng 3.12 Kết lần thử nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên người thực 47 Bảng 3.13 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp mẫu thử 49 Bảng 3.14 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp mẫu thử 50 lu an Bảng 3.15 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 7F n va mẫu thử 51 tn to Bảng 3.16 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 14 gh mẫu thử 52 p ie Bảng 3.17 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 19F w mẫu thử 53 oa nl Bảng 3.18 Kết lần thử nghiệm nhận dạng týp mẫu thử 54 d Bảng 3.19 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 9V lu va an mẫu thử 55 u nf Bảng 3.20 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 18C ll mẫu thử 56 m oi Bảng 3.21 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 6B z at nh mẫu thử 57 z Bảng 3.22 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 23F @ mẫu thử 58 gm m co l Bảng 4.1 Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu 61 an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si CHƢƠNG BÀN LUẬN 4.1 Thử nghiệm có giá trị Để đánh giá thử nghiệm có giá trị nhóm nghiên cứu thiết kế thử nghiệm cách sử dụng chứng dương công thức tính giá trị cut-off chứng dương, kháng thể đặc hiệu cho 10 týp kháng nguyên nhà sản xuất cung cấp; tất trang dụng cụ, trang thiết bị tham gia thử nghiệm lu thẩm định hiệu chuẩn, người tham gia thử nghiệm an đánh giá tay nghề va n Theo tiêu chuẩn: Thử nghiệm có giá trị tất giếng nhỏ chứng tn to dương cho phản ứng dương tính (Giá trị OD trung bình týp ie gh kháng nguyên phế cầu lớn giá trị cut-off giếng cột 11 nhỏ p chứng dương), q trình thử nghiệm tính tốn kết nhóm thử nl w nghiệm thu kết chứng dương hoàn toàn dương tính d oa quan sát định tính mắt thường hình 3.1; 3.2; 3.3 bên cạnh tính an lu tốn giá trị OD trung bình chứng dương tất týp kháng nguyên va phế cầu vắc xin Synflorix™ lơn giá trị cut-off cho thông ll u nf số giới hạn phát hiện, độ mạnh, độ đặc hiệu oi m Như kết luận thử nghiệm có giá trị thông số cần kiểm tra z at nh qua lần thực thử nghiệm Từ tiếp tục tiến hành đọc kết thử nghiệm ghi lại tất giá trị OD trung bình mẫu thử cho thơng z số cần đánh giá qua lần thực thử nghiệm @ l gm 4.2 Giới hạn phát Giới hạn phát là lượng nhỏ mẫu phân tích xác m co định khơng định lượng giá trị xác Áp dụng an Lu n va 60 ac th si nghiên cứu này, giới hạn phát quy trình độ pha loãng lớn mẫu thử mà phản ứng cịn dương tính Trong nghiên cứu này, dựa vào giá trị OD thu độ lặp lại, tiến hành pha loãng bậc 10 týp kháng nguyên phế cầu Nhóm nghiên cứu phải tiến hành thử nghiệm nhiều lần với độ pha lỗng khác để thiết kế thử nghiệm giới hạn phát cho týp kháng nguyên phế cầu độ pha loãng tương ứng phần kết nêu, kết giới hạn phát thể sau: Bảng 4.1 Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu lu Giới hạn phát (độ pha loãng) Týp 1/80 Týp 1/320 p an Týp kháng nguyên phế cầu Týp 1/640 Týp 6B 1/80 Týp 7F 1/40 Týp 9V 1/320 n va STT ie gh tn to d oa nl w u nf va an lu Týp 14 1/80 ll m Týp 18C Týp 19F 1/320 10 Týp 23F 1/80 oi 1/40 z at nh z @ l gm Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu nằm khoảng từ độ pha loãng 1/40 đến 1/640 Như vậy, khả phát m co kháng nguyên quy trình cao có khác giới hạn phát an Lu týp kháng nguyên Sở dĩ có khác giới hạn phát n va 61 ac th si týp kháng nguyên hàm lượng kháng nguyên týp vắc xin thành phẩm khác sản phẩm tạo thành phản ứng kết hợp kháng nguyên - kháng thể khơng bị rửa trơi quy trình kháng nguyên khác 4.3 Độ mạnh Độ mạnh quy trình thể qua việc đánh giá độ lặp lại, độ xác trung gian điều kiện hay thay đổi điều kiện thử nghiệm mẫu thử, quy trình cho kết lu Với độ lặp lại, người tiến hành lần thử nghiệm lô vắc xin an Synflorix™ làm thử nghiệm đúp cho lần Kết lần thử va n nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu: 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, tn to 6B, 18C 23F lớn giá trị cut-off cho kết dương tính (bảng ie gh 3.12) Kết lần thử nghiệm ổn định nằm khoảng TB ± 2SD p tương ứng với khoảng tin cậy 95% CV týp kháng nguyên phế cầu nl w nhỏ 20 d oa Để xác định độ xác trung gian, chúng tơi thiết kế có thay an lu đổi thời gian người thực Nghiên cứu thực lần thử va nghiệm người mẫu vắc xin ngày khác làm ll u nf thử nghiệm đúp cho lần So sánh kết quả, người thực oi m khác nhau, thời gian tiến hành khác kết OD trung bình z at nh tất týp vắc xin Synflorix™ lớn giá trị cut-off dương tính với kháng nguyên phế cầu Kết người thực z phân tích phần mềm phân tích thống kê SPSS týp @ l gm kháng ngun phế cầu khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê kết thử nghiệm m co Như vậy, với quy trình, thực mẫu thử, an Lu trang thiết bị, hai người thử nghiệm khác khoảng thời gian khác n va 62 ac th si cho kết lặp lại lần thử nghiệm người thực cho kết tương đương (dương tính), quy trình nhận dạng đạt độ mạnh 4.4 Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu khả xác định chất cần tìm có mẫu thử có mặt thành phần khác tá dược, tạp chất, sản phẩm phụ gia , để đánh giá độ đặc hiệu nhóm nghiên cứu sử dụng mẫu thử mẫu có chứa 10 týp kháng nguyên phế cầu (vắc xin Synflorix™); mẫu thử mẫu thêm (thêm lượng 10 týp kháng nguyên phế cầu biết vào vắc xin thương hàn lu an - Typhim vi có chất với kháng nguyên phế cầu polysaccharide n va có hàm lượng kháng nguyên Vi 1,0 μg/ml theo tỉ lệ 1:1); mẫu thử mẫu tn to trắng (mẫu không chứa 10 týp kháng nguyên phế cầu mẫu vắc xin thương ie gh hàn Vi - Typhim Vi) Kết bảng từ 3.13 đến 3.22 cho thấy, mẫu p trắng tất giá trị OD trung bình mẫu nhỏ giá trị cut-off nl w qua lần thực thử nghiệm chứng tỏ xảy phản ứng âm tính tức oa khơng có mặt 10 týp kháng nguyên phế cầu týp 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, 6B, d 18C 23F; mẫu thêm mẫu Synflorix™ giá trị OD trung bình hai mẫu lu va an lớn giá trị cut-off; hai mẫu dương tính với 10 u nf týp kháng nguyên phế cầu týp 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, 6B, 18C 23F; mặt ll khác kết OD thu mẫu thêm mẫu Synflorix™ tương đương nhau, oi m z at nh tức có kháng nguyên phế cầu tham gia phản ứng kết hợp đặc hiệu với kháng thể tương ứng Như vậy, quy trình thử nghiệm cho kết dương tính z có mặt chất cần nhận dạng (mẫu vắc xin SynflorixTM) , có lẫn thành phần @ gm khác (mẫu có chứa vắc xin SynflorixTM vắc xin Typhim Vi) âm tính m co l khơng có mặt chất cần nhận dạng (mẫu vắc Typhim Vi) điều cho thấy quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu đạt độ đặc hiệu an Lu n va 63 ac th si KẾT LUẬN Quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™ có độ tin cậy cao với: Giới hạn phát Giới hạn phát kháng nguyên phế cầu nằm khoảng từ độ pha loãng 1/40 đến 1/640 Độ mạnh thử nghiệm lu Quy trình đạt độ mạnh thay đổi điều kiện thực quy trình, an giống thực thử nghiệm thường quy Các kết thu va n sau thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê Độ đặc hiệu quy trình đánh giá thơng qua việc nhận dạng kháng nguyên phế cầu mẫu có chứa nhiều thành phần p ie gh tn to Độ đặc hiệu d oa nl w khác nhau, cho kết dương tính ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va 64 ac th si KIẾN NGHỊ Quy trình “nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™” đạt yêu cầu giới hạn phát hiện, độ mạnh, độ đặc hiệu theo tiêu chuẩn WHO Đề nghị sử dụng quy trình để kiểm tra nhận dạng vắc xin Synflorix™ Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va 65 ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ môn Vi sinh y học - trường Đại học Y Hà Nội (2007),“Vi sinh y [1] học”, nhà xuất Y học, Hà nội, tr 160-163 Bộ Y tế (2009), "Dược điển Việt Nam IV", nhà xuất Y học, Hà Nội, [2] mục 15.11.Phụ lục 323 Đặng Đức Hậu (2008), “Xác xuất thống kê”, nhà xuất giáo dục, y [3] tế, tr 80-89, 141-143 Hoàng Thanh Dương (2009), “Xác nhận giá trị sử dụng phương [4] lu an pháp”, văn phịng Cơng nhận chất lượng, Tổng cục Tiêu chuẩn đo n va lường chất lượng tn to Học viện quân y (1992),“Vi sinh vật học”, nhà xuất giáo dục đào [5] gh tạo chuyên nghiệp, Hà nội, tr 242-243 Học viện quân y (1999), “Bệnh học truyền nhiễm”, nhà xuất y học, Hà nội, w [7] Học viện quân y (2008),“Vi sinh vật y học”, nhà xuất Quân đội nhân dân, tr 96 p ie [6] Lê Văn Hiệp (2006), “Vắc xin học vấn đề bản”, nhà xuất y học d [8] oa nl tr.15-17 va an Lê Văn Phủng (2009), “Vi khuẩn y học”, nhà xuất Giáo dục Việt Nam ll tr 33-37 u nf [9] lu tr 286 m oi [10] Nguyễn Lê Huyền Trang (2014), “Hướng dẫn thầm định thử nghiệm”, z at nh tài liệu nội Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế z [11] Viện Kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế ( 2014), “Bộ tiêu chuẩn gm @ xuất xưởng vắc xin- sinh phẩm”, tài liệu lưu hành nội bộ, tr.150 – 155 l [12] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), “Thẩm an Lu khoa học kỹ thuật, tr.10-59 m co định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật”, nhà xuất n va ac th si Tài liệu tiếng anh [13] Anh DD, Kilgore PE, Slack MP, Nyambat B, le Tho H, Yoshida LM, Nguyen HA, Nguyen CD, Chong CY, Nguyen D, Ariyoshi K, Clemens JD, Jodar L (2009), “Surveillance of pneumococcal-associated disease among hospitalized children in Khanh Hoa Province, Vietnam”, Clin Infect Dis, 48:57–64 [14] Black RE, Cousens S, Johnson HL, Lawn JE, Rudan I, Bassani DG, Jha P, Campbell H, Walker CF, Cibulskis R, Eisele T, Liu L, Mathers C (2010), “Global, regional, and national causes of child mortality in lu an 2008: a systematic analysis”, Lancet, 375:1969–1987 n va [15] Bogaert D, Ha NT, Sluijter M, Lemmens N, De Groot R, Hermans PW children with upper respiratory tract infections in Hanoi, Vietnam”, J Clin Microbiol, 40:3903–3908 p ie gh tn to (2002), “Molecular epidemiology of pneumococcal carriage among w [16] Chung Keel Lee (2011), “Validation system and inspection”, WHO oa nl global Learning Opptunities for vaccine quanlity, KFDA Medicines Agency d [17] European (2009), “Assessment report for lu va an Synflorix”, London, UK u nf [18] GAVI Alliance (2013), “Pneumococcal disease”, GAVI Factsheet, ll Geneva m oi [19] Guidelines for Independent Lot Release of Vaccines by Regulatory z at nh Authorities, World Health Organization, 2010 z [20] ICH Q2A (1995),“Guidline for validation of analytical methods: on Harmonisation of Technical l Conference gm @ definitions and terminology”,CPMP/ICH/381/95, The International Requirements for m co Registration of Pharmaceuticals for Human Use, London, UK an Lu n va ac th si [21] ICH Q2B,(1995), “Guidline for validation of analytical procedures: methodology”, CPMP/ICH/381/95, The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use , London, UK [22] Kim SH, Song JH, Chung DR, Thamlikikul V, Yang Y, Wang H, Lu M, So TM, Hsueh PR, Yasin RM, Carlos CC, Pham HV, Lalitha MK, Shimono N, Perera J, Shibl AM, Baek JY, Kang CI, Ko KS, Peck KR (2012), “Changing trend of antimicrobial resistance and serotypes in Streptococcus pneumoniae in Asian countries: an ANSORP study”, lu Antimicrob Agents Chemother, 56:1418-1425 an va [23] Lin T Z Summary of invasive pneumococcal disease burden among n children in the Asia-Pacic region Vaccine 28 (2010), pp7589–7605 Institute (NVI) p ie gh tn to [24] Lonneke Levels (2010), "Method validation, part one" Nederlands Vaccin [25] Teeranart Jivapaisarnpong (2006), "Validation of bioassay" Training nl w course on quality control of vaccines used in EPI, Ha Noi d oa [26] Summary Protocol for Synflorix™ vaccine (2010), GSK an lu [27] USP (2013), “Validation and Verification of Analytical procedures” va Training course, Hà nội pp 3-7 ll u nf [28] WHO (1992), "Good manufacturing practices for biological products WHO oi m expert committee on biological standardization" Technical Report Series z at nh No.822, forty - second Report [29] WHO (1997),“ Part 2: validation,WHO guide to good manufacturing z practice (GMP) requirement”, Geneva @ gm [30] WHO-TRS No 927 Annex (2005), “Recommendation for production l and control of pneumococcal conjugate vaccines”, pp72-84 an Lu Press, New York, USA m co [31] Whale walker (2008), “The ELISA guide book”, 2nd edition, Humana n va ac th si [32] WHO (1997), “Manual of laboratory methods” For testing of vaccines used in the WHO Expanded programe on Immunization, pp 72-86 [33] WHO (2001), “Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 85 [34] WHO (2004), “Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 87 [35] WHO (2006), “Validation” Supplementary guidelines on good manufacturing practice (GMP) Technical report series, No 937, annex 4, pp 107-119 lu an [36] WHO (2000), “Supplementary information on vaccine safety”, n va departmnet of vaccines and biologys, pp75 tn to [37] WHO in- country workshop on analytical method validation, 17 gh February 2014, Ha Noi –Viet Nam p ie [38] WHO position paper-Wkly Epidemiol Dec 2012, 87 (14): 129-144 w [39] Yeowon Sohn (2011), “Analytical method validation of bioassay” oa nl Training course on quanlity control of vaccines used in EPI, Ha Noi d Các trang Web lu va an [40] Http://niheold.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-ky- ll pneumoniae.vhtm u nf thuat/954/Qui-trinh-nuoi-cay-phan-lap-vi-khuan-Streptococcus- m oi [41] Http://www.historyofvaccines.org/content/timelines/Pneumococcal z at nh [42] Http://www.phoiviet.com/benh-tiem-ngua-phe-cau z [43] Http://www.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-ky- @ thuat/147/phe-cau-khuan-spneumoniae.vhtm m co l gm an Lu n va ac th si PHỤ LỤC PHỤ LỤC CÁCH PHA LOÃNG KHÁNG THỂ Kháng thể Độ pha kháng týp lỗng Cơng thức pha 40µl dung dịch mẹ + 3960µl dung dịch post-coating 1/100 7F 14 lu - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 490µl dung dịch an va post-coating (1/50) n 19F - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch 1/5000 to tn post-coating (1/100) post-coating (1/100) - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch p ie gh - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 990µl dung dịch nl w oa 1/150000 post-coating (1/100) - Dung dịch 3: 350µl dung dịch + 4900µl dung dịch d 1/250000 - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 990µl dung dịch u nf 18C post-coating (1/15) va an lu 9V ll post-coating (1/100) m oi - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch z at nh post-coating (1/100) - Dung dịch 3: 200µl dung dịch + 4800µl dung dịch z 50µl dung dịch mẹ + 2450µl dung dịch post-coating m co l 23F 1/50 gm 6B @ post-coating (1/25) an Lu n va ac th si PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH RỬA VÀ HẬU PHỦ PHIẾN Pha dung dịch rửa: Tên hóa chất Công thức lu an NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g Na2HPO4 1.15g KCl 0.2g Tween 20 1ml Vừa đủ 100ml n va Nước cất lần tn to ie gh Pha dung dịch hậu phủ phiến PBS Tween 20 – BSA 1%: p Tên hóa chất Cơng thức 1g Dung dịch rửa 100ml d oa nl w BSA va an lu Chú ý: ll u nf Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH DỪNG PHẢN ỨNG Tên hóa chất Công thức H2SO4 98% 2.717ml Nước cất lần Vừa đủ 100ml lu an Chú ý: n va Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH ĐỆM CARBONATE 0,05M Pha dung dịch đệm carbonate 0,2M: a Công thức Natri bicarbonate 1.172g Natri carbonate 0,636g Nước cất lần Vừa đủ 100ml lu Tên hóa chất an n va tn to Pha dung dịch đệm carbonate 0,05M: p ie gh b Công thức Dung dịch đệm carbonate 0,2M 25ml oa nl w Tên hóa chất d Nước cất lần 75ml u nf va an lu Chú ý: ll Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH CỘNG HỢP - Dung dịch 1: Tên hóa chất Cơng thức 980 µl Dung dịch hậu phủ phiến (post-coating) Dung dịch Protein A – peroxidase 20µl lu an va - Dung dịch 2: n Công thức Dung dịch hậu phủ phiến (post-coating) 9.1ml Dung dịch 15ml p ie gh tn to Tên hóa chất d oa nl w an lu Chú ý: Dung dịch dùng sau pha ll u nf va oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si