(Luận văn) nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chủ yếu của lợn mắc bệnh dịch tả lợn châu phi tại một số tỉnh phía bắc việt nam

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒNG THỊ THU HIỀN lu an va NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CHỦ YẾU n CỦA LỢN MẮC BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI tn to p ie gh TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM d oa nl w Thú y ll u nf m Mã số: va an lu Ngành: oi Người hướng dẫn khoa học: z at nh 8.64.01.01 GS.TS Nguyễn Thị Lan z TS Trương Quang Lâm m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc tháng năm 2020 Hà Nội, ngày Tác giả luận văn lu an n va Hoàng Thị Thu Hiền p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Tơi xin trân trọng cảm ơn quan tâm, giúp đỡ đặc biệt thầy cô giáo hướng dẫn khoa học – GS.TS Nguyễn Thị Lan TS Trương Quang Lâm thầy, cô Khoa Thú y tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn lu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc Học Viện, Ban quản lý Đào Tạo bạn bè, đồng nghiệp hết lòng giúp đỡ tơi q trình học tập, xây dựng hồn thành luận văn an n va tn to Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán cơng nhân viên Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú y, khoa Thú y, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi trình thực đề tài p ie gh Xin chân thành cảm ơn gia đình tơi tạo điều kiện động viên suốt q trình học tập hồn thành luận văn này./ Hà Nội, ngày tháng năm 2020 w d oa nl Tác giả luận văn an lu ll u nf va Hoàng Thị Thu Hiền oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract x lu Phần Mở đầu n va 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài tn to Tính cấp thiết đề tài gh an 1.1 p ie Phần Tổng quan tài liệu w Tình hình nghiên cứu bệnh dịch tả lợn Châu Phi oa nl 2.1 d 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi giới lu an Việt Nam va 2.1.2 Dịch tễ học 12 ll u nf 2.1.3 Chẩn đoán bệnh Dịch tả lợn Châu Phi 19 m 2.1.4 Phòng bệnh 20 oi Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 25 z at nh Địa điểm nghiên cứu 25 3.2 Thời gian nghiên cứu 25 3.3 Đối tượng nghiên cứu 25 3.4 Nội dung nghiên cứu 25 3.5 Nguyên liệu nghiên cứu 25 3.6 Phương pháp nghiên cứu 26 z 3.1 m co l gm @ an Lu 3.6.1 Phương pháp quan sát, mô tả 26 3.6.2 Phương pháp mổ khám 26 n va ac th iii si 3.6.3 Phương pháp lấy mẫu xử lý mẫu 27 3.6.4 Phương pháp Realtime PCR 28 3.6.5 Phương pháp RT-PCR 31 3.6.6 Phương pháp PCR 33 3.6.7 Phương pháp phân lập vi khuẩn 34 3.6.8 Phương pháp làm tiêu vi thể 34 3.6.9 Phương pháp hóa mơ miễn dịch 37 3.6.10 Phương pháp xử lý số liệu 39 Phần KẾt quẢ thảo luận 40 Kết thu thập mẫu ca bệnh, sàng lọc xác định số triệu trứng lâm 4.1 lu sàng lợn mắc bệnh DTLCP 40 an 4.1.1 Kết thu thập ca bệnh phẩm sàng lọc lợn mắc bệnh DTLCP đạt tiêu va chuẩn nghiên cứu 40 n tn to 4.1.2 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 43 Kết nghiên cứu bệnh tích đại thể vi thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 46 p ie gh 4.2 4.2.1 Bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 46 Kết quản nghiên cứu phân bố kháng nguyên virus dịch tả lợn châu phi d oa 4.3 nl w 4.2.2 Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 50 an lu kỹ thuật hóa mơ miễn dịch 55 4.3.1 Kết phát kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi kỹ thuật va u nf hóa mơ miễn dịch 55 ll Phần Kết luận đề nghị 62 m Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 62 oi 5.1 z at nh Tài liệu tham khảo 63 z m co l gm @ an Lu n va ac th iv si DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT an n va ASF African Swine Fever DTLCP Dịch tả lợn Châu Phi ASFV African Swine Fever Virus CSFV Classical Swine Fever Virus Ct Cycle threshold DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme – Linked ImmunSorbent Assay IFT Indirect Fmmumnofluorescence Test HP Haemophilus parasuis APP Actinobacillus pleuropneumoniae PM Pasteurella multocida MH Mycoplasma hyopneumoniae PAM Porcine Alveolar Macrophages Phosphate Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction p ie gh tn to Viết đầy đủ lu Chữ viết tắt PBS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus an Ribonucleic acid ll u nf va RNA Porcine Circo Virus type lu PRRSV d oa nl w PCV2 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Sức đề kháng virus Dịch tả lợn Châu Phi 11 Bảng 2.2 Khả tồn virus DTLCP nhiều điều kiện môi trường 12 Bảng 3.1 Thuốc thử 28 Bảng 3.2 Trình tự mồi – mẫu dò 29 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng Realtime PCR 30 Bảng 3.4 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng Realtime PCR 30 Bảng 3.5 Thành phần phản ứng RT-PCR 32 Bảng 3.6 Thành phần phản ứng PCR 34 lu Bảng 4.1 Số lượng mẫu lợn nghi mắc bệnh DTLCP thu thập 40 an va Bảng 4.2 Kết chẩn đoán lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi kỹ thuật n Realtime PCR 41 tn to Bảng 4.3 Kết kiểm tra đồng nhiễm với tác nhân gây bệnh khác lợn ie gh mắc DTLCP 42 p Bảng 4.4 Một số triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 43 w Bảng 4.5 Bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 46 oa nl Bảng 4.6 Bệnh tích vi thể số quan lợn mắc bệnh DTLCP 50 d Bảng 4.7 Kết phát kháng nguyên virus DTLCP mô lợn mắc lu an bệnh kỹ thuật hóa mơ miễn dịch 55 u nf va Bảng 4.8 Kết so sánh tương quan phân bố kháng nguyên virus DTLCP kỹ thuật hóa mơ miễn dịch Realtime PCR 60 ll oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Tình hình DTLCP giới giai đoạn 2016-2018 Hình 2.2 Tình hình DTLCP giới từ 01/01/2019-01/03/2019 Hình 2.3 Cấu trúc virus DTLCP Hình 2.4 Sơ đồ truyền lây virus DTLCP 10 Hình 2.5 Tóm tắt sơ đồ lây lan bệnh Dịch tả lợn Châu Phi 14 Hình 2.6 Mối nguy gây lây nhiễm bệnh DTLCP với lợn nuôi 15 Hình 2.7 Tỷ lệ chết lợn mắc bệnh theo độc lực chủng virus DTLCP 17 lu Hình 4.1 Hình ảnh triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 45 an va Hình 4.2 Hình ảnh bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP 47 n Hình 4.3 Hình ảnh bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp) 48 tn to Hình 4.4 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP 52 gh Hình 4.5 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp) 53 p ie Hình 4.6 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp) 54 w Hình 4.7 Hình ảnh tế bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP oa nl (IHC400X) 57 d Hình 4.8 Đánh giá mức độ phân bố kháng nguyên virus DTLCP mẫu mơ an lu dương tính (IHC40X) 58 va Hình 4.9 Hình ảnh tế bào đại thực bào dương tính với kháng nguyên virus ll u nf DTLCP số quan (IHC40X) 59 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hoàng Thị Thu Hiền Tên luận văn: Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi số tỉnh phía Bắc Việt Nam Ngành: Thú y Mã số: 8.64.01.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Xác định triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể, vi thể lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi số tỉnh miền Bắc Việt Nam lu - Xác định phân bố virus Dịch tả lợn Châu Phi quan nội tạng an va lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi n Phương pháp nghiên cứu to - Phương pháp mổ khám, quan sát bệnh tích đại thể; ie gh tn - Phương pháp quan sát, mô tả; p - Phương pháp lấy mẫu xử lý mẫu; nl w - Phương pháp PCR, Realtime PCR RT-PCR d oa - Phương pháp làm tiêu vi thể lu - Phương pháp hóa mơ miễn dịch; Kết kết luận u nf va an - Phương pháp xử lý số liệu ll Các đặc điểm bệnh lý đặc trưng lợn mắc bệnh DTLCP thể thể cấp tính oi m cấp tính: z at nh - Triệu chứng lâm sàng lợn mắc bệnh DTLCP: mệt mỏi, ủ rũ, ăn (100%), sốt cao 40 - 42oC (100%), có triệu chứng hơ hấp ho, khó thở (73,33%), triệu chứng z thần kinh (60,00%), xuất huyết da vùng tai, hông (53,33%), chết đột ngột @ gm (10,00%) l - Bệnh tích đại thể lợn mắc bệnh DTLCP: hạch lympho xuất huyết, phù thũng, m co màu đỏ sẫm (100%), thận xuất huyết (100%), lách sậm màu sưng to, nhồi huyết (96,66%), màng não xuất huyết (60%), phổi xuất huyết (60,00%,), ruột xuất huyết an Lu (53,33%); n va ac th viii si - Bệnh tích vi thể đặc trưng lợn mắc DTLCP xuất huyết tràn lan quan nội tạng, hoại tử nhu mô gan tế bào lympho tượng teo, vỡ nhân tế bào lympho hạch lách - Kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi phát hầu hết quan lợn mắc bệnh Trong kháng nguyên phát tế bào đại thực bào, tế bào đơn nhân nhiều quan khác nhau, tế bào gan tế bào biểu mô ống thận Sự phân bố kháng nguyên virus DTLCP tập trung nhiều quan hạch lách Các quan phổi, thận gan mức độ phân bố kháng nguyên đạt trung bình kháng ngun phân bố quan não, tim, ruột dày Kết nghiên cứu cung cấp thông tin triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể vi thể chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP thông tin quan trọng giúp cán lu thú y hay người chăn nuôi thực sàng lọc tiếp tục khẳng định lợn bị mắc bệnh an chẩn đốn phịng thí nghiệm va n Xác định phân bố kháng nguyên virus DTLCP quan nội tạng phục vụ cho công tác phân lập virus để sản xuất vắc xin phòng khống chế dịch bệnh gh tn to lợn mắc bệnh có ý nghĩa vô quan trọng cho việc lựa chọn mẫu bệnh phẩm p ie nhằm giảm thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi lợn d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ix si Lách: Biến đối bệnh lý lách chủ yếu tượng xuất huyết, hồng cầu lan tràn nhu mô lách, tụ lại thành đám gây tượng xuất huyết, hồng cầu ứ lại tĩnh mạch tủy trắng; có hoại tử tế bào lympho, kết đặc nhân tế bào lympho lu Hạch lympho: hạch lympho cửa ngõ trình ngăn chặn xâm nhiễm tác nhân gây bệnh vào thể, bệnh truyền nhiễm biểu bất bình thường hạch lympho dấu hiệu chứng tỏ có q trình nhiễm khuẩn diễn Những biểu thể cấp tế bào chưa có biểu thành bệnh tích đại thể Những biến đổi đại thể kết trình biến đổi vi thể mức độ trầm trọng Khi quan sát tiêu thấy hầu hết mẫu bệnh phẩm có teo nang lympho Tế bào lympho, thối hóa, xuất nhiều tế bào hồng cầu, đặc biệt hạch phổi hạch màng treo ruột, hạch dày có nhiều nhất, giống biểu bệnh tích đại thể an n va ie gh tn to Ruột: Tĩnh mạch đầy ắp tế bào hồng cầu gây nên tượng sung huyết, cịn mơ liên kết hồng cầu xuất tràn lan gây tượng xuất huyết p Dạ dày: tế bào hồng cầu rải rác d oa nl w Phổi: bệnh tích xuất huyết phổ biến, lòng phế nang chứa nhiều hồng cầu đại thực bào, ngồi có thâm nhiễm tế bào viêm tổ chức kẽ phổi, dịch phù lịng phế nang Ở phế quản: biểu mơ bong tróc, tổn thương chứa đầy dịch rỉ viêm an lu ll u nf va Thận: Bệnh tích vi thể thận lợn mắc bệnh thấy có tượng xuất huyết, chứa nhiều hồng cầu vùng vỏ thận ống thận, cầu thận Tập trung nhiều tế bào viêm vùng kẽ thận oi m z at nh Gan: Có tượng xuất huyết lan tràn hoại tử nhu mô gan z m co l gm @ an Lu n va ac th 51 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z o l.c gm @ m Hình 4.4 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP a, b, c hình ảnh xuất huyết lách, hạch, gan (100X); d, e, f, hình ảnh xuất huyết lách, hạch, gan (400X) an Lu n va ac th 52 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z o l.c gm @ m Hình 4.5 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp) a, b, c hình ảnh viêm kẽ phổi, xuất huyết ruột, viêm kẽ thận (HE10X); d, e, f, hình ảnh dịch phù lịng phế nang, xuất huyết dày, xuất huyết tim (HE10X) an Lu n va ac th 53 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z gm @ m o l.c Hình 4.6 Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp) a, b, c hình ảnh teo tế bào lympho hạch amidan, lách, hạch hầu họng (HE10X); d, e, f hình ảnh hoại tử, vỡ tế bào lympho hạch amidan, lách, hạch hầu họng (HE40X) an Lu n va ac th 54 si 4.3 KẾT QUẢN NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ KHÁNG NGUYÊN VIRUS DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI BẰNG KỸ THUẬT HĨA MƠ MIỄN DỊCH 4.3.1 Kết phát kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi kỹ thuật hóa mơ miễn dịch lu Từ 30 ca bệnh lợn dương tính với virus DTLCP, lựa chọn ca bệnh điển hình đại diện cho tỉnh thành nghiên cứu (thành phố Hà Nội, tỉnh Hà Nam, Hưng Yên, Nam Định Thái Bình), áp dụng kỹ thuật nhuộm hóa mơ miễn dịch để xác định có mặt kháng nguyên virus tổ chức Phát có mặt virus tổ chức đem nhuộm hóa miễn dịch cho kết dương tính xuất màu nâu vàng lát cắt tổ chức (màu DAB) Như vậy, dựa vào xuất màu nâu vàng tế bào tổ chức tiêu đánh giá vị trí virus cư trú mật độ virus phân bố an n va ie gh tn to Mỗi ca bệnh lấy mẫu lách, hạch, phổi, gan, thận, não, tim, dày, ruột tiến hành nhuộm hóa mô miễn dịch Kết phân bố kháng nguyên virus DTLCP quan nội tạng trình bày bảng 4.7 p Bảng 4.7 Kết phát kháng nguyên virus DTLCP mô lợn mắc bệnh kỹ thuật hóa mơ miễn dịch nl w Kết nhuộm hóa mơ miễn dịch Cơ quan d oa TT Con Con Con Con +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ ++ +++ +++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ + - + + - + + + - - - + + Hạch Lách Phổi ++ Thận ++ ++ Gan ++ Não - Tim - Ruột + - Dạ dày + - va an u nf lu Con +++ ll oi m z at nh z l gm @ m co Ghi chú: (-)Khơng có tế bào dương tính/1 tiêu (+): có 10 tế bào dương tính/1 tiêu an Lu (++): có từ 11-50 tế bào dương tính/1 tiêu (+++): có 500 tế bào tế bào dương tính/1 tiêu n va ac th 55 si Kết bảng 4.7 cho thấy tổ chức nghiên cứu dương tính với virus DTLCP thể xuất đám màu nâu vàng tiêu bản, nhiên phân bố kháng nguyên virus lại khác quan tổ chức Trong hạch lách quan có phân bố kháng nguyên virus nhiều thể xuất đám màu vàng nâu với mật độ cao lan tràn khắp tiêu bản, phổi, gan thận kháng nguyên virus phân bố hạch lách Các mô não, tim, ruột dày tùy ca bệnh phát hay khơng phát kháng nguyên virus Quan sát tiêu nhuộm hóa mơ miễn dịch thấy: lu an n va p ie gh tn to Trong hạch lympho phát tế bào đơn nhân dương tính với kháng nguyên virus DTLCP có nhiều (hình 4.7b) Trong phổi, đại thực bào phổi tìm thấy dương tính với kháng nguyên virus DTLCP (hình 4.7a) Trong não xác định kháng nguyên virus DTLCP tế bào đại thực bào não (hình 4.7d) Trong mơ thận, nhiều tế bào dương tính với kháng ngun virus DTLCP có tế bào biểu mơ ống thận (hình 4.7f) Đơi khi, vài tế bào dương tính tìm thấy mạch quản cầu thận xác định đại thực bào Ở gan, tế bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP tìm thấy tế bào gan tế bào Kuffer (hình 4.7c hình 4.9a) Fernandez cs., 1992 phát kháng nguyên virus bạch cầu đơn nhân, đại thực bào, tế bào gan, tế bào nội mơ, bạch cầu trung tính Gomez cs., 1995 cho virus nhân lên tế bào thực bào đơn nhân lớn, đại thực bào khắp thể thông qua mạch máu hệ bạch huyết Virus nhân lên tế bào nội mô, tế bào gan, tế bào biểu mô, ống thận Các kết nghiên cứu phát kháng nguyên virus DTLCP hoàn toàn tương đồng với Gomez cs., 1995 Fernandez cs., 1992 Nghiên cứu không phát kháng nguyên virus tế bào lympho Minguez cs., 1988 báo cáo virus không nhiễm vào tế bào lympho B T d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 56 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z o l.c gm @ m Hình 4.7 Hình ảnh tế bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP (IHC400X) Kháng nguyên virus DTLCP phát tế bào đại thực bào mơ phổi não (hình a d), tế bào đơn nhân mơ hạch lách (hình b e), tế bào gan tế bào biểu mô ống thận (hình c f) an Lu n va ac th 57 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z gm @ m o l.c Hình 4.8 Đánh giá mức độ phân bố kháng nguyên virus DTLCP mẫu mô dương tính (IHC40X) “+”: ít, có 1-10 tế bào dương tính/tiêu (hình c, f) “++”: trung bình, có 11-50 tế bào dương tính/tiêu (hình b,e), “+++”: nhiều, có 50 tế bào dương tính/tiêu (hình a,d) an Lu n va ac th 58 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll fu an nv a lu oi m z at nh z o l.c gm @ m Hình 4.9 Hình ảnh tế bào đại thực bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP số quan (IHC40X) Kháng nguyên virus DTLCP phát đại thực bào số quan a, gan; b, thận; c, tim; d, ruột; e, dày; f, tử cung an Lu n va ac th 59 si 4.3.2 So sánh phân bố kháng nguyên virus DTLCP phương pháp Hóa mơ miễn dịch phương pháp Realtime PCR Để đánh giá tương quan phân bố kháng nguyên virus DTLCP kết phát virus DTLCP phương pháp Realtime PCR, từ mẫu mô ca bệnh dương tính với virus Dịch tả lợn Châu Phi (mỗi loại mẫu mô lấy riêng rẽ từ thu mẫu lựa chọn vùng tổn thương đặc trưng, mẫu nghiền máy đồng mẫu) 100 mg mẫu đưa vào tách chiết DNA xác định lượng virus DTLCP phương pháp Realtime PCR Thơng qua giá trị Ct xác định hàm lượng virus quan khác Giá trị Ct thấp thể hàm lượng virus cao Kết so sánh tương quan phân bố kháng ngun virus DTLCP kỹ thuật hóa mơ miễn dịch Realtime PCR lu thể bảng 4.8 an n va Bảng 4.8 Kết so sánh tương quan phân bố kháng nguyên virus DTLCP kỹ thuật hóa mơ miễn dịch Realtime PCR tn to Cơ quan Con IHC Con Ct IHC Con Ct IHC Con Ct IHC Ct Con IHC Ct p ie gh TT +++ 17,29 +++ 19,12 +++ 19,58 +++ 16,28 +++ 18,46 Lách +++ 16,62 ++ 20,06 ++ 20,00 +++ 15,43 +++ 17,23 Phổi oa 18,43 ++ 20,24 ++ 22,13 ++ 20,81 +++ 19,12 Thận ++ an ++ 24,07 ++ 24,44 ++ 23,81 ++ 20,37 Gan ++ 20,66 ++ 22,93 ++ 22,08 + 25,09 ++ 24,30 Não - 24,27 ++ 25,37 + 28,63 - 29,78 + 26,42 Tim - 27,72 + oi - 27,00 + 30,15 + 28,13 Ruột + 25,38 - 27,50 + 26,38 - 29,19 - 25,19 Dạ dày + 35,84 - 38,45 - NA - NA + 37,63 +++ d nl Hạch w lu 21,08 ll u nf va m 28,60 z at nh z m co l gm @ Ghi chú: Ct (cycle threshold-chu kỳ ngưỡng) Ct ≤ 40 dương tính NA: âm tính (-) Khơng có tế bào dương tính/1 tiêu bản; (+): có 10 tế bào dương tính/1 tiêu bản; (++): có từ 1150 tế bào dương tính/1 tiêu bản; (+++): có 50 tế bào tế bào dương tính/1 tiêu an Lu Qua bảng 4.8 cho thấy mô hạch lách lợn nghiên cứu có giá trị Ct thấp mẫu mơ nghiên cứu, cụ thể giá trị Ct mẫu hạch lách lợn nghiên cứu dao động khoảng từ 15,43 – 20,06 tiếp đến mẫu n va ac th 60 si phổi, thận gan giá trị Ct dao động khoảng từ 18,34-25,09 cuối mô não, tim, ruột dày giá trị Ct dao động khoảng từ 24,27-38,45 Tương tự, kết xác định phân bố kháng nguyên virus DTLCP phương pháp hóa mơ miễn dịch cho thấy, mẫu hạch lách có mức độ phân bố kháng nguyên virus DTLCP cao (từ ++ đến +++) có giá trị Ct thấp ngược lại Một số quan não, tim, ruột, dày số ca bệnh không phát thấy kháng ngun virus DTLCP phương pháp hóa mơ miễn dịch kết kiểm tra virus phương pháp Realtime PCR cho kết dương tính điều lý giải độ nhạy phương pháp Realtime PCR phương pháp hóa mơ miễn dịch khác mô bệnh phẩm vị trí lấy mẫu khác cho kết xác định virus khác mô bệnh phẩm hàm lượng kháng nguyên virus không cao lu an n va p ie gh tn to Kết nghiên cứu phù hợp với khuyến cáo OIE việc lựa chọn mẫu bệnh phẩm phù hợp để phát kháng nguyên virus DTLCP hạch, lách, phổi thận mẫu bệnh phẩm ưu tiên cho việc phát virus (OIE, 2019) d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 61 si PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Các đặc điểm bệnh lý đặc trưng lợn mắc bệnh DTLCP thể thể cấp tính cấp tính: - Triệu chứng lâm sàng lợn mắc bệnh DTLCP: mệt mỏi, ủ rũ, ăn (100%), sốt cao 40 - 42oC (100%), có triệu chứng hơ hấp ho, khó thở (73,33%), triệu chứng thần kinh (60,00%), xuất huyết ngồi da vùng tai, hơng (53,33%), chết đột ngột (10,00%) - Bệnh tích đại thể lợn mắc bệnh DTLCP: hạch lympho xuất huyết, phù thũng, màu đỏ sẫm (100%), thận xuất huyết (100%), lách sậm màu sưng to, nhồi lu an huyết (96,66%), màng não xuất huyết (60%), phổi xuất huyết (60,00%,), ruột - Bệnh tích vi thể đặc trưng lợn mắc DTLCP xuất huyết tràn lan n va xuất huyết (53,33%) tn to quan nội tạng, hoại tử nhu mô gan tế bào lympho tượng teo, ie gh vỡ nhân tế bào lympho hạch lách p - Kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi phát hầu hết w quan lợn mắc bệnh Trong kháng nguyên phát tế bào đại oa nl thực bào, tế bào đơn nhân nhiều quan khác nhau, tế bào gan tế bào biểu d mô ống thận Sự phân bố kháng nguyên virus DTLCP tập trung nhiều lu an quan hạch lách Các quan phổi, thận gan mức độ phân bố kháng ruột dày ll oi m 5.2 KIẾN NGHỊ u nf va nguyên đạt trung bình kháng ngun phân bố quan não, tim, z at nh Kết nghiên cứu nguồn liệu quan trọng sử dụng nghiên cứu bệnh phục vụ đào tạo; lựa chọn quan có phân bố z kháng nguyên virus DTLCP cao để phục vụ cơng tác chẩn đốn gm @ nghiên cứu chuyên sâu khác virus DTLCP l Tiến hành nghiên cứu với quy mô lớn thể bệnh khác thực sở công tác phòng chống bệnh DTLCP m co địa nhằm cung cấp thông tin, liệu cho người chăn nuôi, cán Thú y an Lu n va ac th 62 si TÀI LIỆU THAM KHẢO Chi Cục Thú Y Vùng VI (2017) Quy trình phát virus Dich tả lợn Châu Phi kỹ thuật realtime PCR ban hành Costard S., Mur L., Lubroth J., Sanchez-Vizcaino J.M & Pfeiffer D.u (2013) Epidemiology of African swine fever virus Virus Research 173 (1): 191–197 De León P., Bustos M J & Carrascosa A L (2013) Laboratory methods to study African swine fever virus Virus Research 173: 168–79 Dixon L.K., Chapman D.A.G., Netherton C.L & Upton C (2019) African swine fever virus replication and genomics Virus Research 173 (1): 3–14 Fauquet C., Fauquet M & Mayo M.A (2005) Virus Taxonomy: VIII Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses Academic Press lu an n va gh tn to Fernandez A., Perez J., Carrasco L., Bautista M.J., Vizcaino J.M and Sierra, M.A (1992) Distribution of ASFV antigens in pig tissues experimentally infected with two different Spanish virus isolates Journal of Veterinary Medicine, Series B, 39(110): 393-402 p ie Francisco J S (2020) Comparative Pathology and Pathogenesis of African Swine Fever Infection in Swine Frontiers in Veterinary Science, 7: 22-29 Gallardo C (2019) Attenuated and non haemadsorbing (non‐ HAD) genotype II w d oa nl African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017 Transbound Emerg Dis 66(3): 1399- 1404 u nf va an lu Gallardo C (2019) Attenuated and non-haemadsorbing (non-HAD) genotype II African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017 Transbound Emerg Dis., 66(3):1399- 1404 ll Gallardo C., Soler A., Rodze I., Nieto R., Cano-Gómez C., Fernandez-Pinero J., Arias M (2019) Attenuated and non-haemadsorbing (non-HAD) genotype II African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017 Transbound Emerg Dis doi: 10.1111/tbed.13132 oi m z at nh z Gomez-Villamandos J C., Hervas J., Moreno C., Carrasco L., Bautista M J., Caballero J M., Wilkinson P J & M A Sierra (1997) Subcellular changes in the tonsils of pigs infected with acute African swine fever virus Vet Research 28:179–189 l gm @ m co Gómez-Villamandos J.C., Hervás J., Méndez A., Carrasco L., de las Mulas J.M., Villeda C.J., Wilkinson P.J and Sierra M.A (1995) Experimental African swine fever: apoptosis of lymphocytes and virus replication in other cells Journal of General Virology, 76(9): 2399-2405 an Lu n va ac th 63 si Huyền Trang (2019) Các đường lây nhiễm bệnh DTLCP cách phòng ngừa hiệu quả.Tạp chí chăn ni (5): -2 Katjaischulz C., Christophi S & Sandraiblome S (2017) African and classical swine fever: similarities,differences and epidemiological consequences Vet Research 48: 48 Le V.P., Jeong D.G., Yoon S.W., Kwon H.M., Trinh T.B.N & Nguyen T.L (2019) Outbreak of African swine fever, Vietnam Emerging infectious disease Mínguez I., Rueda A., Domínguez J., Sánchez-Vizcaíno JM (1988) Double labeling immunohistological study of African swine fever virus-infected spleen and lymph nodes Veterinary Pathology, 25(3):193-198 Montgomery R.E (1921) On a form of swine fever occurring in British East Africa J Comp Pathol 34: 59–191 lu Nguyễn Bá Hiên & Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2011), Giáo trình Bệnh truyền nhiễm thú y NXB Nông Nghiệp, Hà Nội an n va tn to Nguyễn Đăng Thọ (2019) Các phương pháp chẩn đốn Dịch tả lợn Châu Phi Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y (3): 71 – 83 p ie gh Penrith M.L., Thomson G R & Bastos A.D.S (2004) African swine fever In Infectious diseases of livestock, 2: 1088–1119 nl w Plowright W., Thomson G R., Neser J A (1994) African swine fever In Infectious diseases of livestock, with special reference to southern Africa, 1: 567–599 d oa Reis A.L., Abrams C.C., Goatley L.C., Netherton C., Chapman D.G., Sanchez-Cordon P & Dixon L.K (2016) Deletion of African swine fever virus interferon inhibitors from the genome of a virulent isolate reduces virulence in domestic pigs and induces a protective response Vaccine, 34:4698-4705 va an lu ll u nf Sánchez-Vizcaíno J.M., Mur L., Gomez - Villamandos J.C & Carrasco L (2015) An update on the epidemiology and pathology of African swine fever J Comp Pathol 152(1):9-21 oi m z at nh Schloer G.M (1985) Polypeptides and structure of African swine fever virus Virus Research 3(4): 295-310 z Tignon M., Gallardo C., Iscari C., Hutet E., Van der Y., Kolvasov D., De mia G.M., Le Potier M.F., Bishop R.P., Arias M & Koenen F (2011) Development and interlaboratory validation study of an improved new real-time PCR assay with internal control for detection and laboratory diagnosis of African swine fever virus J Virol Methods, 178:161–167 m co l gm @ an Lu Trần Thị Thanh Hà (2019) Nghiên cứu phân lập virus Dịch tả lợn Châu Phi Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y (4):46-49 n va ac th 64 si Vallée I., Stephen W G Tait & Penelope P P (2001) African Swine Fever Virus Infection of Porcine Aortic Endothelial Cells Leads to Inhibition of Inflammatory Responses, Activation of the Thrombotic State, and Apoptosis J Virol 75(21): 10372–10382 Wilkinson P.J., Wardley R.C & Williams S.M (1981) African swine fever virus (Malta/78) in pigs J Comp Pathol 91 (2):277–284 World Organisation for Animal Health (2019) Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals OIE, Paris lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 65 si