(Luận văn) nghiên cứu tinh chế và xác định hoạt tính kháng khuẩn của peptide mastoparan từ nọc ong vespa velutina thu ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu an va n Phạm Thị Huế ie gh tn to p NGHIÊN CỨU TINH CHẾ VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA PEPTIDE MASTOPARAN TỪ NỌC ONG Vespa velutina THU Ở VIỆT NAM d oa nl w nf va an lu lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh oi z m co l gm @ an Lu Hà Nội- 2021 n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu an va n Phạm Thị Huế gh tn to p ie NGHIÊN CỨU TINH CHẾ VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA PEPTIDE MASTOPARAN TỪ NỌC ONG Vespa velutina THU Ở VIỆT NAM d oa nl w lu nf va an Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh oi z NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Hướng dẫn m co l gm @ TS Lê Thị Bích Thảo an Lu Hà Nội-2021 n va ac th si Lời cam đoan Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu luận văn cơng trình nghiên cứu dựa tài liệu, số liệu tơi tự tìm hiểu nghiên cứu Chính vậy, kết nghiên cứu đảm bảo trung thực khách quan Đồng thời, kết chưa xuất nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực sai tơi hồn chịu trách nhiệm Tác giả luận văn lu an n va p ie gh tn to Phạm Thị Huế d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Lời cảm ơn Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Lê Thị Bích Thảo, người tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tới GS.TS Phan Văn Chi, TS Bùi Thị Huyền, TS Phạm Đình Minh tồn thể anh chị làm việc phịng Hóa sinh Protein, Phịng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Gen, Viện Công nghệ Sinh học; lu an n va p ie gh tn to Tôi xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Thị Phương Liên, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; TS Phạm Thị Hằng, Viện Sốt rét – Ký sinh trùng- Côn trùng Trung ương; Trung tâm Bệnh nhiệt đới, Bệnh viện Bạch Mai; ban Lãnh đạo, phòng Đào tạo, phòng chức Học viện Khoa học Cơng nghệ hết lịng giúp đỡ thực thành công luận văn d oa nl w Cuối cùng, vô biết ơn gia đình, bạn bè, người thân ln khích lệ, động viên, giúp đỡ chỗ dựa vững cho quãng thời gian qua lu nf va an Xin chân thành cảm ơn! z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Chữ viết tắt Tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitrile AMP Ampicillin Ampicillin CFU Colony-forming unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc CHCA α-Cyano-4- α-Cyano-4-hydroxycinnamic hydroxycinnamic acid acid CIP Ciprofloxacin Ciprofloxacin Da Dalton Dalton Fraction Phân đoạn Fraction Phân đoạn lu Tiếng Anh an n va gh tn to p ie F7 oa Formic acid Acid formic d FA nl w F9 an lu Imipenem Imipenem KAN Kanamycin LEV Levofloxacin LPS Lipopolysaccharid MALDI Matrix-assisted laser Kỹ thuật ion hóa theo chế desorption/ionization giải hấp phụ sử dụng nguồn nf va IMP lm ul Kanamycin z at nh oi Levofloxacin z Lipopolysaccharid m co l gm @ an Lu n va ac th si laser với trợ giúp chất Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii kháng Acinetobacter baumannii đa thuốc mAu Milli Absorbance unit Mili đơn vị hấp thụ MCD Mast cell degranulating Phân hủy tế bào Mast MP Mastoparan Mastoparan tổng hợp MRSE Methicillin-resistant Methicillin-resistant Staphylococcus Staphylococcus epidermidis MDRAB lu an n va to ie gh tn epidermidis p MS Khối phổ Oxacilin Oxacilin oa nl OXA w Mass Spectrometry Phospholipase A-2 an lu Reverse Phase High- Sắc ký lỏng hiệu cao pha Performance Liquid đảo nf va RP-HPLC Phospholipase A-2 d PLA2 lm ul z at nh oi Chromatography SXT Trimethoprim/Sulfameth Ampicillin/sulbactam Trimethoprim/Sulfamethoxazol gm @ Ampicillin/sulbactam z SAM e Trifluoroacetic acid Acid trifluoroacetic m TFA co l oxazole an Lu n va ac th si TFE Tetrafluoroethylene Tetrafluoroethylene TOF Time of Flight Thời gian bay lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Danh mục bảng Bảng 1.1 Một số protein peptide tìm thấy nọc ong 13 Bảng 1.2 Trình tự amino acid số peptide mastoparan từ nọc số loài ong 18 Bảng 2.1 Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 29 Bảng 2.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 30 Bảng 3.1 Kết nhận diện phân đoạn phần mềm PEAK 40 Bảng 3.2 Kết nhận diện phân đoạn phần mềm PEAK 41 lu Bảng 3.3 Hiệu ức chế sinh trưởng F9 chủng vi khuẩn 46 an n va Bảng 3.4 Hiệu ức chế sinh trưởng phân đoạn F7 chủng vi khuẩn 49 p ie gh tn to Bảng 3.5 Kết thử nghiệm xác định nồng độ ức chế tối thiểu MP chủng vi khuẩn kháng kháng sinh 52 d oa nl w Bảng 3.6 Mức độ nhạy cảm vi khuẩn MP loại thuốc kháng sinh 56 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Danh mục hình Hình 1.1 Ong Vespa velutina (Lepeletier) Hình 1.2 Ong Vespa velutina nigrithorax mặt lưng (phía trên) bụng (phía dưới) Hình 1.3 Ong Vespa velutina nigrithorax (bên trái) đực (bên phải) Hình 1.4 Nọc ong săn mồi nguồn hợp chất có hoạt tính sinh học ứng dụng chúng Hình 1.5 Một số hợp chất thành phần nọc ong 10 lu Hình 1.6 Cấu trúc 3D Mastoparan X xác định NMR 16 an n va Hình 1.7 Sự so sánh trình tự gốc amino acid polypeptide tiền thân mastoparan 17 gh tn to Hình 1.8 Các mơ hình để giải thích chế thấm qua màng 24 p ie Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bước tiến hành 31 w Hình 3.1 Ong Vespa velutina 35 oa nl Hình 3.2 Cơ quan nọc độc ong Vespa velutina sau giải phẫu 36 d Hình 3.3 Sắc ký đồ phân đoạn dịch chiết nọc ong Vespa velutina 37 nf va an lu Hình 3.4 Phổ MALDI-TOF phân đoạn (A) phân đoạn (B) 39 lm ul z at nh oi Hình 3.5 Giải trình tự peptide phân đoạn F7 (A) F9 (B) có chứa mastoparan sử dụng De novo 42 Hình 3.6 Sự so sánh trình tự F7 F9 với mastoparan từ loài ong chi Vespa 43 z l gm @ Hình 3.7 Phổ MALDI -TOF MP hỗn hợp peptide sau tổng hợp 44 m co Hình 3.8 Hiệu ức chế sinh trưởng mastoparan phân đoạn số chủng vi khuẩn 45 an Lu n va ac th si Hình 3.9 Hiệu ức chế sinh trưởng mastoparan phân đoạn số chủng vi khuẩn 48 Hình 3.10 Kết Thử hoạt tính kháng khuẩn MP chủng vi khuẩn kháng kháng sinh theo nồng độ 53 Hình 3.11 Kết xác định mức độ nhạy cảm MP kháng sinh chủng vi khuẩn kháng kháng sinh 55 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 54 Như số nghiên cứu Katsu cộng (1990) [55] Nakahata cộng (1990) [56] đề cập, mastoparan chèn vào lớp màng lipid kép dẫn đến ổn định màng phân huỷ tế bào, tương tác trực tiếp với protein G bề mặt tế bào chất, gây nhiễu tín hiệu màng tế bào [5556] Đối với khả kháng khuẩn mastoparan, kết thử nghiệm MP chủng vi khuẩn kháng kháng sinh khác với chủng liên quan đến khác biệt cấu trúc màng ngồi tính chất loài vi khuẩn lu Ngoài việc xác định nồng độ ức chế tối thiểu MP chủng vi khuẩn, tiến hành xác định mức độ nhạy cảm MP kháng sinh chủng vi khuẩn kháng kháng sinh (Hình 3.11, Bảng 3.6) an n va p ie gh tn to Chủng A baumanii chủng vi khuẩn kháng loại kháng sinh Ampicillin, Pipercillin/tazobactam, Cefazoline, Gentamycin, Ciprofloxacin, Levofloxacin K pneumoniae kháng với kháng sinh: Trimethoprim/ Sulfamethoxazone, Ampicillin, Ceftazidime Còn Salmonella spp kháng với Ampicillin MRSE kháng Methicillin Do kháng sinh lựa chọn làm đối chứng dương kháng sinh mà vi khuẩn nhạy cảm sử dụng điều trị, kháng sinh làm đối chứng âm kháng sinh mà vi khuẩn kháng d oa nl w lu nf va an Khi tiến hành thử nghiệm mức độ nhạy cảm vi khuẩn MP kháng sinh, nồng độ MP 180 µg/khoanh giấy sử dụng chủng K pneumonia, A baumannii, Salmonella spp., cho thấy vòng kháng khuẩn với đường kính 12,00; 12,00 10,00 mm; nhiên, chủng MRSE, MP với nồng độ 60 µg/khoanh giấy cho thấy vịng kháng khuẩn có đường kính 10,09 mm z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 55 (B) (A) NC SAM NC MP LEV MP IPM IPM SXT CIP lu (D) an (C) n va gh tn to NC MP CIP p ie w SXT AMP d oa nl nf va an lu z at nh oi lm ul Hình 3.11 Kết xác định mức độ nhạy cảm MP kháng sinh chủng vi khuẩn kháng kháng sinh z (A): chủng vi khuẩn A baumannii (B)chủng vi khuẩn K pneumonia; (C): Salmonella spp; (D): MRSE 1, 2, nồng độ MP tương ứng với 15; 30; 60 µg, 4: kháng sinh KAN-30 µg NC: khơng có kháng sinh; MP 180 µg; AMP: AMP-20 µg; CIP: CIP-5 µg; IPM: IPM-10 µg; SAM: SAM-20 µg; SXT: SXT-25 µg; LEV: LEV-5 µg m co l gm @ an Lu n va ac th si 56 lu an n va tn to Bảng 3.6 Mức độ nhạy cảm vi khuẩn MP loại thuốc kháng sinh p ie gh Kích thước vịng kháng khuẩn (mm) IPM SXT CIP SAM LEV KAN MP MP 20 µg 10 µg 25 µg µg 20 µg µg 30 µg 180 µg 60 µg 19,33 ±0,58 - - 21,00 - 12,00 - ±0,00 ±0,00 - 10,00 ±0,00 - ll A baumannii fu an nv a lu K pneumonia d oa nl w AMP 14,00 m - z at nh 21,00 ±0,00 30,00 z - - - - - 10,00 ±0,00 - - - 26,32 10,90 ±0,68 ±0.75 m o l.c - 12,00 ±0,00 ±0,00 gm @ MRSE - ±0,00 oi Salmonella spp - an Lu -: không thử nghiệm; AMP: ampicillin; IPM: Imipenem; SAM: Ampicillin/sulbactam; SXT: Trimethoprim/Sulfamethoxazole; KAN: Kanamycin; LEV: Levofloxacin; CIP: Ciprofloxacin; MP: mastoparan tổng hợp n va ac th si 57 So sánh MP kháng sinh thử nghiệm MP có độ nhạy thấp kháng sinh thử, nhiên MP có khối lượng phân tử lớn (xấp xỉ 1556 Da), nên cần tối ưu hàm lượng MP dùng cho thử nghiệm lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN - Tách chiết mastoparan từ nọc ong Vespa velutina có đồng phân với trình tự amino acid là: INWKGIAAMAKKL (1444,93 Da) INWKGIAAMAKKLL (1557,03 Da) - Mastoparan tự nhiên tách chiết từ nọc ong Vespa velutina có hàm lượng mg với độ tinh khiết 99 % Chúng cho thấy hiệu kháng khuẩn chủng vi khuẩn bao gồm E coli, S flexneri, S typhimurium, S aureus lu - Mastoparan tổng hợp nhân tạo với trình tự INWKGIAAMAKKLL có hàm lượng 10 mg với độ tinh khiết 99 % MP cho thấy hoạt tính kháng vi khuẩn chủng vi khuẩn kháng kháng sinh bao gồm: Salmonella spp, K pneumonia, A baumannii, MRSE an n va gh tn to 4.2 KIẾN NGHỊ p ie - Tiến hành thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật mastopraran từ nọc ong Vespa velutina thêm chủng vi sinh vật khác nấm d oa nl w - Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn mastoparan kết hợp với kháng sinh khác nf va an lu - Thử nghiệm hoạt tính khác mastoparan từ nọc ong Vespa velutina hoạt tính chống ung thư z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Monceau K., Bonnard O and Thiéry D., 2014, Vespa velutina: a new invasive predator of honeybees in Europe, Journal of Pest Science, 87(1), pp.116 Robinet C., Suppo C and Darrouzet E., 2017, Rapid spread of the invasive yellow‐legged hornet in F rance: the role of human‐mediated dispersal and the effects of control measures, Journal of Applied Ecology, 54(1), pp.205-215 lu Kishi S and Goka K., 2017, Review of the invasive yellow-legged hornet, Vespa velutina nigrithorax (Hymenoptera: Vespidae), in Japan and its possible chemical control, Applied Entomology and Zoology, 52(3), pp.361-368 an n va gh tn to Bertolino S., Lioy S., Laurino D., Manino A and Porporato M., 2016, Spread of the invasive yellow-legged hornet Vespa velutina (Hymenoptera: Vespidae) in Italy, Applied entomology and zoology, 51(4), pp.589-597 p ie Budge G.E., Hodgetts J., Jones E.P., Ostojá-Starzewski,J.C., Hall J., Tomkies V., Semmence N., Brown M., Wakefield M and Stainton K., 2017, The invasion, provenance and diversity of Vespa velutina Lepeletier (Hymenoptera: Vespidae) in Great Britain, PLoS One, 12(9), p.e0185172 d oa nl w nf va an lu Leza M., Miranda M.Á and Colomar V., 2018, First detection of Vespa velutina nigrithorax (Hymenoptera: Vespidae) in the Balearic Islands (Western Mediterranean): a challenging study case, Biological Invasions, 20(7), pp.1643-1649 lm ul z at nh oi Husemann M., Sterr A., Maack S and Abraham R., 2020, The northernmost record of the Asian hornet Vespa velutina nigrithorax (Hymenoptera, Vespidae), Evolutionary Systematics, 4, p.1 z m co l gm @ Nguyen L.T., Saito F., Kojima J.I and Carpenter J.M., 2006, Vespidae of Viet Nam (Insecta: Hymenoptera) Taxonomic Notes on Vespinae, Zoological science, 23(1), pp.95-104 an Lu n va ac th si 60 Carpenter J.M and Kojima J.I., 1997, Checklist of the species in the subfamily Vespinae (Insecta: Hymenoptera: Vespidae), Natural history bulletin of Ibaraki University, 1, pp.51-92 10 van der Vecht J., 1957, The Vespinae of the Indo-Malayan and Papuan areas (Hymenoptera, Vespinae), Zoologische Verhandelingen, 34, pp 1-83 11 www.cabi.org 12 Ueno T., 2014, Establishment of the invasive hornet Vespa velutina (Hymenoptera: Vespidae) in Japan, Int J Chem Environ Biol Sci, 2(4), pp.220222 lu an n va ie gh tn to 13 El-Wahed A., Yosri N., Sakr H.H., Du M., Algethami A.F., Zhao C., Abdelazeem A.H., Tahir H.E., Masry S.H., Abdel-Daim M.M and Musharraf S.G., 2021, Wasp Venom Biochemical Components and Their Potential in Biological Applications and Nanotechnological Interventions, Toxins, 13(3), p.206 p 14 De Lima P.R and Brochetto-Braga M.R., 2003, Hymenoptera venom review focusing on Apis mellifera, Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, 9(2), pp.149-162 d oa nl w nf va an lu 15 Cichocka-Jarosz E., 2012, Hymenoptera venom allergy in humans, Folia medica Cracoviensia, 52(3-4), pp 43-60 z at nh oi lm ul 16 Gräler M.H and Goetzl E.J., 2002, Lysophospholipids and their G proteincoupled receptors in inflammation and immunity, Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids, 1582(1-3), pp.168-174 z 17 Girish K.S and Kemparaju K., 2007, The magic glue hyaluronan and its eraser hyaluronidase: a biological overview, Life sciences, 80(21), pp.19211943 gm @ m co l 18 Dotimas E.M., Hamid K.R., Hider R.C and Ragnarsson U., 1987, Isolation and structure analysis of bee venom mast cell degranulating peptide, Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Protein Structure and Molecular Enzymology, 911(3), pp.285-293 an Lu n va ac th si 61 19 Ziai M.R., RUSSEK S., WANG H.C., BEER B and BLUME A.J., 1990, Mast cell degranulating peptide: a multi‐functional neurotoxin, Journal of pharmacy and pharmacology, 42(7), pp.457-461 20 Sharma J.N., 2014, Basic and clinical aspects of bradykinin receptor antagonists, Recent Developments in the Regulation of Kinins, pp.1-14 21 Shkenderov S and Koburova K., 1982, Adolapin-a newly isolated analgetic and anti-inflammatory polypeptide from bee venom, Toxicon, 20(1), pp.317321 lu 22 Moreno M and Giralt E., 2015, Three valuable peptides from bee and wasp venoms for therapeutic and biotechnological use: melittin, apamin and mastoparan, Toxins, 7(4), pp.1126-1150 an n va gh tn to 23 Raghuraman H and Chattopadhyay A., 2007, Melittin: a membrane-active peptide with diverse functions, Bioscience reports, 27(4-5), pp.189-223 p ie 24 Hood J.L., Jallouk A.P., Campbell N., Ratner L and Wickline S.A., 2013, Cytolytic nanoparticles attenuate HIV-1 infectivity, Antivir Ther, 18(1), pp.95103 nl w d oa 25 Pease J.H and Wemmer D.E., 1988, Solution structure of apamin determined by nuclear magnetic resonance and distance geometry, Biochemistry, 27(22), pp.8491-8498 nf va an lu z at nh oi lm ul 26 Banks B.E.C., Brown C., Burgess G.M., Burnstock G., Claret M., Cocks T.M and Jenkinson D.H., 1979, Apamin blocks certain neurotransmitterinduced increases in potassium permeability, Nature, 282(5737), pp.415-417 z 27 Higashijima T., Uzu S., Nakajima T and Ross E.M., 1988, Mastoparan, a peptide toxin from wasp venom, mimics receptors by activating GTP-binding regulatory proteins (G proteins), Journal of Biological Chemistry, 263(14), pp.6491-6494 l gm @ m co 28 Wood C.L and Hoffman D.R., 1983, Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis of hymenoptera venom and venom sac extracts, Toxicon, 21(2), pp.291-299 an Lu n va ac th si 62 29 Weinstock G.M., Robinson G.E., Gibbs R.A., Worley K.C., Evans J.D., Maleszka R., Robertson H.M., Weaver D.B., Beye M., Bork P and Elsik C.G., 2006, Insights into social insects from the genome of the honeybee Apis mellifera, Nature, 443(7114), pp.931-949 30 Chan Q.W., Chan M.Y., Logan M., Fang Y., Higo H and Foster L.J., 2013, Honey bee protein atlas at organ-level resolution, Genome research, 23(11), pp.1951-1960 31 Kwon Y.B., Lee J.D., Lee H.J., Han H.J., Mar W.C., Kang S.K., Beitz A.J and Lee J.H., 2001, Bee venom injection into an acupuncture point reduces arthritis associated edema and nociceptive responses, Pain, 90(3), pp.271-280 lu an n va 32 Park H.J., Lee S.H., Son D.J., Oh K.W., Kim K.H., Song H.S., Kim G.J., Oh G.T., Yoon D.Y and Hong J.T., 2004, Antiarthritic effect of bee venom: p ie gh tn to Inhibition of inflammation mediator generation by suppression of NF‐κB through interaction with the p50 subunit, Arthritis & rheumatism, 50(11), pp.3504-3515 d oa nl w 33 Varanda E.A and Tavares D.C., 1998, Radioprotection: mechanisms and radioprotective agents including honeybee venom, Journal of Venomous Animals and Toxins, 4(1), pp.5-21 lu an 34 Varanda E.A., Monti R and Tavares D.C., 1999, Inhibitory effect of nf va propolis and bee venom on the mutagenicity of some direct‐and indirect‐acting lm ul mutagens, Teratogenesis, carcinogenesis, and mutagenesis, 19(6), pp.403-413 z at nh oi 35 Nam K.W., Je K.H., Lee J.H., Han H.J., Lee H.J., Kang S.K and Mar W., 2003, Inhibition of COX-2 activity and proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) production by water-soluble sub-fractionated parts from bee (Apis mellifera) venom, Archives of pharmacal research, 26(5), pp.383-388 z @ m co l gm 36 Son D.J., Lee J.W., Lee Y.H., Song H.S., Lee C.K and Hong J.T., 2007, Therapeutic application of anti-arthritis, pain-releasing, and anti-cancer effects of bee venom and its constituent compounds, Pharmacology & therapeutics, 115(2), pp.246-270 an Lu n va ac th si 63 37 Jalaei J., Fazeli M., Rajaian H and Shekarforoush S.S., 2014, In vitro antibacterial effect of wasp (Vespa orientalis) venom, Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, 20(1), pp.1-6 38 Blondelle S.E and Houghten R.A., 1991, Hemolytic and antimicrobial activities of the twenty-four individual omission analogs of melittin, Biochemistry, 30(19), pp.4671-4678 39 Stockwell V.O and Duffy B., 2012, Use of antibiotics in plant agriculture, Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties, 31(1) lu 40 dos Santos-Pinto J.R.A., Perez-Riverol A., Lasa A.M and Palma M.S., 2018, Diversity of peptidic and proteinaceous toxins from social Hymenoptera venoms, Toxicon, 148, pp.172-196 an n va ie gh tn to 41 Lee S.H., Baek J.H and Yoon K.A., 2016, Differential properties of venom peptides and proteins in solitary vs social hunting wasps, Toxins, 8(2), p.32 p 42 Todokoro Y., Yumen I., Fukushima K., Kang S.W., Park J.S., Kohno T., Wakamatsu K., Akutsu H and Fujiwara T., 2006, Structure of tightly membrane-bound mastoparan-X, a G-protein-activating peptide, determined by solid-state NMR, Biophysical journal, 91(4), pp.1368-1379 d oa nl w lu nf va an 43 Hirai Y., Yasuhara, T., Yoshida H., Nakajima T., Fujino M and Kitada C., 1979a, A new mast cell degranulating peptide" mastoparan" in the venom of Vespula lewisii, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 27(8), pp.1942-1944 lm ul z at nh oi 44 Hirai Y., Kuwada M., Yasuhara T., Yoshida H and Nakajima T., 1979b, A new mast cell degranulating peptide homologous to mastoparan in the venom of Japanese hornet (Vespa xanthoptera), Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 27(8), pp.1945-1946 z gm @ m co l 45 Todokoro Y., Yumen I., Fukushima K., Kang S.W., Park J.S., Kohno T., Wakamatsu K., Akutsu H and Fujiwara T., 2006, Structure of tightly membrane-bound mastoparan-X, a G-protein-activating peptide, determined by solid-state NMR, Biophysical journal, 91(4), pp.1368-1379 an Lu n va ac th si 64 46 Lin C.H., Tzen J.T., Shyu C.L., Yang M.J and Tu W.C., 2011, Structural and biological characterization of mastoparans in the venom of Vespa species in Taiwan, Peptides, 32(10), pp.2027-2036 47 Lee V.S.Y., Tu W.C., Jinn T.R., Peng C.C., Lin L.J and Tzen J.T.C., 2007, Molecular cloning of the precursor polypeptide of mastoparan B and its putative processing enzyme, dipeptidyl peptidase IV, from the black‐bellied hornet, Vespa basalis, Insect molecular biology, 16(2), pp.231-237 48 Argiolas A and Pisano J.J., 1984, Isolation and characterization of two new peptides, mastoparan C and crabrolin, from the venom of the European hornet, Vespa crabro, Journal of Biological Chemistry, 259(16), pp.10106-10111 lu an n va tn to 49 Hirai Y., Yasuhara T., Yoshida H and Nakajima T., 1981, A new mast cell degranulating peptide, mastoparan-M, in the venom of the hornet Vespa mandarinia, Biomedical Research, 2(4), pp.447-449 p ie gh 50 Čeřovský V., Slaninová J., Fučík V., Hulačová H., Borovičková L., Ježek R and Bednárová L., 2008, New potent antimicrobial peptides from the venom of Polistinae wasps and their analogs, Peptides, 29(6), pp.992-1003 nl w d oa 51 Brogden K.A., 2005, Antimicrobial peptides: pore formers or metabolic inhibitors in bacteria?, Nature reviews microbiology, 3(3), pp.238-250 lu nf va an 52 dos Santos Cabrera M.P., Arcisio-Miranda M., da Costa L.C., de Souza, B.M., Costa S.T.B., Palma M.S., Neto J.R and Procopio J., 2009, Interactions of mast cell degranulating peptides with model membranes: a comparative biophysical study, Archives of biochemistry and biophysics, 486(1), pp.1-11 z at nh oi lm ul z 53 de Souza B.M., dos Santos Cabrera M.P., Neto J.R and Palma M.S., 2011, Investigating the effect of different positioning of lysine residues along the peptide chain of mastoparans for their secondary structures and biological activities, Amino Acids, 40(1), pp.77-90 l gm @ m co 54 de Souza B.M and Palma M.S., 2008, Monitoring the positioning of short polycationic peptides in model lipid bilayers by combining hydrogen/deuterium exchange and electrospray ionization mass an Lu n va ac th si 65 spectrometry, Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranes, 1778(12), pp.2797-2805 55 Katsu T., Kuroko M., Morikawa T., Sanchika K., Yamanaka H., Shinoda S and Fujita Y., 1990, Interaction of wasp venom mastoparan with biomembranes, Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranes, 1027(2), pp.185-190 56 Nakahata N., Abe M.T., Matsuoka I and Nakanishi H., 1990, Mastoparan inhibits phosphoinositide hydrolysis via pertussis toxin-intensive G-protein in human astrocytoma cells, FEBS letters, 260(1), pp.91-94 lu 57 Rocha T., de Souza B.M., Palma M.S and da Cruz-Höfling M.A., 2007, Myotoxic effects of mastoparan from Polybia paulista (Hymenoptera, Epiponini) wasp venom in mice skeletal muscle, Toxicon, 50(5), pp.589-599 an n va p ie gh tn to 58 Dongol Y., L Dhananjaya B., K Shrestha R and Aryal G., 2016, Wasp venom toxins as a potential therapeutic agent, Protein and peptide letters, 23(8), pp.688-698 d oa nl w 59 Lin C.H., Hou R.F., Shyu C.L., Shia W.Y., Lin C.F and Tu W.C., 2012, In vitro activity of mastoparan-AF alone and in combination with clinically used antibiotics against multiple-antibiotic-resistant Escherichia coli isolates from animals, Peptides, 36(1), pp.114-120 nf va an lu z at nh oi lm ul 60 dos Santos Cabrera M.P., Alvares D.S., Leite N.B., Monson de Souza B., Palma M.S., Riske K.A and Ruggiero Neto J., 2011, New insight into the mechanism of action of wasp mastoparan peptides: lytic activity and clustering observed with giant vesicles, Langmuir, 27(17), pp.10805-10813 z 61 Leite N.B., Da Costa L.C., dos Santos Alvares D., dos Santos Cabrera M.P., de Souza B.M., Palma M.S and Neto J.R., 2011, The effect of acidic residues and amphipathicity on the lytic activities of mastoparan peptides studied by fluorescence and CD spectroscopy, Amino Acids, 40(1), pp.91-100 co l gm @ m 62 Yamamoto T., Ito M., Kageyama K., Kuwahara K., Yamashita K., Takiguchi Y., Kitamura S., Terada H and Shinohara Y., 2014, Mastoparan peptide causes mitochondrial permeability transition not by interacting with an Lu n va ac th si 66 specific membrane proteins but by interacting with the phospholipid phase, The FEBS journal, 281(17), pp.3933-3944 63 De Souza B.M., da Silva A.V.R., Resende V.M.F., Arcuri H.A., dos Santos Cabrera M.P., Neto J.R and Palma M.S., 2009, Characterization of two novel polyfunctional mastoparan peptides from the venom of the social wasp Polybia paulista, Peptides, 30(8), pp.1387-1395 lu 64 Dos Santos Cabrera M.P., Arcisio-Miranda M., Gorjao R., Leite N.B., de Souza B.M., Curi R., Procopio J., Ruggiero Neto J and Palma M.S., 2012, Influence of the bilayer composition on the binding and membrane disrupting effect of Polybia-MP1, an antimicrobial mastoparan peptide with leukemic Tlymphocyte cell selectivity, Biochemistry, 51(24), pp.4898-4908 an n va ie gh tn to 65 Henriksen J.R and Andresen T.L., 2011, Thermodynamic profiling of peptide membrane interactions by isothermal titration calorimetry: a search for pores and micelles, Biophysical journal, 101(1), pp.100-109 p 66 Xu X., Li J., Lu Q., Yang H., Zhang Y and Lai R., 2006, Two families of antimicrobial peptides from wasp (Vespa magnifica) venom, Toxicon, 47(2), pp.249-253 oa nl w d 67 Xu X., Yang H., Yu H., Li J and Lai R., 2006, The mastoparanogen from wasp, Peptides, 27(12), pp.3053-3057 nf va an lu z at nh oi lm ul 68 Yandek L.E., Pokorny A and Almeida P.F., 2009, Wasp mastoparans follow the same mechanism as the cell-penetrating peptide transportan 10, Biochemistry, 48(30), pp.7342-7351 69 Park N.G., Yamato Y., Lee S and Sugihara G., 1995, Interaction of mastoparan‐B from venom of a hornet in Taiwan with phospholipid bilayers z l gm @ and its antimicrobial activity, Biopolymers: Original Research on Biomolecules, 36(6), pp.793-801 m co 70 Yu H.M., Wu T.M., Chen S.T., Ho C.L., Her G.R and Wang K.T., 1993, Mastoparan B, synthesis and its physical and biological properties, Biochemistry and molecular biology international, 29(2), pp.241246 an Lu n va ac th si 67 71 Chen W., Yang X., Yang X., Zhai L., Lu Z., Liu J and Yu H., 2008, Antimicrobial peptides from the venoms of Vespa bicolor Fabricius, Peptides, 29(11), pp.1887-1892 72 Yang X., Wang Y., Lee W.H and Zhang Y., 2013, Antimicrobial peptides from the venom gland of the social wasp Vespa tropica, Toxicon, 74, pp.151157 73 Lin C.H., Lee M.C., Tzen J.T., Lee H.M., Chang S.M., Tu W.C and Lin, C.F., 2017, Efficacy of Mastoparan-AF alone and in combination with clinically used antibiotics on nosocomial multidrug-resistant Acinetobacter baumannii, Saudi journal of biological sciences, 24(5), pp.1023-1029 lu an n va ie gh tn to 74 Yoon K.A., Kim K., Nguyen, P., Seo J.B., Park Y.H., Kim K.G., Seo H.Y., Koh Y.H and Lee S.H., 2015, Comparative bioactivities of mastoparans from social hornets Vespa crabro and Vespa analis, Journal of Asia-Pacific Entomology, 18(4), pp.825-829 p 75 Li M.L., Liao R.W., Qiu J.W., Wang Z.J and Wu T.M., 2000, Antimicrobial activity of synthetic all-D mastoparan M, International journal of antimicrobial agents, 13(3), pp.203-208 oa nl w d 76 Chen X., Zhang L., Wu Y., Wang L., Ma C., Xi X., Bininda-Emonds O.R., Shaw C., Chen T and Zhou M., 2018, Evaluation of the bioactivity of a mastoparan peptide from wasp venom and of its analogues designed through targeted engineering, International journal of biological sciences, 14(6), p.599 nf va an lu lm ul z at nh oi 77 Etzerodt T., Henriksen J.R., Rasmussen P., Clausen M.H and Andresen T.L., 2011, Selective acylation enhances membrane charge sensitivity of the antimicrobial peptide mastoparan-x, Biophysical journal, 100(2), pp.399-409 z l gm @ 78 Hancock R.E., 1997, The bacterial outer membrane as a drug barrier, Trends in microbiology, 5(1), pp.37-42 m co 79 Meng S., Xu H and Wang F., 2010, Research advances of antimicrobial peptides and applications in food industry and agriculture, Current Protein and Peptide Science, 11(4), pp.264-273 an Lu n va ac th si 68 80 Da Silva A.V., De Souza B.M., dos Santos Cabrera M.P., Dias N.B., Gomes P.C., Neto J.R., Stabeli R.G and Palma M.S., 2014, The effects of the Cterminal amidation of mastoparans on their biological actions and interactions with membrane-mimetic systems, Biochimica Et Biophysica Acta (BBA)Biomembranes, 1838(10), pp.2357-2368 81 N N An, L.V Khang, D.H Lợi, H.N Oanh, 1970, Một số kết bước đầu nghiên cứu nọc ong thực nghiệm, Dược học, 3, pp15-18 82 Cấn Văn Mão, Nguyễn Minh Núi, 2016, Nghiên cứu độc tính cấp tính bán trường diễn nọc ong động vật thực nghiệm, 2, pp 162-165 lu an n va 84 p ie gh tn to 83 Lê Hữu Thọ, Nguyễn Huy Du, Nguyễn Xuân Hải, Đỗ Văn Nhật Trường, Nguyễn Trung Nhân, Nguyễn Thị Thanh Mai, 2015, Estabishment on procedure for determination of apamin, phospholipaza a2 and melittin in bee venom from Apis melifera by HPLC/UV, Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, 20 (4), tr 13-19 nl w 85 https://www.ibt.ac.vn/index.php/12-cong-trinh-khoa-hoc d oa 86 Nguyễn Tiến Dũng, Đỗ Thị Vân Anh, Nguyễn Thị Minh Phương, Bùi Thị Huyền, Phạm Đình Minh, Đỗ Hữu Chí, Nguyễn Thị Phương Liên, Phan Văn Chi, Lê Thị Bích Thảo, 2017, Phân tích hệ protein/peptide nọc độc ong Vespa velutina phân lập Việt Nam kỹ thuật proteomics, Tạp chí Công nghệ Sinh học, 15(2), pp 1-7 nf va an lu lm ul z at nh oi 87 Yang L., Harroun T.A., Weiss T.M., Ding L and Huang H.W., 2001, Barrel-stave model or toroidal model? A case study on melittin pores, Biophysical journal, 81(3), pp.1475-1485 z m co l gm @ 88 Naito A., Nagao T., Norisada K., Mizuno T., Tuzi S and Saitô H., 2000, Conformation and dynamics of melittin bound to magnetically oriented lipid bilayers by solid-state 31P and 13C NMR spectroscopy, Biophysical Journal, 78(5), pp.2405-2417 an Lu n va ac th si