(Luận văn) nghiên cứu mức độ ô nhiễm vi khuẩn e coli trong thịt lợn tại thành phố lạng sơn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM lu an NÔNG ĐẠI THẾ n va p ie gh tn to d oa nl w NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ Ô NHIỄM VI KHUẨN E.COLI TRONG THỊT LỢN TẠI THÀNH PHỐ LẠNG SƠN ul nf va an lu oi lm LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y z at nh z m co l gm @ an Lu THÁI NGUYÊN - 2016 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM lu an NÔNG ĐẠI THẾ n va p ie gh tn to d oa nl w NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ Ô NHIỄM VI KHUẨN E.COLI TRONG THỊT LỢN TẠI THÀNH PHỐ LẠNG SƠN nf va an lu Chuyên ngành: Thú y Mã số ngành: 60 64 01 01 oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y z at nh z Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ NGÂN m co l gm @ an Lu THÁI NGUYÊN - 2016 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi trực tiếp thực với cộng tác giúp đỡ TS Nguyễn Thị Ngân Viện Khoa học Sự sống - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Các số liệu, hình ảnh kết luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin đảm bảo thơng tin, trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc lu Tác giả luận văn an n va tn to Nông Đại Thế p ie gh d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn, với nỗ lực thân, nhận giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp, cho phép tơi tỏ lịng biết ơn cảm ơn chân thành tới: Giáo viên hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Ngân trực tiếp hướng dẫn, bảo tơi tận tình suốt q trình nghiên cứu hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, Ban chủ nhiệm Khoa lu an thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học n va Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Bộ môn Công nghệ Vi sinh - Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên gh tn to Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, giáo cơng tác Phịng thí nghiệm p ie giúp tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn lãnh đạo Chi cục Thú y tỉnh Lạng Sơn nl w giúp tơi q trình thực đề tài oa Cuối Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc ủng hộ, động viên, giúp đỡ d gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt thời gian học tập, nghiên cứu lu va an hoàn thành tốt luận văn Học viên oi lm ul nf Thái Nguyên, ngày 12 tháng 11 năm 2016 z at nh z Nông Đại Thế m co l gm @ an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU lu an Tính cấp thiết đề tài n va Mục tiêu nghiên cứu 3.1 Ý nghĩa khoa học gh tn to Ý nghĩa khoa học thực tiễn p ie 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU nl w 1.1 Ngộ độc thực phẩm d oa 1.2 Tầm quan trọng vệ sinh an toàn thực phẩm lu 1.3 Ngộ độc thực phẩm vi khuẩn E coli va an 1.3.1 Đặc điểm hình dạng, ni cấy tính chất sinh hóa nf 1.3.2 Triệu chứng trúng độc oi lm ul 1.3.3 Biện pháp phòng ngừa ngộ độc 1.4 Hiểu biết vi sinh vật hệ vi sinh vật ô nhiễm thịt z at nh 1.4.1 Hệ vi sinh vật ô nhiễm thịt 1.4.2 Các yếu tố liên quan đến nhiễm khuẩn vào thịt 11 z 1.5 Thịt tươi dạng hư hỏng thịt 14 @ gm 1.5.1 Thịt tươi 14 l 1.5.2 Các dạng hư hỏng thịt 15 m co 1.5.3 Ô nhiễm thực phẩm nguồn gốc động vật 15 1.5.4 Ô nhiễm thực phẩm vi sinh vật 16 an Lu 1.5.5 Ô nhiễm thịt tươi vi khuẩn 16 n va ac th si iv 1.5.6 Ý nghĩa ô nhiễm thịt tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí 17 1.6 Tình hình nghiên cứu nước giới 17 1.6.1 Nghiên cứu Việt Nam 17 1.6.2 Nghiên cứu giới 18 Chương NỘI DUNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 20 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 2.3 Vật liệu nghiên cứu 20 lu 2.4 Nội dung nghiên cứu 21 an va 2.5 Phương pháp nghiên cứu 21 n 2.5.1 Phương pháp lấy mẫu xét nghiệm 21 2.5.3 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn thịt lợn tươi 23 ie gh tn to 2.5.2 Phương pháp xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 21 p 2.5.4 Quy định kỹ thuật tiêu vi sinh vật thịt tươi 24 w 2.5.5 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn phân lập 25 oa nl 2.5.6 Phương pháp xác phương pháp định gen quy định sản sinh độc tố đường d ruột chủng vi khuẩn 25 an lu 2.5.7 Xác định gen VT1, VT2 chủng E coli phản ứng PCR 26 va 2.5.8 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh vi ul nf khuẩn phân lập 28 oi lm 2.5.9 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn 28 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 31 z at nh Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Khảo sát tình hình giết mổ tiêu thụ thịt lợn địa bàn thành phố Lạng Sơn 32 z gm @ 3.2 Xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 35 3.3 Xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 37 l 3.4 Xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian m co sau giết mổ 39 an Lu 3.5 Xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi theo tháng thời gian sau giết mổ 43 n va ac th si v 3.6 Xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ thời gian sau giết mổ 45 3.7 Nghiên cứu đặc tính sinh học, đặc tính hóa học vi khuẩn phân lập 47 3.8 Xác định serotype chủng phân lập 49 3.9 Kết tách DNA tổng số vi khuẩn 51 3.10 Xác định gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn phân lập 53 3.11 Xác định gen mã hóa độc tố đường ruột PCR 54 lu 3.12 Xác định độc lực chủng vi khuẩn E coli phân lập 54 an va 3.13 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược n chủng vi khuẩn phân lập 56 khuẩn E coli 60 ie gh tn to 3.14 Đề xuất biện pháp phịng, khống chế ngộ độc thực phẩm nhiễm vi p 3.14.1 Giải pháp ngắn hạn 60 w 3.14.2 Giải pháp lâu dài 62 oa nl KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 d Kết luận 63 an lu Kiến nghị 64 va TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 oi lm ul nf MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI 69 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATVSTP An toàn vệ sinh thực phẩm CFU Colony Forming Unit E coli Escherichia coli FDA Food and Drug Administration (Quản lý Thực phẩm Dược phẩm) ISO International Organization for Standardization lu (Tổ chức tiêu chuẩn quốc tế) an va LAMP Loop Mediated Isothermal Aplification n (Vòng lặp trung gian đẳng nhiệt Aplification) p ie gh tn to Ngộ độc thực phẩm TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TCVS Tiêu chuẩn vệ sinh VKHK Vi khuẩn hiếu khí w NĐTP World Health Organization oa nl WHO d (Tổ chức Y tế giới) oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Độc lực chủng E coli Bảng 1.2: Đánh giá kết cảm quan thịt 14 Bảng 1.3: Tiêu chuẩn đánh giá thịt tươi phản ứng sinh hóa học 15 Bảng 2.1: Các tiêu vi sinh vật thịt tươi TCVN 7046: 2002 24 Bảng 3.1: Kết khảo sát tình hình giết mổ tiêu thụ thịt lợn địa bàn thành phố Lạng Sơn 34 lu an Kết xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 35 Bảng 3.3: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 37 Bảng 3.4: Kết xác định vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo n va Bảng 3.2: Bảng 3.5: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi theo ie tháng thời gian sau giết mổ 43 Bảng 3.6: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo gh tn to thời gian sau giết mổ 40 p nl w mùa vụ thời gian sau giết mổ 46 Kết nghiên cứu đặc tính sinh học, đặc tính hóa học vi d oa Bảng 3.7: an lu khuẩn phân lập 48 Kết xác định serotype chủng phân lập 50 Bảng 3.9: Kết đo OD chủng vi khuẩn 51 ul nf va Bảng 3.8: oi lm Bảng 3.10: Kết xác định gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn phân lập 53 z at nh Bảng 3.11: Kết xác định gen mã hóa độc tố đường ruột PCR 54 Bảng 3.12: Kết xác định độc lực chủng E coli phân lập 55 z Bảng 3.13: Kết xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa @ m co l gm dược chủng vi khuẩn E coli phân lập 58 an Lu n va ac th si viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ phân lập tổng số vi khuẩn hiếu khí 23 Hình 2.2 Sơ đồ phân lập E coli từ thịt 24 Hình 3.2 Biểu đồ xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 36 Hình 3.3 Biểu đồ định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 38 Hình 3.4 Biểu đồ xác định vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian sau giết mổ 41 lu Hình 3.5 Vẽ Biểu đồ xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn an va tươi theo tháng thời gian sau giết mổ 45 n Hình 3.6 Biểu đồ xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi Hình 3.7 Kết tách DNA tổng số vi khuẩn E.coli 52 Hình 3.8 ie Kết PCR xác định độc tố đường ruột 53 Hình 3.9 Biểu đồ xác định tính mẫn cảm với kháng sinh hóa dược gh tn to theo mùa vụ thời gian sau giết mổ 46 p d oa nl w số chủng vi khuẩn E coli phân lập 59 oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 58 Tetracyclin: Thuốc có tác dụng yếu với chủng vi khuẩn kiểm tra Có tác dụng trung bình với 3/6 chủng, chiếm 50 %; có tác dụng yếu với 1/6 chủng, chiếm 16,67% bị 2/6 chủng kháng lại chiếm 33,33% Bảng 3.13: Kết xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn E coli phân lập Đánh giá mức độ mẫn cảm lu TT an Tên kháng Số sinh & hóa dược chủng thử Rất mẫn Mẫn cảm Mẫn cảm Kháng cảm trung bình yếu thuốc % + % + % + % 50,00 33,33 16,67 0,00 16,67 50,00 16,67 16,67 0,00 50,00 16,67 33,33 33,33 50,00 0,00 16,67 33,33 33,33 16,67 16,67 66,67 33,33 0 0,00 50,00 16,67 33,33 n va + Colistin Gentamicin 6 p ie gh tn to Kanamycin nl w Neomycin d oa lu Norfloxacin Enrofloxacin Tetracyclin va an oi lm ul nf 0,00 z at nh Sở dĩ có mức độ mẫn cảm khác chủng E coli loại kháng sinh lạm dụng thuốc trình điều trị dẫn đến mức độ mẫn z gm @ cảm vi khuẩn với loại kháng sinh yếu chí kháng thuốc hồn tồn Ngày nay, người ta phát khả năng, mức độ kháng thuốc vi khuẩn E coli m co l phát triển nhanh diện rộng Nghiên cứu tính kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Salmonella an Lu tác giả cho rằng: Sự quen thuốc số lồi vi khuẩn, có vi khuẩn E coli có chiều hướng tăng theo thời gian sử dụng: Nguyên nhân tượng kháng n va ac th si 59 thuốc sử dụng khơng kỹ thuật người gen sản sinh yếu tố kháng kháng sinh nằm plasmind R (Resistance) Plasmid di truyền dọc truyền ngang cho tất quần thể vi khuẩn thích hợp Kết nghiên cứu chúng tơi tương đồng với kết nghiên cứu Đỗ Bích Duệ (2012) [32], tác giả nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Escherichia coli thịt lợn bán thành phố Thái Nguyên Kết cho thấy loại kháng sinh tiến hành thử có kháng sinh norfloxacin có điểm tương đồng Nghiên cứu thành phố Thái Nguyên cho thấy norfloxacin lu thuốc có tác dụng tương đối mạnh với vi khuẩn E coli Có tác dụng mạnh với 17/20 an va chủng, chiếm 85%; tác dụng trung bình với 2/20 chủng, chiếm 10%; có 1/20 n chủng kháng lại, chiếm 16,67% Trong thành phố Lạng Sơn kháng sinh bình với 2/6 chủng, chiếm 33,33%; tác dụng yếu với 1/6 chủng, chiếm 16,67% ie gh tn to norfloxacin: Thuốc có tác dụng mạnh với 2/6 chủng, chiếm 33,33%; tác dụng trung p có 1/6 chủng kháng lại, chiếm 16,67% Điều thể thuốc kháng sinh 70 oa nl w norfloxacin dùng để điều trị gia súc mắc bệnh vi khuẩn E coli gây d 66.67 an 50 50 50 50 50 Colistin Gentamincin Kanamycin Neomycin Norfloxacin Enrofloxacin Tetracyclin 40 33.33 33.33 30 33.33 33.33 33.33 z at nh 20 oi lm ul nf va 50 lu 60 16.67 16.67 16.67 16.67 16.67 16.67 Mẫn cảm yếu m co Mẫn cảm trung bình l Rất mẫn cảm gm @ z 10 an Lu Hình 3.9 Biểu đồ xác định tính mẫn cảm với kháng sinh hóa dược số chủng vi khuẩn E coli phân lập n va ac th si 60 Lê Huy Chính (2007) [1] cho biết: E coli thuộc vào vi khuẩn có tỷ lệ kháng thuốc cao, cần phải làm kháng sính đồ để chọn kháng sinh thích hợp điều trị bệnh Từ kết thu trên, thực tế khuyến cáo sử dụng điều trị trường hợp người bị ngộ độc thực phẩm ô nhiễm vi khuẩn với loại kháng sinh có độ mẫn cảm cao (Rất mẫn cảm) 3.14 Đề xuất biện pháp phịng, khống chế ngộ độc thực phẩm nhiễm vi khuẩn lu E coli an 3.14.1 Giải pháp ngắn hạn va n 3.14.1.1 Giải pháp kỹ thuật to tn - Trong giết mổ ie gh + Thợ giết thịt chủ nuôi phải thực tốt công đoạn vệ sinh từ dụng p cụ, quy trình trước, sau giết mổ như: Tắm rửa lợn trước chọc tiết, nl w cạo lông, mổ lợn nơi sẽ, làm lòng riêng biệt oa + Không giết mổ lợn ốm bệnh mà chưa rõ nguyên nhân d + Sử dụng nguồn nước cho việc giết mổ làm lòng lu va an - Trong vận chuyển, phân phối, tiêu thụ ul nf + Khi vận chuyển phải có túi nilon bọc kín thùng đựng chuyên dụng oi lm + Dụng cụ phải vệ sinh trước, sau bán thịt, chất liệu phải khơng han gỉ, bóng, không thấm nước để dễ cọ rửa z at nh + Phải có lưới che đậy ruồi, muỗi loại côn trùng khác thịt + Không mổ thịt lợn cách ạt để thời gian tiêu thụ lợn z l gm - Trong kiểm soát giết mổ @ thời gian ngắn m co + Cán kiểm dịch phải 100% đào tạo qua lớp kiểm dịch, kiểm soát giết mổ, kiểm tra vệ sinh thú y động vật sản phẩm động vật, có sức khỏe tâm an Lu huyết nghề nghiệp n va + Xử lý nghiệm túc sản phẩm thịt không đủ tiêu chuẩn VSATTP ac th si 61 - Trong trình chế biến, sử dụng + Chọn mua thịt an toàn, mua địa tin cậy, thịt phải có nguồn gốc rõ ràng kiểm dịch quy định Kiên không mua thịt phát dấu hiệu hư hỏng, không rõ nguồn gốc + Chế biến thịt cách, thịt phải nấu chín kỹ, khơng ăn thịt sống hay thịt tái + Có đủ nước để chế biến, vệ sinh dụng cụ Nếu khơng có nước máy phải khử trùng nước Cloramin trước sử dụng lu an + Thịt sau chế biến phải ăn vịng giờ, khơng ăn thức ăn cũ va hay nguội Sau giờ, muốn ăn phải đun kỹ lại, không để thịt qua chế biến n ăn Thức ăn chín thức ăn sống phải để riêng biệt gh tn to + Thịt qua chế biến chưa sử dụng cần bảo quản cẩn thận p ie 3.14.1.2 Các giải pháp quản lý - Các cấp quyền, chuyên ngành thú y cấp trên, UBND thành phố, xã nl w đạo Trạm thú y cán kiểm dịch phối hợp chặt chẽ với tổ kiểm tra liên oa ngành, Ban quản lý chợ thực nghiệm túc việc kiểm soát giết mổ, kiểm tra vệ d sinh thú y quầy bán kinh doanh thịt, kiểm tra 100% số chợ tụ điểm buôn lu va an bán thịt toàn thành phố ul nf - Chuyên ngành thú y không ngừng nâng cao vai trò tham mưu, quản lý kiểm tra, kiểm dịch oi lm thường xuyên nâng cao lực trình độ cho đội ngũ cán thú y làm công tác z at nh 3.14.1.3 Các giải pháp xã hội - Đối với người kinh doanh thịt lợn sản phẩm từ thịt lợn: Phải có cam z kết với cấp quyền Trạm thú y thực quy định cần thiết gm @ quầy hàng để giảm thiểu ô nhiễm vi sinh vật m co l - Đối với người tiêu thụ: Các quan chức cần khuyến cáo cho nhân dân biết an tồn vệ sinh thực phẩm từ họ có cách nghĩ, cách làm để sang động vật khác từ sử dụng thịt an Lu hạn chế thấp vụ ngộ độc thực phẩm cho người truyền lây vi sinh vật n va ac th si 62 3.14.2 Giải pháp lâu dài Tiến tới xây dựng lò mổ nhà nước tư nhân đảm bảo tiêu chuẩn vệ sinh thú y cụm trang trại chăn nuôi thành phố, kiên xóa bỏ điểm giết mổ lan tràn Đẩy mạnh pháp chế thú y: Bắt buộc chủ lò mổ quầy bán thịt phải thực nghiệm túc quy trình vệ sinh thú y giết mổ bày bán Có bảo đảm an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu thảo luận mức độ ô nhiễm vi khuẩn thịt thành phố Lạng Sơn Chúng rút số kết luận sau: - Hộ kinh doanh thịt lợn tươi có cơng suất từ 20,32 - 35,05 con/ngày, tương đương 1,32 - 1,81 thịt lợn/ngày; tổng lượng thịt lợn tiêu thụ chợ khoảng 4,48 tấn/ngày; quầy bán thịt gà kiểm dịch vệ sinh thú y chủ lu yếu cảm quan an - Có 48,89% mẫu thịt lợn có tiêu tổng số VKHK không đạt tiêu chuẩn kỹ va thuật (theo TCVN 7046-2002) Trong đó, số mẫu khơng đạt u cầu kỹ thuật cao n chợ Đông Kinh (43,33%) gh tn to chợ Chi Lăng (53,33%), sau đến chợ Giếng Vuông (50,0%) thấp p ie - Theo địa điểm nghiên cứu, mẫu thịt gà ô nhiễm E coli chiếm 75,56%, 42,22% khơng đạt tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm Cụ thể; chợ Đông Kinh oa nl w mẫu nhiễm vi khuẩn E coli, chiếm 63,33%, mẫu không đạt tiêu chuẩn vệ sinh thú y, chiếm tỷ lệ 30,0%; chợ Giếng Vuông, mẫu nhiễm vi khuẩn E coli chiếm tỷ lệ d an lu 76,67%, có 43,33 % khơng đạt tiêu chuẩn vệ sinh thú y; chợ Chi Lăng, mẫu nhiễm E va coli chiếm 86,67%, mẫu không đạt tiêu chuẩn vệ sinh thú y chiếm 53,33% ul nf - Tỷ lệ thịt gà ô nhiễm vi khuẩn E coli vào thời điểm lấy mẫu oi lm ngày có khác rõ rệt, đặc biệt mẫu lấy vào buổi sáng so với buổi trưa Tỷ lệ thịt gà nhiễm khuẩn E coli cao vào buổi trưa (83,33%) thấp vào z at nh buổi sáng sớm (61,11%) - Từ tháng 8-10 thịt lợn tươi bán chợ ô nhiễm E coli chiếm tỷ lệ cao z 58,82 -64,29%; l gm @ (73,68 - 89,47%); mẫu thu thập từ tháng 11 - 12 tỷ lệ nhiễm chiếm - Tỷ lệ nhiễm khuẩn E Coli thịt lợn theo mùa sau giết mổ: mùa Xuân m co -Hè có tỷ lệ nhiễm E coli (91,11%) cao so với mùa Thu - Đông (60%) an Lu - Vi khuẩn E coli phân lập lên men sinh đường lactose, glucose, dương tính phản ứng sinh indol (100%) E coli phân lập âm tính với n va ac th si 64 urease, citrate không sinh H2S; 2,63% số chủng số chủng E coli phân lập có khả gây dung huyết - Các chủng vi khuẩn E coli phân lập từ thịt lợn có độc lực mạnh, từ cơng cường độc vào chuột thí nghiệm vịng từ 24 - 72 gây chết từ 88,89% chuột thí nghiệm - Type huyết kháng nguyên O 26 chủng vi khuẩn phân lập cho thấy, chủng thuộc nhóm kháng nguyên O khác nhau, có chủng thuộc nhóm O26, theo nghiên cứu nhóm O157, O111, O26 số type lu an huyết xác định thường gây bệnh ngộ độc va - Gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn phân lập n cho thấy loại độc tố STa, STb phát thấy số chủng vi ngộ độc cho người p ie gh tn to khuẩn E coli kiểm tra có khả sản sinh độc tố đường ruột - yếu tố gây - Gen mã hóa sản sinh độc tố gây bệnh PCR chủng phân lập đa w số có gen VT1 (chiếm tới 37,5%), số chủng có gen VT2 (chiếm 12,5%) nl - Kết tách DNA tổng số vi khuẩn đảm bảo độ tinh nằm d oa khoảng 1,8-2,0 Các chủng tiến hành phân tích khơng có lẫn tạp chất an lu - Các chủng vi khuẩn E coli phân lập mẫn cảm với Colistin enrofloxacin từ (50,00% - 66,67%) Đặc biệt, loại kháng sinh như: kanamycin, va oi lm Kiến nghị ul nf tetracyclin tác dụng với E coli Do kinh phí có hạn nên kết nghiên cứu đề tài cịn hạn chế Vì vậy, z at nh chúng tơi đề nghị cần tiếp tục có nghiên cứu phạm vi rộng hơn, tăng thêm số tiêu, cụ thể sau: z Tiếp tục có nghiên cứu nhiễm vi khuẩn E coli phân lập từ gm @ thịt lợn tươi l Xác định yếu tố nguy cơ, nguồn lây nhiễm vi khuẩn vào thịt gà tươi m co qua trình giết mổ, phân phối, lưu thông, bày bán, từ dụng cụ, trang thiết bị, Xác định gen mã hóa sản sinh độc tố đường ruột LT, Vte an Lu quần áo bảo hộ tay người tham gia giết mổ, người kinh doanh thịt n va ac th si 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng việt Lê Huy Chính (2007), Vi sinh vật y học, Nhà xuất Y học Bộ Y tế - Cục An toàn vệ sinh thực phẩm (2009), “Vệ sinh an tồn thực phẩm sức khỏe người”, Bản tin An toàn vệ sinh thực phẩm số 04 tháng 7-8 năm 2009, tr Bộ Y tế - Cục Quản lý chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm (2010), Quản lý chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm, Báo cáo khoa học Hội nghị chất lượng lu an vệ sinh an toàn thực phẩm lần thứ nhất, Thành Phố Hồ Chí Minh, NXB Y học, n va tr 19-20; 254-255; 383-392 Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2010), Số liệu ngộ độc năm 2010 gh tn to Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2009), Số liệu vụ ngộ độc 2009 p ie Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2011), Số liệu ngộ độc năm 2011 Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2012), Số vụ ngộ độc thực phẩm nl w năm 2012 oa Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2013), Số liệu vụ ngộ độc thực d phẩm năm 2013 lu nf phẩm năm 2014 va an Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2014), Số liệu vụ ngộ độc thực phẩm năm 2015 oi lm ul 10 Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2015), Số liệu vụ ngộ độc thực phẩm tháng đầu năm 2016 z at nh 11 Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (6/2016), Số liệu vụ ngộ độc thực z 12 Đỗ Bích Duệ (2012), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn @ l Công nghệ sinh học, Thái Nguyên, tr 53 - 55 gm Escherichia coli thịt lợn bán thành phố Thái Nguyên, Luận Văn thạc sĩ m co 13 Trương Thị Dung (2000), Khảo sát số tiêu vệ sinh thú y điểm giết mổ lợn địa bàn thành phố Hà Nội, Luận văn thạc sĩ khoa học Nông an Lu nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội n va ac th si 66 14 Lã Quý Đôn, Trần Đáng, Nguyễn Thị Dụ, Phạm Duy Tường, Phạm Xuân Đà, Nguyễn Văn Sơn (2008), Ngộ độc thực phẩm, nguyên nhân cách phòng tránh, Tài liệu lưu hành nội - Hà Nội 15 Trần Thị Hương Giang, Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2012), “Xác định tỷ lệ nhiễm độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ thịt (lợn, bò, gà) số huyện ngoại thành Hà Nội”, Tạp chí Khoa học Phát triển 2012: tập 10, số 2: 295 - 300 Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 16 Trần Thị Hạnh, Lưu Thị Quỳnh Hương, Võ Thị Bích Thuỷ (2004), Tình trạng lu nhiễm Salmonella thực phẩm có nguồn gốc động vật địa bàn Hà Nội an va kết phân lập vi khuẩn, Viện Thú y 35 năm xây dựng phát triển, tr n 407 - 419 lợn xuất tiêu thụ nội địa, Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội p ie gh tn to 17 Vũ Mạnh Hùng (2006), Xác định số tiêu vi sinh vật sở giết mổ w 18 Hoàng Phú Hiệp, Lê Quang Huấn (2012), “Phát triển kỹ thuật lamp (loop- oa nl mediated isothermal amplification) cho việc phát nhanh xác vi d khuẩn Escherichia coli O157: H7”, Tạp chí Sinh học, 2012, 34(3): 343-346 an lu 19 Nguyễn Thị Liên Hương (2010) “Nghiên cứu số đặc tính vi khuẩn ul nf Hà Nội va Escherichia coli phân lập từ ngan bệnh biện pháp phòng trị”, Luận án tiến sĩ, Hà Nội oi lm 20 Chu Văn Mẫn, Đào Hữu Hồ (2002), Thống kê sinh học, Nxb Đại học Quốc gia z at nh 21 Nguyễn Bình Minh (2004), “Kỹ thuật PCR đa mồi xác định loại Escherichia coli gây bệnh”, Tạp chí Y học Việt Nam, số 7, Tổng hội y dược học z gm @ Việt Nam, tr 1-4 22 Lương Đức Phẩm (2000), Vi sinh vật học an toàn vệ sinh thực phẩm, m co l Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 23 Nguyễn Vĩnh Phước (1977), Vi sinh vật học thú y tập1, Nxb ĐH THCN, Hà Nội an Lu 24 Nguyễn Vĩnh Phước (1970), Vi sinh vật thú y tập 2, Nxb ĐH THCN, Hà Nội 25 Nguyễn Vĩnh Phước (1976), Vi sinh vật thú y tập 3, Nxb ĐH THCN, Hà Nội n va ac th si 67 26 Nguyễn Thị Nguyệt Quế (2006), Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ, số tiêu vi sinh vật ô nhiễm thịt lợn nơi giết mổ bán chợ thuộc quận Long Biên, Hà Nội, Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 27 Lê Minh Sơn (2003), Nghiên cứu số vi khuẩn gây ô nhiễm thịt lợn vùng hữu ngạn Sông Hồng, Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 28 Đinh Quốc Sự (2005), Thực trạng hoạt động giết mổ gia súc tỉnh, Một số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thị xã Ninh Bình, tỉnh Ninh lu an Bình, Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội va 29 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2001), Vi sinh vật n thú y, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội gốc từ động vật thị trường Hà Nội, Luận án thạc sĩ Nông nghiệp, tr 50-58 ie gh tn to 30 Tô Liên Thu (1999), Nghiên cứu ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm có nguồn p 31 Tơ Liên Thu (2005), Nghiên cứu tình trạng nhiễm số vi khuẩn vào thịt w lợn, thịt gà sau giết mổ Hà Nội số phương pháp làm giảm nhiễm oa nl khuẩn thị, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia Hà Nội, tr 45-57 d an lu 32 Đỗ Ngọc Thúy (2006), “Đánh giá tình hình nhiễm số loại vi khuẩn gây va bệnh thịt tươi địa bàn Hà Nội”, Tạp chí KHKT Thú y, 13(3) nf 33 Đào Thị Thanh Thủy (2012), Xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella oi lm ul số đặc điểm Salmonella thịt lợn tươi khu vực thành phố Thái Nguyên, Luận văn Thạc sĩ Công Nghệ sinh học Thái Nguyên tr 88-90 z at nh 34 Hoàng Thu Thuỷ (1991), E coli, Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh vật học, Nxb Văn hóa, z 35 Nguyễn Thị Thanh Thủy (2012), Nghiên cứu số đặc tính vi khuẩn gm @ Escherichia coli, phân lập từ bò, lợn giết mổ Hà Nội, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội l m co 36 Trịnh Quang Tuyên, Nguyễn Ngọc Phụng, Lê Văn Tạo, Cù Hữu Phú, Lê Thế Tuấn (2004), “Phân lập xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli từ tr 22 - 28 an Lu lợn bị tiêu chảy nuôi trại lợn Tam Điệp”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, n va ac th si 68 37 TCVN 7046:2002, Quy định kỹ thuật áp dụng đói với tiêu vi sinh vật thịt lợn tươi, Hà Nội 38 TCVN 4833-1:2002 TCVN 4833-2:2002, Phương pháp lấy mẫu thịt lợn tươi, Hà Nội 39 TCVN 5155:1990, Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt tươi, Hà Nội 40 TCVN 5667:1992, Phương pháp xác định tiêu tổng số VKHK thịt tươi, Hà Nội lu 41 Trung tâm kiểm tra vệ sinh Thú y Trung ương I- Cục Thú y (1998), Tài liệu tập an huấn kiểm tra vệ sinh thú y thịt sản phẩn thực phẩm có nguồn n va gốc tỷ lệ thịt, Hà Nội 42 Bertschinger H U, Fairbrother J M, Nielsen N O, Pohlenz J (1992), Escherichia coli infection Diseases of Swine IOWA State University press/AMES, 7th edition, IOWA USA p ie gh tn to II Tiếng nước w 43 Herbert R A (1991) Psychorotrophic Micro organisions in Spoilaga and oa nl pathoganicity, Published by Academic Press, New York, 1991, p.3-26 d 44 Husein H S (2007), Prevalence and pathogenicity of Shiga toxin -producing lu an Escherichia coli in beef cattle and their products, J Anim Sci 85: E63 -E72, va Doi: 10.2527/jas.2006-421 ul nf 45 Mervat A M Abostate et al (2006), Incidence of Bacillus cereus in some meat oi lm products and the effect of Gamma radiation on its toxin, International Journal of Agriculture and Biology z at nh 46 Quinn P J., Carter M E., Markey B K., Carter G R., (1994), Clinical Veterinary Microbiology Wolfe publishing Mosby-Year Book Europe Limited z @ 47 Quinn P.J, Carter M.E, Makey B, Carter G.R (2002), Clinical veterinary gm microbiology, Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB, England, p 209-236 m co l 48 Zarfel G., Galler H., Luxner J., Petternel C., Reinthaler F F., Haas D., Kittinger C., Grisold A J., Pless P., Feierl G (2014), “Multiresistant bacteria isolated 12582 - 12593 an Lu from chicken meat in Austria”, Int J Environ Res Public Health, 11(12), pg n va ac th si 69 MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI lu an Ảnh Lợn mổ không đảm bảo vệ sinh n va Ảnh Phương tiện vận chuyển không đảm bảo vệ sinh p ie gh tn to d oa nl w an lu Ảnh 4: Chợ Chi Lăng oi lm ul nf va Ảnh 3: Sơ chế nội tạng không đảm bảo vệ sinh z at nh z m co l gm @ an Lu Ảnh 5: Chợ Đông Kinh Ảnh 6: Chợ Giếng Vuông n va ac th si 70 lu Ảnh 7: Quầy bán thịt lợn chợ Chi Lăng an Ảnh 8: Quầy bán thịt lợn chợ Giếng Vuông n va p ie gh tn to d oa nl w an lu Ảnh Quầy bán thịt lợn chợ Đông Kinh oi lm ul nf va Ảnh 10: Khử trùng dụng cụ lấy mẫu z at nh z m co l gm @ an Lu Ảnh 11: Lấy mẫu chợ Đông Kinh Ảnh 12: Lấy mẫu chợ Giếng Vuông n va ac th si 71 lu an Ảnh 13: Tiêm chuột thí nghiệm n va Ảnh 14: Chuột chết sau tiêm Escherichia coli p ie gh tn to d oa nl w an lu Ảnh 16: Phản ứng lên men đường Escherichia coli oi lm ul nf va Ảnh 15: Bệnh tích chuột sau thử độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập z at nh z m co l gm @ an Lu Ảnh 18: Khuẩn lạc Escherichia coli môi trường thạch MacConkey n va Ảnh 17: Vi khuẩn Escherichia coli bắt màu Gram (-) ac th si 72 lu Ảnh 19: Kết phản ứng Indol Escherichia coli an n va Ảnh 20: Thử tính mẫn cảm với kháng sinh hoá dược vi khuẩn Escherichia coli phân lập p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si