Đang tải... (xem toàn văn)
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG BÁO CÁO ĐỀ CƯƠNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIÊP ĐẶT VẤN ĐỀ • Cá tra một trong loại thủy sản có kim ngạch xuất khẩu cao • Tă[.]
BÁO CÁO ĐỀ CƯƠNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIÊP ĐẶT VẤN ĐỀ • Cá tra- loại thủy sản có kim ngạch xuất cao • Tăng dần qua năm đem nhiều nguồn lợi kinh tế Biểu đồ Thống kê xuất cá tra tháng đầu năm từ 2009-2013 ĐẶT VẤN ĐỀ • Ni cá số lượng lớn,mật độ cao, nuôi thâm canh dẫn đến ô nhiễm nguồn nước, dịch bệnh tràn lan • Sử dụng kháng sinh tự phát, tùy tiện Đặc biệt bênh gây xuất huyết cá tra với tác nhân gây bệnh Aermonas hydrophyla PHÂN LẬP VI KHUẨN Aeromonas hydrophila CÓ ĐỘC LỰC CAO GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ TRA (pangasius hypophthalmus) Ở CÁC TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG BẰNG PHƯƠNG PHÁP PCR GVHD: Trần Hoàng Ngâu SVTH: Châu Thanh Xuân Tổng quan Vật liệu-Phương pháp Kết quả-Biện luận Kết luận-kiến nghị Tài liệu tham khảo Tổng quan Vài nét Aeromonas hydrophila Hình 1.1 Vi khuẩn Aeromonas hydrophila có tiên mao Ảnh kính hiển vi điện tử (Bùi Quang Tề, 1998) Tổng quan Khả lây bệnh • Tác nhân gây bệnh nhiễm trùng huyết (motile aeromonad septicaemia: MAS) • Xâm nhiễm quan nội tạng, gây xuất huyết • Aeromonas hydrophila sản sinh nhiều độc tố haemolysin (aerolysin), cytotoxin, enterotoxin, lipase cholinesterases,… góp phần quan trọng vào q trình phát triển bệnh Vật liệu-Phương pháp 1.2 Phương pháp phân lậpvà vàmổ giữ giống 1.1 Phương tra khám tích thái 1.3 Phương phápkiểm nhuộm gram quanbệnh sát hình Vật liệu pháp • Các thiết bị chuyên dụng phịng thí nghiệm • Các hóa chất cần thiết cho đề tài Phương pháp Thí nghiệm 1: Phân lập vi khuẩn từ tỉnh Đồng sông Cửu Long ( Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, Đồng Nai) Sơ đồ 2.3 Quy trình nhuộm gram Vật liệu-Phương pháp Thí nghiệm 2: Định danh vi khuẩn phương pháp PCR 2.1 Thiết kế đoạn mồi • Dựa trình tự đoan gene gây độc Thermostable hemolysine( AHA_3217) Hình 2.1 Vị trị gene Thermostable hemolysine genom A hydrophila Vật liệu-Phương pháp 2.3 Chu trình luân nhiệt 2.2 Thành phần phản ứng PCR Thành phần Taq buffer 10X Nồng độ cuối Thể tích cho phản ứng (V = 25l) 1X 2.5 l 0.2 mM 0.2 l 0.04 U 0.2 l Forward primer 10mM 0.2 mM 0.5 l Reverse primer 10mM 0.2 mM 0.5 l dNTPs 25mM Dream Taq polymerase 5U/l DNA template H 2O 1.0 l 20.1l Vật liệu-Phương pháp Giải trình tự sản phẩm PCR Vật liệu-Phương pháp Thí nghiệm 3: Xây dựng đường cong tăng trưởng • Xây dựng mối tương quan hồi quy OD mật độ tế bào thời gian phát triển hệ làm sở cho việc thử nghiệm độc lực chủng A.hydrophila hoang dại • Tăng sinh vi khuẩn canh trường LB broth, nuôi cấy lắc 28oC, 250rpm • Cứ tiếng lấy mẫu đo OD trải đếm vi khuẩn Theo dõi vịng Vật liệu-Phương pháp Thí nghiệm 4: Thử nghiệm độc lực chủng A.hydrophila hoang dại phương pháp tiêm Vật liệu-Phương pháp Thí nghiệm 5: Xác định độ nhạy cặp mồi phát A.hydrophila phương pháp Realtime PCR xác định độ đặc hiệu phương pháp 5.1 Xác định độ nhạy cặp mồi a Xây dựng đường chuẩn - Dựa vào đường chuẩn để xác định số coppy có mẫu cần phân tích, từ xác định xác hàm lượng DNA thấp mà cặp mồi bắt cặp Vật liệu-Phương pháp b Thành phần phản ứng Realtime PCR Thành phần Nồng độ cuối Master mix (10X) Thể tích cho phản ứng (V = 20l) 10 l Forward primer 10mM 0.2 mM 0.5 l Reverse primer 10mM 0.2 mM 0.5 l DNA template H 2O 1.0 l l Vật liệu-Phương pháp 5.2 Xác định độ đặc hiệu cặp mồi - Xác định độ đặc hiệu căp mồi cách thực phản ứng PCR với mẫu vi khuẩn thường gây bệnh cho cá Kết quả-Biện luận • Dự kiến phân lập vài dịng A.hydrophila có độc lực cao để phục vụ cho việc nghiên cứu vaccine • Xác định hàm lượng DNA vi khuẩn thấp phát • Xác định độ đặc hiệu phương pháp Kết luận-kiến nghị • Sử dụng phương pháp PCR với cặp mồi thiết kế đặc hiệu để phân lập thêm chủng A.hydrophila hoang dại • Tạo chủng A.hydrophila đột biến từ dịng A.hydrophila có độc lực cao vừa phân lập Tài liệu tham khảo • Tiếng Việt Kết thực kế hoạch tháng đầu năm 2014 Ngành nông nghiệp phát triển nông thôn Báo cáo Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn Phạm Thanh Hương, Từ Thanh Dung Điểm bệnh học cá tra Chi cục thủy sản thành phố Cần Thơ Bùi Quang Tề, 2001 Ký sinh trùng số lồi cá nước Đồng Sơng Cửu Long biện pháp phòng trị chúng Luận án tiến sỹ sinh học Hà Nội • Tiếng Anh Austin B, Austin D A Bacterial fish pathogens 2nd ed Chichester, United Kingdom: Ellis Horwood; 1993 Roberts R.J (1993) Motile Aeromonad Septicaemia In: Bacterial diseases of fish (Ed by Inglis V., Roberts R.J and Bromage N.R.), Blackwell scientific publications, Oxford, 143-155 (RJ, 1993) Plumb J.A., Grizzle J.M and Defigueiredo J (1976) Necrosis and bacterial infection in channel catfish (Ictalurus punctatus) following hypoxia Journal of Wildlife Diseases12, 247-253