(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến khả năng tạo mô sẹo và tiếp nhận gen gus của một số giống lúa thông qua vi khuẩn agrobacterium tumerfaciens

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÂM THỊ MẠNH Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO VÀ TIẾP NHẬN GEN GUS CỦA MỘT SỐ GIỐNG LÚA THƠNG QUA VI KHUẨN AGROBACTERIUM TUMERFACIENS” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Lớp Khoá học Giáo viên hướng dẫn : Chính quy : Cơng nghệ sinh học : CNSH - CNTP : 42 - CNSH : 2010 – 2014 : PGS.TS Ngô Xuân Bình 2.ThS Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH & CNTP Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2014 n LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm thời gian thực tập tốt nghiệp em thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo tiếp nhận gen gus số giống lúa thông qua vi khuẩn agrobacterium tumerfaciens” Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Ngơ Xn Bình trưởng khoa CNSH - CNTP, tạo điều kiện giúp đỡ cho em suốt q trình thực hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Th.s Lương Thị Thu Hường, Ks Lã Văn Hiền người trực tiếp hướng dẫn em suốt trình làm đề tài hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn thầy cô giáo Khoa CNSH - CNTP, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối em xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln quan tâm, động viên tạo điều kiện để em hoàn thành khóa luận Do thời gian thực đề tài có giới hạn nên đề tài khơng thể tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành giúp đỡ quý báu Thái Nguyên, tháng năm 2014 Sinh viên thực Lâm Thị Mạnh n MỤC LỤC Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu .2 1.4 Ý nghĩa đề tài .2 Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lúa 2.1.1 Nguồn gốc lúa 2.1.2 Phân loại lúa .3 2.1.3 Sinh thái học lúa 2.1.4 Giá trị lúa .6 2.2 Vi khuẩn Agrobacterium tumerfaciens chế chuyển gen vào thực vật 2.2.1 Đặc điểm chung vi khuẩn Agrobacterium tumerfaciens .6 2.2.2 Cấu trúc chức Ti-plasmid T-DNA 2.2.3 Cơ chế biến nạp gen thông qua vi khuẩn A.tumerfaciens vào thực vật .9 2.3 Hệ thống gen thị sử dụng để biến nạp vào tế bào thực vật thông qua vi khuẩn A tumefaciens sử dụng nghiên cứu 10 2.3.1 Gen gus .10 2.3.2 Gen bar .10 2.4 Một số phương pháp biến nạp gen lúa .11 2.4.1 Phương pháp vi tiêm 11 2.4.2 Chuyển gen xung điện .11 2.4.3 Chuyển gen qua ống phấn (pollen tube) 11 2.4.4 Chuyển gen súng bắn gen 12 2.5 Tình hình sản xuất lúa gạo giới Việt Nam 12 2.5.1 Trên giới .12 2.5.2 Ở Việt Nam 13 2.6 Tình hình nghiên cứu chuyển gen vào lúa giới Việt Nam 14 2.6.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 2.6.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 15 Phần 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Vật liệu nghiên cứu 16 3.1.1 Vật liệu thực vật .16 n 3.1.2 Chủng vi khuẩn Agrobacterium vector biến nạp 16 3.2 Địa điểm, thời gian phạm vi nghiên cứu 17 3.3 Hóa chất thiết bị 17 3.3.1 Hóa chất 17 3.3.2 Thiết bị .17 3.4 Nội dung nghiên cứu .17 3.5 Phương pháp nghiên cứu 18 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Kết ảnh hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 22 4.2 Kết ảnh hưởng 2,4D đến khả tạo mô sẹo số giống lúa .25 4.3 Kết ảnh hưởng nồng độ 2,4D kết hợp với kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 27 4.4 Kết ảnh hưởng tuổi mô sẹo đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa 30 4.5 Kết ảnh hưởng nồng độ AS đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa 33 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .36 5.1 Kết luận 36 5.2 Đề nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 n DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT As : Acetosyringone (3,5-dimethoxy-4-hydrroxy Acetophenone) A tumefaciens : Agrobacterium tumefaciens BAP : 6- Benzyl Amino Purine CCM : Co-Cultivation Medium CMV : Cucumber Mosaic Virus Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation DNA : Deoxyribonucleic Acid Đ/c : Đối chứng FFTC : Food and Fertilizer Technology Center FAO : Food and Agriculture Organization Gus : β-1,4-Glucuronidase KD : Khang Dân LSD : Least Singnificant Diference Test MS : Murashige & Skoog (1962) TMV : Tobacco Mosaic Virus Ti -plasmid : Tumor Including Plasmid TB : Thái Bình X-gluc : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Glucuronidase Acid 2,4D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid n DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Một số loài lúa Oryza, nhiễm sắc thể, phân bố Bảng 2.2 Đặc điểm sinh thái số phận cấu tạo lúa Bảng 2.3 Diện tích, suất sản lượng lúa giới qua năm 13 Bảng 2.4 Diện tích, suất sản lượng lúa Việt nam qua năm 13 Bảng 4.1: Ảnh hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 22 Bảng 4.2: Ảnh hưởng nồng độ 2,4D đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 25 Bảng 4.3: Ảnh hưởng nồng độ 2,4D kết hợp kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 27 Bảng 4.4: Ảnh hưởng tuổi mô sẹo đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa 30 Bảng 4.5: Ảnh hưởng nồng độ AS đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa 33 n DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Vi khuẩn A tumefaciens Hình 2.2 Sơ đồ cấu trúc tế bào vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Hình 2.3 Cấu trúc Ti-plasmid Hình 2.4 Cấu trúc T-DNA Hình 2.5 Cơ chế phân tử việc chuyển gen thông qua A tumefaciens Hình 3.1 T-DNA plasmid pCambia3301 mang gen bar gen gus, gen điều kiển CaMV 35S promoter (LB: ranh giới trái, RB: ranh giới phải) 16 Hình 3.2 Sơ đồ cấu trúc vector pCambia 3301 16 Hình 3.3: Phương pháp biến nạp gen gus vào lúa (Hiei Y cs, 2008) [34]Error! Bookmark n Hình 4.1 Mô sẹo giống lúa nuôi cấy mơi trường N6 MS 24 Hình 4.2 Mô sẹo giống lúa nuôi cấy môi trường N6 có bổ sung 2,4D 2mg/l (sau 14 ngày) 26 Hình 4.3 Mơ sẹo giống lúa ni cấy môi trường bổ sung nồng độ 2,4D 2mg/l kết hợp với nồng độ kinetin 0,5mg/l (sau 17 ngày) 29 Hình 4.4 Mơ sẹo giống lúa sau tiếp nhận gen gus 32 Hình 4.5 Mơ sẹo giống lúa sau biến nạp nuôi cấy môi trường có bổ sung AS 35 n Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây Lúa có tên khoa học Oryza sativa, thuộc họ Hòa thảo (Poaceae) Lúa năm loại lương thực phục vụ nhu cầu thiết yếu ngày nửa dân số giới Đặc biệt, người dân Châu Á Châu Phi, lúa gạo nguồn lương thực chính, cung cấp dinh dưỡng có giá trị phần ăn lúa gạo có hàm lượng tinh bột cao, giàu protein acid amin thiết yếu Lysine, Threonine, Methionine, Tryptophan Vì lúa gạo đóng vai trị to lớn đảm bảo an ninh lương thực tồn cầu Bên cạnh đó, lúa mặt hàng xuất quan trọng nhiều nước giới, bao gồm Việt Nam có tiềm lớn ngành công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi, sản xuất rượu cồn ngành thương mại [11] Với giá trị đó, lúa trồng nhiều quốc gia trế giới Thái Lan, Việt Nam, Trung Quốc, Ấn Độ,…Năm 2011, FAO thống kê sản lượng lúa giới đạt đến 721 triệu (tương đương 481 triện gạo), tăng lên 3% hay 24 triệu so với 2010 [1] Ở Việt Nam, sản lượng lúa năm 2012 đạt 43,7 triệu tấn, tăng 1,3 triệu so với năm trước diện tích suất tăng, diện tích gieo trồng đạt 7753,2 nghìn ha, tăng 97,8 nghìn ha; suất đạt 56,3 tạ/ha, tăng 0,9 tạ/ha [15] Tuy nhiên, suất chất lượng lúa gạo phụ thuộc nhiều yếu tố khí hậu, thời tiết, đặc điểm thổ nhưỡng, giống đặc biệt yếu tố sâu bệnh hại gây thiệt hại nghiêm trọng Để đáp ứng nhu cầu lương thực ngày tăng hạn chế tác nhân làm giảm suất chất lượng lúa gạo, xu hướng sử dụng giống lúa biến đổi gen nhà nghiên cứu khoa học đặc biệt quan tâm Một số nhà nghiên cứu thành công tạo giống lúa biến đổi gen như: - Daisuke Tokuhara cs tạo giống lúa chuyển gen MucoRice-ARP1có khả cung cấp kháng thể chống Rotavirus [29] - Nhóm nghiên cứu Viện Di truyền Nông nghiệp chuyển gen thành công vào giống lúa IR64 [13] - Phan Tố Phượng cộng thành công việc chuyển gen Xa21 kháng bệnh bạc vào lúa thông qua A.tumerfaciens [17] n Trên thực tế hiệu chuyển gen lúa cịn gặp nhiều hạn chế: tỷ lệ tạo mơ sẹo, tỷ lệ nhân nhanh hiệu tái sinh thấp, phụ thuộc khả xâm nhiễm A.tumerfaciens dẫn tới hiệu biến nạp gen thấp (chỉ khoảng 11%) [13] Vì vậy, chúng tơi tiến hành thực nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo tiếp nhận gen gus số giống lúa thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumerfaciens” đề đánh giá hiệu biến nạp gen lúa phục vụ cho công tác nghiên cứu chuyển gen nhiều giống lúa khác 1.2 Mục đích nghiên cứu - Xác định ảnh hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Xác định ảnh hưởng nồng độ 2,4D kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tiếp nhận gen gus thông qua A.tumerfaciens vào số giống lúa Việt Nam 1.3 Yêu cầu - Xác định ảnh hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Xác định ảnh hưởng nồng độ 2,4D đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Xác định ảnh hưởng nồng độ 2,4D kết hợp với kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Xác định ảnh hưởng số yếu tố đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa, bao gồm yếu tố sau: + Độ tuổi mô sẹo + Nồng độ AS 1.4 Ý nghĩa đề tài - Giúp sinh viên củng cố, hệ thống lại kiến thức học nghiên cứu - Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý, phân tích số liệu, biết cách trình bày báo khoa học - Dựa kết tiến hành nghiên cứu sở để áp dụng công nghệ chuyển gen cho giống lúa loài trồng khác n Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lúa 2.1.1 Nguồn gốc lúa Theo kết nghiên cứu nhà khảo cổ học, lúa có nguồn gốc từ vùng Đơng Nam Á Đơng Dương, nơi có nhiều di tích phổ biến lúa phát triển khoảng 10.000 năm trước Công Nguyên Các giống lúa Indica trồng vùng nhiệt đới Đông Nam Á, giống Japonica trồng phổ biến vùng Trung Nam Trung Quốc, Triều Tiên, Nhật Bản, Đài Loan có điều kiện khí hậu lạnh [11] 2.1.2 Phân loại lúa - Về mặt phân loại thực vật, lúa thuộc họ Poacae (hòa thảo), chi Oryza Oryza có khoảng 20 lồi phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ẩm Châu Phi, Nam Đông Nam Châu Á, Nam Trung Quốc, Nam Trung Mỹ phần Châu Úc [12] Loài lúa trồng quan trọng nhất, thích nghi rộng rãi chiếm đại phận diện tích lúa giới Oryza sativa L Lồi lúa có mặt khắp nơi vùng đầm lầy, sườn núi, vùng nước ngọt, nước mặn, vùng xích đạo,và vùng nhiệt ơn đới Loài Oryza glaberrima Steud., trồng giới hạn số quốc gia Tây Phi Châu bị thay dần Oryza sativa L [15] Chi Oryza có 23 lồi, có lồi phụ Indica, Japonica Javanica [11] Lúa Indica thường trồng khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới có thân cao, dễ đổ ngã, nhiều nhánh, xanh nhạt, cong kháng nhiều sâu bệnh Hạt gạo dài trung bình, chứa nhiều tinh bột suất Japinica Lúa Japonica thường trồng vùng ôn đới nơi có độ cao 100m (so với mực nước biển), có thân ngắn, chống đổ, xanh đậm, thẳng đứng, nhánh hơn, hạt gạo thường ngắn trịn hơn, có suất cao Indica Lúa Javanica (Japonica nhiệt đới): Có tính chất trung gian lúa Japonica lúa Indica Loại lúa có hạt to rộng, chất amylose cao, thường có đi, trấu có lơng dài, chồi, gié dài, thân dày thẳng đứng, cao giàn, không chịu lạnh, chịu hạn hán n Phụ lục Phụ lục Kết xử lý số liệu Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Lúa Syn BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 111 26/ 5/** 17:49 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 400.167 400.167 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.33336 333339 * TOTAL (CORRECTED) 401.500 80.3000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 111 26/ 5/** 17:49 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MO SEO 29.6667 13.3333 SE(N= 3) 0.333336 5%LSD 4DF 1.30661 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 111 26/ 5/** 17:49 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 6) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 21.500 8.9610 0.57736 2.7 0.0000 | - Lúa KD BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 111 26/ 5/** 18: PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 580.167 580.167 435.12 0.000 * RESIDUAL 5.33334 1.33334 * TOTAL (CORRECTED) 585.500 117.100 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 111 26/ 5/** 18: n PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MO SEO 35.3333 15.6667 SE(N= 3) 0.666667 5%LSD 4DF 2.61319 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 111 26/ 5/** 18: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 6) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 25.500 10.821 1.1547 4.5 0.0001 | - Lúa U17 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 111 26/ 5/** 18: PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 54.0000 54.0000 162.00 0.000 * RESIDUAL 1.33334 333335 * TOTAL (CORRECTED) 55.3333 11.0667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 111 26/ 5/** 18: PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MO SEO 14.3333 8.33333 SE(N= 3) 0.333334 5%LSD 4DF 1.30660 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 111 26/ 5/** 18: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 6) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 11.333 3.3267 0.57735 5.1 0.0001 n | Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4D đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Lúa Syn BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE U8 24/ 5/** 18:11 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1228.25 409.417 196.52 0.000 * RESIDUAL 16.6668 2.08335 * TOTAL (CORRECTED) 11 1244.92 113.174 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE U8 24/ 5/** 18:11 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MO SEO 29.6667 41.0000 57.0000 36.0000 SE(N= 3) 0.833336 5%LSD 8DF 2.71743 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE U8 24/ 5/** 18:11 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 12 40.917 10.638 1.4434 3.5 0.0000 | - Lúa KD BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 12 24/ 5/** 17:36 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1327.00 442.333 123.44 0.000 * RESIDUAL 28.6667 3.58334 * TOTAL (CORRECTED) 11 1355.67 123.242 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 12 24/ 5/** 17:36 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MO SEO 27.6667 n 3 35.3333 56.3333 41.3333 SE(N= 3) 1.09291 5%LSD 8DF 3.56386 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 12 24/ 5/** 17:36 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 12 40.167 11.101 1.8930 4.7 0.0000 | - Lúa U17 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 12 24/ 5/** 17:41 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2484.67 828.222 382.26 0.000 * RESIDUAL 17.3333 2.16666 * TOTAL (CORRECTED) 11 2502.00 227.455 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 12 24/ 5/** 17:41 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MO SEO 13.6667 40.0000 53.0000 41.3333 SE(N= 3) 0.849835 5%LSD 8DF 2.77123 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 12 24/ 5/** 17:41 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 12 37.000 15.082 1.4720 4.0 0.0000 | Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa n - Syn BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 25/ 5/** 22: PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 282.267 70.5667 24.62 0.000 * RESIDUAL 10 28.6666 2.86666 * TOTAL (CORRECTED) 14 310.933 22.2095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 22: PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MO SEO 57.0000 60.0000 63.0000 70.0000 61.3333 SE(N= 3) 0.977525 5%LSD 10DF 3.08022 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 22: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 15 62.267 4.7127 1.6931 2.7 0.0001 | - Lúa KD: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 25/ 5/** 21:42 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 379.333 94.8333 43.11 0.000 * RESIDUAL 10 22.0000 2.20000 * TOTAL (CORRECTED) 14 401.333 28.6667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 21:42 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MO SEO 56.3333 58.0000 n 3 66.3333 69.0000 58.6667 SE(N= 3) 0.856348 5%LSD 10DF 2.69838 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 21:42 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 15 61.667 5.3541 1.4832 2.4 0.0000 | - Lúa U17: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE 25/ 5/** 21:55 PAGE VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 828.267 207.067 91.35 0.000 * RESIDUAL 10 22.6667 2.26667 * TOTAL (CORRECTED) 14 850.933 60.7810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 21:55 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MO SEO 53.0000 56.0000 60.0000 73.3333 54.0000 SE(N= 3) 0.869227 5%LSD 10DF 2.73897 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 21:55 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 15 59.267 7.7962 1.5055 2.5 0.0000 | Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng tuổi mô sẹo đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa - Lúa Syn 6: n BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU SONG FILE U98 24/ 5/** 22: PAGE VARIATE V003 MAU SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 128.250 42.7500 23.32 0.000 * RESIDUAL 14.6667 1.83333 * TOTAL (CORRECTED) 11 142.917 12.9924 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE U98 24/ 5/** 22: PAGE VARIATE V004 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 83.5833 27.8611 167.17 0.000 * RESIDUAL 1.33333 166667 * TOTAL (CORRECTED) 11 84.9167 7.71970 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE U98 24/ 5/** 22: PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU SONG MAU XANH 41.0000 2.66667 43.0000 6.00000 46.0000 9.66667 49.6667 4.00000 SE(N= 3) 0.781736 0.235702 5%LSD 8DF 2.54916 0.768602 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE U98 24/ 5/** 22: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU SONG 12 44.917 3.6045 1.3540 3.0 0.0000 MAU XANH 12 5.5833 2.7784 0.40825 7.3 0.0000 | - Lúa KD: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU SONG FILE U9 24/ 5/** 22:18 PAGE VARIATE V003 MAU SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 35.0000 11.6667 9.33 0.006 * RESIDUAL 10.0000 1.25000 * TOTAL (CORRECTED) 11 45.0000 4.09091 n BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE U9 24/ 5/** 22:18 PAGE VARIATE V004 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 52.3333 17.4444 104.67 0.000 * RESIDUAL 1.33333 166667 * TOTAL (CORRECTED) 11 53.6667 4.87879 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE U9 24/ 5/** 22:18 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU SONG MAU XANH 40.0000 3.00000 40.3333 5.00000 44.3333 8.66667 41.3333 6.66667 SE(N= 3) 0.645497 0.235702 5%LSD 8DF 2.10490 0.768601 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE U9 24/ 5/** 22:18 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU SONG 12 41.500 2.0226 1.1180 2.7 0.0008 MAU XANH 12 5.8333 2.2088 0.40825 7.0 0.0000 | - Lúa U17: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU SONG FILE 24/ 5/** 23:26 PAGE VARIATE V003 MAU SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 85.6667 28.5556 28.56 0.000 * RESIDUAL 8.00000 1.00000 * TOTAL (CORRECTED) 11 93.6667 8.51515 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE 24/ 5/** 23:26 PAGE VARIATE V004 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 68.6667 22.8889 91.56 0.000 * RESIDUAL 2.00000 250000 * TOTAL (CORRECTED) 11 70.6667 6.42424 n TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 24/ 5/** 23:26 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU SONG MAU XANH 40.3333 2.66667 40.3333 5.66667 44.0000 9.33333 46.6667 5.00000 SE(N= 3) 0.577350 0.288675 5%LSD 8DF 1.88268 0.941340 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 24/ 5/** 23:26 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU SONG 12 42.833 2.9181 1.0000 2.3 0.0002 MAU XANH 12 5.6667 2.5346 0.50000 8.8 0.0000 | Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ AS đến biến nạp gen gus số giống lúa - Lúa Syn 6: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE 26/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V003 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 110.250 36.7500 49.00 0.000 * RESIDUAL 6.00000 750000 * TOTAL (CORRECTED) 11 116.250 10.5682 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 26/ 5/** 23:13 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU XANH 9.66667 14.6667 18.0000 12.6667 SE(N= 3) 0.500000 5%LSD 8DF 1.63045 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 26/ 5/** 23:13 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU XANH 12 13.750 3.2509 0.86603 6.3 0.0000 | - Lúa KD: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE 26/ 5/** 23:14 PAGE VARIATE V003 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 92.0000 30.6667 52.57 0.000 * RESIDUAL 4.66667 583334 * TOTAL (CORRECTED) 11 96.6667 8.78788 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 26/ 5/** 23:14 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU XANH 8.66667 10.6667 14.6667 7.33333 SE(N= 3) 0.440959 5%LSD 8DF 1.43792 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 26/ 5/** 23:14 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU XANH 12 10.333 2.9644 0.76376 7.4 0.0000 | - Lúa U17: BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU XANH FILE 26/ 5/** 23:16 PAGE VARIATE V003 MAU XANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 86.0000 28.6667 49.14 0.000 * RESIDUAL 4.66667 583334 * TOTAL (CORRECTED) 11 90.6667 8.24242 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 26/ 5/** 23:16 PAGE n MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 MAU XANH 9.33333 11.6667 16.6667 11.6667 SE(N= 3) 0.440959 5%LSD 8DF 1.43792 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 26/ 5/** 23:16 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MAU XANH 12 12.333 2.8710 0.76376 6.2 0.0000 n | Phụ lục Thành phần môi trường nuôi cấy Môi trường đồng Thành phần Môi trường tạo mô sẹo (N6) nuôi cấy (CCM) Glucose - 10g/l Sucrose 30 g/l 30 g/l 5g/l g/l pH 5,6-5,8 5,2 *BAP 0,5mg/l - *2,4D 2mg/l - *L-asparagine mg/l - *L-glutamic mg/l - *Acetosyringone - 50 µM/l *Ticarcillin - 100 mg/l *Cefotaxime - 100mg/l Agar Hiei Y, Komari T, 2008 [34] Ghi chú: (*) – lọc qua màng lọc bổ sung sau khử trùng môi trường n Phụ lục Môi trường YEP (pH = 7) Thành phần Khối lượng (g/l) Bacto-peptone 10 Yeast-extract NaCl Agar 12 Hiei Y, Komari T, 2008 [34.] n Phụ lục Thành phần môi trường MS Lượng lấy STT Thành phần g/l KNO3 1900 20 NH4NO3 1650 20 KH2 PO4 170 10 MgSO4.7H2O 370 10 CaCl2.2H2O 440 10 FeSO4.7H2O 27,8 Na2EDTA 37,3 (ml) 10 H3 BO3 0,3 MnSO4.H2O 0,76 ZnSO4.7H2O 0,2 (B5 minor) KI 0,075 10 Na2MoO4.2H2O 0,025 CuSO4 0,0025 CoCl2.6H2O 0,0025 (B5 Vitamins) Myo-inositol 10 Nicotinic acid 0,1 Pyridoxin-HCl 0,1 Thiamin-HCl 20 Murashige T, Skoog F, 1962[36] n Phụ lục Thành phần mơi trường X – Gluc (100ml) Hố chất Lượng lấy K3(Fe(CN)6 0,0165g K4(FeCN)6 0,211g X - Gluc 100mg Na3PO4 115 mM Chu C.C, 1978 [24] Phụ lục Thành phần môi trường N6 STT Thành phần g/l KNO3 56,6 NH4NO3 9,26 KH2 PO4 8,00 MgSO4.7H2O 3,70 CaCl2.2H2O 3,32 MnSO4.4H2O 4,40 H3 BO3 1,60 ZnSO4.7H2O 1,50 KI 0.80 FeSO4.7H2O 2,78 Na2EDTA 3,72 Myo-inositol 10 Glycine 200 Thiamine-HCl 100 Nicotinic acid 50 N6 Macro 20x N6 Micro 1000X FeSO4 EDTA Iron 100x N6 Vitamins 100x(mg/l) Lượng lấy (ml) 50 10 10 Chu C.C, 1978 [24] n ... hưởng môi trường đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Xác định ảnh hưởng nồng độ 2,4D kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tiếp nhận gen gus thông qua A .tumerfaciens. .. 2,4D đến khả tạo mô sẹo số giống lúa n 18 - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ2,4D kết hợp với kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa - Nghiên cứu ảnh hưởng tuổi mô sẹo đến khả tiếp nhận gen gus - Nghiên. .. kinetin đến khả tạo mô sẹo số giống lúa 27 4.4 Kết ảnh hưởng tuổi mô sẹo đến khả tiếp nhận gen gus số giống lúa 30 4.5 Kết ảnh hưởng nồng độ AS đến khả tiếp nhận gen gus số giống