Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu biểu hiện gen mã hoá nhân tố phiên mã zmdreb2a nhằm tăng cường tính chịu hạn ở một số dòng ngô việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỒN THỊ BÍCH THẢO NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HỐ NHÂN TỐ PHIÊN MÃ ZmDREB2A NHẰM TĂNG CƯỜNG TÍNH CHỊU HẠN Ở MỘT SỐ DỊNG NGƠ VIỆT NAM ́ ́ LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC HÀ NỘI – 2020 ̀ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỒN THỊ BÍCH THẢO NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HỐ NHÂN TỐ PHIÊN MÃ ZmDREB2A NHẰM TĂNG CƯỜNG TÍNH CHỊU HẠN Ở MỘT SỐ DỊNG NGƠ VIỆT NAM Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS TS Nông Văn Hải TS Bùi Mạnh Cường HÀ NỘI – 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn Thầy giúp đỡ tận tình đồng nghiệp Viện Nghiên cứu Ngơ Các kết trình bày luận án trung thực, phần cơng bố Tạp chí khoa học - cơng nghệ, phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 07 năm 2020 TÁC GIẢ ĐỒN THỊ BÍCH THẢO ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, trình nghiên cứu thực hiện, nhận quan tâm, giúp đỡ quan, thầy cô, bạn bè đồng nghiệp gia đình Trước tiên, Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Nông Văn Hải, TS Bùi Mạnh Cường tận tình hướng dẫn bảo suốt q trình tơi nghiên cứu thực đề tài luận án Tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới Ban Giám đốc Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Lãnh đạo tập thể cán Ban Đào tạo sau đại học, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập hồn thiện luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ngô tạo điều kiện thuận lợi, vật chất, tinh thần thời gian thực luận án Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ đồng nghiệp Bộ môn Công nghệ sinh học, Bộ mơn Cơng nghệ gen, Phịng Khoa học HTQT nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực luận án Trong q trình thực đề tài, tơi nhận giúp đỡ tập thể cán Phòng Đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng tri ân đồng nghiệp, gia đình bạn bè điểm tựa tinh thần vững chắc, giúp đỡ, động viên, khích lệ, chia sẻ khó khăn ln đồng hành tơi q trình học tập Hà Nội, tháng 07 năm 2020 Đồn Thị Bích Thảo iii MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT xii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu 3 Đóng góp luận án Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tác động hạn đến sinh trưởng phát triển ngô 1.1.1 Khái niệm hạn 1.1.1.1 Hạn khơng khí .5 1.1.1.2 Hạn đất .6 1.1.1.3 Hạn toàn diện .6 1.1.2 Tác động hạn đến sinh trưởng phát triển ngô .7 1.2 Ảnh hưởng hạn sản xuất ngô 1.2.1 Ảnh hưởng hạn sản xuất ngô giới 1.2.2 Ảnh hưởng hạn đến sản xuất ngô Việt Nam 11 1.3 Tình hình nghiên cứu giống ngô chịu hạn 14 1.3.1 Tình hình nghiên cứu, sử dụng giống ngô chịu hạn giới .14 1.3.2 Tình hình nghiên cứu ngơ chịu hạn Việt Nam 16 1.4 Cơ chế sinh lý, sinh hóa liên quan đến tính chịu hạn thực vật 17 1.4.1 Cơ chế phân tử phản ứng với hạn thực vật 17 1.4.2 Vai trò số phân tử truyền tín hiệu điều hịa biểu gen chịu hạn thực vật .19 1.5 Một số nhóm nhân tố phiên mã quan tâm nghiên cứu chịu hạn .21 1.5.1 Nhân tố phiên mã AREB/ABF .22 1.5.2 Nhân tố phiên mã NAC 23 1.5.3 Nhóm nhân tố phiên mã bZIP 24 1.5.4 Nhân tố phiên mã AP2/ERF 25 iv 1.5.5 Một số nghiên cứu nhân tố phiên mã phản ứng hạn thực vật nước ta 26 1.6 Một số nghiên cứu giới Việt Nam nhóm gen mã hóa yếu tố phiên mã Dreb2A phản ứng chịu hạn trồng .27 1.7 Ứng dụng ngô biến đổi gen giới Việt Nam 33 1.7.1 Tiềm ứng dụng ngô biến đổi gen 33 1.7.2 Sử dụng ngô biến đổi gen giới 34 1.7.3 Nghiên cứu sản xuất ngô biến đổi gen Việt Nam 38 1.8 Ứng dụng tiến kỹ thuật phân tích chuyển gen 42 1.8.1 Chọn lọc thể chuyển gen gen thị 42 1.8.2 Phân tích chuyển gen kỹ thuật sinh học phân tử 43 1.8.2.1 Phân tích chuyển gen kỹ thuật PCR 43 1.8.2.2 Phương pháp xác định số (copy) chuyển gen .44 1.8.2.3 Phân tích biểu gen 45 1.8.3 Phương pháp phân tích sử dụng nhà lưới đồng ruộng 45 1.8.3.1 Phân tích chức sinh học gen chuyển 46 1.8.3.2 Phân tích đặc điểm di truyền nhận biết thể đồng hợp tử hệ sau .46 CHƯƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 48 2.1 Vật liệu 48 48 2.1.1 Vật liệu thực vật 2.1.2 Chủng vi sinh vật 48 2.1.3 Vector oligonucleotide 48 2.1.4 Môi trường nuôi cấy 48 2.2 Hóa chất, thiết bị địa điểm nghiên cứu 49 2.2.1 Hóa chất, thiết bị nghiên cứu 49 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 50 2.3 Nội dung nghiên cứu 50 2.4 Phương pháp nghiên cứu 50 2.4.1 Phương pháp xác định dịng ngơ có khả tái sinh cao .51 2.4.2 Phương pháp theo dõi đặc điểm nơng sinh học, chọn tạo dịng làm vật liệu chuyển gen 51 2.4.3 Phương pháp thiết kế vector biểu gen ZmDREB2A 52 2.4.3.1 Thiết kế vector biểu tế bào thực 52 2.4.3.2 Tạo dòng vi khuẩn A tumefaciens mang vector chuyển gen 53 v 2.4.4 Phương pháp tạo chuyển gen thông qua vi khuẩn A.tumefaciens 53 2.4.4.1 Chuẩn bị nguyên liệu biến nạp 53 2.4.4.2 Chuẩn bị vi khuẩn lây nhiễm 53 2.4.4.3 Quy trình biến nạp gen .54 2.4.5 Phân tích đánh giá ổn định dịng ngô mang gen ZmDREB2A 56 2.4.5.1 Kiểm tra có mặt gen chuyển kỹ thuật PCR 56 2.4.5.2 Đánh giá phân ly gen ZmDREAB2A qua hệ .57 2.4.4.3 Phân tích chuyển gen southerm blot 57 2.4.6 Đánh giá biểu gen thông qua RT-PCR 59 2.4.7 Tạo kháng thể đa dòng kháng protein ZmDREB2A tái tổ hợp 60 2.4.7.1 Biểu protein ZmDREB2A tế bào vi khuẩn E coli 60 2.4.7.2 Gây đáp ứng miễn dịch chuột 62 2.4.8 Xác định hàm lượng Chlorophyll, proline, cacbonhydrate chuyển gen 63 2.4.8.1 Phương pháp xác định hàm lượng chlorophyll tổng số 63 2.4.8.2 Phương pháp xác định hàm lượng proline .63 2.4.8.3 Phương pháp xác định hàm lượng cacbohydrate không cấu trúc (NSC) 64 2.4.9 Đánh giá khả chịu hạn chuyển gen .64 2.4.9.1 Đánh giá khả chịu hạn thí nghiệm gây hạn nhân tạo giai đoạn theo phương pháp Camacho 64 2.4.9.2 Đánh giá khả chịu hạn thí nghiệm gây hạn nhân tạo giai đoạn sinh trưởng khác theo phương pháp Zaidi 65 2.4.10 Các kỹ thuật dùng đánh giá chuyển gen 65 2.4.10.1 Tách chiết, định lượng DNA 65 a, Tách chiết DNA plasmid 65 b, Tách chiết DNA tổng số từ ngô .66 2.4.10.2 Tách chiết, định lượng RNA từ mô thực vật 67 2.4.10.3 Điện di DNA/RNA gel agarose .67 2.4.10.4 Tổng hợp cDNA 68 2.4.10.5 Kỹ thuật PCR khuếch đại gen ZmDREB2A 68 2.4.10.6 Phương pháp giải trình tự so sánh 68 2.4.10.7 Phương pháp phân lập, tách dịng xác định trình tự gen 69 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 70 vi 3.1 Đánh giá khả tái sinh đặc điểm nông học số vật liệu 70 3.1.1 Đánh giá khả tái sinh số vật liệu nghiên cứu 70 3.1.2 Đặc điểm nông, sinh học dịng có tỷ lệ tái sinh cao .73 3.1.2.1 Thời gian sinh trưởng .73 3.1.2.2 Đặc điểm hình thái 74 3.1.2.3 Khả chống chịu 75 3.1.2.4 Các yếu tố cấu thành suất suất 76 3.2 Thiết kế biến nạp vector biểu thực vật mang gen ZmDreb2A vào vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 79 3.2.1 Thiết kế vector biểu thực vật mang gen ZmDREB2A 79 3.2.1.1 Phân tích tổng hợp gen ZmDreb2A .79 3.2.1.2 Thiết kế vector biểu thực vật mang gen ZmDREB2A .82 3.2.2 Biến nạp cấu trúc vector chứa gen ZmDREB2A-S vào số dịng ngơ Việt Nam thơng qua vi khuẩn A tumefaciens 84 3.2.2.1 Chuyển gen ZmDREB2A-S vào dịng ngơ K1, K3, K7 thơng qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 85 3.2.2.2 Kiểm tra có mặt gen chuyển kỹ thuật PCR chuyển gen hệ T0 .90 3.2.2.3 Kết giải trình tự đoạn gen ZmDREB2A .91 3.2.2.4 Đánh giá khả hữu thụ chuyển gen hệ T0 .93 3.3 Phân tích đánh giá ổn định dịng ngơ mang gen ZmDREB2A hệ T1, T2, T3 96 3.3.1 Phân tích có mặt gen ZmDREB2A dịng ngơ chuyển gen hệ T1 phương pháp PCR 96 3.3.2 Phân tích có mặt gen ZmDREB2A dịng ngơ chuyển gen hệ T2 phương pháp PCR 99 3.3.3 Phân tích có mặt gen ZmDREB2A dịng ngơ chuyển gen hệ T3 phương pháp PCR 101 3.3.4 Kết giải trình tự cấu trúc biểu Ubi::ZmDREB2A:: 35S ngô chuyển gen 104 3.3.4.1 Kết PCR, giải trình tự promoter Ubiquitin so sánh với trình tự gốc 104 3.3.4.2 Kết PCR, giải trình tự đoạn gen ZmDREB2A so sánh với trình tự gốc 107 3.3.4.3 Kết PCR, giải trình tự terminator 35S so sánh với trình tự gốc 109 vii 3.3.5 Xác định có mặt gen chuyển ZmDREB2A kỹ thuật lai Southern 112 3.3.5.1 Kết DNA tổng số cắt enzyme giới hạn 112 3.3.5.2 Kết xác định tín hiệu lai Southern blot 113 3.3.6 Xác định có mặt sản phẩm phiên mã gen chuyển ZmDREB2A ngô chuyển gen kỹ thuật RT-PCR 115 3.3.6.1 Kết PCR sử dụng cặp mồi Actin 115 3.3.6.2 Kết PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu ZmDREB2A 117 sản phẩm PCR từ cDNA dòng K7-4.12.25 118 3.3.7 Kiểm tra protein ZmDREB2A thẩm tách miễn dịch (Western Blot) 118 3.4 Xác định hàm lượng Chlorophyll, Proline, Cacbonhydrate chuyển gen đánh giá khả chịu hạn dịng ngơ chuyển gen 120 3.4.1 Xác định hàm lượng chlorophyll chuyển gen ZmDREB2A 120 3.4.2 Xác định hàm lượng proline chuyển gen ZmDREB2A 123 3.4.3 Xác định hàm lượng carbohydrate không cấu trúc chuyển gen ZmDREB2A 125 3.4.4 Đánh giá khả chịu hạn ngô chuyển gen hệ T3 gây hạn nhân tạo .127 3.4.4.1 Đánh giá số tiêu liên quan đến khả chịu hạn nhân tạo dòng chuyển gen ZmDREB2A thời kỳ .127 3.4.4.2 Đánh giá dòng chuyển gen dòng tương ứng giai đoạn sinh trưởng khác khả chịu hạn nhân tạo 134 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 146 4.1 Kết luận 146 4.2 Đề nghị 147 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 148 TÀI LIỆU THAM KHẢO 149 PHỤ LỤC 165 Một số hình ảnh thực thí nghiệm tái sinh chuyển gen .165 Một số hình ảnh gây hạn nhân tạo .169 Một số hình ảnh đặc điểm hình thái dịng K1, K3, K7 171 viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Khả gặp hạn vùng ngô Việt Nam 12 Bảng 1.2 Phản ứng gen DREB với stress khác môi trường chuyển gen 28 Bảng 1.3 Diện tích trồng chuyển gen giới, từ 1996 đến 2017 34 Bảng 1.4 Các nước trồng biến đổi gen vào năm 2016 2017 (Triệu ha) 35 Bảng 2.1 Trình tự oligonucleotide sử dụng nghiên cứu 49 Bảng 2.2 Hệ thống môi trường dùng thí nghiệm chuyển gen ngơ 55 Bảng 2.3 Thành phần gel polyacrylamide chứa SDS 61 Bảng 3.1 Tỷ lệ tạo tái sinh từ phôi non số dịng ngơ Việt Nam 71 Bảng 3.2 Thời gian sinh trưởng đặc điểm dòng năm 2014 .73 Bảng 3.3 Một số đặc điểm sinh trưởng phát triển dịng ngơ năm 2014 74 Bảng 3.4 Khả chống chịu dịng ngơ năm 2014 75 Bảng 3.5 Các yếu tố cấu thành suất giống ngô 76 Bảng 3.6 Hình thái bắp, yếu tố cấu thành suất suất thực thu dịng thí nghiệm năm 2014 .78 Bảng 3.7 Sự hình thành mơ sẹo dịng ngơ thí nghiệm 86 Bảng 3.8 Sự hình thành chồi tái sinh dịng ngơ thí nghiệm 87 Bảng 3.9 Sự hình thành hồn chỉnh dịng ngơ thí nghiệm .89 Bảng 3.10 Kết kiểm tra có mặt gen chuyển khả hữu thụ chuyển gen hệ T0 90 Bảng 3.11 Kết đánh giá khả hữu thụ chuyển gen hệ T0 94 Bảng 3.12 Kết phân tích PCR dịng ngơ hệ T1 96 Bảng 3.13 Kết phân tích PCR dịng ngơ hệ T2 100 Bảng 3.14 Nguồn gốc T2 chọn đánh giá hệ T3 102 Bảng 3.15 Kết phân tích PCR dịng ngơ hệ T3 102 Bảng 3.16 Kết so sánh đoạn trình tự Promoter Ubiquitin trình tự gốc 106 Bảng 3.17 Kết so sánh đoạn trình tự gen ZmDREB2A trình tự gốc 108 Bảng 3.18 Kết so sánh đoạn trình tự 35S terminater dịng ngơ 111 Bảng 3.19 Tỷ lệ sống sau phục hồi (%) .129 Bảng 3.20 Các tiêu thân, lá, rễ tươi dịng ngơ thí nghiệm chậu 131 Bảng 3.21 Các tiêu thân, rễ khô dịng ngơ thí nghiệm chậu 133 Bảng 3.22 Thời gian sinh trưởng dòng ngơ thí nghiệm 135 Bảng 3.23 So sánh chiều dài bắp đường kính bắp vật liệu ngô thời kỳ hạn khác nhà lưới .138 Bảng 3.24 So sánh số hàng hạt số hạt/hàng dòng ngô mang 139 Bảng 3.25 So sánh tỷ lệ hạt/bắp khối lượng nghìn hạt dịng ngơ 140 Bảng 3.26 So sánh suất cá thể dịng ngơ chuyển gen ZmDREB2A thời kỳ hạn khác nhà lưới 141 163 171 Wang, K.E (2006) Agrobacterium Protocols Plant Sciences 172 Wang, Q., Guan, Y., Wu, Y., Chen, H., Chen, F., Chu, C (2008) Overexpression of a rice OsDREB1F gene increases salt, drought, and low temperature tolerance in both Arabidopsis and rice Plant Mol Biol 67: p 589-602 173 Wang, X.Q., Ullah, H., Jones A.M., Assmann, S.M (2001) G protein regulation of ion channels and abscisic acid signaling in Arabidopsis guard cells Science 292: p 2070-2072 174 Wang, Z., Cheng, K., Wan, L., Yan, L., Jiang, H., Liu, S., et al (2015) Genomewide analysis of the basic leucine zipper (bZIP) transcription factor gene family in six legume genomes BMC Genomics 16: p 1053 175 Wani, S.P., T K Sreedevi., and J Rockstrom (2009) Rainfed Agriculture Unlocking the Potential Eds S.P Wani, J Rockstrom ans T Oweis Rainfed Agriculture: Comprehensive Assessment of Water Management in Agriculture Series CABI International Wallingford, UK 1-7: p 4-35; 328 176 Wei, K., Chen, J., Wang, Y., Chen, Y., Chen, S., Lin, Y., et al (2012) Genomewide analysis of bZIP-encoding genes in maize DNA Res 19: p 463– 476 177 Wu, H., Lv, H., Li, L., Liu, J., Mu, S., Li, X., et al (2015) Genome-Wide Analysis of the AP2/ERF transcription factors family and the expression patterns of DREB genes in moso bamboo (Phyllostachys edulis) PLoS ONE 10: p e0126657 178 Wu, R (2012) Recombinant DNA Methodology II Academic Press 444 179 Yan, J., M Warburton., and J Crouch (2017) Association mapping for enhancing maize (Zea mays L.) genetic improvement Crop Science 51: p 433-449 180 Yancey, P.H., Clark, M E., Hand, S C., & Somero, G N (1982) Living with water stress: evolution of osmolyte systems Science 217(4566): p 1214-1222 181 Yong, Z.H.A.N.G., Bao-Yu, Y A N G., and Shi-Yun, C H E N (2016) Inheritance analysis of herbicide-resistant transgenic soybean lines Acta Genetica Sinica 33(12): p 1105-1111 182 Yoshida, T., Fujita, Y., Maruyama, K., Mogami, J., Todaka, D., Shinozaki, K.,et al (2015) Four Arabidopsis AREB/ABF transcription factors function predominantly in gene expression downstream of SnRK2 kinases in abscisic acid signalling in response to osmotic stress Plant Cell Environ 28: p 35-49 183 Yoshida, T., Sakuma, Y., Qin, F., Mizoi, J., Kidokoro, S., Fujita, Y., Shinozaki, K., Yamaguchi-Shinozaki, K (2008) Functional analysis of an Arabidopsis heatshock transcription factor HsfA3 in the transcriptional cascade downstream of the DREB2A stress-regulatory system Biochem Biophys Res Commun 368: p 515-521 184 You, J., Zong, W., Hu, H., Li, X., Xiao, J., and Xiong, L (2016) A STRESSRESPONSIVE NAC1-regulated protein phosphatase gene rice protein 164 phosphatase18 modulates drought and oxidative stress tolerance through abscisic acid-independent reactive oxygen species scavenging in rice Plant Physiol 166: p 2100-2114 185 Zaidi Pervez, H (2002) Drought Tolerance in Maize: Theoretical considerations & Practical implications CIMMYT, Int 186 Zaidi, P.H., M Yadav, R.P Singh (2008) Relationship between drought and excess moisture tolerance in tropical maize (Zea mays L.) Aust J Crop Sci 1: p 78-96 187 Zhang, H., Zhang, J., Quan, R., Pan, X., Wan, L., Huang, R (2013) EAR motif mutation of rice OsERF3 alters the regulation of ethylene biosynthesis and drought tolerance Planta 237: p 1443-1451 188 Zhang, J., Yu, H., Zhang, Y., et al (2016) Increased abscisic acid levels in transgenic maize overexpressing AtLOS5 mediated root ion fluxes and leaf water status under salt stress Journal of Experimental Botany 67(5): p 1339-1355 189 Zhang, X., Liu, X., Wu, L., Yu, G., Wang, X., and Ma, H (2015) The SsDREB transcription factor from the succulent halophyte Suaeda salsa enhances abiotic stress tolerance in transgenic tobacco Int J Genomics 2015: p 875497 190 Zhang, X., Mi, Y., Mao, H., Liu, S., Chen, L., and Qin, F (2019) Genetic variation in ZmTIP1 contributes to root hair elongation and drought tolerance in maize Plant Biotechnol J https://doi.org/10.1111/pbi.13290 191 Zhang, Y., Yin, X., Yang, A., Li, G., & Zhang, J (2005) Stability of inheritance of transgenes in maize (Zea mays L.) lines produced using different transformation methods Euphytica 144: p 1-2; 11-22 192 Zheng, Y.M., Ding Y.F., Liu, Z.H., and Wang, S.H (2010) Effects of panicle nitrogen fertilization on non-structural carbohydrate and grain filling in indica rice Agricultural Sciences in China 9: p 1630-1640 193 Zhuang, J., Wang, F., Xu, Z S., and Xiong, A S (2015) Microarray analysis of different expression profiles between wild-type and transgenic rice seedlings overexpression OsDREB1BI gene Biologia Plantarum 70: p 760-770 165 PHỤ LỤC Một số hình ảnh thực thí nghiệm tái sinh chuyển gen Hình ảnh lấy phôi non ngô từ hạt ngô 166 Hình Biến nạp gen thơng qua vi khuẩn Agrobacterium 167 Hình Tạo mơ sẹo tái sinh phịng thí nghiệm 168 Hình Cây chuyển gen trấu hun nhà lưới 169 Một số hình ảnh gây hạn nhân tạo Hình Chuẩn bị giá thể gây hạn giai đoạn 170 A B 171 C Hình (A,B,C) Thí nghiệm gây hạn nhân tạo giai đoạn trưởng thành Một số hình ảnh đặc điểm hình thái dịng K1, K3, K7 Chỉ tiêu hình thái Giai đoạn Dịng K1 172 Dạng cờ Râu Rễ 173 Dạng bắp Hình thái Hình Đặc điểm hình thái nguồn K1 174 Giai đoạn Dạng cờ Râu Rễ 175 Dạng bắp Hình thái Hình Đặc điểm hình thái nguồn K7 176 Giai đoạn Dạng cờ Râu Rễ 177 Dạng bắp Hình thái Hình Đặc điểm hình thái nguồn K3