(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu vai trò gây bệnh của vi khuẩn e coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con nuôi tại tỉnh vĩnh phúc và biện pháp phòng trị

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN CHÍ DŨNG NGHIÊN CỨU VAI TRỊ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN E COLI TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN CON NI TẠI TỈNH VĨNH PHÚC VÀ BIỆN PHÁP PHỊNG TRỊ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS Ngô Nhật Thắng GS.TS Nguyễn Thị Kim Lan THÁI NGUYÊN - 2013 n i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng cá nhân Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trực tiếp nghiên cứu hướng dẫn Thầy TS Ngô Nhật Thắng, GS.TS Nguyễn Thị Kim Lan giúp đỡ chân tình cơ, chú, anh, chị phịng Vi trùng – Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương, Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc Các số liệu luận văn hoàn toàn trung thực, rút từ tình hình thực tế tỉnh Vĩnh Phúc năm qua chưa sử dụng để bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn trích rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 09 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Chí Dũng n ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt năm học tập, với nỗ lực thân, nhận giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể, đến luận văn hồn thành Nhân dịp này, cho phép tơi bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Khoa Sau đại học, Khoa Chăn nuôi – Thú y, thầy cô giáo giúp đỡ, tạo điều kiện để học tập tiếp thu kiến thức suốt trình học tập Các cán thuộc phịng Vi trùng – Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương Ban lãnh đạo, cán Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc số bạn đồng nghiệp làm việc lĩnh vực Chăn nuôi – Thú y Đặc biệt thầy giáo hướng dẫn trực tiếp: TS Ngô Nhật Thắng – Khoa Chăn nuôi Thú y GS TS Nguyễn Thị Kim Lan – Khoa Sau Đại học – người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt trình thực đề tài Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ vượt qua khó khăn suốt q trình học tập, nghiên cứu thực đề tài Một lần xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới tập thể, cá nhân tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành chương trình học tập Thái Nguyên, tháng năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Chí Dũng n iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng biểu viii Danh mục biểu đồ, sơ đồ x MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu hội chứng tiêu chảy lợn 1.1.1 Nguyên nhân vi khuẩn 1.1.2 Nguyên nhân vi rút 1.1.3 Nguyên nhân ký sinh trùng 1.1.4 Ảnh hưởng mơi trường, khí hậu 1.1.5 Ảnh hưởng chăm sóc, ni dưỡng không kỹ thuật 1.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn E.coli gây bệnh tiêu chảy lợn 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước ngồi 11 1.3 Một số đặc tính sinh vật, hố học vi khuẩn E.coli 13 1.3.1 Đặc tính hình thái 14 1.3.2 Đặc tính ni cấy 14 1.3.3 Đặc tính sinh hoá 15 1.3.4 Sức đề kháng 16 1.3.5 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn E.coli 16 1.4 Các yếu tố gây bệnh vi khuẩn E.coli 21 n iv 1.4.1 Các yếu tố độc tố 21 1.4.2 Các độc tố gây bệnh vi khuẩn E coli 25 1.5 Cơ chế gây bệnh vi khuẩn E.coli 28 1.6 Bệnh tiêu chảy E.coli lợn 29 1.6.1 Triệu chứng 30 1.6.2 Bệnh tích 30 1.6.3 Điều trị 30 1.6.4 Phòng bệnh 31 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 34 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 34 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 34 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 34 2.2 Nội dung nghiên cứu 34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 35 2.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli môi trường nuôi cấy 35 2.3.3 Phương pháp xác định đặc tính sinh hố vi khuẩn E coli 36 2.3.4 Xác định serotype kháng nguyên O vi khuẩn E coli phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 37 2.3.5 Xác định kháng nguyên K88 phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 38 2.3.6 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli 38 2.3.7 Thử nghiệm biện pháp phòng, điều trị bệnh tiêu chảy lợn vi khuẩn E coli gây 40 2.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 41 2.4 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 41 2.4.1 Mẫu bệnh phẩm 41 n v 2.4.2 Các loại mơi trường, hố chất 41 2.4.3 Động vật thí nghiệm 42 2.4.4 Các loại hoá chất môi trường 42 2.3.5 Các loại kháng huyết chuẩn để định type vi khuẩn E coli phân lập 42 2.4.6 Các loại hố chất mơi trường dùng phản ứng PCR 43 2.4.7 Máy móc thiết bị 43 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Tình hình chăn nuôi dịch bệnh Vĩnh Phúc 44 3.1.1 Tình hình chăn ni gia súc, gia cầm 44 3.1.2 Tình hình dịch bệnh đàn gia súc 45 3.2 Kết điều tra tình hình lợn mắc bệnh tiêu chảy năm 2013 huyện tỉnh Vĩnh Phúc 45 3.2.1 Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy chết tiêu chảy 45 3.2.2 Kết điều tra lợn mắc bệnh tiêu chảy theo tuổi huyện tỉnh Vĩnh Phúc 48 3.2.3 Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy theo tháng năm huyện tỉnh Vĩnh Phúc 51 3.2.4 Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy theo kiểu chuồng nuôi 3huyện tỉnh Vĩnh Phúc 54 3.2.5 Kết điều tra lợn mắc bệnh tiêu chảy theo giống lợn huyện 56 3.3 Đặc điểm bệnh tích đại thể lợn mắc bệnh tiêu chảy E coli gây huyện tỉnh Vĩnh Phúc 57 3.4 Kết phân lập vi khuẩn E coli lợn theo mẹ Vĩnh Phúc 59 3.4.1 Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy lợn 59 3.4.2 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ bệnh phẩm 60 n vi 3.5 Kết kiểm tra số đặc tính sinh vật hoá học vi khuẩn E coli phân lập 62 3.6 Kết xác định serotype kháng nguyên O chủng E coli phân lập 63 Biểu đồ 3.5: So sánh tỷ lệ serotype kháng nguyên O phân lập 64 3.7 Kết xác định khả bám dính khả sản sinh độc tố chủng vi khuẩn E coli nhóm ETEC 65 3.7.1 Kết xác định khả bám dính chủng vi khuẩn E coli 65 3.7.2 Kết xác định khả sản sinh độc tố vi khuẩn E coli phân lập 67 3.7.3 Tổ hợp yếu tố gây bệnh mang chủng E coli phân lập địa bàn huyện Vĩnh Phúc 68 3.8 Kiểm tra độc lực vi khuẩn E coli tiêm truyền chuột bạch 71 3.9 Kết xác định tính mẫn cảm vi khuẩn E coli phân lập với số loại kháng sinh hoá dược 73 3.10 Kết đánh giá bước đầu hiệu lực vacxin phòng bệnh tiêu chảy cho lợn 75 3.11 Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy E.coli gây lợn huyện Vĩnh Phúc 78 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 81 4.1 Kết luận 81 4.2 Đề nghị 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 HÌNH ẢNH MINH HỌA n vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AMP Adenosine 5’-monophosphate BHI Brain-heart infusion ColV Colicin V DGTP 2’ deoxy guanosine triphosphate DNA Deoxyribonucleic acid EaggEC Enteroaggregative E coli Escherichia coli EMB Eosin Methylene Blue Agar Ent Enterotoxin (Độc tố đường ruột) EPEC Enteropathogenic Escherichia coli (Mầm bệnh độc tố đường ruột E.coli) ETEC Enterotoxigenic Escherichia Coli (Độc tố đường ruột E.coli) Hly Haemolyzin F Fimbriae (Yếu tố bám dính) LT Heat-Labile enterotoxin (Độc tố không chịu nhiệt) LTa Heat-Labile enterotoxin a LTb Heat-Labile enterotoxin b PCR Polymerase Chain Reaction (Yếu tố bám dính) SLT Shiga-like toxin SLTI Shiga-like toxin I SLTII Shiga-like toxin II ST Heat-stable enterotoxin (độc tố chịu nhiệt) ST (a,b) Heat-stable enterotoxin (a,b) ST1 Shiga like toxin ST2 Shiga like toxin Stx2e Shiga toxin 2e VT2e Verocytotoxin 2e VTEC Verotoxigenic Escherichia Coli n viii DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 3.1: Số lượng gia súc, gia cầm tỉnh Vĩnh Phúc từ 2008 - 2012 44 Bảng 3.2: Tình hình dịch bệnh đàn lợn 2012 – 2013 45 Bảng 3.3: Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy chết tiêu chảy huyện tỉnh Vĩnh Phúc 46 Bảng 3.4: Kết điều tra lợn mắc bệnh tiêu chảy theo tuổi 49 Bảng 3.5: Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy theo tháng năm 52 Bảng 3.6: Kết điều tra tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy theo kiểu chuồng nuôi 55 Bảng 3.7: Kết điều tra lợn mắc bệnh tiêu chảy theo loại lợn 57 Bảng 3.8: Bệnh tích đại thể lợn mắc bệnh tiêu chảy huyện tỉnh Vĩnh Phúc 58 Bảng 3.9: Kết phân lập vi khuẩn E coli từ phân lợn bị tiêu chảy 60 Bảng 3.10: Kết phân lập vi khuẩn E coli từ bệnh phẩm lợn bị tiêu chảy 61 Bảng 3.11: Kết giám định số đặc tính sinh hóa chủng E coli phân lập 62 Bảng 3.12: Kết xác định serotype kháng nguyên chủng E.coli phân lập 63 Bảng 3.13: Kết xác định khả bám dính chủng vi khuẩn E coli phân lập 66 Bảng 3.14: Kết xác định khả sản sinh độc tố vi khuẩn E.coli 67 Bảng 3.15: Tổ hợp yếu tố gây bệnh mang chủng E.coli 69 Bảng 3.16: Các yếu tố gây bệnh chủng E coli lựa chọn để thử độc lực 71 n ix Bảng 3.17: Kết kiểm tra độc lực số chủng vi khuẩn E coli chuột bạch 72 Bảng 3.18: Kết kiểm tra kháng sinh đồ vi khuẩn E coli phân lập 73 Bảng 3.19: Kết đánh giá bước đầu hiệu lực vac xin phòng bệnh tiêu chảy cho lợn 76 Bảng 3.20: Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy lợn vi khuẩn E coli gây 79 n 82 + Kháng nguyên bám dính K88 chiếm tỷ lệ cao (69,56%), kháng nguyên K99 chiếm 30,43% + Số chủng sinh độc tố STb chiếm tỷ lệ cao 71,73%, tiếp đến độc tố STa (58,69%) thấp độc tố không chịu nhiệt (47,82%) 4.1.6 Các chủng E coli thuộc ETEC phân lập có tỷ lệ khác năm nhóm tổ hợp yếu tố gây bệnh là: LT+STa+STb + K88+Hly + ( 52,17%) LT+STa +STb + K88+Hly - (10,86%) STa + K99 + (17,39%) STa + STb + (4,34%) STb + (15,21%) 4.1.7 Vi khuẩn E.coli phân lập có độc lực mạnh, có 2/3 chủng vi khuẩn gây chết 100% số chuột vòng 18 - 72 giờ, 1/3 gây chết 50% số chuột 4.1.8 Nofloxacin Colistin hai loại kháng sinh sử dụng để điều trị bệnh tiêu chảy lợn theo mẹ có hiệu tốt địa bàn huyện tỉnh Vĩnh Phúc, không nên sử dụng Amoxycilin bị vi khuẩn kháng Trong điều trị phải ý bổ sung chất điện giải vitamin để có kết cao 4.2 Đề nghị 4.2.1 Tiếp tục nghiên cứu sâu hội chứng tiêu chảy lợn nuôi huyện tỉnh Vĩnh Phúc đặc biệt nguyên nhân gây tiêu chảy như: Vi rút, loại vi khuẩn khác, yếu tố thức ăn, chế độ chăm sóc ni dưỡng 4.2.2 Nghiên cứu chế tạo vác xin phòng bệnh tiêu chảy cho lợn với chủng vi khuẩn E coli có đặc điểm sinh vật, hoá học, yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập 4.2.3 Triển khai áp dụng kết nghiên cứu để tài vào thực tế sản xuất chăn nuôi hộ, trang trại địa bàn tỉnh công tác quản lý quan thú y n 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng Việt Đặng Xn Bình (2004), Vai trị vi khuẩn Escherichia coli Clostridium Perfrigens bệnh tiêu chảy lợn theo mẹ, biện pháp phòng trị Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội Phùng Quốc Chướng (1995), Tình hình nhiễm Salmonella lợn vùng Tây Nguyên khả phòng trị Luận án PTS khoa học Nông nghiệp, trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội Chi cục Thú y Vĩnh Phúc, Báo cáo tình hình dịch bệnh gia súc, gia cầm hàng tháng, năm 2012 – 2013 Cục Thống kê tỉnh Vĩnh Phúc, Niên giám thống kê tỉnh Vĩnh Phúc năm 2008, 2009, 2010, 2011, 2012 NXB Thống kê Hà Nội Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên (2000), Sử dụng chế phẩm sinh học Biosubtyl để phòng trị bệnh tiêu chảy lợn trước sau cai sữa Tạp chí KHKT Thú y, số 2, Tr 58 Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ (1995), Bệnh đường tiêu hoá lợn Nhà xuất nông nghiệp Đào Trong Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (1996), Bệnh lợn nái lợn NXB Nông nghiệp, Hà Nội Tr 44-81 Erwin M Kohler, Tiêu chảy lợn sơ sinh Cẩm nang chăn nuôi lợn công nghiệp NXB Hà Nội 1996 tr 734 Trần Thị Hạnh, Đặng Xuân Bình (2002), Chế tạo, thử nghiệm số chếphẩm sinh học phòng trị bệnh tiêu chảy phân trắng lợn E.coli Cl perfringens Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, số 1, Tr 19-28 n 84 10 Phạm Khắc Hiếu (1998), ứng dụng chế phẩm sinh vật hữu hiệu EMI phòng trị hội chứng tiêu chảy lợn Báo cáo khoa học hội nghị tổng kết năm 1998 chương trình nghiên cứu đề tài khoa học cấp nhà nước EM, Hà Nội 11 Phạm Khắc Hiếu, Bùi Thị Tho (1999), Một số kết nghiên cứu tính kháng kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thú y Kết nghiên cứu KHKT khoa Chăn nuôi Thú y NXB Nông nghiệp Tr 134-138 12 Lý Thị Liên Khai (2001), Phân lập, xác định độc tố ruột chủngE.coli gây tiêu chảy cho heo Khoa học Kỹ thuật thú y, số 2, Tr 13-18 13 Phạm Văn Khuê, Phan Lục (1996), Giáo trình Ký sinh trùng thú y, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 14 Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Ngân, Lê Minh - Đại học Nông lâm TháiNguyên, Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn Thái Nguyên, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, số 4, 2006, trang 94 15 Nguyễn Lương, Hoàng Ngọc Thuý, Nguyễn Thị Cúc (1963), Báo cáo tổng kết khoa chăn nuôi thú y Đại học Nông nghiệp I Hà Nội 16 Vũ Bình Minh, Cù Hữu Phú (1999), Kết phân lập vi khuẩn E.coli salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh vật hố học chủng phân lập, tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, số 1, tr 15-22 17 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Trương Quang, Phùng Quốc Chướng, Chu Đức Thắng, Phạm Ngọc Thạch (1997), Bệnh viên ruột ỉa chảy lợn, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, Hội Thú y Việt Nam, số 2, tr 39-45 18 Nguyễn Thị Ngữ (2005), Nghiên cứu tình hình hội chứng tiêu chảy lợn huyện Chương mỹ, Hà Tây, xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E.coli Salmonela, biện pháp phòng trị Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Hà Nội n 85 19 Sử An Ninh (1995), Các tiêu sinh lý, sinh hoá máu, nước tiểu hình thái đại thể số tuyến nội tiết lợn mắc bệnh phân trắng Luận án tiến sỹ nông nghiệp, trường ĐHNNI –Hà Nội 20 Nguyễn Thị Nội (1986), Tìm hiểu vai trị Escherichia coli bệnh phân trắng lợn vacxin dự phịng Luận án Phó tiến sĩ Nơng nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam 21 Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thị Sở, Trần Thị Thu Hà (1993), Nghiên cứu vacxin đa giá Salsco phòng bệnh ỉa chảy lợn Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y Tr 54-58 22 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Bình Minh, Đỗ Ngọc Thuý (2000), Kết phân vi khuẩn E.coli Salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh hố chủng vi khuẩn phân lập biện pháp phòng trị Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y 19962000, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Tr 171-176 23 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Đỗ Ngọc Thúy, Nguyễn Xuân Huyên,Âu Xuân Tuấn, Văn Thị Hường, Đào Thị Hảo Vũ Ngọc Quý, Kết điều tra tình hình tiêu chảy lợn theo mẹ số trại lợn miền Bắc Việt Nam, xác định tỷ lệ kháng kháng sinh yếu tố gây bệnh chủng E coli phân lập Báo cáo khoa học CNTY (2002-2003) 24 Nguyễn Vĩnh Phước (1970), Vi sinh vật học thú y, NXB Đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội 25 Phan Thanh Phượng, Trần Thị Hạnh, Phạm Thi Ngọc, Ngơ Hồng Hưng (1996), “ Nghiên cứu xác định vai trị vi khuẩn yếm khí Clostridium perfrigens hội chứng tiêu chảy lợn” Tạp chí Nơng nghiệp công nghiệp thực phẩm (số 12), Hà Nội, Tr 495-496 n 86 26 Phan Thanh Phượng (1988), Phòng chống bệnh phó thương hàn lợn NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 27 Tơ Thị Phượng (2006), Nghiên cứu tình hình hội chứng tiêu chảy lợn ngoại hướng nạc Thanh Hố biện pháp phịng, trị Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, chuyên ngành thú y Đại học Nông nghiệp I – Hà Nội 28 Sở Nông nghiệp PTNT Vĩnh Phúc, Báo cáo tình hình thực nhiệm vụ công tác năm 2012 kế hoặch năm 2013 29 Lê Văn Tạo, Khương Bích Ngọc, Nguyễn Thị Vui, Đoàn Băng Tâm (1990-1991), Xác định yếu tố gây bệnh di truyền Plasmid vi khuẩn E.coli để chọn giống sản xuất vacxin phòng bệnh phân trắng lợn Cơng trình nghiên cứu khoa học kỹ thuật 1990-1991 Tr 77-81 30 Lê Văn Tạo, Khương Bích Ngọc, Nguyễn Thị Vui, Đoàn Băng Tâm (1993), Nghiên cứu chế tạo vacxin E.coli cho uống phòng bệnh ỉa chảy phân trắng lợn Tạp chí khoa học cơng nghệ quản lý kinh tế Tr 324-326 31 Lê Văn Tạo (1996), Cấu trúc Fimbriae, kháng nguyên bám dính K88 vi khuẩn E.coli vai trị q trình gây bệnh phân trắng lợn Tạp chí Nông nghiệp, công nghiệp thực phẩm – số năm 1996, Hà Nội 1996 Tr 62-63 32 Lê Văn Tạo (2006), Bệnh vi khuẩn Escherichia coli gây lợn Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú Y- Tập XIII- số 3-2006 33 Đoàn Thị Băng Tâm (1987), Bệnh động vật nuôi Tập I NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, Tr 119-135 34 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997), Vi sinh vật Thú y Tr 81-85 35 Trịnh Văn Thịnh (1964), Giáo trình bệnh nội khoa bệnh ký sinh trùng thú y, NXB Nông thôn, Hà Nội n 87 36 Trung tâm dự báo khí tượng thuỷ văn tỉnh Vĩnh Phúc, Thơng báo khí tượng thuỷ văn tháng – 12/2012 Vĩnh Phúc 37 Bùi Thị Tho, Phạm Khắc Hiếu (1996), Kiểm tra số yếu tố ảnh hưởng đến tính mẫn cảm tính kháng thuốc E.coli phân lập từ bệnh lợn phân trắng Khoa học kỹ thuật thú y tập III, số Tr 57-62 38 Đỗ Ngọc Thuý, D.Trott, A Frost, K.Townsend, Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Xuân Huyên, Văn Thị Hường, Vũ Ngọc Quý (2002), Tính kháng kháng sinh vi khuẩn E.coli phân lập từ lợn tiêu chảy số tỉnh phía Bắc Việt Nam Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số Tr 21 - 27 39 Trịnh Quang Tuyên, Lê Văn Tạo, Cù Hữu Phú, Phạm Thị Thanh Hoa (2003), Xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E.coli gây bệnh tiêu chảy cho lợn trại chăn ni lợn tập trung miền Bắc Việt Nam, Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số 7, tr 859-860 40 Trịnh Quang Tuyên (2006), Xác định yếu tố gây bệnh E.coli bệnh tiêu chảy phù đầu lợn chăn nuôi tập trung Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, 2006 41 Tạ Thị Vịnh, Đặng Khánh Vân (1996), Bước đầu thăm dò xác định E.coli lợn bình thường lợn mắc hội chứng tiêu chảy Hà Tây Hà Nội Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y số B Tiếng nước 42 Bertschinger H.U, Faibrother J.M, Nielsen N.O, Pohlenz J.F, Escherichiacoli infection Diseases of swine IOWA State University press/AMES IOWA U.S.A 7th Edition 1992, p 487-488 43 Blanco, J.E., M Blanco, A Mora and J Blanco 1997, Prevalence of bacterial resistance to Quinolones and otherr antimicrobials among avian E.coli strain isolated from septicemic and healthy chiken in Spain Journal of clinical microbiology Vol 35, No.8, p 2184-2185 n 88 44 Brown V.(1981), “Escherichia coli cell centaning the Col.V.Plamid produce The iron ionophore aerobactin” FEMS Microbicl Lett, p 225-228 45 Carter, G.R.; Chengappa, M.M.; Rober, TS A.W (1995), Essentials of veterinary Microbiology Copyright 1995 Williams and Wikkins, Rose tree corporate Center Building 1400 North providence Rd, Suite 5025 Media PA 19063 – 2043 A waverly Company 1995 46 Cavalieri, S J Snynder, I.S (1982), Cytotoxin activity of a partially purifield Escherichia coli alpha – haemolysin J Med Microbiology 15, 1982, p 11-21 47 Cox E, Houvenagel A (1993), Comparison of the invitro adhension of K88, K99, F41 and 987P positive Escherichiae coli to intestinal villi of to week old pigs Vet Microbiol, pp 7-18 48 Elsinghorst E A and Weit J A 1994, Epithelial cell invasion and adherencedirected by the enterotoxigenic E.coli tib locus is assocated with a 104 kilodalton outer membrane protein Infect Immun, 62, pp 3463-3471 49 Evan, D.G.; Evans, D.J.; Gorbach, S.L (1973), Production of Vascular permeability factor by enterotoxigenic Escherichia coli isolated from man Infect Immun V8, p 725 – 730 50 Fairbrother, j.m.; Bestchinger, H.U; Nielsen, O N.; Pohlenz, j.f (1992), Escherichia coli infections – diseases of swine Seventh Edition Wolfe publishing Ltd – Australian1992, p 489 – 497 51 Falkow S, P Small, R Isberg, S.F.Hayes, and D.Corwin (1987), “A molecular stragety for the stady of bacteria invasion”, Rev infect Dis 9, P.5450-5455 52 Freter, R.; Alweiss, B; Obrien, P.C.M (1981), Roce of chemotoxin in the association of motile bacteria with intestinal mucose: in vitro studies.Infect Immu 34, p 211 – 249 n 89 53 Giannella R.A., Rout W.R., Formal S.P., Colling H (1976), “Role of plasmafiltration in the intestinal fluid secretion medicated by infection with Salmonella typhymurium”,P 470-474 54 Gyles G.L (1992), Escherichia coli cytotoxins and enterotoxin Can J Microbiol 38 - p 734 - 746 55 Isaacson R E (1983), Regulation of expression of Escherichia coli pilusK99, infect Immun (40), pp 633- 639 56 Jacob, A A C and de Graaf, F K (1985), Production of K88, K99 and F41 fimbriae in relation to growth phage and rapid procedure for adhesion purinfication FEMS Micribiol, lett, (26), pp 15-19 57 Jone, G W and Rutter, J M (1977), Role of the K88 antigen in the pathogenesis of neonatal diarrhea caused by Escherichiae coli in piglets Infection and Immunity 6, pp 918- 927 58 Jones, Richardson (1983), The contribution of manose sensitive and manose sensitive heamagglutinate activities J.Gen Microbiol V 127,P 361 -370 59 Ketyle I; Emodyl; Kentrohrt (1975), Mouse lang Oedema caused by a toxin substance of Escherichia coli strains Acta Microbiol A cad – Sci Hung – 25, p 307 – 317 60 Lindhl, M and Carlstedt, I (1990), Binding of K99 fimbriae of enterotoxingenic E coli to pig small intestinal mucin glycopeptide J Gene.Microbiol, pp 1609-1614 61 Nagy, B Fekete, P.Z (1999), “Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) infarm animál”, Vet Res, 30, P 259-284 62 Ngeleka, M., Prichard, J., Appleyard, G., Middleton, P.M., Faibrother, J.M., 2003, Isolation and association of Echerichia coli AIDA-I/STb, rather than EASTI pathotype with diarrhea in piglets and antibiotic sensitivity of isolates J Vet Diagn Invest 15, 242-252 n 90 63 Orskov, I.; Birch, F; Andersen, A (1980), Comparison of Escherichia colifimbriae antigen f7 with type I Fimbriae Infect Immun 27 p 657 – 666 64 Plonait H, Bickhardt K, 1997, Salmonella Infection and Salmonellose, p 334 – 338 65 Radostits O.M cộng sự, 1997, Role of fimbriae F18 for actively acquiredimmunity against porcine enterotoxigenic Escherichia coli, Vet Microbiol, 1997, P 133 66 Raybould T J G, Grouch C F, Acres S D (1987), Monoclonal antibodyresponse, hemagglutination and capture enzyme linked in immuno sorbert assays for direct detection and quantitation of F41 and K99 fimbrial antigen in enterotoxingenic Escherichiae coli J Clin Microbiol, pp 278-284 68 Smith H.W (1963), The haemolysins of Escherichia coli J Pathol Bacterrial P 197-212 69 Smith H.W, Halls S (1967), The transmissible nature of the genetic factorin E.coli that controls hemolysin production J Gen Microbiol 47 1967, p 153-161 70 Sokol A, Mikula I, Sova C (1981), Neonatal coli-infecie ich laboratorinadiagnostina a prevencia UOLV- Kosise P.40-45 71 Virrgnial, Wwaterst and Jorge H Crosa (1991), Colicin V virulence plasmid, Microbiological Review Sept p 437 – 450 73 Orskov, I., F Orskov, W J Sojka, and J M Leach (1961) Simultaneous occurrence of E coli B and L antigens in strains from diseased swine Influence of cultivation temperature Two new E coli K antigens: K87 and K88 Acta Pathol Microbiol Scand 53:404-422 74 Jones, C H., K Dodson, and S J Hultgren (1996) Structure, function, and assembly of adhesive P pili, p 175-219 In H L T Mobley, and J W Warren (ed.), Urinary tract infections: molecular pathogenesis and clinical management American Society for Microbiology, Washington, D.C n MỘT SỐ HÌNH ẢNH TƯ LIỆU ĐỀ TÀI Ảnh 1: Lợn nuôi kiểu chuồng Ảnh 2: Lợn nuôi kiểu chuồng sàn n Ảnh 3: Lợn theo mẹ mắc tiêu chảy Ảnh 4: Phân lợn tiêu chảy n Ảnh 5: Bệnh tích ruột lợn tiêu chảy Ảnh 6: dày chứa đầy sữa chưa tiêu n Ảnh 7: Hình thái vi khuẩn E coli kính hiển vi Ảnh 8: Khuốn lạc vi khuẩn E coli môi trường thạch Macconkey n Ảnh 9: Phản ứng sinh indol M ¶nh 10: Các sản phẩm phản ứng PCR phức hợp sau trình điện di M: 100 bp DNA marker GiÕng 1, 2, 6: STa, LT d−¬ng tÝnh GiÕng 3, 7: STb, LT dơng tính Giếng 4: Âm tính aaAAAa Ảnh 10 Kết PCR n Ảnh 11: Thử kháng sinh đồ với vi khuẩn E coli n ... E coli Escherichia coli EMB Eosin Methylene Blue Agar Ent Enterotoxin (Độc tố đường ruột) EPEC Enteropathogenic Escherichia coli (Mầm bệnh độc tố đường ruột E. coli) ETEC Enterotoxigenic Escherichia... khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy lợn nuôi tỉnh Vĩnh Phúc biện pháp phòng trị? ?? Mục tiêu nghiên cứu Xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bị tiêu chảy nuôi huyện Tỉnh Vĩnh Phúc. .. Enteropathogenic E. coli (EPEC); Verotoxigenic E. coli (VTEC); Adhenicia Enteropathegenic E. coli (AEEC) Từ xếp Serotype mang yếu tố gây bệnh vào nhóm gây nên thể bệnh đặc trưng cho lứa tuổi lợn khác