Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O TRƯ NG Đ I H C M THÀNH PH H CHÍ MINH KHOA CƠNG NGH SINH H C Giáo trình TH C T P VI SINH CƠ S Biên so n: Nguy n Văn Minh Dương Nh t Linh Tp HCM, năm 2008 (Lưu hành n i b ) Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh M CL C Bài 1: Các qui t c an tồn phịng thí nghi m vi sinh v t Bài 2: Trang thi t b - d ng c - phương pháp kh trùng Bài 3: S d ng kính hi n vi quang h c quan sát t bào vi sinh v t Bài 4: Pha ch môi trư ng dinh dư ng Bài 5: Các phương pháp phân l p vi sinh v t Bài 6: Các phương pháp quan sát vi sinh v t Bài 7, 8: Các đ c tính sinh hóa c a vi sinh v t Bài 9: Phương pháp ki m tra s lư ng t bào vi sinh v t Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Bài 1: CÁC QUI T C AN TOÀN TRONG PHỊNG THÍ NGHI M VI SINH V T Thao tác an toàn yêu c u c c kỳ quan tr ng đ i v i thí nghi m vi sinh v t Vi sinh v t có kích thư c nh bé mà m t thư ng khơng nhìn th y đư c Trong q trình làm thí nghi m, thư ng thao tác v i s lư ng r t l n đ m đ c t bào vi sinh v t Bên c nh nh ng gi ng, lồi vi sinh v t có ích nh ng gi ng, lồi có kh gây b nh có h i đ i v i s c kh e ngư i M t khác, q trình thí nghi m ph i s d ng nhi u lo i hóa ch t, có nh ng hóa ch t có đ c tính Chính th , ngư i làm thí nghi m phịng thí nghi m vi sinh v t c n tuân th qui t c b n sau đây: Nh ng qui đ nh chung: - Nh ng ngư i khơng có nhi m v khơng đư c vào phịng thí nghi m - Khi vào phịng thí nghi m ph i m c áo Blouse (cài khuy kín), c t tóc g n gàng - Khơng nói chuy n n ào, gi gìn tr t t Khơng ăn u ng, hút thu c phòng ki m nghi m - Mang kh u trang, găng tay thao tác v i vi sinh v t hóa ch t - Trên bàn thí nghi m ch đ v t d ng thí nghi m, s ghi chép, gi y ghi chép T t c v t d ng cá nhân, áo khoác, túi xách, sách v ,… ph i đ nơi qui đ nh - Trư c sau k t thúc thí nghi m, ph i sát trùng m t bàn b ng hóa ch t sát trùng chu n b s n lau khô b ng gi y v sinh Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh - C n ghi tên ch ng, ngày tháng thí nghi m, ngư i thí nghi m lên t t c h p petri, ng nghi m,… - Tuy t đ i không đ canh trư ng hay v t ph m có vi sinh v t d y lên qu n áo, sách v d ng c cá nhân Đ ng th i ph i ý b o v da qu n áo kh i b dính hóa ch t thu c nhu m - C n th n thao tác v i đèn c n ho c đèn Bunsen T t ng n l a chưa có nhu c u s d ng ho c sau th c hi n xong m i thao tác Tuy t đ i không dùng đèn c n đ m i l a đèn c n - S d ng qu bóp cao su thao tác ng hút đ nh lư ng (pipette), Tuy t đ i không hút b ng mi ng - Không t ý s d ng trang thi t b , d ng c phịng thí nghi m chưa đư c hư ng d n c th S d ng theo hư ng d n, h t s c th n tr ng, tránh làm đ v hư h ng - T t c v t li u b nhi m b n c n ph i đư c kh trùng trư c v t b ho c s d ng l i - K t thúc thí nghi m ph i v sinh thi t b , d ng c s d ng theo qui trình s p x p vào nơi qui đ nh - R a tay s ch s trư c r i phịng thí nghi m - T t c trư ng h p tai n n ph i báo cáo cho cán b hư ng d n thí nghi m đ k p th i x lý M t s lưu ý v i sinh viên nh m đ t k t qu t t th c hành vi sinh v t • Trư c th c hành: - C n đ c trư c n i dung tồn đ hình dung đư c kh i lư ng công vi c s làm Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh - Hi u rõ nguyên t c, m c đích c a thí nghi m - Đ c c n th n cách ti n hành thí nghi m • Trong gi th c hành: - Ghi c n th n nh ng d n c a gi ng viên v thao tác qui trình th c hành - Th c hi n thí nghi m theo hư ng d n c a gi ng viên - Trong q trình thí nghi m có nh ng thao tác, cơng đo n khơng rõ c n h i l i gi ng viên hư ng d n - Ghi chép c n th n ý quan tr ng c a thí nghi m k t qu c a m i thí nghi m • K t thúc th c hành: - Làm báo cáo th c hành theo yêu c u c a gi ng viên Bài 2: TRANG THI T B - D NG C - CÁC PHƯƠNG PHÁP KH TRÙNG I/ TRANG THI T B - D NG C A M t s trang thi t b , d ng c thông d ng T s y (vacuum oven): to t 60oC – 200oC, dùng đ s y khô, kh trùng lo i d ng c ch u đư c s c nóng khơ, ch y u d ng c th y tinh, kim lo i Tùy vào đ i tư ng c n kh khu n mà s y ch đ to th i gian khác nhau, thư ng s y 160oC/2 gi , ho c 180oC/30 phút Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Hình 1: T s y T m (incubator or etuve ): to t 20oC – 60oC, có ch đ n đ nh nhi t đ , đư c s d ng đ nuôi c y vi sinh v t t i nhi t đ thích h p cho s sinh trư ng phát tri n c a chúng Tùy vào đ i tư ng nuôi c y mà to khác đ vi sinh v t có th phát tri n t t Ví d : Coliform 30oC/24h – 48h, E coli thích h p 44oC/24h – 48h T l nh hay t mát ( freezer ): dùng b o qu n môi trư ng pha ch , gi ng vi khu n, ch ph m sinh h c (vaccin, huy t thanh, đĩa gi y kháng sinh,…), hóa ch t, thu c th d phân h y nhi t đ thư ng N i h p t ( Autoclave ): Thi t b c p nhi t b ng nư c áp su t cao (hơi nư c bão hòa áp su t cao), đư c s d ng đ h p kh trùng môi trư ng, m t s nguyên li u d ng c thí nghi m Tùy đ i tư ng mà s d ng thích h p, thư ng dùng ch đ nhi t đ áp su t 121oC/1 atm/ 15 phút Hay 127 oC/1.5 atm/30 phút v i môi trư ng đ t, 117oC/ 0.8 atm/15 phút v i môi trư ng ch a nhi u đư ng, môi trư ng s a…… Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Ch s áp k c a n i h p áp su t: Ch s áp k 0,2 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,5 2,0 (đơn v :atm ) To sôi 100 105 110 112 114 116 117 119 121 127 134 nư c (đơn v :oC) To sôi 212 221 230 234 237 241 243 246 250 261 273 nư c (đơn v : oF) Hình : N i h p Cân phân tích n t 100µg – 200g Đ (analytical balance): tr ng lư ng t xác 10-4g Cân k thu t (technical balance)- đ xác 10-2g Dùng cân hóa ch t, mơi trư ng Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh A B Hình : A- cân phân tích, B- cân k thu t T c y vơ khu n có đèn c c tím (UV) (flux laminar ): Có khơng gian vô trùng đư c s d ng đ thao tác v i vi sinh v t nh h th ng đèn t ngo i b ph n th i khí vơ trùng Hình 4: t c y Máy ly tâm (centrifuge): Dùng tách ch t pha r n-l ng kh i tách sinh kh i t bào kh i môi trư ng nuôi c y, tách h ng c u, enzyme,… Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Hình 5: máy ly tâm Máy l c (shaker): Thi t b dùng đ nuôi c y, nhân gi ng vi sinh v t b ng cách l c bình ni c y theo chi u khác (l c vòng l c ngang) m t cách đ u đ n đ tăng lư ng oxy hịa tan mơi trư ng Hình 6: máy l c Kính hi n vi (microscope): có vai trị r t quan tr ng nghiên c u vi sinh v t Dùng nghiên c u, quan sát t bào vi sinh v t v đ c m hình thái, sinh lý nh vào kh phóng đ i c a kính (s gi i thi u chi ti t s d ng kính hi n vi) 10 Máy đo pH (pH meter): đo pH dung d ch, môi trư ng nuôi c y,… Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh A B Hình 7: A- máy đo pH đ bàn, B- máy đo pH c m tay 11 Máy c t nư c (single/ double water stills): dùng đ c t nư c Hình 8: máy c t nư c l n 12 B n nhi t (water bath): ch a nư c đư c cài đ t nh t đ nh đ nhi t đ n đ nh nhi t đ cho nh ng thí nghi m c n s n đ nh v nhi t đ 10 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Lưu ý: Dung d ch r t đ c Do ngâm ph i đ y kín,lúc r a nên đeo kh u trang, mang găng cao su kính b o hi m C n 70%: Dùng đ sát khu n tay, bàn , gh , t c y,… Cách pha: c n 70o t c n 96o Vì khơng địi h i xác,nên có th áp d ng cơng th c: V1C1 = V2C2 Nư c mu i sinh lý 9‰ vô khu n: Cân xác 9g NaCl tinh t cho vào c c có ch a 991ml nư c c t (v a đ 1000ml ), dùng đũa th y tinh khu y đ u Đem h p vô khu n to = 121 oC (1atm)/ 15 – 20 phút B THU C NHU M Crystal violet ( C25H30N3Cl 9H2O = 570,11 ): Công th c: a) 0,4g C n 96o 10ml Phenol 1g Nư c c t b) Crystal violet 100ml Cách pha: Tr n hai dung d ch a b l i v i nhau, khu y cho hòa tan đ u r i đem l c Chú ý: dung d ch thu c nhu m b o qu n chai màu, tránh ánh sáng 89 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Lugol: Công th c: KI 2g Iod tinh th 1g Nư c c t 300ml Cách pha: Hòa 2g KI vào 5ml nư c c t, sau thêm 1g iod Ch cho iod tan h t m i thêm nư c v a đ 300ml Fuchsine ki m ( C19H18N 3Cl = 323,82 ): Công th c: a) 0,3g C n 96% 10ml Phenol 5g Nư c c t b) Fuchsine ki m 35ml Cách pha: Tr n dung d ch a b v i → khu y cho tan đ u,đem l c B o qu n chai màu Trư c dùng pha lỗng l n ( d ch pha lỗng khơng gi đư c lâu cịn d ch đ c có th gi đư c nhi u tháng ) Safranin O ( C20H19N4Cl = 350,80 ): Công th c: Safranin O ( dung d ch 2,5% c n 96o ) 25ml Nư c c t 75ml B o qu n chai màu 90 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Methylene blue ( C37H27N2Sna = 799,80 ): Công th c: a) Methylen blue 3g C n 96% b) 30ml Dung d ch KOH 0.01% 1000ml Cách pha:Tr n hai dung d ch a b l i v i → khu y hào tan đ u → đem l c B o qu n chai màu Thu c nhu m tiêm mao: a/ Thu c nhu m Nishizawa Kangen v Dung d ch A: + Acid tanic 5g + Nư c c t 100ml Khu y cho tan đ u v a l c cho thêm vào th t ch t sau: + FeCl3 1,5g + Formalin 2ml + NaOH 4% 1ml v Dung d ch B: + AgNO3 2g + Nư c c t 100ml Hòa AgNO3 vào nư c c t,l y 10ml cho vào c c th y tinh có dung tích 100ml C THU C TH VÀ CH TH MÀU: NaOH 40%: Cân xác 40g NaOH tinh th + 60ml nư c c t.Khu y cho tan đ u 91 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh KOH 10%: Cân xác 10g KOH tinh th + 90ml nư c c t Khu y cho tan đ u Thu c th KOWAC: ( tìm kh t o Indol c a vi khu n ) Công th c: P – dimetilaminobenzaldehit 5g Rư u amilic hay butilic 75ml HCl đ m đ c 25ml Thu c th α - naphtol 10%: pha c n 96o, b o qu n l nh chai màu trư c dùng Thu c th đ xác đ nh kh kh Nitrat: Griess A: Acid sulfanilic 0,5g Acid acetic 30ml Nư c c t v a đ 100ml Dung d ch đư c b o qu n tháng, đư c đ ng chai màu tránh ti p xúc v i ánh sáng Griess B: α - naphtylamin 0,8g Acid acetic 30ml Nư c c t 100ml Hòa tan 0,8g α - naphtylamin 100ml nư c c t đun sôi Đ ngu i r i b sung thêm 30ml acid acetic, đem l c Đ ng chai màu Dung d ch ch đư c b o qu n đư c tu n 92 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Thu c th Metyl red 0.5% c n: Metyl red 0,5g C n 60o 100ml Cách làm gi y t m acetat Pb: Chu n b : Gi y l c c t thành s i kh ( x 6cm ) Dung d ch acetat Pb 10 – 20% Cách làm:Ngâm s i gi y l c vào dung d ch acetat Pb 10 – 20%, kho ng 15 – 20 phút Sau v t đem s y khô nhi t đ 50 – 60oC B o qu n l vô trùng Lưu ý: T t c bư c ti n hành đ u ph i làm m t cách vô trùng D MÔI TRƯ NG I MÔI TRƯ NG NUÔI C Y N M M C VÀ N M MEN Môi trư ng Sabouraud: (đ nuôi c y n m m c n m men) Công th c: Pepton 20g Mantose hay glucose 40g Agar 18g Nư c c t v a đ 1000ml ( pH: 5,5 – 6,0 kh khu n n i áp su t to = 121 oC (1atm)/ 15- 20 phút) Môi trư ng Czapek: ( đ nuôi c y n m m c ) Công th c: Saccharose 30g NaNO3 2g KH2PO4 0,5g 93 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh MgSO4 0,5g FeSO4 0,01g Agar 18g Nư c c t v a đ 1000ml ( Đi u ch nh pH: 6,kh khu n n i áp su t to = 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút) Môi trư ng Hansens (đ nuôi c y n m men) Công th c: Maltose ho c glucose 50g Pepton 10g KH2PO4 3g MgSO4 – 5g Agar 18g Nư c c t v a đ 1000ml ( pH: 6, kh khu n n i áp su t to = 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút) Môi trư ng Gauzer I: (đ nuôi c y x khu n) Công th c: Tinh b t tan 20g KH2PO4 0,5g MgSO4 0,5g KNO3 1g NaCl 0,5g FeSO4 0,01g Agar 18g Nư c c t v a đ 1000ml 94 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh ( pH: 7,2 – 7,4; kh khu n n i áp su t to = 121oC ( 1atm)/ 15 – 20 phút) II MÔI TRƯ NG NUÔI C Y Đ I V I VI KHU N Môi trư ng Nutrient Broth (NB): Công th c: Cao th t 5g Pepton b t 10g NaCl 5g Nư c c t 1000ml ( pH: 7,4 – 7,6 ) Cân 13g b t môi trư ng NB hòa vào 1000ml nư c c t, khu y đ u Đem h p kh trùng 121oC (1am)/ 15 – 20 phút Môi trư ng Nutrient Agar ( NA ): Thành ph n môi trư ng mơi trư ng NB có b sung 18g agar 1000ml môi trư ng Cân 23g b t mơi trư ng NA hịa vào 1000ml nư c c t, r i khu y đ u.Kh khu n n i áp su t to = 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút Môi trư ng Trypticase soya broth ( TSB): Công th c: Trypticase pepton 15g Thytone pepton 5g NaCl 5g Nư c c t 1000ml pH: 7,3 95 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Đi u ch :Cân 30g b t mơi trư ng TSB hịa 1000ml nư c c t, đun sơi cho hịa tan H p 121oC/ 15 – 20 phút Môi trư ng Trypticase Soya Agar ( TSA ): Công th c: Trypticase pepton 15g Thytone pepton 5g NaCl 5g Agar 18g Nư c c t 1000ml pH: 7,3 Đi u ch :Cân 30g b t mơi trư ng TSB + 18g agar, hịa 1000ml nư c c t, đun sơi cho hịa tan h t agar.H p 121oC/15 – 20 phút Môi trư ng Brilliant Green Bile Lactose ( BGBL ) Broth: Công th c: Pepton 10g Lactose 10g Oxgall 20g Brilliant green 0,0133g Nư c c t 1000ml ( pH: 7,7 ± 0,1 ) Đi u ch :Cân 40g b t mơi trư ng BGBL hịa vào 1000ml nư c c t, r i khu y đ u Đem h p kh khu n 121oC (1atm)/15 – 20 phút Môi trư ng Lactose Broth: Công th c: Chi t th t bò 3g 96 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Pepton 5g Lactose 5g Nư c c t 1000ml ( pH: 6,9 ± 0,2 ) Đi u ch :Phân ph i vào ng nghi m, 10ml/ ng Cho ng Durham vào, h p kh khu n to = 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút Môi trư ng EC (Enrichmen coli): Công th c: Tryptose Bile salt (mu i m t) 2g 1,5g Lactose 5g K2HPO4 4g KH2PO4 1,5g Nư c c t 1000ml ( pH: 6,9 ± 0,2 ) Đi u ch :Đem h p kh trùng 121oC(1atm)/ 15 – 20 phút Môi trư ng Clark lubs (dùng đ th ph n ng MR & VP): Công th c: Pepton 7g Glucose 5g K2HPO4 5g Nư c c t 1000ml ( H: 6,9 ± 0,2) Đi u ch :Đem h p kh trùng 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút 97 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Môi trư ng Simmon’s citrat: Công th c: Sodium citrat 2g K2HPO4 1g MgSO4 0,2g Brothymol blue 0,08g NaCl 5g NH4H2PO4 1g Agar 18g ( pH: 6,9 ± 0,2 ) Đi u ch : Đem h p kh trùng 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút 10 Môi trư ng Christensen’s Urea: Môi trư ng b n: Pepton 1g NaCl 5g Glucose 1g KH2PO4 2g Phenol red 0,012g Nư c c t 900ml Hòa tan t t c thành ph n 900ml nư c H p 121oC/15 phút đ ngu i đ n 50 -55oC Dung d ch Ure: Urea 20g Nư c c t 100ml pH: 6,8 ± 0,1 98 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Hòa tan Ure 10ml nư c, l c vô trùng, thêm vào môi trư ng b n làm ngu i (thao tác vô trùng) Tr n, phân vào ng nghi m vô trùng 11 Môi trư ng lên men lo i đư ng: Công th c: Cao th t 5g Pepton b t 10g NaCl 5g Đư ng 10g Phenol red 0,01g Nư c c t 1000ml pH: 7,4 Đem h p kh trùng 110oC/15 – 20 phút 12 Môi trư ng tinh b t ( Starch medium ): Công th c: Nutrient agar 23g Tinh b t tan 10g Nư c c t 1000ml Đi u ch : hòa tan tinh b t 200ml nư c c t Thêm th khác vào cho đ theo công th c Đem h p kh trùng 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút 13 Môi trư ng th ch bán l ng di đ ng: Công th c: Nutrient broth 13g Agar 5g Nư c c t 1000ml 99 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh pH: 7,2 Đi u ch : Đem thành ph n c a mơi trư ng hịa tan nư c c t, r i đun cách th y cho agar hòa tan đ u Phân vào ng nghi m 16 x 120 mm,m i ng kho ng 5ml Đem h p kh khu n 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút L y đ đ ng cho môi trư ng đông l i 14 Môi trư ng Gelatine: Công th c: Nutrient broth Gelatine Nư c c t 13g 150g 1000ml pH: 7,2 Đi u ch : Đem thành ph n c a môi trư ng hòa tan nư c c t, r i đun cách th y cho Geslatine hào tan đ u Phân vào ng nghi m 16 x 120 mm, m i ng kho ng 5ml Đem h p kh 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút.L y đ đ ng cho môi trư ng khu n đông l i 15 Mơi trư ng th ch chì (tìm kh sinh H2S c a vi khu n): Công th c: Nutrient agar 23g Na2S2O3 2,5g Acetat Pb 10% 5ml Nư c c t v a đ 1000ml pH: 7,0 Đi u ch : Hòa tan thành ph n môi trư ng nư c c t.Đun cho tan đ u th ch r i thêm Na2S2O sau tr n đ u r i kh khu n 121oC/ 15 – 20 phút L y đ i ngu i kho ng 45oC, thao tác vô 100 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh khu n, b sung 5ml dung d ch acetat Pb 10% Phân vào ng nghi m ( vô khu n ), r i đ cho đông d ng th ch đ ng 16 Môi trư ng kh Nitrat: Công th c: Nutrient Broth 13g KNO3 ( NaNO3) 2g Nư c c t 1000ml pH: 7,2 Đi u ch :Phân chia vào ng nghi m 16mm x 120mm, h p kh khu n 121oC/ 15 – 20 phút Ngồi ngư i ta cịn có th dùng môi trư ng Nitrat d ng bán l ng, mơi trư ng bán l ng có th gi đư c ph c màu sau th đư c lâu 17 Môi trư ng Mueller Hinton Agar ( MHA ): Công th c: Beef Infusion From 300g Casein acid hydrolysate 7,5g Starch 1,5g Nư c c t 1000ml pH: 7,4 ±0,2 Đi u ch : Cân 38g b t mơi trư ng MHA hịa vào 1000ml nư c c t, đun sôi,r i khu y đ u cho agar hòa tan h t Đem h p kh khu n 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút 18 Môi trư ng th ch máu BA (Blood Agar): Có lo i môi trư ng th ch máu: Th ch máu hi u khí mơi trư ng th ch máu k khí: • Th ch máu hi u khí: 101 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh Công th c: MHA 38g Máu ( c u ho c th ) 50ml Nư c c t v a đ 1000ml ( pH: 7,4 ± 0,2 ) Đi u ch : Cân 38g b t mơi trư ng MHA, hịa vào 950ml nư c c t, đun sôi, r i khu y đ u cho agar hòa tan h t Đem h p kh khu n 121oC (1atm)/ 15 – 20 phút L y đ cho môi trư ng ngu i d n đ n kho ng 40 – 45oC, dùng k thu t vô khu n, b sung thêm 50ml máu vào L c nh t trái sang ph i ngư c l i đ tránh hi n tư ng môi trư ng có b t khí Khi mơi trư ng hòa đ u, ti n hành đ đĩa ( thao tác vơ khu n ) • Th ch máu k khí: Cơng th c mơi trư ng cách u ch trên, ta b sung thêm 1% glucose, ho c vitamin K (h p th oxy môi trư ng ), b sung kháng sinh đ tiêu di t vi sinh v t hi u khí 102 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Th c t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh TÀI LI U THAM KH O B Th y s n (2004), S tay ki m nghi m vi sinh th c ph m th y s n NXB Nông nghi p Phan H u Nghĩa, Tô Minh Châu (2000), Th c hành Vi sinh s , Trư ng ĐH M Bán Công Tp HCM Tr n Thanh Th y (1998), Hư ng d n th c hành vi sinh v t h c NXB Giáo d c Tr n Linh Thư c (2005), Phương pháp phân tích vi sinh v t nư c, th c ph m m ph m NXB Giáo d c Jean F MacFaddin (2000), Biochemical Test for Indentification of Medical Bacteria Lippincott Williams and Wilkins http://www.austin.cc.tx.us/microbugz 103 ... t p vi sinh s - Trư ng Đ i h c M Tp HCM Nguy n Văn Minh IV/ TH C HÀNH Ø Phân l p vi sinh v t Phân l p vi khu n Sinh vi? ?n th c hành phân l p vi sinh v t b ng k thu t h p ria t h n t p vi sinh. .. nghĩa r t quan tr ng vi c nghiên c u ng d ng vi sinh v t Vi sinh v t d ng thu n t gi ng vi sinh v t đư c t o t t bào ban đ u Trong thiên nhiên ho c v t ph m nghiên c u, vi sinh v t thư ng t n... L P VI SINH V T THU N KHI T V i h u h t lo i m u nghiên c u, trình phân l p vi sinh v t d ng thu n t g m bư c b n sau: - T o khu n l c riêng r t qu n th vi sinh v t ban đ u - Phân l p vi sinh