LA NOPBV HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA BỆNH CARE Ở CHÓ NUÔI TẠI HÀ NỘI VÀ CHẾ KHÁNG THỂ PHÒNG TRỊ BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XU[.]
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA BỆNH CARE Ở CHĨ NI TẠI HÀ NỘI VÀ CHẾ KHÁNG THỂ PHỊNG TRỊ BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA BỆNH CARE Ở CHĨ NI TẠI HÀ NỘI VÀ CHẾ KHÁNG THỂ PHÒNG TRỊ BỆNH Ngành : Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi Mã số : 64 01 02 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Hữu Nam PGS.TS Phạm Ngọc Thạch HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, cơng ty Hanvet Các kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cám ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Thị Huyền i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận án, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, động viên đồng nghiệp bạn bè; giúp đỡ vật chất lẫn tinh thần quan gia đình Nhân dịp này, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn đến Cha, Mẹ người sinh thành dưỡng dục Biết ơn PGS.TS Nguyễn Hữu Nam, PGS.TS Phạm Ngọc Thạch hết lòng hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, thực hoàn thành luận án Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ông Nguyễn Hữu Vũ, Chủ Tịch Hội Đồng Quản Trị - Tổng Giám đốc Công ty Cổ phần Dược thú y Hanvet toàn thể Ban Lãnh Đạo Công ty, giúp đỡ vật chất, tinh thần tạo điều kiện cho thời gian, địa điểm nghiên cứu suốt trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc Học viện, Ban Quản lý đào tạo Các thầy cô giáo Bộ môn Bệnh lý; Các thầy cô giáo Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam: tận tình hướng dẫn bảo, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Cảm ơn Anh Trần Văn Khánh, PTGĐ Công ty Hanvet; Ban Lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu sinh phẩm công ty Hanvet đặc biệt toàn cán nhân viên Bệnh viện Thú Cảnh Hanvet: Chị Lê Thị My, anh Lê Phạm Trịnh Công, chị Lê Thị Nụ giúp đỡ hỗ trợ tơi suốt q trình nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn lời u thương đến đại gia đình tơi: Bố, Mẹ, Chồng , anh chị em tôi, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Huyền ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình ix Trích yếu luận án x Thesis abstract xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Care 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Care giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Care Việt Nam 2.2 Đặc tính sinh học virus gây bệnh Care 10 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc, phân loại 10 2.2.2 Đặc tính sinh học virus 13 2.2.3 Đặc tính sinh học phân tử virus 15 2.3 Bệnh Care chó 18 2.3.1 Dịch tễ học 18 2.3.2 Cơ chế sinh bệnh 19 2.3.3 Đặc điểm bệnh lý 20 2.3.4 Chẩn đoán bệnh 23 iii 2.3.5 Phòng điều trị bệnh 26 2.4 Một số nghiên cứu áp dụng điều trị bệnh Care kháng huyết 29 Phần Nội dung Phương pháp nghiên cứu 33 3.1 Nội dung nghiên cứu 33 3.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm bệnh Care chó Hà Nội 33 3.1.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care 33 3.1.3 Nghiên cứu gây bệnh thực nghiệm điều trị thử nghiệm bệnh Care kháng thể kháng virus Care 33 3.2 Vật liệu nghiên cứu 33 3.2.1 Trang thiết bị dụng cụ 33 3.2.2 Phạm vi nghiên cứu 34 3.3 Phương pháp nghiên cứu 35 3.3.1 Phương pháp nghiên cứu số đặc điểm bệnh Care 35 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care 38 3.3.3 Phương pháp gây bệnh thực nghiệm điều trị thực nghiệm 42 3.3.4 Phương pháp điều trị thử nghiệm kháng thể kháng virus Care 45 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 47 Phần Kết Thảo luận 48 4.1 Kết xác định số đặc điểm bệnh Care 48 4.1.1 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care chó đến khám phòng khám thú y địa bàn Hà Nội 48 4.1.2 Kết kiểm tra chó mắc Care test chẩn đoán nhanh CDV-Ag 49 4.1.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo địa bàn điều tra 52 4.1.4 Tỷ lệ mắc bệnh Care theo giống chó 53 4.1.5 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo lứa tuổi 55 4.1.6 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo mùa 57 4.1.7 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo tính biệt 58 4.1.8 Một số hình ảnh triệu chứng điển hình chó mắc bệnh Care 59 4.1.9 Kết nghiên cứu bệnh tích đại thể vi thể chó mắc bệnh Care 61 4.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care 64 4.2.1 Nghiên cứu quy trình chế tạo kháng thể kháng virus Care 64 4.2.2 Chế tạo thử nghiệm kháng thể kháng virus Care quy mô Pilot 71 iv 4.3 Kết gây bệnh thực nghiệm điều trị thử nghiệm 74 4.3.1 Kết gây bệnh thực nghiệm 74 4.3.2 Kết nghiên cứu thử nghiệm kháng thể kháng virus Care phòng trị bệnh 93 Phần Kết luận Kiến nghị 102 5.1 Kết luận 102 5.2 Kiến nghị 103 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án 104 Tài liệu tham khảo 105 Phụ lục 114 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng anh Nghĩa tiếng việt ADN acid nucleic ARN Acid Ribonucleic acid Phân tử polyme chứa thông tin di truyền Phân tử polyme chứa thông tin di truyền C Control cDNA complementary DNA Chuỗi mạch đơn ADN CDV Cannine Distemper Virus Virus gây bệnh Care chó CDVag Cannine Distemper Virus antigen kháng nguyên CDV CEF chick embryo fibroblasts Tế bào xơ phôi gà CPE cytopathogenic effect Bệnh tích tế bào DMEM Dulbecco's Modified Mơi trường ni cấy tế bào Eagle Medium ông Dulbecco phát triển FBS Fetal bovine serum Huyết thai bò FCS Fetal calf serum Huyết thai bê IgA immunoglobulin A Globlin miễn dịch dòng A IgD immunoglobulin D Globlin miễn dịch dòng D IgE immunoglobulin E Globlin miễn dịch dòng E IgG immunoglobulin G Globlin miễn dịch dòng G IgM immunoglobulin M Globlin miễn dịch dòng M KKT anti - antibody Kháng kháng thể KN Antigen Kháng nguyên KT antibody Kháng thể T Test TCID50 tissue culture infectious dose 50% Liều gây nhiễm 50% tế bào Vero-DST Vero Dog Slam Tag Tế bào vero gắn pCAGdogSlam vào plasmid TCVN 8684- Theo tiêu chuẩn Việt Nam - 6:2001 8684-6:2001 vi DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2.1 Các loại vaccine kháng thể kháng virus Care dùng Việt Nam 31 4.1 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care chó đến khám phịng khám địa bàn Hà Nội 48 4.2 Kết kiểm tra chó mắc Care test chẩn đốn nhanh CDV Ag 51 4.3 Tỷ lệ mắc bệnh Care chó theo địa bàn điều tra Hà Nội 52 4.4 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care theo giống chó 53 4.5 Kết xác định tỷ lệ mắc Care theo lứa tuổi 55 4.6 Kết xác định tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo mùa vụ 57 4.7 Kết xác định tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo tính biệt 58 4.8 Kết cô đặc huyết hệ thống lọc TFF 73 4.9 Kết thử nghiệm chế tạo kháng thể Care quy mô Pilot 74 4.10 Kết chai kiểm nghiệm 03 lô sản phẩm kháng thể Care 74 4.11a Kết xét nghiệm virus Care phương pháp RT - PCR 75 4.11b Kết xét nghiệm virus Care phương pháp RT - PCR 76 4.12 Biến động thân nhiệt chó sau gây bệnh với chủng CDV-HV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care 79 4.13 Biến động tần số hơ hấp chó sau gây bệnh với chủng CDVHV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care 81 4.14 Biến động tần số tim chó sau gây bệnh với chủng CDV-HV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care 83 4.15 Triệu chứng lâm sàng chó gây nhiễm CDV-HV thực nghiệm 85 4.16 Kết khảo sát số tiêu huyết học chủ yếu chó gây bệnh với chủng CDV-HV thực nghiệm 87 4.17 Bệnh tích vi thể chủ yếu chó gây nhiễm CDV-HV thực nghiệm 89 4.18 Kết nhuộm hóa mơ miễn dịch quan 92 4.19 Kết bước đầu điều trị thử nghiệm chó gây nhiễm virus Care 93 4.20 Kết thử nghiệm kháng thể kháng virus Care phòng bệnh Care 94 4.21 Kết thử nghiệm kháng thể điều trị bệnh Care 95 4.22 Hiệu điều trị kháng kháng virus Care phòng khám (liều tiêm 0,5 ml/2-5kg thể trọng) 97 vii 4.23 Hiệu điều trị kháng thể kháng virus Care phòng khám (liều tiêm ml-1,5/2-5kg thể trọng) 98 4.24 So sánh phác đồ điều trị kháng thể chống bệnh Care theo lứa tuổi 99 4.25 So sánh phác đồ điều trị kháng thể chống bệnh Care theo giống chó 100 viii 59 Laidlaw P P & Dunkin G W (1931) Studies in dogs distemper: VI Dog distemper antiserum Journal of Comparative Pathology and Therapeutics 44, 1-25 60 Lamb R & Kolakofsky D (2001) Fundamental virology Paramyxoviridae: The Viruses and Their Replication 11 61 Lan N., Yamaguchi R., Inomata A., Furuya Y., Uchida K., Sugano S & Tateyama S (2006) Comparative analyses of canine distemper viral isolates from clinical cases of canine distemper in vaccinated dogs Veterinary microbiology 115(1-3): 32-42 62 Lan N T., Ryoji Y., Nam N H & Kien T T (2008) A canine distemper virus isolated from an autopsied dog in Hanoi, Vietnam Journal of Science and Development April 70: 74 63 Lan N T., Yamaguchi R., Kai K., Uchida K., Kato A & Tateyama S (2005) The growth profiles of three types of canine distemper virus on Vero cells expressing canine signaling lymphocyte activation molecule Journal of veterinary medical science 67(5): 491-495 64 Lan N T., Yamaguchi R., Kawabata A., Uchida K., Sugano S & Tateyama S (2007) Comparison of molecular and growth properties for two different canine distemper virus clusters, Asia and 2, in Japan Journal of Veterinary Medical Science 69(7): 739-744 65 Lan N T., Yamaguchi R., Kien T T., Hirai T., Hidaka Y & Nam N H (2009) First isolation and characterization of canine distemper virus in Vietnam with the immunohistochemical examination of the dog Journal of veterinary medical science 71(2): 155-162 66 Latha D., Srinivasan S., Thirunavukkarasu P., Gunaselan L., Ramadass P & Narayanan R (2007) Assessment of canine distemper virus infection in vaccinated and unvaccinated dogs 67 Lednicky J A., Dubach J., Kinsel M J., Meehan T P., Bocchetta M., Hungerford L L., Sarich N A., Witecki K E., Braid M D & Pedrak C (2004) Genetically distant American Canine distemper virus lineages have recently caused epizootics with somewhat different characteristics in raccoons living around a large suburban zoo in the USA Virology journal 1(1): 68 Leisewitz A L., Jacobson L S., De Morais H S & Reyers F (2001) The mixed acid‐base disturbances of severe canine babesiosis Journal of Veterinary Internal Medicine 15(5): 445-452 110 69 Liu P C., Chen C A., Chen C M., Yen C H., Lee M H., Chuang C K., Tu C F & Su B L (2016) Application of xenogeneic anti-canine distemper virus antibodies in treatment of canine distemper puppies The Journal of small animal practice, 57(11), 626–630 70 Maclachlan N J & Dubovi E J (2010) Fenner's veterinary virology Academic press trang trang 71 Maes R K., Wise A G., Fitzgerald S D., Ramudo A., Kline J., Vilnis A & Benson C (2003) A canine distemper outbreak in Alaska: diagnosis and strain characterization using sequence analysis Journal of veterinary diagnostic investigation 15(3): 213-220 72 Martella V., Cirone F., Elia G., Lorusso E., Decaro N., Campolo M., Desario C., Lucente M., Bellacicco A & Blixenkrone-Møller M (2006) Heterogeneity within the hemagglutinin genes of canine distemper virus (CDV) strains detected in Italy Veterinary Microbiology 116(4): 301-309 73 Martella V., Elia G & Buonavoglia C (2008) Canine distemper virus Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice 38(4): 787-797 74 Martella V., Pratelli A., Cirone F., Zizzo N., Decaro N., Tinelli A., Foti M & Buonavoglia C (2002) Detection and genetic characterization of canine distemper virus (CDV) from free-ranging red foxes in Italy Molecular and cellular probes 16(1): 77-83 75 Mccarthy A J., Shaw M.-A & Goodman S J (2007) Pathogen evolution and disease emergence in carnivores Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences 274(1629): 3165-3174 76 Norris J., Krockenberger M., Baird A & Knudsen G (2006) Canine distemper: re‐ emergence of an old enemy Australian veterinary journal 84(10): 362-363 77 Panzera Y., Sarute N., Iraola G., Hernández M & Pérez R (2015) Molecular phylogeography of canine distemper virus: Geographic origin and global spreading Molecular phylogenetics and evolution 92: 147-154 78 Pardo I D., Johnson G C & Kleiboeker S B (2005) Phylogenetic characterization of canine distemper viruses detected in naturally infected dogs in North America Journal of clinical microbiology 43(10): 5009-5017 111 79 Pawar R M., Raj G D., Gopinath V P., Ashok A & Raja A (2011) Isolation and molecular characterization of canine distemper virus from India Tropical animal health and production 43(8): 1617-1622 80 Pratakpiriya W., Seki F., Otsuki N., Sakai K., Fukuhara H., Katamoto H., Hirai T., Maenaka K., Techangamsuwan S & Lan N T (2012) Nectin4 is an epithelial cell receptor for canine distemper virus and involved in neurovirulence Journal of virology 86(18): 10207-10210 81 Qiu X M & Mainka S A (1993) Review of mortality of the giant panda (Ailuropoda-Melanoleuca) Journal of Zoo and Wildlife Medicine 24, 425-429 82 Roelke-Parker M E., Munson L., Packer C., Kock R., Cleaveland S., Carpenter M., O'brien S J., Pospischil A., Hofmann-Lehmann R & Lutz H (1996) A canine distemper virus epidemic in Serengeti lions (Panthera leo) Nature 379(6564): 441-445 83 Shah S.A, N Sood, N Wani, K Gupta and A.Singh, (2013) Haemato - biochemmical changes in canine Parvoviral infection indian Journal of vetterinary Pathologhy, Vol 37 (2), pp 131-133 84 Seki F., Ono N., Yamaguchi R & Yanagi Y (2003) Efficient isolation of wild strains of canine distemper virus in Vero cells expressing canine SLAM (CD150) and their adaptability to marmoset B95a cells Journal of virology 77(18): 9943-9950 85 Shell L (1990) Canine distemper Compendium on Continuing Education for the Practicing Veterinarian 12(2): 173-179 86 Shin Y.-S., Mori T., Okita M., Gemma T., Kai C & Mikami T (1995) Detection of canine distemper virus nucleocapsid protein gene in canine peripheral blood mononuclear cells by RT-PCR Journal of Veterinary Medical Science 57(3): 439-445 87 Sidhu M.S., Husar W., Cook S D., Dowling P C & Udem S A (1993) Canine distemper terminal and intergenic non-protein coding nucleotide sequences: completion of the entire CDV genome sequence Virology 193(1): 66-72 88 Simon-Martinez J., Ulloa-Arvizu R., Soriano V & Fajardo R (2008) Identification of a genetic variant of canine distemper virus from clinical cases in two vaccinated dogs in Mexico The Veterinary Journal 175(3): 423-426 112 89 Sykes J E (2013) Canine distemper virus infection Canine and feline infectious diseases Elsevier, St Louis, Missouri 152-165 90 Timothy W Y (2008) Isolation of wild-type canine distemper viruses from dogs in South Africa Indian journal of virology indian virological soc ccs haryana agricultural univ, dept plant pathology … 116-116 91 Watson A & Wright R (1974) The ultrastructure of cytoplasmic inclusions in circulating lymphocytes in canine distemper Research in veterinary science 17(2): 188-192 92 Weiss D (2010) Iron and copper deficiencies and disorders of iron metabolism Schalm’s Veterinary Hematology 6th ed Ames: Wiley-Blackwell 167-71 93 Wills J & Simpson K.W (1994) Waltham book of clinical nutrition of the dog and cat Pergamon Press trang trang 94 Wintrobe M.M (1967) Clinical Hermatology Lea & Febiger 95 Woma T.Y & Van Vuuren M (2009) Isolation of canine distemper viruses from domestic dogs in South Africa using Vero DogSLAM cells and its application to diagnosis 96 Woodroffe R & Ginsberg J R (1999) Conserving the African wild dog Lycaon pictus I Diagnosing and treating causes of decline Oryx 33(2): 132-142 97 Wyllie S., Kelman M & Ward M (2016) Epidemiology and clinical presentation of canine distemper disease in dogs and ferrets in Australia, 2006–2014 Australian veterinary journal 94(7): 215-222 113 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Mẫu hồ sơ bệnh án gia súc Bệnh Viện Thú Cảnh Hanvet BỆNH VIỆN THÚ CẢNH HANVET Trụ sở - PK1: 86 - 88 Trường Chinh - Đống Đa - Hà Nội Điện thoại: 024.38687201 - Hotline: 0913.367.270 Website: hanvetpetclinic.com.vn Số HS: 12150 PHIẾU KHÁM BỆNH- HỒ SƠ THỐNG KÊ BỆNH I THÔNG TIN KHÁCH HÀNG TÊN: SỐ ĐIỆN THOẠI: ĐỊA CHỈ: II THÔNG TIN THÚ CƯNG TÊN: TUỔI: MÀU SẮC: VACINE: GIỐNG: GIỚI TÍNH: CÂN NĂNG: TẨY KST: THÔNG TIN KHÁC (Ghi rõ tên Vaccinee, thuốc tẩy KST thời gian sử dụng gần nhất) III TRIỆU CHỨNG CẬN LÂM SÀNG NHIỆT ĐỘ: NHỊP TIM: HÔ HẤP: 114 TRIỆU CHỨNG BẤT THƯỜNG: CÁC XÉT NGHIỆM KHÁC: IV CHẨN ĐOÁN - KẾT LUẬN V ĐIỀU TRỊ VI CÁC THÔNG BÁO KHÁC * PK2: Số 126 Nguyễn Đình Hồn, Cầu Giấy, Hà Nội - ĐT: 024.37824060 * PK3: A12 TT 18 Khu ĐT Văn Quán, Hà Đông, Hà Nội - ĐT: 0985.212.174 * PK 4: Cửa Hàng 86 Đường Trường Chinh, Quận Đống Đa, Hà Nội: 0961.084.774 *PK5: số 54 Phố Hạ Yên, Phường Yên Hòa, Quân Cầu Giấy: 0961.294.466 * PK6: 491 Đường Chợ Hàng , Quận Lê Chân, Tp Hải Phòng - ĐT: 022.53272195 *PK7: Số 440 Đường Lê Lợi, P Yết Kiêu,Tp Hạ Long - ĐT: 0983.755.094 115 CÔNG TY CỔ PHẦN DƯỢC VÀ VẬT TƯ THÚ Y CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Địa chỉ: 88 Trường Chinh, Đống Đa, Hà Nội Độc lâp – Tự – Hạnh phúc ĐT: 043.8685996 – FAX: 043.8690097 BỆNH VIỆN THÚ CẢNH HANVET Trụ sở - PK1: 86 - 88 Trường Chinh - Đống Đa - Hà Nội Điện thoại: 024.38687201 - Hotline: 0913.367.270 Website: hanvetpetclinic.com.vn Số HS: 12150 BỆNH ÁN Hà Nội, Ngày …… tháng…… năm 20 Số bệnh án:……….………… Họ tên chủ vật nuôi: Địa chỉ:………………………………………………… ĐT:……………… Loại vật nuôi: …… Giống:….… Tuổi:…… Màu lơng:…….Trọng lượng:………… Loại vaccine tiêm phịng: Tiền sử bệnh: - Thời gian mắc bệnh : - Triệu chứng chủ yếu: - Thuốc phương pháp điều trị: Kết khám bệnh: -Thân nhiệt:………………………… -Hệ tiết niệu: -Hệ tuần hoàn:……………………… -Da, lơng: -Hệ hơ hấp:………………………… -Niêm mạc: -Hệ tiêu hóa: Kết sơ chẩn: Quá trình theo dõi điều trị: Ngày: CHỦ VẬT NUÔI BÁC SĨ ĐIỀU TRỊ 116 Phụ Lục 2: K ết điều tra tỷ lệ mắc bệnh Care chó khu vực Hà Nội 6.9 Tỷ lệ (%) 4.04 3.29 3.17 3.15 2.51 1.45 1.39 0.59 Quận Tây Quận Quận Hai Quận Cầu Quận Hà Hồ Đống Đa Bà Trưng Giấy Đông Quận Thanh Xuân Quận Hồn Kiếm Quận Ba Quận Đình Hồng Mai Hình 2.1 Tỷ lệ mắc Care theo địa bàn điều tra Hà Nội Tỷ lệ mắc Care theo giống chó 5.72 5.42 3.81 3.76 3.49 3.69 3.45 3.22 3.67 2.98 2.28 2.36 2.03 1.8 2.06 Nhóm chó nội Nhóm chó ngoại Hình 2.2 Tỷ lệ mắc Care theo giống chó 117 Giống chó khác Rottweiler Bergie Chowchow Corgi Alaska Dachshund Poodle Pomeranian Phốc Lai Bergie Chó Vàng Mơng cộc Bắc Hà Phú Quốc Tỷ lệ (%) Tỷ lệ (%) Chó tháng tuổi Chó từ - tháng tuổi Chó từ - 12 tháng tuổi Chó 12 tháng tuổi Hình 2.3 Tỷ lệ mắc Care theo lứa tuổi Tỷ lệ mắc (%) Mùa Xuân Mùa Hè Mùa Thu Hình 2.4 Tỷ lệ mắc Care theo mùa vụ 118 Mùa Đông Phụ Lục 3: Kết xác định khả đáp ứng miễn dịch chó Hiệu giá kháng thể Ngày kiểm tra Ngày Ngày 14 Ngày 28 Ngày 42 Ngày 56 Mã số Số mẫu CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình 5 5 5 28 24 0 0 0 0 2.2 1 2 3 2 60 66 0 0 5.36 1 3 2 1 0 7.24 9.2 1 3 3 2 2 Hiệu giá khán 10 11 g thể trung bình 5 5 0 5 5 1 0 0 18 91 72 5 5 0 0 0 5 5 32 108 90 1 0 0 119 0 1 1 2 1 40 108 80 9.4 8.8 9.2 9.2 9.12 Phụ Lục 4: Kết xác định khả đáp ứng miễn dịch Thỏ Hiệu giá kháng thể Ngày kiểm tra Ngày Ngày 14 Ngày 28 Ngày 42 Ngày 56 Mã số Số mẫu CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình CTN01 CTN02 CTN03 CTN04 CTN05 Trung bình 5 5 2 2 10 24 5 5 5 0 0 0 0 1.72 2 12 36 28 0 0 0 3.04 2 3 3 28 65 30 0 0 4.92 2 10 78 70 0 0 6.32 3 1 1 2 5 5 0 5 5 0 0 5 5 2 3 0 Hiệu giá khán 10 11 g thể trung bình 120 0 2 3 24 77 80 7.4 7.6 6.8 7.4 0 7.24 Phụ Lục 5: Kết xác định độ tuổi thỏ dùng để chế kháng thể Ngày 0: Tiêm Vaccine Care cho thỏ giai đoạn 2, tháng tuổi Ngày 14: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 28: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 56: Lấy máu kiểm tra hàm lượng kháng thể Nhóm thí nghiệm Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Động vật số Thỏ 01 Thỏ 02 Thỏ 03 Thỏ 04 Thỏ 05 Thỏ 06 Thỏ 07 Thỏ 08 Thỏ 09 Thỏ 10 Thỏ 11 Thỏ 12 Thỏ 13 Thỏ 14 Thỏ 15 HGKT (log2) 6 7 8 7 8 121 HGKT trung bình 6.4 7.4 7.4 Phụ lục 6: Kết nghiên cứu quy trình gây tối miễn dịch để sản xuất kháng thể Quy trình 01: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Quy trình 02: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56, 70 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Quy trình 03: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56, 70, 84 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Nhóm thí nghiệm Quy trình 01 Quy trình 02 Quy trình 03 Động vật số Thỏ 01 Thỏ 02 Thỏ 03 Thỏ 04 Thỏ 05 Trung bình Thỏ 06 Thỏ 07 Thỏ 08 Thỏ 09 Thỏ 10 Trung bình Thỏ 11 Thỏ 12 Thỏ 13 Thỏ 14 Thỏ 15 Trung bình 98 112 126 8 7 7 8 7.8 7.6 7.6 9 10 10 9 10 10 9 9 10 9.4 9.2 9.2 9 10 10 10 10 10 9 9 10 9.4 9.4 9.2 122 Quy trình Quy trình Quy trình 98 7.8 9.4 9.4 112 7.6 9.2 9.4 126 7.6 9.2 9.2 Phụ Lục 7: Kết xác định độ tuổi thỏ dùng để chế kháng thể Ngày 0: Tiêm Vaccine Care cho thỏ giai đoạn 2, tháng tuổi Ngày 14: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 28: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 56: Lấy máu kiểm tra hàm lượng kháng thể Nhóm thí nghiệm Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Động vật số Thỏ 01 Thỏ 02 Thỏ 03 Thỏ 04 Thỏ 05 Thỏ 06 Thỏ 07 Thỏ 08 Thỏ 09 Thỏ 10 Thỏ 11 Thỏ 12 Thỏ 13 Thỏ 14 Thỏ 15 HGKT (log2) 6 7 8 7 8 123 HGKT trung bình 6.4 7.4 7.4 Phụ Lục 8: Kết chai kiểm nghiệm 03 lô sản phẩm kháng thể Care Lô sản xuất Quy cách (ml/lọ) Số lọ KT.Care 01 KT.Care 02 KT.Care 03 Kết kiểm nghiệm thành phẩm Vô trùng Thuần khiết* An toàn Hiệu giá 680 Đạt Đạt Đạt 9log2 630 Đạt Đạt Đạt 9log2 750 Đạt Đạt Đạt 9log2 Ghi chú: * Kiểm tra tạp nhiễm virus xuất huyết truyền nhiễm thỏ Phụ lục 9: Kết điện di xuất huyết thỏ âm tính Kết điện di sản phẩm PCR phát Rabbit Calicivirus gây bệnh xuất huyết thỏ (Rabbit haemorrhagic disease – RHD) từ mẫu máu thỏ nghiên cứu cặp mồi chẩn đoán RCV-F – RCV-R Ghi chú: M: thị phân tử DNA thực khuẩn thể Lambda cắt HindIII 1: mẫu máu thỏ sử dụng nghiên cứu (-): mẫu đối chứng âm Kết quả: Phản ứng PCR cho kết âm tính với cặp mồi chẩn đoán RCV-F – RCV-R Điều chứng tỏ thỏ sử dụng nghiên cứu không bị nhiễm Calicivirus gây bệnh xuất huyết 124