Đang tải... (xem toàn văn)
Pham Tuan Anh ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM TUẤN ANH PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN AEROMONAS HYDROPHILA GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ CHÉP VÀ BIỆN PHÁP[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM TUẤN ANH PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN AEROMONAS HYDROPHILA GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ CHÉP VÀ BIỆN PHÁP ĐIỀU TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM TUẤN ANH PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN AEROMONAS HYDROPHILA GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ CHÉP VÀ BIỆN PHÁP ĐIỀU TRỊ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: GS.TS NGUYỄN QUANG TUYÊN PGS.TS PHẠM THỊ TÂM THÁI NGUYÊN - 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng năm 2016 Tác giả Phạm Tuấn Anh ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn, với nỗ lực thân, nhận giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể Tơi xin đặc biệt bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc cảm ơn chân thành tới: Giảng viên hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, Đại học Nông Lâm Thái Nguyên PGS.TS Phạm Thị Tâm, Viện Đại học Mở Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, bảo tơi tận tình suốt q trình nghiên cứu hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phịng Đào tạo, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Tơi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo công tác Viện Đại học Mở Hà Nội Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn lãnh đạo cán nhân viên trạm Thú y Văn Quan, Cao Lộc Đình Lập thuộc Chi cục Thú y tỉnh Lạng Sơn, giúp tơi q trình thực đề tài Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc ủng hộ, động viên, giúp đỡ gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành tốt luận văn Trong q trình thực luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong góp ý nhận xét q thầy để giúp Tơi có nhiều kinh nghiệm bổ ích cho cơng việc sống sau Thái Nguyên, tháng năm 2016 Tác giả Phạm Tuấn Anh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH, BIỂU ĐỒ viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục đích để tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình bệnh vi khuẩn A.hydrophila 1.1.1 Tình hình giới 1.1.2 Tình hình nước 1.2 Một số đặc điểm vi khuẩn A hydrophila, gây bệnh xuất huyết cá chép 1.2.1 Đặc điểm vi khuẩn A hydrophila 1.2.2 Cơ chế gây bệnh 1.3 Yếu tố độc tố gen gây bệnh 1.4 Biểu bệnh 10 1.6 Mùa vụ xuất bệnh 13 1.7 Cơ chế tạo vacin phòng bệnh cho cá 13 1.8 Điều trị bệnh xuất huyết cá vi khuẩn A hydrophila gây 13 1.8.1 Điều trị kháng sinh 14 1.8.2 Sử dụng chất kích thích miễn dịch 15 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 iv 2.2 Địa điểm nghiên cứu 16 2.3 Thời gian thực 16 2.4 Nội dung 16 2.5 Vật liệu 16 2.5.1 Thiết bị dụng cụ phịng thí nghiệm 16 2.5.2.Mơi trường hóa chất 17 2.6 Phương pháp nghiên cứu 19 2.6.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 19 2.6.2 Phân lập vi khuẩn A.hydrophila 19 2.6.3 Phương pháp xác định số đặc điểm sinh vật học chủng A.hydrophila phân lập 21 2.6.4 Xác định yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn A hydrophila phân lập 24 2.6.5 Phương pháp xác định độc lực khả gây bệnh chủng vi khuẩn A hydrophila phân lập 26 2.6.6 Phương pháp tách độc tố 27 2.6.7 Phương pháp xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn A hydrophila phân lập 28 2.6.8 Phương pháp xử lí số liệu 28 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết điều tra tình hình dịch tễ bệnh xuất huyết cá chép số điểm nuôi cá số huyện tỉnh Lạng Sơn 29 3.2 Kết phân lập vi khuẩn Aeromonas spp gây bệnh cá chép 31 3.3 Kết xác định điều kiện ni cấy thích hợp khả gây dung huyết vi khuẩn A hydrophila 37 3.3.1 Nhiệt độ thời gian nuôi cấy 37 3.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả gây dung huyết thạch máu vi khuẩn A hydrophila 40 v 3.3.3 Ảnh hưởng độ pH đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila 41 3.3.4 Ảnh hưởng độ mặn (NaCl) đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila 43 3.3.5 Kết xác định độc lực chủng A hydrophila phân lập động vật thí nghiệm 44 3.4 Kết xác định gen độc tố chủng A hydrophila gây bệnh cho cá chép 46 3.5 Khả gây bệnh cho cá chép chủng vi khuẩn phân lập 47 3.5.1 Kết gây nhiễm cá độc tố Aerolysin 48 3.5.2 Gây nhiễm vi khuẩn 49 3.6 Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn A hydrophila phân lập 50 3.7 Kết điều trị thử nghiệm điều trị kháng sinh 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT (-) : Âm tính (+) : Dương tính A hydrophila : Aeromonas hydrophila ATC : Aerolysin Cytotoxic enterrotoxin BHI : Brain Heart Infusion BXH : Bệnh xuất huyết KIA : Kligler Iron Agar LB : Lysogeny Broth LPS : Lipopolysacharide Môi trường LB : Môi trường Luria-Bertani Môi trường TSA : Môi trường tryptone casein soy agar MRS : DE MAN, ROGOSA, SHARPE NF - Kb : Nuclear Factor-kappa B PBS : Phosphate buffer saline PCA : Plate count agar PCR : Polymerase Chain Reaction PE : Polyethylene TTSS : Type III secretion system VAC : Vườn ao chuồng vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Điều tra tình hình cá mắc bệnh xuất huyết ao nuôi 30 Bảng 3.2 Kết phân lập vi khuẩn A Hydrophila 33 Bảng 3.3 Một số đặc tính sinh vật học điển hình vi khuẩn A hydrophila phân lập cá chép 34 Bảng 3.4: Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila chủng C5 38 Bảng 3.5: Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila chủng C8 39 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả gây dung huyết thạch máu vi khuẩn A hydrophila C5 C8 40 Bảng 3.7 Ảnh hưởng pH lên khả sinh trưởng phát triển vi khuẩn 42 Bảng 3.8 Ảnh hưởng nồng độ muối lên khả sinh trưởng phát triển vi khuẩn A hydrophila 44 Bảng 3.9: Kết xác định độc lực số chủng vi khuẩn A hydrophila chuột bạch 45 Bảng 3.10 Đặc điểm hai cặp mồi sử dụng phát gen độc tố vi khuẩn A hydrophila gây bệnh cá chép 46 Bảng 3.11 Kết gây nhiễm vi khuẩn A hydrophila Chủng … (số cá gây nhiễm 30 con/một thí nghiệm nồng độ 50 Bảng 3.12: Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn A hydrophila phân lập 51 Bảng 3.13: Kết thực nghiệm phác đồ điều trị 53 viii DANH MỤC CÁC HÌNH, BIỂU ĐỒ Hình Hình 3.1: Mổ khám cá chép nghi nhiểm vi khuẩn A hydrophila 29 Hình 3.2 Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn A hydrophila mọc môi trường thạch máu 32 Hình 3.3 Hình dạng vi khuẩn A hydrophila vật kính 100X 35 Hình 3.4 Kết phản ứng KIA thạch nghiêng vi khuẩn A hydrophila phân lập 36 Hình 3.5 Kết phản ứng sinh Indol vi khuẩn A hydrophila phân lập 36 Hình 3.6: PCR phát hai gen độc tố Aer Hyl vi khuẩn A hydrophila 47 Hình 3.7: Hình ảnh kết tinh độc tố 48 Hình 3.8 Kết đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn A hydrophila phân lập từ cá chép bệnh 52 Biểu đồ Biểu đồ 3.1: Tỉ Lệ ao có cá mắc bệnh huyện tỉnh Lạng Sơn 31 Biểu đồ 3.2: Tỉ lệ phân lập vi khuẩn A hydrophila từ mẫu bệnh phẩm lấy Lạng Sơn 33 Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila chủng C5 38 Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến khả sinh trưởng vi khuẩn A hydrophila chủng C8 38 Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng pH lên khả sinh trưởng phát triển vi khuẩn A hydrophila 42 Biều đồ 3.6 Ảnh hưởng nồng độ muối lên khả sinh trưởng phát triển vi khuẩn A hydrophila 43 Biểu đồ 3.7: Hiệu số phác đồ điều trị bệnh xuất huyết cá chép nuôi tỉnh Lạng Sơn 55