(Luận văn) nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của bệnh suy hô hấp ở gà ai cập do ornithobacterium rhinotracheale (ort) gây ra

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHUNSAVAN NAMMANININ lu an NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ va n CỦA BỆNH SUY HÔ HẤP Ở GÀ AI CẬP DO p ie gh tn to Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) GÂY RA d oa nl w Thú Y 60 64 01 01 u nf va Mã Số: an lu Ngành: PGS.TS Bùi Trần Anh Đào ll Người hướng dẫn khoa học: oi m z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu thân tơi thực Tồn số liệu nghiên cứu thu thập từ việc thâm nhập, quan sát theo dõi thực tế Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn lu an Phunsavan Nammaninin n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Trần Anh Đào tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài lu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ mơn Bệnh lý Thú y, phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Sinh học Thú y, Khoa Thú y, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam, tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn an n va tn to Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ ie gh Hà Nội, ngày tháng năm 2017 p Tác giả luận văn d oa nl w lu ll u nf va an Phunsavan Nammaninin oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi lu Phần Mở đầu an n va Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài ie gh tn to 1.1 p Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước w Tình hình nghiên cứu giới 2.1.2 Tình hình nguyên cứu ORT Việt Nam 2.2 Bệnh vi khuẩn Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) gây 2.2.1 Một số đặc điểm vi khuẩn Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) 2.3 Một số đặc điểm bệnh ORT 12 2.3.1 Nguyên nhân gây bệnh 12 2.3.2 Dịch tễ học bệnh 12 2.3.3 Triệu chứng lâm sàng 14 2.3.4 Bệnh tích đại thể 15 2.3.5 Bệnh tích vi thể 15 2.3.6 Chẩn đoán 15 2.3.7 Huyết học 17 2.3.8 Chẩn đoán phân biệt 18 2.3.9 Phòng bệnh điều trị 18 d oa nl 2.1.1 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th iii si Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Thời gian nghiên cứu 20 3.3 Đối tượng nghiên cứu 20 3.3.1 Động vật nghiên cứu 20 3.3.2 Mẫu bệnh phẩm nghiên cứu 20 3.3.3 Hóa chất 20 3.4 Nội dung nghiên cứu 21 3.4.1 Kết nghiên cứu chẩn đoán bệnh ORT phương pháp phân lập vi khuẩn 21 lu an n va Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý chủ yếu gà mắc bệnh ORT 21 3.5 Phương pháp nghiên cứu 22 3.5.1 Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng 22 tn to 3.4.2 3.5.2 Phương pháp mổ khám 22 gh Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu 22 p ie 3.5.3 Phương pháp làm tiêu bệnh lý 23 nl w 3.5.5 Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn 23 3.5.4 Phương pháp xác định tiêu huyết học 23 3.5.7 Xử lý số liệu 23 d oa 3.5.6 an lu Kết nghiên cứu chẩn đoán bệnh ORT phương pháp phân lập u nf 4.1 va Phần Kết thảo luận 24 ll vi khuẩn 24 m Kết thu thập mẫu bệnh phẩm 24 4.1.2 Kết nghiên cứu phân lập vi khuẩn 24 4.1.3 Kết kiểm tra số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT 26 4.2 Kết nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý chủ yếu gà mắc bệnh oi 4.1.1 z at nh z @ 4.2.1 l gm ORT 29 Kết nghiên cứu số biểu triệu chứng lâm sàng gà mắc m co ORT 29 Kết nghiên cứu số biến đổi bệnh lý đại thể gà mắc ORT 32 an Lu 4.2.2 n va ac th iv si 4.2.3 Kết nghiên cứu số biến đổi bệnh lý vi thể gà mắc O.rhinotrachale (ORT) 34 4.2.4 Kết nghiên cứu tiêu huyết học gà mắc ORT O.rhinotracheale 37 Phần Kết luận kiến nghị 42 5.1 Kết luận 42 5.1.1 Chẩn đoán bệnh ORT phương pháp phân lập vi khuẩn 42 5.1.2 Đặc điểm bệnh lý chủ yếu gà mắc bệnh ORT 42 5.2 Kiến nghị 42 Tài liệu tham khảo 44 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT an n va p ie gh tn to AGP Accelerated Graphics Port BHB Brain Heart Broth BHI Brain heart infusion broth CBA Columbia Blood Aagar Base CRD Chronic Respiratory Disease DIA Dot Immunobinding assay DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations FBS Fetal bovine serum HE Haematoxilin – Eosin IB Infectious bronchitis IC Infectious Coryza ILT Infectious Laryngo Tracheitis Nghĩa tiếng Anh w lu Chữ viết tắt Negative control an lu Ornithobacterium rhinotracheale u nf va ORT d oa nl NC Peroxidase - anti peroxidase PB Pasteurella broth PC Positive control PCR Polymerase chain reaction rRNA Ribosomal ribonucleic acid TBE Tris-Borate electrophoresis buffer TSI Tryple Sugar Iron Agar USA United States of America ll PAP oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết thu thập mẫu bệnh phẩm gà Ai cập mắc ORT 24 Bảng 4.2 Kết phân lập vi khuẩn ORT 25 Bảng 4.3 Kết kiểm tra số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT 26 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu số triệu chứng lâm sàng gà mắc ORT 29 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu số triệu chứng lâm sàng gà mắc ORT 30 Bảng 4.6 Kết kiểm tra bệnh tích đại thể gà mắc ORT 32 Bảng 4.7 Tổn thương vi thể gà măc bệnh ORT O rhinotracheale gây 34 Bảng 4.8 Chỉ tiêu hệ hồng cầu gà Ai Cập mắc ORT 19 tuần tuôi 39 Bảng 4.9 Chỉ tiêu sinh lý hệ bạch cầu gà Ai cập 19 tuần tuổi mắc bệnh ORT 39 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC HÌNH lu an O rhinotracheale có tính đa hình tự nhiên cao Nhuộm Gram vi khuẩn sau 48 nuôi cấy (Pan et al., 2012) Hình 2.2 Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn ORT mơi trường (Phịng thí nghiệm trọng điểm CNSH Thú y, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Hình 2.3 Các loại thuốc kháng sinh dùng điều trị bệnh ORT 19 Hình 4.1 Kết ni cấy vi khuẩn ORT môi trường thạch máu 25 Hình 4.2 Kết kiểm tra phản ứng sinh hóa ORT 27 Hình 4.3 Nhuộm tiêu xem hình thái vi khuẩn 0RT 28 Hình 4.4 Hình thái vi khuẩn ORT (độ phóng đại 1000 lần) 28 Hình 4.5 Triệu chứng lâm sàng gà mắc ORT 31 Hình 4.6 Bệnh tích đại thể gà mắc ORT 33 n va Hình 2.1 tn to Bệnh tích đại thể gà mắc ORT 34 Hình 4.8 Khí quản gà khỏe, biểu mơ xếp trật tự, cấu chúc chặt chẽ HE10× 35 p ie gh Hình 4.7 Phổi gà đối chứng, lòng phế nang sáng HE10X 36 Hạ niêm mạc khí quản chứa nước phù HE10× 36 d oa Hình 4.10 nl w Hình 4.9 Sung huyết phổi HE10× 37 Hình 4.12 Bệnh tích vi thể não gà mắc ORT 37 Hình 4.13 Lấy mẫu máu bảo quản 38 u nf va an lu Hình 4.11 ll Biểu đồ 4.1 Công thức bạch cầu gà Ai Cập 19 tuần tuổi mắc ORT 40 m oi Biểu đồ 4.2 Công thức bạch cầu gà Ai Cập 19 tuần tuổi khỏe mạnh 40 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Phunsavan Nammaninin Tên luận văn: “Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý bệnh suy hô hấp gà Ai Cập Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) gây ra” Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Xác định đặc điểm bệnh lý chủ yếu bệnh, làm sở cho việc chẩn đoán phân biệt với bệnh khác lựa chọn phương pháp phịng trị thích hợp lu an Phương pháp nghiên cứu: n va -Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng tn to -Phương pháp mổ khám -Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu p ie gh -Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn -Phương pháp làm tiêu bệnh lý oa nl w -Phương pháp xác định tiêu huyết học -Xử lý số liệu d an lu Kết nghiên cứu va + Chẩn đoán bệnh ORT phương pháp phân lập vi khuẩn ll m tuần tuổi u nf - Gà lứa tuổi có nguy mắc bệnh, tỷ lệ cao nhóm 3-6 oi - Hầu hết chủng vi khuẩn ORT kháng với kháng sinh Gentamycin z at nh - Vi khuẩn ORT vi khuẩn gram âm, bắt màu hồng đỏ, có hình que đa dạng hình thái z @ + Đặc điểm bệnh lý chủ yếu gà mắc bệnh ORT gm - Triệu chứng lâm sàng gà 3-6 tuần tuổi ủ rũ, giảm ăn, giảm tăng trọng, l tăng dịch tiết,vảy mỏ kèm theo triệu chứng phù mặt Tỷ lệ chết giai đoạn m co khoảng 2-10% ORT nguyên nhân gây chết đột ngột (dưới 20% ngày) gà với nhiễm trùng não xương sọ kèm theo không kèm theo triệu an Lu chứng hô hấp n va ac th ix si lu an n va to tn Hình 4.7 Bệnh tích đại thể gà mắc ORT ie gh E) Viêm ngoại tâm mạc; F) Gan sưng, xuất huyết; G) Lách sưng, phù thũng; H) Cơ tim sung, phù thũng p 4.2.3 Kết nghiên cứu số biến đổi bệnh lý vi thể gà mắc w O.rhinotrachale (ORT) d oa nl Để thực việc nghiên cứu bệnh tích vi thể, tiến hành lựa chọn cá thể gà có tổn thương đại thể rõ điển hình phổi khí quản để lấy mẫu làm tiêu vi thể Kết quan sát tổn thương vi thể an lu va phổi khí quản gà mắc bệnh trình bày bảng 4.7 u nf Bảng 4.7 Tổn thương vi thể gà mắc bệnh ORT O rhinotracheale gây Số mẫu kiểm tra (n= 20 block) ll Số mẫu có biến đổi z at nh Phổi gà có ổ mủ oi Niêm mạc khí quản bong tróc m Tổn thương vi thể Tỷ lệ (%) 11 55 13 65 z 17 85 18 90 Khí quản xuất huyết 15 Ơ hoại tử thâm nhiễm Heterophil 14 75 70 an Lu Thâm nhiễm đại thực bào phổi 65 m co 13 l Hạ niêm mạc khí quản phù gm @ Biểu mơ khí quản sung huyết n va ac th 34 si Kết qủa bảng 4.7 cho thấy: - Khí quản: 90 % khí quản xuất huyết, 85% biểu mơ khí quản sung huyết lu an n va p ie gh tn to - Phổi: Tổn thương vi thể phổi sung huyết, viêm kèm theo ổ hoại tử Nhu mơ có lượng lớn hỗn hợp fibrin lẫn với đại thực bào tế bào heterophils nằm tự lòng mao mạch túi khí đoạn cuống phổi Trong số 20 mẫu kiểm tra có 15 mẫu có tổn thương phổi, phổi viêm, có mủ, chiếm tới 65% Có tới 75% có thâm nhiễm đại thực bào phổi Sự khuếch tán thâm nhiễm đại thực bào với số lượng tế bào heterophil -Túi khí: Túi khí dày lên nghiêm trọng phù nề lặng đọng tơ huyết kẽ, thâm nhiễm tế bào heterophil Qua biểu đồ nhận thấy: Hầu hết biến đổi vi thể tập trung đường hơ hấp Trong chiếm 90% khí quản xuất huyết Ở tất tiêu vi thể mà tiến hành nghiên cứu có xuất biến đổi điển hình Đây sở việc nghiên cứu bệnh ORT d oa nl w HÌNH ẢNH BIẾN ĐỔI BỆNH LÝ VI THỂ Ở CÁC CƠ QUAN NỘI TẠNG CỦA GÀ MẮC O rhinotracheale Phổi gà khỏe khí quản gà khỏe làm đối chứng ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ cấu chúc chặt chẽ HE10× an Lu Hình 4.8 Khí quản gà khỏe, biểu mơ xếp trật tự, n va ac th 35 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình 4.9 Phổi gà đối chứng, lịng phế nang sáng HE10X ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.10 Hạ niêm mạc khí quản chứa nước phù HE10× n va ac th 36 si lu an va n Hình 4.11 Sung huyết phổi HE10× gh tn to 4.2.4 Kết nghiên cứu tiêu huyết học gà mắc ORT p ie Bên cạnh việc theo dõi triệu chứng lâm sàng mổ khám, làm tiêu vi thể gà mắc ORT O Rhinotracheale gây ra, tiến hành theo dõi tiêu sinh lý máu gà mắc bệnh có kết dương tính với O w oa nl rhinotracheale sau phân lập d Mẫu máu lấy vào ống có dung dịch chống đơng, mẫu lấy 1xilanh riêng biệt Sau bảo quản lạnh gửi tới phịng thí nghiệm an lu ll u nf va bộmôn bệnh lý ngày oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.12 Bệnh tích vi thể não gà mắc ORT n va ac th 37 si A) Các mạch máu nhu mô não bao quanh màng mỏng tế bào lympho (HE 100X); B) Tổn thương nhẹ xâm nhập tế bào đơn nhân mạch máu não (HE 200X); C) Các tế bào Purkinje tiểu não bị teo lại, thối hóa hoại tử (HE 40X); D) Tế bào chất đông tụ, tế bào Purkinje nhìn thấy (HE 400X) lu Các nghiên cứu lần Iran mô tả trường hợp gà giống thương phẩm 13 tuần tuổi có biểu bị dị tật vẹo cổ ngẹo đầu phía sau thể phân lập ORT từ não với bệnh tích viêm màng não viêm não Trong báo cáo khác gà nhiễm ORT thường có tượng kết hợp với hội chứng thần kinh (Goovaerts et al., 1998) Năm 2009, người ta phân lập O rhinotracheale từ mẫu tai, xương sọ thân não từ gà Gô - đối tượng ni có dấu hiệu thần kinh viêm tai viêm tủy xương khơng có an n va dấu hiệu hô hấp (Moreno et al., 2009) p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.13 Lấy mẫu máu bảo quản n va ac th 38 si Bảng 4.8 Chỉ tiêu hệ hồng cầu gà Ai Cập mắc ORT 19 tuần tuôi Gà mắc bệnh (n=30) Gà đối chứng (n=30) X ± SE X ± SE Triệu/µl 2,53±0,02 2,23±0,045 >0,05 Hàm lượng Hb g/l 9,61±0,14 9,28 ± 0,18 >0,05 Tỷ khối huyết cầu % 30,79 ± 0,22 30,68 ± 0,5 >0,05 Chỉ tiêu sinh lý Đơn vị Số lượng hồng cầu Trị số P lu Qua bảng số liệu nhận thấy: Khơng có khác có ý nghĩa tiêu số lượng hồng cầu, hàm lượng Hb tỷ khối huyết cầu Như khơng có khác biệt tiêu hệ hống cầu gà Ai cập an n va khỏe mạnh gà mắc bệnh tn to Bảng 4.9 Chỉ tiêu sinh lý hệ bạch cầu gà Ai cập 19 tuần tuổi mắc bệnh gh ORT X±SE X±SE Nghìn/µl 30,41 ± 0,34 20,41 ± 0,34 0,5 2,26 ± 0,13