Qua nghiên cứu của các nhà khoa học White (1934), Limasset và Cornuet (1950), Morel và Martin (1952): Nồng độ virus trong các cây bị bệnh phụ thuộc vào tốc độ phân chia của các tế bào và khả năng sinh trưởng của tế bào. Tế bào phân chia càng mạnh thì nồng độ virus càng thấp, nghĩa là những tế bào càng gần đỉnh sinh trưởng thì càng chứa ít virus hơn. Từ đây các ông đã đưa ra một kỹ thuật: kỹ thuật nuôi cấy meristem (mô phân sinh đỉnh) để tạo ra cây hoàn toàn sạch virus từ cây đã nhiễm bệnh. Đỉnh sinh trưởng là phần chóp của búp lá hoặc thân cây nơi có thể sinh ra những phần mới từ đó, đỉnh sinh trưởng thường mềm yếu rất mẫn cảm với ánh sáng, nó chứa nhiều Auxin, nơi diễn ra trao đổi chất rất mạnh Kỹ thuật nuôi cấy meristem là phương pháp sử dụng phần mô phân sinh ngọn với 3 4 tiền phát khởi lá, tức lá đỉnh, có kích thước 0,10,5 mm tính từ chóp đỉnh sinh trưởng
VIRUS-FREE-PLANT TISSUE CULTURE GIẢNG VIÊN: SINH VIÊN: 01 02 03 Tổng quan Nuôi cấy meristem Các cách nuôi cấy 04 Các cách kiểm tra đánh giá 05 Các phương pháp ngăn chặn trình tái lây nhiễm 01 TỔNG QUAN Whoa! Virus thực vật gì? Tác hại chúng trồng sao? Tại lại phải phòng chống bệnh virus thực vật? Làm tạo bệnh virus? Tổng quan Virus thực vật loại virus gây bệnh thực vật Virus bệnh không Gần lây truyền chữa lây qua sinh sản vơ tính truyền qua nhiều hệ Virus làm giảm Khoảng 600 lồi virus thực suất, chất lượng sức sinh vật biết (ít 80 loại có trưởng trồng thể truyền qua hạt giống) Kỹ thuật tạo bệnh virus Hiện có phương pháp là: Kỹ thuật RNA interference (RNAi – RNA can thiệp) Kỹ thuật làm virus invitro Kỹ thuật làm virus invitro: phương pháp: Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh kết hợp xư ̉ lz nhiệt độ cao Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh kết hợp xư ̉ lz hóa chất Vi ghép 02 Ni cấy meristem tạo bệnh virus Khái quát Nuôi cấy mô tế bào thực vật phạm trù khái niệm chung cho tất loại nuôi cấy nguyên liệu thực vật hồn tồn vi sinh vật, mơi trường dinh dưỡng nhân tạo, điều kiện vô trùng Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật công cụ hữu hiệu để tạo trồng bệnh Khái quát Để tạo bệnh người ta dùng phương pháp sau: Dùng phương pháp chuẩn đoán bệnh virus để lọc mẫu nhiễm bệnh trước đưa vào nuôi cấy, sử dụng biện pháp nhân nhanh in vitro để nhân nhanh mẫu Làm virus mẫu bị nhiễm, sau tạo mẫu tiếp tục sử dụng biện pháp nhân nhanh in vitro để nhân mẫu Các cách kiểm tra đánh giá Chẩn đoán mắt Ưu: Đơn giản; Ít tốn kém; Dễ thực Nhược: Phải có kinh nghiệm; Khó áp dụng nhiễm tổ hợp virus; Phụ thuộc ngoại cảnh, tuổi cây, đặc điểm giống Các cách kiểm tra đánh giá Ưu: Nhạy, xác; Có thể phát nồng Chẩn đoán thị độ virus thấp Nhược: Thời gian chuẩn đoán dài, cần thời gian ủ bệnh; Phụ thuộc vào điều kiện thí nghiệm; Phương pháp lây nhiễm phức tạp; Tốn cơng chăm sóc thị, mơi giới truyền bệnh; Một số bệnh virus không tiến hành (bệnh lá) Các cách kiểm tra đánh giá Chẩn đốn kính hiển vi điện tử Ưu: Chính xác; Tin cậy Nhược: Chi phí cao; Số lượng mẫu hạn chế; Phương pháp lấy mẫu, xử lz mấu phức tạp; Không áp dụng với số bệnh virus Các cách kiểm tra đánh giá Ưu: Nhạy, đặc hiệu (kết thu 48h), chi phí thấp; Khơng cần có nhà cách ly ni cấy thị Nhược: Có thể lẫn với số dạng kết tủa khác; Phản ứng khó xảy với nồng độ dịch bệnh thấp Huyết Các cách kiểm tra đánh giá Phân tích DNA Ưu: Chính xác Nhược: Đắt tiền Sơ đồ nguyên lz: ARN virus => cDNA virus => phản ứng lai với ARN virus => nhận biết cDNA gắn phản xạ enzyme Các cách kiểm tra đánh giá ELISA Thông thường Bắt kháng nguyên Enzyme thông dụng photphataza kiềm Cơ chất phản ứng nitrophenylphosphat bị tách phosphate thành α-nitro phenol có màu vàng Mỗi enzyme xúc tác cho hàng ngàn phân tử chất nên tín hiệu khuếch đại rõ Có thể định tính, định lượng Bổ xung kháng thể đặc hiệu Gắn kháng nguyên vào nhựa Thông thường Bổ xung chất Che chắn phần trống protein Bổ xung cộng hợp enzyme Phản ứng chuyển màu chất xúc tác enzyme Thông thường Cho kháng thể vào lỗ thử ủ 370C 2-4h, sau rửa Bắt kháng nguyên Bổ xung kháng thể gắn với enzyme ủ 370C h Bổ xung chất phản ứng chờ vài Đọc máy so màu đánh giá kết Cho dịch mẫu thử vào lỗ thử ủ 40C 12h, đem rửa lại Bắt kháng nguyên 05 Các phương pháp ngăn chặn trình tái lây nhiễm Các phương pháp ngăn chặn trình tái lây nhiễm Nên trồng nhà cách ly (nhà màn, nhà kính) khơng chứa nguồn bệnh vetor truyền bệnh (rệp) hay nơi khơng có mang virus Cần loại trừ thường xuyên nguồn lây nhiễm, cần phịng trừ vật mang bệnh (cơn trùng tuyến trùng…), dọn cỏ thường xuyên Phòng tránh lây nhiễm giới q trình chăm sóc trồng.is a gas giant and it has several rings Các phương pháp ngăn chặn trình tái lây nhiễm Thường xuyên chọn lọc, mắt qua phân tích chuẩn đốn Để hồn tồn chắn, nên trì vật liệu bệnh in vitro Tài liệu tham khảo ● Reference 1: https://123docz.net//document/3064726-ky-thuat-nuoicay-meristem-va-tao-cay-sach-benh-virus.htm ● Reference 2: https://pdfcoffee.com/ky-thuat-nuoi-cay-meristem-vatao-cay-sach-benh-virus-pdf-free.html Thanks! ... TỔNG QUAN Whoa! Virus thực vật gì? Tác hại chúng trồng sao? Tại lại phải phòng chống bệnh virus thực vật? Làm tạo bệnh virus? Tổng quan Virus thực vật loại virus gây bệnh thực vật Virus bệnh không... chất kháng virus để tạo bệnh • Các chất kháng virus như: 2thiouracil, ribavirin, vidarabin làm tăng khả đề kháng tế bào, mô thực vật ức chế nhân virus • Phương pháp áp dụng việc tạo virus thuốc... truyền qua nhiều hệ Virus làm giảm Khoảng 600 loài virus thực suất, chất lượng sức sinh vật biết (ít 80 loại có trưởng trồng thể truyền qua hạt giống) Kỹ thuật tạo bệnh virus Hiện có phương